人羊膜上皮细胞静脉移植治疗大鼠心肌梗死

背景：人羊膜上皮细胞在体外适当诱导条件下可分化为心肌样细胞,可望成为细胞心肌成形术的种子细胞,但在心肌梗死原位是否能分化成心肌细胞值得探讨。 目的：探讨人羊膜上皮细胞移植在心肌梗死原位的分化及对心肌梗死后心室重构和心功能的影响。 方法：用胰酶消化分离人羊膜上皮细胞,行流式细胞仪检测和免疫组化染色以鉴定其表型特征。结扎SD大鼠左冠状动脉前降支以建立心肌梗死模型,实验分为人羊膜上皮细胞移植组、模型组及假手术组,人羊膜上皮细胞移植组于造模后1周经舌下静脉移植Brdu标记的人羊膜上皮细胞。移植后1,4,6周采用超声心动图检查心功能变化,应用苏木精-伊红和Masson染色观察心肌重构的变化,以免疫荧光双染色法检测人羊膜上皮细胞在心肌梗死区的植活与分化。 结果与结论：①所分离的人羊膜上皮细胞表达CD29、CD166、CD73和CK19,不表达CD44、CD34、CD45、CD80、CD86和HLA-DR。②人羊膜上皮细胞移植后6周,心肌梗死区仍可见Brdu标记的阳性细胞,表达心肌特异蛋白连接蛋白43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。③移植组大鼠左心室纤维化程度明显低于模型组。④移植组大鼠射血分数、左室短轴缩短率显著高于模型组(P < 0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也显著大于模型组(P < 0.05)。提示人羊膜上皮细胞在心肌梗死原位可分化为心肌细胞,可减缓心室重构并改善心脏功能。     

黄芪注射液对人羊膜上皮细胞向神经细胞分化作用及存活的影响

目的:探讨黄芪注射液体外定向诱导人羊膜上皮细胞分化的作用和黄芪注射液对分化细胞活力影响。方法:将人羊膜上皮细胞分为三组,即黄芪诱导组(设立四个浓度亚组)、全反式维甲酸组和对照组。分别采用化学诱导剂和黄芪注射液诱导hAECs分化为神经细胞,在诱导前后,应用免疫细胞化学方法染色鉴定神经元特异性烯醇化酶、神经干细胞巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白.逆转录-聚合酶链反应进一步鉴定细胞多能基因Oct4、神经干细胞标记物Nestin基因和神经元标记物NSE,四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞活力。结果:倒置显微镜下见,RA诱导12 h后,黄芪诱导24 h后,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支,48 h时100μl/ml黄芪诱导组,NSE阳性率低于RA诱导组(P<0.05),细胞活力较RA组高(P<0.05),两诱导组结果均高于对照组,而GFAP阳性率高于RA组(P<0.05),同时RT-PCR检测到诱导后多能基因Oct4表达减少,而Nestin、NSE表达增多。结论:黄芪和RA都可诱导人羊膜上皮细胞在体外分化为神经元样细胞,且黄芪于100μl/ml浓度时效果较好,黄芪诱导后对细胞毒性较小。     

人羊膜上皮细胞的诱导分化

目的:建立体外培养及标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的方法并应用原子力显微镜(AFM)从细胞形貌变化上探讨人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的可视性研究。方法:取足月产人羊膜,采用酶消化法获得HAECs进行原代和传代培养,对培养的细胞进行形态学观察和鉴定;HAECs与兔角膜基质细胞共培养2周,采用CK3+12免疫荧光细胞化学染色鉴定诱导后的细胞;应用AFM分别对共培养前后的人羊膜上皮细胞的表面超微结构进行观察,并与人角膜上皮细胞(HCECs)对比,分析细胞形貌的变化。结果:HAECs体外培养呈铺路石样外观,核/质比率小,连接成片。细胞形态为多角形,角蛋白keratin表达阳性,不表达CK3+12;免疫荧光显示共培养2周的HAECs表达CK3+12;AFM观察,共培养2周后HAECs细胞核中央由山谷样外观转变成类似HCECs的山峰样外观。结论:HAECs可成功进行原代和传代培养,在兔角膜基质细胞诱导培养条件下可向角膜上皮细胞转分化。     

褪黑素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠皮层氧化应激的影响

目的:研究褪黑素(Mel)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠皮层氧化应激的影响及分子机制.方法:54只新生SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺氧缺血脑损伤组(HIBD)和褪黑素治疗组(HIBD+Mel),利用左侧颈总动脉结扎联合低氧刺激制备新生大鼠HIBD模型,利用神经功能缺损评分(NSS)评测大鼠神经功能变化...     

大鼠羊膜上皮细胞体外培养的初步研究

目的： 研究大鼠羊膜上皮细胞（AECs）在体外培养时的形态变化和其生长特性，探讨EGF和血清对AECs生长和增殖性的影响。 方法: 分别取妊娠中期SD大鼠（12-14 d）和妊娠晚期SD大鼠（18-19 d）的羊膜，制成AECs单细胞悬液，用DMEM/F12培养液培养、传代。光镜、扫描电镜下观察其生长的形态变化； MTT法检测EGF和血清对AECs生长和增殖性的影响。 结果： 妊娠中期和晚期AECs在体外培养时均生长良好、增殖活跃，但妊娠晚期AECs生长周期相对较短。 结论： EGF和血清均能促进AECs增殖，其中EGF促进AECs的增殖更为显著。这为利用AECs进行细胞治疗和组织工程技术奠定了实验基础。     

天麻素对缺血缺氧脑损伤新生大鼠小胶质细胞Sirt3表达的影响

目的:研究天麻素对缺血缺氧脑损伤(HIBD)新生大鼠脑内激活的小胶质细胞Sirt3表达的影响。方法:选取39只3 d龄SD幼年大鼠随机分为对照组(control)、缺血缺氧脑损伤组(HIBD)、天麻素组(HIBD+gastrodin)。采用左侧颈总动脉结扎结合缺氧法建立新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)模型,使用免疫荧光染色观察HIBD模型后新生大鼠大脑胼胝体区小胶质细胞的分布情况;使用免疫荧光双标染色及Western Blot检测大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞Sirt3的表达变化。结果:免疫荧光染色结果显示HIBD后新生大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞出现明显激活,确定模型建立成功。免疫荧光双标染色及Western Blot结果均显示,与对照组相比,HIBD模型组Sirt3的表达水平明显升高(P <0. 05);与HIBD模型组相比,天麻素组Sirt3的表达进一步增强(P <0. 05)。结论:天麻素可能通过促进新生大鼠脑内小胶质细胞Sirt3的表达,发挥其神经保护作用。     

天麻素对新生大鼠缺血缺氧脑损伤中小胶质细胞NOX2表达的影响

目的:研究天麻素(GAS)对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤后脑内激活的小胶质细胞表达NADPH氧化酶2(NOX2)的影响.方法:将39只3 d龄新生SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、以及HIBD与GAS联合处理组(HIBD+GAS).利用左侧颈总动脉结扎结合缺氧箱(8％O2,92％N2)缺氧2...     

人羊膜上皮细胞移植改善AD样病变模型大鼠学习记忆能力

目的:观察人羊膜上皮细胞(h AECs)对阿尔茨海默病(AD)样病变大鼠模型的治疗效应。方法:采用胰蛋白酶消化法分离h AECs,流式细胞术分析表型。48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、培养基组和h AECs移植组,每组12只。采用双侧脑室注入脂多糖(LPS)复制AD样病变大鼠模型。AD样病变大鼠海马区移植5×105个h AECs。细胞移植后2周,Morris水迷宫试验观察行为学变化,HE和硫磺素S染色观察海马病理变化,免疫组化染色检测β-淀粉样蛋白42(Aβ42)、Tau蛋白和乙酰胆碱(ACh)的变化,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的变化,流式微球阵列捕获技术(cytometric bead array,CBA)检测血清细胞因子含量,免疫荧光染色检测海马区人细胞核抗原阳性细胞及其神经元特异性核蛋白(Neu N)的表达。结果:与模型组和培养基组比较,h AECs移植组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.01),跨域平台次数明显增加(P0.05);海马神经元病损减轻,Aβ沉积减轻(P0.05),磷酸化Tau蛋白水平下降(P0.05),ACh增加(P0.05);外周血Th1和Th17细胞百分比下降(P0.05),而Th2和Treg细胞升高(P0.05);IL-2和IFN-γ水平下调(P0.05),而IL-4上调(P0.05);移植区可见h AECs,并表达Neu N。结论:h AECs可明显改善AD样病变模型大鼠空间辨别性学习记忆能力,减轻海马病理损伤,其免疫调节效应可能发挥重要作用。     

大鼠胚胎神经上皮细胞侧脑室移植后存活及分化的实验研究

目的：观察大鼠胚胎神经上皮细胞同种脑移植后的存活及生长分化状况。方法：孕12d大鼠剖腹取胚胎，剥离神经管，胰酶消化后获取神经管壁上的神经上皮细胞，然后植入其父体侧脑室中，分别于移植后10d,14d,21d,28d灌注取脑，肜HF染色及神经元特异烯醇化酶（NSE），胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组织化学方法检测胚胎神经上皮细胞移植后的存活及分化状况。结果：神经上皮细胞侧脑室移植后多贴附于脑室壁形成细胞团块，有的随脑脊液循环至第三脑室生长，随时间延长移植物增大，HE染色见脑室内有成团的移植细胞，免疫组织化学染色显示移植细胞团内既有NSE－免疫阳性细胞，也有GFAP－免疫阳性细胞，移植物周围多为GFAP－免疫阳性细胞。结论：胚胎神经上皮细胞侧脑室移植后能够贴附脑室壁存活，并能分化为神经元和神经胶质细胞。     

人羊膜上皮细胞移植修复兔臂丛神经损伤

背景：目前人们把目光多集中在干细胞修复脊髓损伤方面,而对于干细胞移植治疗周围神经损伤的研究却不多,尤其人羊膜上皮细胞修复治疗周围神经损伤的研究和报道更少。 目的：探讨人羊膜上皮细胞对臂丛神经的修复作用。 方法：应用测力神经根拉钩水平牵拉臂丛神经根的方法制备大白兔臂丛损伤模型,提取人羊膜上皮细胞并扩增培养,扫描电子显微镜下观察人羊膜组织及羊膜上皮细胞的超微结构,人羊膜上皮细胞转染绿色荧光蛋白标记并注射入臂丛神经损伤区,苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察羊膜上皮细胞对兔臂丛神经损伤的修复作用。 结果与结论：①分离得到的人羊膜上皮细胞表达上皮细胞标志物角蛋白CK19,不表达间充质细胞标志物波形蛋白,不同程度表达CD29,CD73。扫描电子显微镜观察到人羊膜上皮细胞胞体饱满,连接紧密,细胞状态良好。②人羊膜上皮细胞移植到新西兰大白兔臂丛神经损伤模型后18周,免疫荧光检测到神经损伤区可见有表达绿色荧光蛋白的羊膜上皮细胞。③术后6周实验组大白兔前爪功能开始恢复,术后12,18周实验组大白兔前爪功能得到明显改善,功能评分明显提高,对照组几乎没有恢复。以上结果可见人羊膜上皮细胞参与了臂丛神经损伤的修复。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

人骨髓间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑病新生大鼠学习记忆功能的影响

目的 研究人骨髓间充质干细胞(hMSC)经脑室移植后对新生鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型的治疗作用及观察植入细胞的存活、迁移及对大鼠远期学习记忆功能的影响.方法 体外分离、扩增正常人骨髓间充质干细胞,移植前用CM-DiI标记.7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、HIE组(n=10)、HIE-hMSC组(n=20).HIE-hMSC组:建立HIE模型后72 h,将hMSC(1×106细胞/μl)5μl采用立体定向移植到乳鼠侧脑室.大鼠6周龄时行Morris水迷宫实验检测其学习记忆功能.取大鼠脑组织制作快速冰冻切片直接在荧光显微镜下观察移植细胞的存活及迁移.部分脑组织制成石蜡切片,HE染色计数海马CA1区存活神经元数.结果hMSC移植到大鼠脑室后能存活至少5周,移植后2周细胞沿移植针道呈条索状分布,并发出红色荧光;移植后5周,细胞分布较前稀疏,损伤组织中可见移植细胞.大鼠的空间学习记忆功能有所改善,水迷宫平均逃逸潜伏期HIE-hMSC组(45.5±16.5) s较HIE组(74.5±7.5)s显著缩短(P<0.05),原平台像限的搜索时间HIE-hMSC组(47±10)s显著长于HIE组(36±8)s(P<0.01).HIE-hMSC组左侧海马CA1区存活神经元数为(94±23)个/mm,较HIE组(61±12)个/mm显著增多(P<0.05).结论 hMSC 经脑室移植到缺氧缺血性脑病的新生SD乳鼠后,hMSC能存活至少5周,并迁移至损伤脑组织.大鼠的远期学习记忆功能有所改善,海马CA1区存活神经元数增多.     

人促红细胞生成素基因修饰人羊膜间充质干细胞蛛网膜下腔移植对脑损伤的影响

BACKGROUND:Studies have shown that as a regulator of bone marrow function erythropoietin is a glycoprotein that controls the development of the central nervous system and has neurotrophic and neuroprotective potential. Therefore, transplantation of human amniotic mesenchymal stem cells genetically modified by human erythropoietin is a new choice for brain injury treatment. OBJECTIVE:To observe the effect of transplantation of human amniotic mesenchymal stem cells genetically modified by human erythropoietin on the functional recovery from brain injury in rats. METHODS:Eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 carrying erythropoietin was successfully constructed and transferred into amniotic mesenchymal stem cells cultured in vitro. Expression of erythropoietin was detected using western blot assay before and after transfection. Rat models of middle cerebral arterial occlusion was made and given transplantation of transfected amniotic mesenchymal stem cells via the tail vein (transfection group). Additionally, model and simple cell transplantation groups were set in a comparative study. RESULTS AND CONCLUSION:Findings from western blot detection showed that transfected cells could express human erythropoietin. Compared with the other groups, modified neurologic severity scores, growth-associated protein 43 and aquaporin 9 at mRNA and protein levels were all decreased significantly in the transfection group. Furthermore, the number of cells positive for CM-Dil was highest in the transfection group, followed by simple cell transplantation group, and lowest in the model group (all P < 0.05). Overall findings from this study show that human erythropoietin-modified human amniotic mesenchymal stem cell transplantation promotes neurologic recovery from brain injury through eliciting a reduction in growth-associated protein 43 and aquaporin 9 at mRNA and protein levels as well as inhibiting cell apoptosis.     

Effect of hyperbaric oxygen on neurological recovery of neonatal rats following hypoxic-ischemic brain damage and its underlying mechanism

Objective: To investigate the mechanism underlying the effect of hyperbaric oxygen (HBO) on hypoxic/ischemic brain damage (HIBD) in a neonatal rat model. Methods: A total of 30 neonatal SD rats aged 7 days were randomly assigned into control group, HIBD group and HBO group (n=10 per group). Following HIBD modeling in neonatal rats, HBO treatment was performed for consecutive 7 days. Immunohistochemistry was done to measure the expression of bone morphogenetic protein-4 (BMP-4) and nestin in the hippocampus. In situ hybridization was employed to detect the mRNA expression of BMP-4 and nestin in the hippocampus. TUNEL staining was done to detect the apoptosis of nerve cells. Results: HIBD was successfully established in the present study. Among three groups, the protein expression of BMP-4 in the hippocampus was the highest in the HBO group, and the smallest in the HIBD group. The BMP-4 expression in the HIBD group was significantly lower than that in the control group. The protein expression of nestin in the hippocampus was the highest in the HBO group, and the smallest in the HIBD group. The nestin protein expression in the hippocampus of HIBD group was significantly lower than that in the control group. The mRNA expression of BMP-4 in the hippocampus was the highest in the HBO group, and the smallest in the HIBD group. The mRNA expression of nestin in the hippocampus was the highest in the HBO group, and the smallest in the HIBD group. The number of apoptotic cells was the largest in the HIBD group, and the number of apoptotic cells in the HBO group was still larger than that in the control group (P<0.01). Conclusion: HBO may promote the neurological recovery in neonatal rats with HIBD, which may be attributed to the increased protein and mRNA expression of BMP-4 and nestin in the hippocampus and the inhibition of neural apoptosis.     

Functional regeneration of irradiated salivary glands with human amniotic epithelial cells transplantation

This study aimed to investigate the functional restoration of radiation-damaged salivary gland with human amniotic epithelial cells (hAECs) transplantation by intra-glandular injection. hAECs were isolated from the amnion tissues. After primary culture, the phenotype of hAECs of the second passage was identified by flow cytometry (FCM) and immunocytochemical staining. Then, hAECs were intra-glandularly injected into the irradiated glands of mice. At different time points after transplantation, the glands were collected for hematoxylin-eosin (HE) staining and immunofluorescence staining, and the saliva flow rate was also determined. Results showed these cells were positive for CD29, CD73 and CK19 and negative for CD44, CD34, CD45 and CD71. The transplanted hAECs in the recipient glands could differentiate into acinar-like cells and resulted in morphological and functional restoration of salivary gland.     

脐血间充质干细胞移植修复缺氧缺血损伤新生大鼠的脑功能

背景：课题计划从神经细胞替代、促进内源性神经干细胞增殖和分化、保护神经元、促进突触重建以及减轻脑白质损伤等方面来探讨脐血间充质干细胞系统移植对新生大鼠缺氧缺血脑损伤后神经功能的修复作用及其机制。 目的：观察脐血间充质干细胞由静脉途径移植透过血脑屏障进入脑组织内,对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑功能修复的影响。 方法：7 d龄SD新生鼠分为3组：假手术组仅分离出左侧颈总动脉而不结扎;缺氧缺血脑损伤组制备缺氧缺血脑损伤模型;细胞移植组在缺氧缺血性脑损伤后第8天尾静脉移植人脐血间充质干细胞,前两组尾静脉注射等量的生理盐水。 结果与结论：免疫荧光观察显示移植后5周脐血间充质干细胞迁移到海马,Nissl染色结果显示脐血间充质干细胞移植后,左侧海马DG区锥体细胞尼氏小体明显增加,提示间充质干细胞移植后可分化为神经元。行为学测试结果显示：与假手术组相比,缺氧缺血脑损伤组在T迷宫实验中,自发改变率下降,在放射形迷宫中觅水时间延长,错误次数及重复次数明显增加(P < 0.05);脐血间充质干细胞静脉移植5周后,上述行为学指标均显著改善(P < 0.05)。提示脐血间充质干细胞静脉移植治疗明显改善和提高了缺氧缺血脑损伤大鼠远期的学习记忆和空间辨别能力。     

高压氧对新生儿缺氧缺血性脑病的治疗

本文报告使用婴儿高压氧舱治疗新生儿缺氧缺血性脑病３０例，结果表明，在新生儿神经行为测定（ＮＢＮＡ）和头颅ＣＴ的恢复与同期对照组３０例相比，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），提示本方法对新生儿缺氧缺血性脑病有明显的治疗价值，且未发现任何副作用。     

脑电图联合MRI在新生儿缺氧缺血性脑病诊断及预后的应用

目的:分析脑电图（EEG）联合MRI在新生儿缺氧缺血性脑病诊断及预后的应用价值。方法:缺血缺氧性脑病足月患儿和健康足月新生儿各42例,按照是否确诊缺血缺氧性脑病分为观察组和对照组。对两组新生儿进行脑部MRI动脉自旋标记扫描和振幅整合EEG（aEEG）检查,随访6个月,记录并发症和生存情况。结果:（1）观察组患儿aEEG异常比例显著高于对照组（P<0.05）;（2）观察组患儿基底节区和丘脑呈高灌注状态,额叶呈低灌注状态;（3）正常aEEG新生儿中,观察组患儿丘脑核基底节区灌注均值显著高于对照组;（4）aEEG正常和中度异常新生儿中,不良预后患儿丘脑和基底节区灌注显著高于预后良好患儿。结论:EEG联合头颅MRI能够显著提高新生儿缺氧缺血性脑病诊断的敏感性,对不良预后有一定的预测价值。     

灯盏花素联合骨髓间充质干细胞移植促进脑梗死大鼠神经功能恢复

背景：灯盏花素治疗脑梗死疗效确切、不良反应少、远期疗效稳定、毒副作用少,能够改善脑梗死后中枢神经系统受损区的微环境。 目的：探讨灯盏花素注射液联合骨髓间充质干细胞移植对脑梗死神经功能恢复及生长相关蛋白43表达的影响。 方法：将60只大脑中动脉闭塞模型SD大鼠随机分为脑梗死组、骨髓间充质干细胞移植组和联合组。建模6 h后通过尾静脉注射1 mL PBS、1 mL骨髓间充质干细胞悬液(2.5×106)、1 mL骨髓间充质干细胞悬液(2.5× 106)+灯盏花素注射液75 mg/kg,连续注射5 d,1次/d。 结果与结论：移植后2周,免疫荧光法观察到BrdU阳性标记的骨髓间充质干细胞主要集中于梗死灶周围且联合组的BrdU阳性细胞数量多于骨髓间充质干细胞组及脑梗死组(P < 0.01);移植后1,2,3周联合组的神经功能障碍评分明显低于骨髓间充质干细胞组及脑梗死组(P < 0.05);移植后2周,与骨髓间充质干细胞组及脑梗死组比较,联合组的脑梗死面积明显减小,水肿程度明显减轻,生长相关蛋白43的表达明显增高(P < 0.05)。光镜下联合组脑梗死组织中胶质细胞明显增生,脑组织水肿有明显减轻。结果表明灯盏花素注射液联合骨髓间充质干细胞可明显减轻脑梗死面积及水肿程度,促进大鼠脑梗死后神经功能恢复及梗死灶生长相关蛋白43的表达。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

缺氧缺血性脑病新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白表达与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法:7日龄新生大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组和假手术对照(NC)组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、7天取心脏组织,应用免疫组织化学法检测心肌组织Caspase-3、Cyt C蛋白的表达;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果:HIE组24小时Caspase-3出现阳性细胞表达增多,48小时达高峰,24小时~7天Caspase-3的表达均明显高于NC组(P<0.05)。HIE组24小时Cyt C出现较多的阳性细胞表达,72小时达高峰,至7天时仍高于NC组(P<0.05)。HIE组12小时心肌阳性凋亡细胞开始增多,72小时达高峰,12~72小时各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05)。Cas-pase-3、Cyt C蛋白表达与凋亡细胞数二者之间均呈直线正相关。结论:HIE新生大鼠心肌细胞Caspase-3、Cyt C蛋白表达增加,提示Caspase-3、Cyt C蛋白表达对心肌细胞凋亡起促进作用。