成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用ThermoShandonExcelsior组织处理机、ThermoShandonHistocentre2型石蜡包埋机、ThermoShandonFinesse325型切片机、ThermoShandonVaristainGemini全自动染片机和ThermoShandonConsul全自动封片机制作成年斑马鱼石蜡连续切片并进行HE染色。结果利用上述方法获得清晰的成年斑马鱼石蜡连续HE染色切片。结论斑马鱼石蜡连续切片的制作和HE染色与哺乳类动物组织切片和染色在操作和某些工作参数上有所不同。     

铃木神经组织镀银改良法在石蜡连续切片中的应用

铃木神经组织镀银改良法在石蜡连续切片中的应用赖红，田应燮（中国医科大学脑研究所沈阳１１０００１）神经纤维镀银染色制成连续切片，是一个难题。特别是神经纤维的连续性很难掌握，我们经过反复实验，摸索出石蜡连续切片的银染方法，效果良好，特介绍如下。一、染色方...     

壁虎颈髓连续组织切片计算机三维重建研究

目的:利用壁虎颈髓连续切片,探索一种用计算机三维重建技术,获得"壁虎虚拟脊髓"形态的方法。方法:通过数码显微摄像系统对连续的Nissl染色的冰冻切片进行拍照,获得壁虎颈髓连续切片的图像,再利用三维重建方法,把二维的切片图像重建成三维图像。结果:在MATLAB开发平台上,采用基于有序数据结构的Shear-Warp算法,重建得到虚拟脊髓,重建后的脊髓可以进行任意的切割、旋转等操作。结论:利用计算机辅助三维重建方法对壁虎颈髓重建,是一种较为实用的方法。     

大鼠肾标本连续切片的三维重建及形态学测量

目的 综合运用目前较成熟的技术,建立一个易施行的、可对大组织标本连续切片整体图像进行三维重建及形态学测量的方法。 方法 对正常大鼠肾的石蜡包埋标本进行全序列连续切片,HE染色后对切片图像进行数字化采集,经过拼接、配准步骤,建立切片整体图像的数字化数据集,对其内部的血管系统及肾盂进行分割及三维重建,并对重建结果进行形态学测量。 结果 切片的整体图像清晰,数字化图像数据集配准准确,三维重建结果再现了各种结构的立体特征及其在原组织块内的位置,在三维空间内,可进行无阻挡的自由观察,并且测量出了脉管系统的多项三维形态学指标,包括组织体积构成百分比、动脉长度及分支角度等。 结论 采用这种方法取得了较为满意的重建结果,可为其他组织连续切片的三维重建研究提供借鉴。     

成年小鼠海马结构的三维重建

目的 利用三维重建工具软件对小鼠大脑、海马结构进行三维重建,并对重建的图像进行观察和测量。 方法 获取小鼠大脑连续冷冻Nissl染色切片,进行图像预处理后,构建三维重建数据集。利用PhotoshopCS3软件对小鼠大脑冠状切片海马结构的不同区域填充不同的颜色。然后,利用3DDOCTOR　4.0软件分别对上述连续切片图像进行配准、分割和三维重建,并对重建的脑及海马结构进行观察。 结果 利用小鼠脑连续冷冻Nissl染色切片图像可以对小鼠海马结构进行三维重建,并能立体观察海马下托、CA1、CA2、CA3、CA4区和齿状回等结构。 结论 利用小鼠脑的连续冷冻Nissl染色切片可以对小鼠脑及海马结构进行三维重建。     

文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用Leica EG1150分体式石蜡包埋机;Leica VT1000S手动轮转切片机;Leica HI1210摊片机;Leica HI1220烘片机制作文昌鱼石蜡连续切片并进行HE染色。依据对脱水和透明过程中文昌鱼外观的变化以及镜下切片结果的反复比较,总结出各个步骤的时间参数。结果利用上述方法获得清晰的文昌鱼石蜡连续HE染色切片,我们选择了头部、胸部、腹部、尾部四个有代表性的文昌鱼断面,在片中可以清楚地分辨脊索、神经管、鳃、卵巢、肌节、肠等结构。结论本文成功建立文昌鱼石蜡连续切片的制作和HE染色方法,并为研究脊椎动物的起源提供基础资料。     

同时显示大鼠中枢神经系统神经元和神经纤维的全程连续切片方法

目的　探索一种简便易行并能同时显示大鼠中枢神经系统 (CNS)神经元和神经纤维的全程连续切片方法。　方法　经过灌流固定的CNS组织低温冰箱速冻后连续冰冻切片和改良的苏木精染色方法。　结果　大鼠全程CNS连续切片各断面上神经元呈蓝黑色 ,神经纤维呈蓝色 ,背景淡黄色。　结论　运用低温速冻、连续冰冻切片、改良的苏木精染色方法可制作同时显示CNS神经元和神经纤维的全程连续切片。     

采用Photoshop软件对成年SD大鼠脊髓中皮质脊髓束三维重建的研究

目的利用大鼠脊髓连续切片,结合三维重建工具软件对正常大鼠皮质脊髓束进行三维重建。方法制作正常成年SD大鼠脊髓连续横断切片,进行Luxol快蓝(LFB)染色并摄片,获得大鼠脊髓皮质脊髓束连续切片图像。在Photoshop软件环境下完成切片图像的配准、分割、灰度化。利用3D-DOCTOR软件进行阈值分割并对大鼠脊髓、脊髓灰质、双侧皮质脊髓束结构进行三维重建,在普通台式机(PC)上对重建结构进行任意角度的观察、切割和测量。结果重建出的大鼠脊髓、脊髓灰质、双侧皮质脊髓束具有立体感,大鼠皮质脊髓束于大鼠颈1节段(C1)~骶4节段(S4)走行于大鼠脊髓后索腹侧,紧贴灰质中间带背侧,呈逐渐变细的类圆柱状形态。在PC机中进行切割后可以对切割后剩余结构进行表面积和体积的数据测量。结论利用大鼠脊髓的连续LFB染色切片,结合计算机三维重建技术,能够进行大鼠皮质脊髓束的三维重建,并提供测量数据。     

脊髓和脑干Weigert法的改良

在医学院校对本科生、研究生的中枢神经解剖学教学过程中 ,脊髓和脑干的断面切片是必须观察的教学内容。熟练运用神经解剖学的技术方法对从事中枢神经形态学研究的科技工作者来说也是一项基本技能之一。传统的神经切片制作染色法采用Ｗｅｉｇｅｒｔ法[1,2 ] 以显示神经组织中髓鞘的分布状况。作者根据多年来实践操作经验对这一方法进行改良。以往神经切片制作所显示的髓鞘方法为经过火棉胶切片后再进行特殊染色 ,但标本在制作过程中损耗率大 ,且制作时间长 ,至少 3至 4个月。为此 ,本文对Ｗｅｉｇｅｒｔ染色法切片制作过程中的某些关键步骤…     

猫视神经连续切片的计算机三维重建

目的制备猫视神经的连续切片,选择合适的染色方法 ,寻找合适的配准方法 ,经图像采集及初步处理后利用计算机的三维重建技术,获得可视化的猫视神经三维结构。方法利用石蜡切片技术的制备猫视神经连续切片,采用特殊的神经三色染色法进行切片染色。利用数码显微镜及Motic Images Advanced 3.0和Motic Images Assembly 1.0软件对连续的猫视神经石蜡切片进行拍照,获得猫视神经连续切片的原始图像,将原始图像在GIMP软件中经过调整亮度对比度、初步图像配准、提取神经束膜图像信息后在Amira软件下,经过计算机在手工配准的基础上进一步自动配准,把二维的切片图像重建成三维的可视化图像。结果实验所得经三色染色的连续切片的原始图像上神经束膜能较好的与周围的组织区分;利用Amira三维重建软件,重建得到猫视神经三维结构图像,重建后的猫视神经结构三维图像可进行任意的切割、旋转、回复、拍照等操作。结论实验证明在不利用标志线的条件下,通过制备视神经连续切片,经过染色拍照,手工图像配准后利用计算机自动配准技术对视神经进行三维重建是完全可行的。     

大鼠小肠壁连续切片的三维重建

目的 在肠壁、微绒毛及肠腺3个观察水平对大鼠小肠进行三维重建,观察其内部各结构的三维形态学特征及空间位置关系.方法 正常SD大鼠1只,取小肠制作石蜡包埋标本,经连续切片、HE染色后,进行数字化图像采集;经图像拼接、预处理、配准、分割及三维重建等步骤后,观察各结构空间相互位置关系,并进行形态学指标测量.结果三维重建图像能够直观、立体地显示肠壁及肠壁内各结构(如动脉、静脉、淋巴管、微绒毛、肠腺等)的三维形态及相互空间位置关系.根据重建结果测量得到多项形态学指标,如微绒毛密度、平均高度,肠腺密度、体积.结论小肠黏膜下层与微绒毛内部存在丰富的血管网及淋巴管网,其排列方式与小肠的吸收及免疫功能密切相关.     

生物组织连续切片图像的配准与三维显示

连续组织切片图像的的三维重建和显示，是一种重要的形态学研究方法，三维重建过程中，首先要对连续切片图像进行配准，本文首先介绍了作者提出的用于自动图像配准的分割一计数法，该方法通过对图像做简单的阈值分割，将优化的准则函数定义为图像的联合直方图特定区域上的计数值，大大加快了配准速度，然后将该方法用于小鼠胚胎的连续切片图像配准，得到空间上配准的三维数据场，为三维显示奠定了基础，最后给了一个初步的表面绘制结果。     

一种病理组织切片恒温染色台的设计

目的设计一种可提高组织切片苏木精-伊红(HE)染色速率及染色质量的病理组织切片染色装置。方法设计制作由水浴箱、带盖染色缸、电控箱三部分构成的组织切片恒温染色台,实验比对组织石蜡切片上的石蜡膜溶于二甲苯的互溶速率和镜下染色效果。结果在37.0℃条件下,石蜡膜在二甲苯中的溶脱时间比室温条件下缩短了近一半的时间,互溶速率两组比较差异有显著统计学意义(P<0.001);在减少1/2染色时间染制的切片组织色泽与室温条件下的染色效果类似,而且细小颗粒着色清晰。结论应用该设备条件的组织切片染色效果优于传统常温方法。     

应用微波辐射促进Cajal镀银染色

cajal氨酒精法镀银染色是组织学中常用的神经组织块染色方法，该方法适于大量切片制做，并且染色后大型神经元和神经纤维鲜明突出。但该方法染色时程较长(6～9d)，为探索加快cajal氨酒精法镀银染色的有效方法，作者对Cajal氨酒精法镀银染色过程中的固定、浸银、还原等步骤进行了微波辐射处理实验。     

附睾管三维重建及解剖

目的 以人附睾组织为研究对象,进行附睾管三维重建,明确附睾管解剖学及组织学特点。 方法 对1例人附睾连续组织切片,Leica Aperio AT2数字扫描,Photoshop CC 2018配准,VGStudio MAX V3.0三维立体合成,Materialise Magics V22.0后期修饰。另1例用于电子显微镜观察。结合切片及三维重建,分析附睾管的组织学特点。 结果 获得7 μm厚的横断面人附睾石蜡切片4331张,矢状面切片543张;人附睾管存在明显的区域性分布,附睾头、体和尾部可分别划分为7个、9个和4个亚区,亚区间有组织间隔;不同亚区内附睾管排列无序,但附睾管管径及其上皮结构存在差异,且体、尾部各亚区间为单根附睾管连接。 结论 利用连续组织切片的方法能成功三维重建人附睾管。揭示人附睾管具有明显的空间区域性,不同亚区组织存在差异。     

Lillie-Mayer苏木精在冷冻切片快速进行性染色中应用

恒温冷冻切片是用于术中快速病理诊断的主要制片技术,除了要求技术人员有熟练的操作技能外,更重要的是要求在制作程序及苏木精染液的配制和使用方法上做出有效的选择,才能达到最佳的染色效果.Lillie-Mayer苏木精染液是一种从英国引进的改良配方,应用于冷冻切片的快速进行性染色,全程染色约90 s完成,该方法简化了盐酸乙醇分化的程序,节省了分化和返蓝中所消耗的时间,避免了盐酸乙醇酸化后引起的部分组织脱落掉片的现象.现将我科多年来在冷冻切片的快速染色方法及Lillie-Mayer苏木精染液的配制方法介绍如下.     

H-E染色制作整块脊髓切片

正制片技术已相当广泛地应用于众多的学科领域~([1])。生物医学领域在制作脊髓切片时,通常选用强还原剂(硝酸银)进行染色制片。因为神经组织是动物体内比较柔软的组织,其结构和功能较为复杂特殊~([2])。强还原剂硝酸银能很好地将神经组织脑和脊髓内的灰质和白质进行染色上的区分,也可将神经元与神经胶质细胞更好地显示清楚,这就是脊髓切片制作时常选用硝酸银染色的原因所在。制作石蜡组织切片时一般选用H-E染料,即苏木精和伊红染料。这2种染液配制简捷方便,价格低廉,染色效果佳,     

酵素水溶液在冷冻切片染色分化中的应用

冷冻切片是保证术中病理诊断和进行科学研究的重要手段,切片质量的好坏直接影响快速诊断的结果及科研的可靠性。影响冷冻切片质量的因素很多,分化液是其中之一。酵素又称为酶,具有催化、净化等作用,现今在生产、生活中广泛应用,如清洗、灭菌、净化、美容、减肥等。有关其在病理切片制作中的应用尚未尝试。作者在不同组织冷冻切片染色中利用酵素水溶液分化,以期探索出提高切片染色清晰度、对比度,优化冷冻切片质量的方法。     

大鼠脑组织厚冷冻切片的经验探讨

正现阶段利用动物模型可以帮助我们发现引起精神疾病临床症状的脑部异常变化,进而为治疗提供重要的理念与依据。动物模型的脑组织切片的特殊染色、免疫组化染色、免疫荧光染色等病理学技术是观察脑部组织异常改变非常重要的方法。如对大鼠脑组织行振动切片高尔基染色,以对神经元的形态进行定性或定量的观察[1]。相关文献中也经常会进行冷冻厚切片(25～50 μm)的制作[2-3]。与临床病理相比,动物实验性研究的冷冻切片病理技术操作及结果展示上会有所不同[4]     

介绍一种冷冻切片快速染色方法

制作优质的冷冻切片,以缩短染色时间、提高染色细胞的核浆清晰度最为重要。我们试将苏木精。伊红按比例配成混合液使整个染色过程在1min内完成,且不必经过盐酸乙醇分化,染色鲜艳而稳定,现介绍如下。1材料和方法1．1染液配制（1）冷冻固定液：85％乙醇85ml,4％甲醛10ml,冰醋酸5ml。（2）苏木精伊红混合染色液：沉淀酸化伊红Y乙醇应用液1份,哈雷苏木精液3份混合供染色用。1．2切片制作取手术新鲜组织置恒冷式切片机载物台上,－20℃冷冻后6μm切片,玻片附贴切片后即刻用冷冻固定液固定10S,水稍洗,滴加苏木精伊红混合染色液至液体覆…