异基因造血干细胞移植中同种异体NK细胞的临床应用及研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)识别并与靶细胞表面人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子结合后转导活化性或抑制性信号,从而调节自然杀伤(NK)细胞活性。在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中,当KIR识别的HLA配体缺失时,NK细胞的同种异体反应性被激活,并特异性杀伤靶细胞。NK细胞KIR分子与靶细胞HLA分子特异性识别机制参与移植物抗白血病(GvL)效应和移植物抗宿主病(GvHD)。同种异体NK细胞介导的GvL效应和降低的GvHD发生率使其适合移植。现就allo-HSCT中同种异体NK细胞的临床应用及研究进展予以综述。     

NK细胞受体与相关配体

NK细胞表面表达非抗原特异性的受体。按分子结构分类,NK细胞受体可分为Ig超家族和C型凝集素超家族。按其介导的功能,可分为NK细胞激活性受体(NKAR)与NK细胞抑制性受体(NKIR)。NKAR包括介导ADCC的CD16,介导自然杀伤的NKR-P1、与DAP12相偶联的KAR,以及协同刺激受体等。它们多依赖胞浆内ITAM模体传递激活信号。NKIR主要包括KIR与CD94/NKG2复合体,其特异性配体为MHC-I类分子,与NK细胞识别自体细胞密切相关。NKIR需要与NKAR共聚,借助胞浆内的ITIM模体来抑制激活性受体的活化及NK细胞的细胞毒作用。     

NK细胞MHC-1类分子受体及其信号传导

近年来,NK细胞表面MHC-1类分子受体的发现,改变了人们对NK细胞杀伤作用的认识.目前已知,当组织细胞处于正常状态时,NK细胞可通过其表面MH-1类分子受体与正常组织细胞表面相应配体的结合产生杀伤抑制作用;而当细胞受病毒感染或发生突变时,其表面MHC-1类分子表达异常或缺失,NK细胞与相应配体结合则解除杀伤抑制状态,启动活化性信号传导途径,杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞.可见,NK细胞的免疫防御和监视功能与其表面受体在不同情况下传导抑制或活化信号的功能密切相关.     

肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性影响研究

目的 探讨肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性的影响.方法 基因克隆建立稳定表达HLA-G抗原的肿瘤细胞株,以及通过基于CD107a标记的流式细胞术检测肿瘤细胞表达HLA-G前后对NK细胞杀伤功能的影响.结果HLA-G抗原在细胞表面获得不同程度的表达且能显著抑制NK对肿瘤细胞的杀伤活性(P＜0.05).HLA-G特异性抗体87G阻断或其受体KIR2DL4特异性抗体#33阻断后,均能明显恢复NK细胞对转染HLA-G肿瘤细胞的杀伤功能.结论 肿瘤细胞HLA-G表达量不同,均能抑制NK细胞的杀伤活性,提示HLA-G分子表达在恶性肿瘤细胞的免疫逃逸中起重要作用.     

正常人外周血NK细胞形态学观察

NK细胞是淋巴细胞中的一类杀伤细胞,它既不需抗原刺激,亦不需抗体参与,即能杀伤靶细胞,因而称为自然杀伤细胞(natural iller ell,NK细胞)。NK细胞是机体发挥免疫监视功能的重要组成部分,可通过其受体识别“自己”靶细胞MHCI类分子的抗原决定簇,从而对NK细胞活性产生抑制信号,避免对“自己”靶细胞的攻击,而对“非己”靶细胞,如肿瘤细胞、病毒感染细胞则产生非特异性杀伤作用。     

同种异体NK细胞对CD34+早期急性髓系白血病细胞的细胞毒效应

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的细胞毒效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,乳酸脱氢酶释放法测定不同效靶比时NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞KG1a的杀伤活性,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞的克隆形成抑制率,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3CDl6 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均有杀伤活性,均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其杀伤活性和克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的杀伤活性和克隆抑制率低于K562(P＜0.05).结论 同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞具有细胞毒效应.     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体与自身免疫疾病的研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)主要表达于自然杀伤(NK)细胞和部分T细胞表面。KIR分子的配体是表达于靶细胞上的某些主要组织相容性复合体Ⅰ(MHC-Ⅰ)类分子,两者可形成配体-受体复合物。MHC-Ⅰ/KIR分子相互识别,通过传导活化或抑制信号调节NK细胞的杀伤功能,在免疫应答过程中,MHC-Ⅰ/KIR分子的相互作用可保护机体抵御各种病原体的侵袭。KIR在自身免疫病中的作用越来越受到重视。     

自然杀伤细胞受体及抗肿瘤研究进展

自然杀伤(NK)细胞受体研究的进展对NK细胞如何选择性的识别和杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞而避免杀伤正常细胞的认识发生了革命性的变化。NK细胞表面的主要抑制性和活化性受体包括杀伤细胞免疫球蛋白样受体,C型凝集素受体家族,自然细胞毒受体等。临床资料显示,异基因骨髓移植中供受者之间杀伤细胞免疫球蛋白样受体-配体错配引发的异源反应性NK细胞活性可以防止白血病细胞复发。本文主要阐述NK细胞的受体是如何调控NK细胞的杀伤活性及调控NK受体-配体间相互作用提高抗肿瘤效应的方法。     

人鼻咽癌细胞株CNE2对NK细胞KIR/NKG2D受体的免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤功能的影响

目的 探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响.方法 PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪检测对照组(新鲜分离的NK细胞)KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况.IL2组(IL2培养的NK细胞)、CNE2组(CNE2、IL2、NK细胞混合培养)培养后4、24、48 h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况,LDH释放法测定IL2组及CNE2组培养24 h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性.结果 CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7.3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1.CNE2组4、24、48 h时KIR2DL1、KIR2DL3表达较对照组、IL2组明显升高(P＜0.01),NKG2D表达较对照组、IL2组明显降低(P＜0.01),KIR3DL1表达与对照组、IL2组相比无明显变化(P＞0.05).IL2组4、24、48 h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1及NKG2D表达与对照组相比无明显变化(P＞0.05).IL2组、CNE2组培养24 h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.%±1.47)%和(2.74±1.64)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(4.57±2.41)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NK细胞与NKG2D配体阳性的肿瘤细胞持续性接触,下凋NK细胞表面NKG2D表达,上调NK细胞表面与HLAⅠ类分子相结合的KIR表达,导致NK细胞对靶细胞杀伤活性减低.本研究阐明了编辑后的NK细胞杀伤活性减低的分子基础,同时提示阻断HLAⅠ类分子与KIR的结合或者增强NK细胞表面NKG2D的表达将有利于提高NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性.     

自然杀伤细胞活性及其受体和配体的调节在复发性流产中的作用研究进展

自然杀伤(NK)细胞的活性失衡是复发性流产(RSA)发生的关键因素之一,NK细胞的受体、配体以及相关免疫细胞和趋化因子等能够通过活化或抑制NK细胞信号传导通路而调节NK细胞的活性.本文就NK细胞活性及其受体、配体等分子的调节在RSA中的作用研究进展进行综述,旨在为今后对与NK细胞活性相关的RSA的诊断与免疫治疗的研究提...     

双重酶免疫组化法识别淋巴细胞亚群中穿孔素的分布

0 引 言穿孔素(perforin)又称成孔蛋白(pore-forming protein,PFP),是一种相对分子质量为67 000,存在于激活的细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞胞质杀伤颗粒中的糖蛋白,当CTL和NK细胞与靶细胞相遇时,释放PFP,在Ca2+存在下,于靶细胞膜上形成一个520 nm的活性孔道,使靶细胞渗透压改变而溶解.杀伤颗粒中的颗粒酶等其他成分通过此孔道进入靶细胞,也可诱导靶细胞凋亡［1］.CTL和NK细胞介导的细胞毒作用在抗感染、抗肿瘤免疫和器官移植排斥反应中发挥着重要作用［24］.本文介绍采用双重酶免疫组化染色法检测CD3+T淋巴细胞和CD5…     

NK细胞受体的研究进展

从 70年代起人们就认识到 ,ＮＫ细胞是一种重要的淋巴细胞 ,不仅在机体抗病毒和抗肿瘤免疫中发挥着重要作用 ,而且可以产生一些细胞因子 ,在造血、炎症和免疫应答过程中扮演重要角色。ＮＫ细胞不同于Ｔ、Ｂ淋巴细胞 ,它不表达ＴＣＲ ,也不表达ＢＣＲ。它对自身正常细胞无杀伤作用 ,却可通过独特的机制选择性地识别和杀伤某些特定的靶细胞。ＮＫ细胞识别和杀伤靶细胞的机制与其表面受体的特性密切相关。ＮＫ细胞受体根据其所识别的靶分子是否有ＭＨＣ参与 ,可分为ＭＨＣ特异性受体和非ＭＨＣ特异性受体 ;根据其所介导的功能不同又可分为抑制…     

自然杀伤细胞受体及其抗病毒免疫机制

自然杀伤细胞受体（NKR）是自然杀伤（NK）细胞发挥功能的分子基础，多种NKR可与主要组织相容性复合体（MHC）或非MHC类配体结合，传递激活或抑制信号，调节NK细胞活性。近年来NKR在抗病毒免疫方面的研究取得了一定进展。     

鼠淋巴因子诱导的细胞毒细胞对带瘤宿主的保护作用

用小剂量白细胞介素2(IL 2),加细胞毒细胞分化因子(CCDF),激活淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。结果发现:IL 2与CCDF在诱导LICC中有协同作用,CCDF不同于IL 2、IL 1。LICC对肿瘤细胞的杀伤无主要组织相容性复合体和组织来源的限制性,既能杀伤自然杀伤细胞(NK)敏感的靶细胞,也能杀伤与NK相抵抗的靶细胞,不损伤正常淋巴母细胞。不同NK活性小鼠中诱导的LICC无明显差别。LICC与L_(783)肿瘤细胞混合接种小鼠能明显延长患鼠的生存时间。     

SiRNA沉默NK细胞CD158b表达及对异体树突状细胞的杀伤作用

目的 探讨特异性的SiRNA干扰人NK细胞CD158b基因表达对异体树突状细胞杀伤的影响.方法 将特异性的CD158b-SiRNA导入人NK细胞后,qRT-PCR及流式检测NK细胞CD158b基因mRNA及其蛋白质的表达.LDH释放法检测RNA干扰NK细胞CD158b前后对异体DC细胞杀伤效果的影响.结果 特异性siRNA片段能有效降低CD158b mRNA水平,最大干扰效率达72%;脂质体及阴性对照siRNA片段对NK细胞CD158b的表达无特异的干扰作用;流式细胞仪检测证明转染特异SiRNA-CD158b后CD158b蛋白表达明显下降.RNA干扰NK细胞CD158b的表达后能显著提高其杀伤异体DC的活性.结论 特异性的CD158b-SiRNA可有效降低NK细胞中CD158b mRNA水平.明显下调CD158b蛋白表达.RNA干扰NK细胞CD158b后所产生的异源反应性NK细胞对异体DC细胞杀伤效果显著增加,证明通过人工改变NK细胞KIR基因的表达产生KIR-HLA错配的异反应性NK细胞有望应用于异基因骨髓移植中降低GVHD.     

用荧光染料Hoechst Dye 33342测定NK细胞和单核细胞的细胞毒效应

采用DNA特异性荧光染料Hoechst Dye 33342(H33342)标记肿瘤细胞核DNA技术,建立了自动微量荧光分析法.小鼠纤维肉瘤L929细胞和人红白血病K562细胞用H33342标记核DNA后,与NK细胞和单核细胞共同培养,损伤的靶细胞其DNA断裂后释放至上清液中,效应细胞的杀伤活性与肿瘤细胞DNA断裂后释放的荧光强度呈正相关性.研究表明,     

肿瘤继承性免疫治疗的进展——LICC的抗癌作用

迄今为止,通过研究并在体外证明对肿瘤细胞有细胞毒性或用来转输进行继承性免疫的细胞大约有5类:1.细胞毒性T细胞(CTL)。需抗原或有丝分裂原预先致敏,其杀伤作用具有特异性,系直接和靶细胞接触,引起靶细胞膜损伤,但杀伤效应受MHC的限制。2.NK细胞。不需任何处理即能直接杀伤肿瘤细胞,但仅对少数NK细胞敏感的肿瘤细胞有效,且选择性差,也能杀伤正常细胞,杀伤作用无特异性,如用白细胞介素或干扰素处理,可加强其杀伤活性,扩大靶细     

WT1多肽特异性T细胞受体基因转导正常T细胞的抗肺癌效应

目的通过基因转导技术获得WT1多肽特异性TCR基因转导的正常外周CD8+ T细胞,检测其对肺癌细胞的杀伤活性,探
讨TCR基因转导用于过继性细胞治疗肺癌的可行性及安全性。方法通过克隆HLA-A*2402限制性WT1特异性细胞毒性T细
胞（CTL）之TCR基因,经构建逆转录病毒载体后转导WT1-TCR基因至正常外周CD8+ T细胞;所获得的CD8+ T细胞对靶细胞
的杀伤效应经标准51Cr 释放试验测定。结果WT1-TCR 基因转导后的正常外周CD8+ T 细胞显示出对WT1 多肽负载的
HLA-A*2402+LCL细胞的特异性杀伤作用,同时TCR基因改造后的CD8+ T细胞可特异性杀伤HLA-A*2402及WT1表达阳性
的肺癌细胞株而不对HLA-A*2402表达阳性的正常细胞产生杀伤作用。结论这些数据论证了WT1-TCR基因转导正常外周T
细胞具有与亲代CTL一致的特异性杀伤特性,提示该方法用于过继性细胞免疫疗法治疗肺癌具有可行性。
     

自然杀伤细胞抗肿瘤治疗研究进展

自然杀伤（NK）细胞是最重要的抗肿瘤免疫细胞。提高NK细胞抗瘤活性的最新研究包括：同种异体NK细胞过继性免疫治疗;通过基因工程的方法使肿瘤细胞表达肿瘤抗原特异性嵌合受体;选择具有高亲和力Fc受体NK细胞,联合单克隆抗体通过ADCC效应杀伤肿瘤细胞;提高靶细胞对NK细胞介导的凋亡的敏感性;解除抑制因素对NK细胞的影响;促进NK细胞浸润肿瘤组织及淋巴结;NK细胞不同亚群间的功能差异研究。     

人类自然杀伤细胞对靶细胞的选择性结合

采用单个细胞水平细胞毒方法研究比较了正常人外周血自然杀伤(NK)细胞对不同靶细胞结合与杀伤活性的差别。发现NK细胞对人胚胎成纤维细胞和低分化鼻咽癌(CNE-2)细胞的结合率明显高于对人成骨肉瘤细胞(OS-732)和PLC/PRF/5人肝癌细胞,结合并杀伤新鲜切除人肝癌细胞,而对同一病人的癌周肝细胞则无作用;在同一株CNE-2细胞中,NK多选择性地与核浆比例大的靶细胞结合。以上结果说明NK细胞在发挥自然细胞毒过程中具有一定的选择性,选择性地结合并杀伤分化差或幼稚的靶细胞。