HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用及其机制的探讨

目的:探讨HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法:以HIF-1α抑制剂Echinomycin(EC)预处理人NHL细胞后给予5 GyX线照射,采用Annexin V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平.将HIF-1α siRNA反义转染至NHL细胞中,检测转染后细胞凋亡分数及Caspase-3蛋白表达水平.结果:流式细胞仪检测结果显示,Namalwa细胞空白对照组、单纯照射组(RI)、RI+EC 2 nmol/L组的凋亡率分别为5.27±1.13、13.81±3.12和39.96±6.81,Ramos细胞分别为6.02±1.26、12.98±3.07和40.76±11.58,Raji细胞则为7.16±0.46、17.62±4.94和47.85±10.22,P＜0.01.电离辐射后,转染vector和HIF-1α siRNA的Namalwa细胞凋亡率分别为15.32±3.64和20.20±1.87,Ramos细胞分别为15.05±2.46和21.02±3.12,t值分别为3.99和3.19,P＜0.05 ;而Raji细胞则为10.90±1.65和17.26±0.69,t=5.98,P＜0.01.蛋白质印迹法结果显示,通过EC预处理抑制HIF-1α的表达能够明显上调射线诱导的各NHL细胞系中Caspase-3蛋白表达水平,同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:抑制HIF-1α能够增加射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与增加Bax蛋白表达而下调Bcl-2蛋白表达有关.     

HIF-1α对电离辐射诱导入非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用及其机制的探讨

目的：探讨HIF-1α对电离辐射诱导入非霍奇金淋巴瘤（NHL）细胞凋亡的作用及其调控机制。方法：以HIF-1α抑制剂Echinomycin（EC）预处理人NHL细胞后给予5Gy X线照射,采用Annexin V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中凋亡相关蛋白Bax、Bel-2和Caspase-3的表达水平。将HIF-1asiR—NA反义转染至NHL细胞中,检测转染后细胞凋亡分数及Caspase-3蛋白表达水平。结果：流式细胞仪检测结果显示,Namalwa细胞空白对照组、单纯照射组（RI）、RI＋EC 2nmol／L组的凋亡率分别为5．27±1．13、13．81±3．12和39．96±6．81,Ramos细胞分别为6．02±1．26、12．98±3．07和40．76±11．58,Raji细胞则为7．16±0．46、17．62±4．94和47．85±10．22,P〈0．01。电离辐射后,转染vector和HIF-1α siRNA的Namalwa细胞凋亡率分别为15．32±3．64和20．20±1．87,Ramos细胞分别为15．05±2．46和21．02±3．12,t值分别为3．99和3．19,P〈0．05;而Raji细胞则为10．90±1．65和17．26±0．69,t=5．98,P〈0．01。蛋白质印迹法结果显示,通过EC预处理抑制HIF-1α的表达能够明显上调射线诱导的各NHL细胞系中Caspase-3蛋白表达水平,同时凋亡相关蛋白Bcb2表达减低而Bax蛋白表达增加,Bcl-2／Bax比值明显降低,与单纯照射组相比差异均有统计学意义,P〈0．05。结论：抑制HIF-1α能够增加射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与增加Bax蛋白表达而下调Bcl-2蛋白表达有关。     

EGCG通过下调Bcl-2、NF-κB(p65)表达,活化Caspase-3诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨EGCG诱导移植瘤细胞凋亡作用的分子机制. 方法:建立人胃腺癌(SGC7901)细胞裸鼠异种移植瘤模型,用不同剂量的EGCG进行治疗,并设对照;采用TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况. 结果:EGCG对移植瘤生长有明显抑制作用;TUNEL法发现EGCG导致移植瘤内细胞发生凋亡;Western blot分析表明EGCG能下调NF-κB(p65)蛋白的表达,促使Bax/Bcl-2蛋白表达的比值增高,并且可以促进Caspase-3的活化. 结论:EGCG对人胃癌细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,并能诱导移植瘤细胞凋亡.其机制可能与通过NF-κB(p65)的下调,促使Bax/Bcl-2比值增高,进而导致Caspase-3的活化而诱导细胞发生凋亡相关.     

NF-κBp65对人非霍奇金淋巴瘤细胞HIF-1α-VEGF途径调节及其机制的探讨

目的:研究NF-κB对人非霍奇金淋巴瘤(NHL)HIF-1α-VEGF途径的调控及其机制。方法:应用Echinomycin(EC)处理人NHL细胞,将HIF-1α反义质粒转染至肿瘤细胞中,采用蛋白质印迹法检测经两种方法处理后各细胞系中VEGF表达水平。以NF-κB特异性抑制剂quinazoline(QNZ)及Bay11-7082预处理人NHL细胞,检测各细胞系中HIF-1α蛋白的表达水平,同时采用实时定量PCR方法检测HIF-1αmRNA变化。应用QNZ处理NHL细胞后检测HIF-1α下游调控靶点VEGF的蛋白表达水平。结果:通过应用HIF-1α特异性抑制剂和转染反义质粒两种方法均能够抑制HIF-1α,明显下调了VEGF蛋白表达水平,与对照组相比差异均有统计学意义,P<0.05。NF-κB抑制剂QNZ及Bay11-7082能够降低NHL细胞HIF-1α蛋白及基因水平的表达,同时下调其下游调控靶点VEGF蛋白的表达,P<0.05。结论:抑制NF-κB可阻断人NHL细胞HIF-1α-VEGF通路,其机制可能与NF-κB调控HIF-1α的基因与蛋白表达有关。     

利妥昔单抗增敏navelbine诱导淋巴瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究利妥昔单抗对Navelbine诱导淋巴瘤细胞凋亡的增敏作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定Navelbine在Rituximab作用前后的IC50及细胞增殖抑制率,并绘出细胞增殖抑制的量效曲线,比较Navelbine单药及Navelbine与rituximab两药联合作用曲线的关系.采用蛋白质印迹法测定Daudi、Ramos、Raji和Namlwa细胞经Rituximab作用24 h后Bcl-2的表达水平.结果:在Daudi、Namalwa和Raji细胞株中,经Rituximab作用24 h后,Navelbine的IC50明显降低;在Daudi、Namalwa和Raji细胞株中,Navelbine和Rituximab联合作用的细胞增殖抑制曲线左移,表明两者有协同作用.在Namalwa和Raji细胞株中,经Rituximab作用24 h后,可见Bcl-2蛋白表达水平下调.结论:Rituximab对Navelbine诱导淋巴瘤细胞凋亡有明显的增敏作用.在Namalwa和Raji细胞株,经Rituximab作用24 h后可见Bcl-2表达水平下调,可能是Rituximab增敏的机制之一.     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC823细胞凋亡

[目的]观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的生物学效应及分子机制。[方法]通过MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;用形态学观察、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳研究EGCG诱导BGC823细胞凋亡。West-ern blot法检测EGCG处理后BGC823细胞NF-κB（p65）、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。[结果]EGCG显著性抑制BGC823细胞的生长,呈浓度依赖性。EGCG处理后,光镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变;流式细胞术分析表明不同浓度EGCG处理48h后,亚G1期细胞逐渐增加;EGCG（80μg/ml）作用48、72h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带;Western blot表明EGCG处理48h后,NF-κB（p65）和Bcl-2蛋白表达下调,Bax和Caspase-3蛋白表达升高。[结论]EGCG具有诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制NF-κB活化,导致Bax/Bcl-2比值上调,促进Caspase-3活化有关。     

人食管鳞癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1 凋亡的变化

 目的 探讨人食管癌紫杉醇耐药细胞株凋亡的变化。方法 以体外诱导的人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1为模型,采用反转录—多聚酶链反应（RT-PCR）检测NF-κB-p65、bcl-2和caspase-3 mRNA的表达;应用免疫组织化学方法检测NF-κB-p65、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达;采用吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡变化。结果 RT-PCR法显示NF-κBmRNA和bcl-2 mRNA在Ec9706/P-1细胞中表达条带亮度强于Ec9706;caspase-3 mRNA在Ec9706/P-1细胞中条带亮度较Ec9706细胞弱。免疫组织化学方法显示NF-κB p65蛋白和Bcl-2蛋白在Ec9706/P-1细胞中的表达率高于Ec9706细胞,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）;Caspase 3蛋白在Ec9706/P-1细胞中的表达率低于Ec9706细胞,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。吖啶橙荧光染色法表明Ec9706/P-1细胞的凋亡率低于Ec9706细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1产生耐药可能与NF κB p65、Bcl 2表达水平升高,Caspase-3表达水平降低有关,其逃避凋亡而导致耐药。     

双硫仑联合Cu对淋巴瘤Raji细胞增殖与凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究双硫仑(Disulfiram,DS)联合Cu离子对Burkitt’s淋巴瘤细胞株(Raji细胞)增殖和凋亡的影响及其与JNK和NF-κB通路的关系。方法:不同浓度DS和DS/CuMTT法检测对Raji细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度DS和DS/Cu作用Raji细胞后凋亡细胞比例;蛋白质印迹法检测Cu、DS及DS/Cu处理细胞后p65、p-JNK及c-jun蛋白表达的变化。结果:DS和DS/Cu对Raji细胞均具有抑制增殖作用,作用72h两组IC50值分别为(0.793±0.08)和(0.085±0.015)μmol/mL,DS/Cu对Raji细胞增殖抑制作用显著强于DS单药,P=0.000。DS单药及DS/Cu对Raji细胞均有诱导凋亡作用,但DS/Cu诱导Raji细胞凋亡比例显著高于DS单药,P=0.001。蛋白质印迹法显示DS及DS/Cu作用Raji细胞后p-JNK及c-jun蛋白表达水平均显著增加、p65蛋白表达水平显著下调。结论:DS/Cu及DS对Raji细胞均有抑制增殖及诱导凋亡作用,其中DS/Cu的作用显著强于DS单药,其机制与同时抑制NF-κB和活化JNK通路有关。     

雷帕霉素对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 探讨不同浓度雷帕霉素作用不同时间对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞生物学行为的影响及其相关机制.方法采用0、10、50、100、250、500 nmol/L雷帕霉素分别作用Raji细胞24、48、72 h,采用CCK-8法测定Raji细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定Raji细胞凋亡及细胞周期;采用Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒检测Raji细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性;采用蛋白印迹法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Raji细胞中bcl-2、p53蛋白及其mRNA表达情况.结果作用24 h后,随着雷帕霉素浓度由0 nmol/L逐渐增加至500 nmol/L,Raji细胞增殖抑制率由(23.7±4.2)％升高至(51.7±3.7)％(P<0.01);细胞凋亡率由(4.9±1.9)％升高至(20.5±1.5)％(P<0.01);G0/G1期细胞比例由(40.8±1.4)％增加至(63.6±1.7)％(P<0.01);Caspase-3酶活性由0.16±0.05增加至1.08±0.04(P<0.01);Caspase-9酶活性由0.19±0.04增加至1.34±0.06(P<0.01);bcl-2 mRNA表达量由0.90±0.03减少至0.46±0.03,p53 mRNA表达量由2.51±0.41增加至5.85±0.21,并且bcl-2蛋白表达降低,p53蛋白表达增高.Raji细胞48 h和72 h实验结果与24 h实验结果趋势一致.结论雷帕霉素可能通过Caspase-3、Caspase-9、bcl-2、p53途径抑制Raji细胞增殖,并诱导Raji细胞凋亡.     

QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷（AS）诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞）,采用慢病毒转染的方式,构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷＋QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时,加入40 μmol/L 亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO2同等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理。采用细胞计数（CCK-8）检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较,砷处理组增殖率比例明显降低（P<0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较,砷处理组总凋亡率比例明显升高（P＜0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较,砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高,Bax的蛋白表达水平较低（P＜0.05）。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中,QRICH1通过调节NF-κB p65的表达,进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。     

乙酰基-11-酮基-β-乳香酸与阿斯匹林对HCT-116作用的比较研究

目的探讨乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(acetyl-11-keto-beta-boswellic acid,AKBA)对人体结肠癌细胞HCT-116的抑制作用及作用机制,并比较其与阿斯匹林(aspirin,ASA)差异。方法选用人结肠癌细胞HCT-116,噻唑蓝比色法(MTT)法检测AKBA及ASA对HCT-116增殖的抑制作用,Hochest 33258法检测AKBA及ASA诱导HCT-116细胞凋亡作用,蛋白质印迹法检测AKBA及ASA对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、cleaved PARP、p53通路相关蛋白ATM和p53以及炎症相关蛋白NF-κB和COX-2等表达的影响。结果 1)AKBA和ASA对结肠癌HCT-116增殖的抑制作用呈现剂量依赖性,当AKBA浓度<60μmol/L,ASA浓度<1.25mmol/L时,对HCT-116的抑制作用较弱,P>0.05;AKBA对HCT-116增殖的IC50为(104.58±6.53)μmol/L,ASA为(6.47±0.57)mmol/L,AKBA的抑制活性更强,P<0.001。2)AKBA及ASA均可诱导HCT-116凋亡,表现为典型的细胞凋亡形态改变。与溶媒对照组相比,AKBA和ASA对许多与凋亡和炎症相关蛋白表达的影响差异有统计学意义。3)AKBA 100μmol/L对Bax/Bcl-2比值的上调作用为(46.07±0.64)%,P<0.001;Caspase-9为(277±10.25)%,P<0.001;PARP为(448.27±9.85)%,P<0.001;p-ATM为(213.26±6.42)%,P<0.001;p53为(176.22±5.78)%,P<0.001。对Pro-Caspase-9表达的下调作用为(16.43±0.94)%,P=0.008;Survivin为(63.34±2.64)%,P<0.001;PCNA为(47.30±2.53)%,P<0.001;ATM为(72.47±3.05)%,P=0.004;p-NF-κB为(30.60±1.32)%,P<0.001;NF-κB为(25.92±1.64)%,P<0.001;COX-2为(63.57±3.42)%,P<0.001。4)ASA 8 mmol/L对Bax/Bcl-2比值的上调作用为(83.67±4.77)%,P<0.001;Caspase-9为(136.36±7.65)%,P<0.001;PARP为(470±9.47)%,P<0.001;p-ATM为(168.08±4.46)%,P<0.001;p53为(80.66±3.14)%,P=0.004。对Pro-Caspase-9表达的下调作用为(33.12±2.45)%,P=0.008;Survivin为(50.44±1.72)%,P=0.008;PCNA为(11.51±1.69)%,P=0.153;ATM为(71.48±2.97)%,P=0.004;p-NF-κB为(27.45±0.76)%,P<0.001;NF-κB为(33.70±2.14)%,P<0.001;COX-2为(33.44±1.27)%,P<0.001。5)AKBA与ASA相比较,对Caspase-9(P=0.002)、PCNA(P=0.006)、p-ATM(P=0.010)、p53(P=0.010)和COX-2(P=0.002)的表达影响的差异有统计学意义,对Bax/Bcl-2(P=0.052)、Survivin(P=0.057)、PARP(P=0.064)、p-NF-κB(P=0.069)和NF-κB(P=0.057)表达的影响差异无统计学意义。结论 AKBA对结肠癌细胞恶性增殖具有一定的抑制作用,其作用机制与纠正炎症信号,调节ATM/p53通路,诱导细胞凋亡等相关。与ASA相比,AKBA的活性更高,并在相关作用机制方面具有更强的作用。AKBA可能成为治疗结肠癌的有效药物。     

HIF-1α对非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用机制的探讨

目的:研究HIF-1α对常氧状态下培养的人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法:以HIF-1α抑制剂Echinomycin(EC)处理人NHL细胞,采用Annexin-V染色方法检测肿瘤凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中Survivin及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达水平;进一步应用HIF-1α反义质粒转染肿瘤细胞,检测转染后Survivin蛋白表达水平.结果:HIF-1α抑制剂EC能够诱导NHL细胞的凋亡(P<0.05),具有时间和剂量依赖性.抑制HIF-1α的表达明显抑制了肿瘤细胞中Survivin蛋白表达水平,同时,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异均具有统计学意义,P<0.05.转染反义HIF-1α siRNA后肿瘤细胞中Survivin蛋白表达水平明显下降(P<0.05).结论:抑制HIF-1α能够诱导NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平有关.     

NF-κBp65、Bcl-2、Bcl-xL蛋白在胰腺癌中的表达及其与P53和凋亡指数的关系

背景与目的:核因子κB通过调控下游bcl-2家族基因表达参入细胞凋亡调节过程,而p53除了参入细胞周期调节外也参入依赖bcl-2基因的细胞凋亡调控。在胰腺癌中NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达与p53和凋亡的关系还不清楚。本研究系统地分析了核因子κBp65及其下游的bcl-2和bcl-xL抑凋亡基因在胰腺癌(PC)中的表达以及与P53蛋白表达和凋亡指数(AI)的关系。方法:免疫组化法检测25例胰腺导管腺癌(PC)和9例正常胰腺组织(NP)中P53蛋白表达;Western印迹法分析NF-κBp65蛋白表达;RT-PCR分析Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达,TdT酶介导的原位缺口标记(TUNNEL)法了解胰腺癌细胞凋亡情况(AI)。结果:P53在PC组织阳性率(56%,14/25),高于NP组织阳性率(P<0.00);NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL在PC组织表达相对值分别为:1.06±0.16、0.79±0.13、0.76±0.24,分别高于NP组织:0.23±0.016、0.23±0.074、0.18±0.026(分别P<0.05);14例p53阳性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-Xl表达相对值分别为:1.32±0.23、0.92±0.33、0.82±0.21;11例p53阴性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL表达相对值分别为:0.78±0.15、0.54±0.19、0.71±0.28(分别P<0.05,P<0.05,P>0.05);NF-κBp65和Bcl-2分别与P53表达有明显的正相关性(分别P<0.01,P<0.05),Bcl-xL与P53无相关性(P>0.05),NF-κBp65与Bcl-XL表达正相关(P<0.01),而NF-κBp65与Bcl-2表达无相关性(P>0.05);胰腺癌平均AI为(15.4±6.48)%,NF-κBp65表达与AI负相关(r=-0.297,P<0.05),而Bcl-2、Bcl-xL与AI无相关性(r=-0.203,P>0.05;r=-0.156,P>0.05)。结论:胰腺癌中抗凋亡因子表达上调,凋亡指数主要决定于NF-κBp65蛋白水平;NF-κBp65通过对下游bcl-xL基因表达的调控参与胰腺癌凋亡过程;p53在凋亡调节过程中起重要作用。     

榄香烯对恶性淋巴瘤细胞多药耐药性影响及机制的研究

目的:研究榄香烯对恶性淋巴细胞瘤细胞多药耐药性的影响及相关机制。方法:以不同浓度榄香烯作用于恶性淋巴瘤Raji细胞,并设空白对照组。通过RT-PCR以及蛋白质印迹方法检测加药后Raji细胞环氧化酶-2(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)的mRNA及COX-2、NF-κB 56蛋白表达情况。结果:24h后,RT-PCR产物经电泳分析,COX-2mRNA、NF-κB mRNA各扩增产物在其相应位置上可见清晰的条带,特异性好。COX-2mRNA、NF-κB mRNA灰度值,各浓度榄香烯处理组与阴性对照组相比差异有统计学意义,P<0.01。各浓度榄香烯处理组与阴性对照组不同程度地表达COX-2、NF-κB p65蛋白,各浓度榄香烯处理组COX-2、NF-κB p65蛋白表达量与阴性对照组相比均下降,呈浓度依赖性,P<0.01。结论:榄香烯可能通过对COX-2和NF-κB的调控影响恶性淋巴细胞瘤细胞多药耐药性。     

非霍奇金淋巴瘤中PKR及NF-κB/P65表达的临床意义

目的:研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)中双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)及核因子-κB/P65(NF-κB/P65)的表达及临床意义。方法:采用免疫组化方法检测45例NHL患者、26例淋巴结反应性增生(RH)患者及15例正常者(CON)组织中PKR和NF-κB/P65的表达水平,分析其与NHL病理特征间的相关性。结果:NHL组PKR表达率为69.05%(29/42),RH组为11.54(3/26),正常组为6.67%(1/15),PKR在NHL中的表达水平较RH组及CON组增高(P<0.05)。NHL中NF-κB/P65阳性表达率为73.80%(31/42),RH组为3.85%(1/26),而CON中无NF-κB/P65阳性表达,NHL组织中NF-κB/P65表达较RH组及CON组增高(P<0.05)。PKR表达与NHL患者性别、年龄、细胞类型、恶性程度及临床分期无关;而NF-κB/P65表达与恶性程度及临床分期有关。结论:PKR在NHL中具有一定蛋白表达,NF-κB/P65异常表达与NHL的发生、发展有关。     

金丝桃苷诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及其机制北大核心CSCD

目的探讨金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法体外培养MKN-45细胞,对照组不加药物,实验组分别加入不同浓度Hyp(12.5、25、50、100、200μg/ml)作用24、48 h,MTT法检测Hyp对细胞增殖的影响并筛选适宜药物浓度;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;Western blot法分析NF-κB P65、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果 Hyp可明显抑制MKN-45细胞的增殖,阻滞细胞于G0/G1期并促进其凋亡,Western blot结果显示,随着药物浓度的增高,Hyp可使NF-κB P65、Bcl-2蛋白表达降低,casepase-3、Bax蛋白表达增高。结论金丝桃苷可抑制MKN-45细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与该药物阻断细胞周期,抑制NF-κB通路,下调NF-κB P65、Bcl-2蛋白,上调casepase-3、Bax蛋白有关。     

GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性影响研究

目的 研究GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性的影响。方法 以qRT-PCR和蛋白印迹法分别检测食管癌细胞系和正常食管上皮细胞GOLPH3 mRNA和蛋白水平,在OE33细胞中转染GOLPH3 siRNA,同时给予照射处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放射敏感性,蛋白印迹法检测活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果 食管癌细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平明显高于正常食管上皮细胞(P<0.05)。GOLPH3 siRNA可明显下调食管癌OE33细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平。下调GOLPH3或者照射处理以后的食管癌细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,并且细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高(P<0.05)。下调GOLPH3后的OE33细胞经照射处理以后,细胞增殖活性下降更多,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高更多(P<0.05)。下调GOLPH3后OE33细胞经照射处理后,细胞放射增敏比为1.673。结论 GOLPH3在食管癌细胞中高表达,下调其表达可以增加OE33细胞放射敏感性,诱导细胞凋亡并抑制其增殖。     

HepG2 细胞系CD133+细胞对多柔比星的抗性及其机制

[摘要] 目的: 探讨HepG2 中CD133+细胞对多柔比星（doxorubicin,DOX）的抗性及其作用机制。方法: 通过磁珠分选实验对HepG2 细胞中CD133+细胞进行分选,流式细胞术检测CD133+细胞阳性率,MTT法检测CD133+细胞对DOX诱导凋亡的抗性,免疫荧光实验检测DOX处理各组细胞后P65 激活转运情况,qRT-PCR检测各组细胞乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP) mRNA表达水平;Western blotting 检测CD133+细胞凋亡相关蛋白的表达。结果: 磁珠分选可以高效地富集HepG2 细胞中CD133+细胞。与CD133-细胞相比,CD133+细胞对DOX具有更强的抗性（P<0.05）;与CD133-细胞、HepG2 细胞相比,CD133+细胞中P65 激活速度与表达水平明显提高（均P<0.05）;CD133+细胞中BCRP mRNA表达水平明显高于CD133-细胞和HepG2 细胞（均P<0.05）;与HepG2、CD133-组相比,CD133+细胞组Bax 和p53 蛋白表达水平显著减少、Bcl-2 和Survivin 蛋白表达量显著增加（P<0.05 或P<0.01）。结论: HepG2 细胞中CD133+细胞亚群对DOX 高耐药性的分子机制在于高表达存活相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Survivin以及耐药性转运蛋白BCRP,而低表达促凋亡相关蛋白p53、Bax。     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

三氧化二砷诱导A375细胞凋亡过程中的信号传导途径研究

背景与目的： 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide, As2O3)在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对NF-κB、C-IAP2以及Caspase-3信号传导途径的影响。 材料与方法： 将As2O3和Caspase-3 抑制剂Ac-devd-cho单独或联合作用A375细胞后,采用Western blot 法检测NF-κB p65和Caspase-3表达水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测C-IAP2 mRNA表达。 结果： 5.0 μmol/L As2O3单独处理A375细胞12 h和24 h以及As2O3联合Ac-devd-cho处理24 h组,随着As2O3作用时间的延长,Caspase-3激活蛋白增多、NF-κB p65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达下降,Ac-devd-cho能够阻断Caspase-3蛋白的活化,而对NF-κBp 65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达无明显影响;免疫组织化学法也显示,Caspase-3激活型蛋白随着As2O3作用时间的延长而增高,但能被Ac-devd-cho阻断。 结论： As2O3可诱导A375细胞凋亡,能抑制A375细胞NF-κB、C-IAP2基因的表达,且不被Ac-devd-cho所阻断; As2O3能活化Caspase-3蛋白表达,而此效应可被Ac-devd-cho阻断。推测NF-κB-C-IAP2-Caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。