原代人胚肺,肾细胞成功培养方法的改进

培养出广泛适合于基础与临床研究的原代人胚肺、人胚肾细胞，方法：分别用不同的培养基及不同浓度的血清，以改进的方法对原代人胚肺，肾细胞进行培养。结果：经水囊引产的３月大小的胚胎肺及肾，用ＭＥＭ及１６４０加上２０％的牛血清，对细胞的贴附及增殖十分有利。     

培养的肺动脉内皮细胞生长及生化特性的初步观察

采用胰蛋白酶消化法和刮取法培养了肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）。通过原代培养、传代和冻存复苏等步骤，观察了ＰＡＥＣ的形态及生化特点，如Ⅷ因子相关抗原、细胞内钙、环磷酸腺苷等。结果表明：原代及传代培养的ＰＡＥＣ可很快贴壁生长，经２￣５ｄ可汇合成单层，细胞呈铺路石状排列，Ⅷ因子相关抗原阳性，并能分泌血管紧张素转移酶；在含２０％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养基内，ＰＡＥＣ可传３０代以上；传代后的细胞生长速     

人表皮细胞的体外培养

目的：对表皮细胞在不同的培养方法、不同的培养液及不同底物中的生长情况进行３方面的探讨，以便选出较好的一种组合进行表皮细胞培养，为改善烧伤皮源不足的问题打下基础。方法：①采用人包皮或体皮制成皮块、皮粒、表皮细胞悬液进行液体培养，比较３种方法中表皮细胞生长情况；②应用纯表皮细胞悬液进行空气液体界面培养，平铺平皿培养及培养瓶液体培养，比较表皮细胞贴壁、生长情况；③另将表皮细胞悬液接种于３种不同的培养液，即ＲＰＭＩ１６４０，ＲＰＭＩ１６４０＋ＭＥＭ及ＭＥＭ比较细胞生长差异。结果：①在适当的条件下，离体的皮肤皮块、皮粒及表皮细胞悬液经培养皆能生长和分化，而表皮细胞悬液生长速度较快，纤维母细胞污染机会最少；②以Ｂｉｏｆｉｌ为底物的空气液体界面法，细胞生长速度最快，培养出的单层表皮细胞膜片易取出，不收缩；③表皮细胞在ＭＥＭ，ＲＰＭＩ１６４０及ＲＰＭＩ１６４０＋ＭＥＭ３种培养基中的生长情况基本一致。结论：以Ｂｉｏｆｉｌ为底物的空气液体界面培养法应得到推广应用，它不仅加快了表皮细胞的生长速度，减少了纤维母细胞的污染，易于移植，同时解决了以往各种人工敷料仅针对Ⅱ度烧伤创面的治疗及暂时覆盖Ⅲ度创面的局限     

人胚细胞的体外培养

目的：为医学研究长期提供培养的人胚细胞。方法：体外培养人胚细胞，观察其生长特性、染色体数目以及冻存和复苏的条件。结果：培养的人胚肺、皮肤、肾、脾及脑组织中，肺和皮肤细胞在冻存前后增长速度较快而稳定，染色体数目为２ｎ＝４６，占８７％￣９１％；肾、脾细胞扩增缓慢；脑组织几乎不能扩增。结论：人胚肺和皮肤细胞可长期培养，可为医学研究提供二倍体细胞实验对象。     

反义阻断hREV3基因表达对细胞生长及MNNG敏感性的影响

目的：应用反义核酸阻断技术研究ｈＲＥＶ３基因对细胞生长和ＭＮＮＧ敏感性的影响。方法：酶切法构建表达反义ｈＲＥＶ３基因片段的真核细胞表达质粒;以改良的磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法建立ｈＲＥＶ３基因表达被阻断的人胚肾细胞（２９３细胞）细胞系（２９３－ｈＲＥＶ３＾－）。以细胞记数方法检测核细胞系的生长速率及不同浓度的烷化剂ＭＮＮＧ对细胞的毒作用。结果：ｈＲＥＶ３基因表达被阻断的人胚肾细胞（２９３－ｈＲＥＶ３＾     

牛视网膜提取物对人-鼠杂合细胞抗体产生的影响

目的：探讨牛视网膜提取物对人－鼠杂合细胞抗体产生的影响。方法：在ＰＲＭＩ１６４０完全培养基（ＣＭ）中加入２０ｍｇ／Ｌ牛视网膜提取蛋白,配成牛视网膜培养基（ＢＲＥＭ）。用ＭＴＴ测定、细胞克隆技术、夹心ＥＬＩＳＡ方法和染色体分析,比较人－鼠杂合细胞Ｇ１２在两种培养条件下的细胞活力、克隆效率、人ＩｇＭ分泌和人染色体阳性细胞比率之间的差异。结果：用ＢＲＥＭ培养的Ｇ１２细胞活力高于用ＣＭ培养（Ｐ＜００５）。用ＢＲＥＭ培养的Ｇ１２细胞克隆中分泌人ＩｇＭ者占１２／２４,用ＣＭ培养的克隆只占２／４７。Ｇ１２细胞传代培养３个月后,用ＢＲＥＭ培养的上清人ＩｇＭ水平Ａ４９０为０３３５±００５０,用ＣＭ培养的上清为００７０±００２７（Ｐ＜００５）。前者含人染色体阳性的细胞为２０％,后者２５％,两者间没有差异（Ｐ＞００５）。结论：添加牛视网膜提取物的培养基可以提高人－鼠杂合细胞的活力和人ＩｇＭ抗体的分泌能力。维持人源性ＩｇＭ持续分泌的条件不仅取决于杂合细胞中人染色体的存在和稳定,还有其它未知因素在起作用,牛视网提取蛋白可以提供这方面的需要。     

IL—6介导儿童急性髓细胞性白血病细胞对地塞米松耐药的实验研究

目的：检测ＩＬ－６对原代白血病细胞的影响,并探讨ＩＬ－６是否与白血病细胞对塞米松产生耐药有关。方法：有ＲＰＭＩ１６４０培养基在不同条件下对原代白血病细胞进行体外培养,用ＭＴＴ法检测细胞增殖指数以了解细胞增殖情况,结果：①ＩＬ－６可促进ＡＭＬ原代细胞增殖（Ｐ〈０．０５）,而对ＡＬＬ原代细胞则无明显作用（Ｐ〉０．０５）;②地塞米松能抑制ＡＭＬ原代细胞增殖（Ｐ〈０．０５）;③地塞米松抑制ＡＭＬ原代细胞增     

鹿血清对体外培养二倍体细胞的抗老化实验研究

实验用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,从35代开始在培养液中加入鹿血清为实验组,不加鹿血清为对照组。我们观察了鹿血清对细胞的生长和增殖的影响,以及一般光镜、荧光显微镜下的细胞形态与组化变化。结果表明实验组的细胞形态、生长和增殖均比同代对照组良好。实验证明5％鹿血清对体外培养的人胚肺二倍体细胞有抗老化作用。     

人脐静脉内皮细胞的培养

目的：培养的内皮细胞为基础和临床研究提供体外模型,并为进一步研究内皮细胞对造血的影响提供实验材料。方法：经胶原酶消化获得人脐静脉内皮细胞,用ＲＰＭＩ－１６４０加２０％的胎牛血清进行培养。结果：成簇状的内皮细胞最初形成于培养皿（或培养瓶）的底层,继而细胞迅速生长,融合成片,约７天细胞呈单层多角形镶嵌排列。透射电镜观察,原代培养细胞的胞质内含内皮细胞特有的细胞器（ＷＰＢｓ）。兔抗人Ⅷ因子相关抗原（ⅧＲ：Ａｇ）免疫组织化学染色实验证实,培养的内皮细胞含有ⅧＲ：Ａｇ。结论：本实验的各项结果从形态,免疫组化及透射电镜的观察均符合内皮细胞的特征,因此确信所培养的内皮细胞可提供作进一步深入的细胞生物学及对造血影响的研究。     

白细胞介素—6对急性白血病原代细胞的影响及意义

用ＲＰＭＩ１６４０培养基，在不同浓度的白细胞介素－６条件下对原代白血病细胞进行 外培养，用ＭＴＴ法测细胞增殖提数，     

云南宣威肺腺癌原代细胞和肺腺癌细胞株XWLC-05体外形态学比较

目的比较宣威肺腺癌原代细胞和已建立的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05的形态学变化.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养宣威肺腺癌细胞和XWLC-05,观察两者的形态学变化,比较不同时间点肺癌细胞数量变化,探讨其生长特性.结果培养的肺癌原代细胞为贴壁成团片状生长,为多边形或类圆形,异型性明显;而XWLC-05细胞成翼状,多边形,增殖速度比本实验室培养肺癌原代细胞快.结论肺癌原代细胞形态学上不同于XWLC-05,有其自身生长特性.     

人原发性胆囊癌细胞系SGC-996的建立

目的 建立原发性胆囊癌细胞系，对其生物学特性进行初步观察。方法 从1例女性胆囊乳头状腺癌组织取材，分离癌细胞进行体外细胞培养、传代，进行生物学特性观察。结果 该细胞系为典型的上皮型多边形细胞，在含10％新生小牛血清的RPMI1640培养液中生长稳定，增殖旺盛，有重叠生长现象。群体倍增时间约为48h，分裂指数较高，染色体数日为亚三倍体。无胸腺裸鼠皮下异体接种全部致瘤。电镜观察细胞表面微绒毛丰富，细胞间偶见桥粒等细胞连接。未见病毒颗粒、支原体及细菌。结论 该细胞符合一般体外培养细胞系标准，定名为SGC996，可作为人胆囊癌研究的模型。     

纳米细菌对肾小管上皮细胞损伤在肾结石形成中作用的研究

目的　探究纳米细菌（NB）损伤人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）并导致晶体滞留的机制。方法　于2016年10月—2017年10月在石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科收集临床确诊肾结石且未应用药物或手术治疗患者的尿液培养NB。实验分为5组：对照组（胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、NB组（NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、一水草酸钙（COM）组（5 mmol/L COM悬液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、纳米级羟基磷灰石（nHAP）组（300 mg/L nHAP、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）和四环素干扰组（5 mg/L四环素、NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）。共同培养6、12、24 h后,采用光学显微镜及透射电子显微镜观察HK-2细胞的形态学变化;超声粉碎细胞后检测Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性;检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢（H2O2）和丙二醛（MDA）含量;用激光扫描共聚焦显微镜观察加入COM晶体后各组细胞的晶体黏附情况。结果　苏木素-伊红（HE）染色和透射电子显微镜结果可见,nHAP组和四环素干扰组HK-2细胞的损伤程度明显低于NB组。共同培养12、24 h后,NB组和COM组Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均低于对照组,H2O2含量均高于对照组（P<0.05）,nHAP组Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均低于对照组（P<0.05）,四环素干扰组Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均高于NB组（P<0.05）。共同培养6、12、24 h后,NB组和COM组MDA含量均高于对照组（P<0.05）,四环素干扰组MDA含量均低于NB组（P<0.05）,COM组LDH含量均高于对照组（P<0.05）,nHAP组、四环素干扰组LDH含量均低于COM组（P<0.05）。结论　NB可能通过诱导脂质过氧化反应损伤HK-2细胞,损伤程度和晶体黏附量与NB作用时间呈正比。四环素可以抑制NB对HK-2细胞的损伤并减少损伤后的晶体滞留。     

12-脂氧化酶影响胃癌细胞株AGS蛋白激酶C活性

目的 研究胃癌细胞中蛋白激酶C(PKC)活化与12-脂氧化酶(12-LOX)的关系.方法 胃癌细胞株AGS于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中常规培养,AGS细胞培养24 h至对数生长期改用无血清RPMI 1640培养基培养24 h加入干预药物.PKC活性采用非同位素标记法测定.分别采用12-LOX催化合成产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)及12-LOX特异性抑制剂--黄芩素干预AGS细胞,测定其PKC活性变化.结果 AGS细胞经12-HETE干预后PKC活性明显增高,而经黄芩素干预后PKC活性明显下降,且呈时间、剂量依赖性.结论 12-LOX对PKC活性具有调节作用;PKC参与了12-LOX影响胃癌细胞增殖凋亡的信号传导.     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

不同浓度胎牛血清对原代心肌成纤维细胞增殖及分化的影响

目的:探讨不同浓度胎牛血清体外培养对原代心肌成纤维细胞增殖和分化的影响。方法:用酶消及差速贴壁法分离并培养SD乳鼠心肌成纤维细胞;采用不同浓度胎牛血清(1%、5%、10%和20%)培养心肌成纤维细胞并观察细胞形态,免疫荧光共聚焦法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达,划痕实验检测心肌成纤维细胞的迁移能力,CCK8实验检测心肌成纤维细胞的增殖能力。结果:随着胎牛血清浓度升高,细胞形态逐渐变圆,细胞表面积增加,α-SMA阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化增多,细胞迁移能力增加。高浓度胎牛血清(20%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最旺盛,低浓度胎牛血清(1%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最低,5%和10%胎牛血清培养时心肌成纤维细胞增殖均旺盛。结论:高浓度胎牛血清培养会导致心肌成纤维细胞分化,5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较10%和20%胎牛血清培养分化程度少,增殖能力较1%胎牛血清好,选用5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较好。     

胎鼠肝nestin阳性细胞的分离培养和诱导分化研究

目的建立胎鼠肝nestin阳性细胞的体外分离、培养和诱导分化的方法。方法采用机械分离法结合悬滴培养法获得胎肝干细胞,原代培养2d后改变培养基,添加含20%胎牛血清的DMEM(含25ml/L葡萄糖,100U/ml青链霉素,pH值7.6),添加烟酰胺10mmol/L,胰岛素1mg/L,N2添加剂,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子各20μg/L诱导分化为nestin阳性细胞。结果和结论大鼠胎肝内存在nestin阳性细胞,在体外扩增后加入诱导剂可定向分化为胰岛β细胞。     

心肌球培养基血清浓度优化研究

目的 通过比较含有不同胎牛血清浓度的心肌球培养基分离培养大鼠心肌干细胞(CSCs)的效果,探讨最优的心肌干细胞血清培养浓度.方法 选取15只健康新生Wistar大鼠(出生1天龄),无菌条件下取出心脏,经胰酶和Ⅱ型胶原酶反复消化后,种植于培养瓶中,应用含20%胎牛血清的完全培养基培养组织块源性心脏祖细胞(CPCs),将所得的培养外植物源性细胞(EDCs)随机分为A、B、C 3组,各组5瓶细胞(25 mL塑料培养瓶),分别应用含10%、11%、15%不同浓度胎牛血清的心肌球生长培养基培养,培养至第三代CSCs时行细胞表面抗原C-kit染色,鉴定C-kit阳性CSCs占所获得细胞的比率,比较所得的细胞数量,生长周期和生长曲线.结果 从新生大鼠心肌组织中成功分离培养出CSCs,C-kit阳性率87%.培养后所得细胞数量以细胞倍增水平(PDL)表示,各组细胞PDL呈匀速递增,PDL水平和其递增速率(生长曲线所示)比较:B组>C组>A组.应用含11%胎牛血清的心肌球生长培养基培养EDCs获得的CSCs,与其他两组相比,具有生长周期短(P<0.05),生长数量多的特点(P<0.05).结论 含11%胎牛血清浓度是心肌球生长培养基培养原代大鼠心肌干细胞的最优血清培养浓度.     

足叶乙甙诱导HL－60急性早幼粒白血病细胞程序化死亡的实验研究

目的：用不同剂量的ＶＰ－１６诱导急性早幼粒白血病细胞程序化死亡（ＰＣＤ）。方法：通过细胞培养技术获取ＰＣＤ细胞，以ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳确定细胞ＰＣＤ的发生，苔盼蓝拒染法检测细胞活力。结果：不同浓度的ＶＰ－１６在试验条件下于４ｈ内均能诱导ＨＬ－６０细胞发生ＰＣＤ。结论：本实验建立的研究细胞ＰＣＤ的方法可靠，ＶＰ－１６具有良好的诱导细胞产生ＰＣＤ的作用     

人脐带间充质干细胞的培养鉴定及其向神经元细胞分化的研究

目的研究脐带间充质干细胞（UC-MSCs）在体外分离、培养、扩增和鉴定以及向神经元分化的方法.方法 30例符合入选标准的脐带采用贴壁法分离得到UC-MSCs,选用20%FBS血清培养液进行原代培养,再选用10%FBS扩增培养液进行一般传代.用神经分化培养基诱导UC-MSCs向神经细胞分化,在荧光显微镜下观察细胞形态,透射电镜观察UC-MSCs超微结构,用流式细胞仪分析其表面特性,采用直接和间接免疫荧光法检测细胞悬浮液的表型特征,用抗人神经纤维M、突触素、微管蛋白、半乳糖神经酰胺的单克隆抗体检测各代之间神经诱导形成率.结果 12 h后细胞开始贴壁生长,超微结构观察表现出未分化细胞的特征,CD123、CD49、CD29、CD73和CD166均为阳性,免疫荧光检测人UC-MSCs分化成神经细胞.结论 UC-MSCs长期传代培养,生物学特性稳定,具有向神经细胞分化的潜能.