血管平滑肌细胞凋亡在腹主动脉瘤发病中的作用

目的：探讨腹主动脉瘤（AAA）中膜血管平滑肌细胞（VSMC）密度降低的机制。方法：选取人体肾下AAA及正常腹主动脉组织（NA）标本,采用免疫组化及原位末端DNA标记技术,测定中膜VSMC,凋亡细胞及其相关蛋白,计算机图像分析并计算VSMC密度及凋亡指数。结果：与NA相比,AAA中膜VSMC密度降低,VSMC凋亡指数及其相关蛋白P53,P21明显增加,而bcl-2无显变化。结论：VSMC凋亡在细胞水平参与腹主动脉结构损伤与重构,促进AAA形成。     

血管平滑肌细胞凋亡在腹主动脉瘤形成机制中的作用

细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是机体在维持正常组织结构和生理功能过程中自然发生的细胞更替,它的异常可导致很多疾病,促进细胞凋亡可使正常细胞过多死亡,同样阻滞细胞凋亡的发生则可能导致恶性肿瘤。最近的研究表明细胞凋亡在正常和病变再塑形的血管壁中均起重要作用［１～２］。腹主动脉瘤（ａｂｄｏｍｉｎａｌａｏｒｔｉｃａｎｅｕｒｙｓｍ,ＡＡＡ）是血管壁再塑形的典型例子,以动脉壁逐渐变弱和渐进性扩张最后破裂为特征［３］。其主要病理变化包括：动脉壁中层弹力纤维的广泛断裂和退化、胶原纤维所占百分比相对过多、免疫及…     

细胞外信号调节激酶对人血管平滑肌细胞的作用及其机制

目的观察磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)对离体培养的平滑肌细胞增殖、凋亡和表型改变的影响。方法培养人大隐静脉平滑肌细胞,实验组培养液中加入PD98059对磷酸化ERK进行阻断后,观测平滑肌细胞的增殖活性,凋亡细胞所占比例以及细胞表型,并与对照组比较。结果实验组与对照组相比,细胞增殖活性明显低于对照组(P<0.01),电镜和荧光染色测定凋亡细胞所占比例明显高于对照组(P<0.01),电镜检测合成型细胞所占比例明显低于对照组(P<0.01),收缩型细胞所占比例较对照组明显为高(P<0.01),α肌动蛋白免疫荧光化学检测显示处理组荧光表达强于对照组。结论对离体培养的人大隐静脉平滑肌细胞磷酸化ERK进行阻断后,平滑肌细胞的增殖受抑,凋亡增加,细胞由合成型向收缩型转变。     

坏死细胞对周围正常血管平滑肌细胞增殖迁移的影响及作用机制研究

目的观察坏死的血管平滑肌细胞对周围正常细胞增殖和迁移能力的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法采用无血清无糖低氧条件制备血管平滑肌细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液干预正常细胞。实验设置无血清低糖DMEM培养的对照组、坏死上清(NCS)干预组、坏死上清与IL-1拮抗剂联合干预组、坏死上清与IL-6拮抗剂联合干预组、IL-1α干预组以及IL-6干预组。CCK-8方法检测细胞增殖能力变化,Transwell方法检测细胞迁移能力变化,RT-PCR方法检测各组细胞中IL-6和CRP m RNA表达情况,Western blot方法检测各组细胞CRP、Akt、p-Akt蛋白的表达。结果与对照组相比,NCS组、IL-1α组和IL-6组细胞的增殖能力和迁移能力均显著性增加(P0.05),同时,NCS和IL-1α组血管平滑肌细胞IL-6表达升高(P0.05),NCS组、IL-1α组和IL-6组细胞CRP和p-Akt的表达也呈增加趋势(P0.05);而NCS+IL-1 RA组和NCS+IL-6 RA组细胞增殖、迁移能力较NCS组有所下降(P0.05),CRP和pAkt的表达也相应有所降低(P0.05)。结论坏死的血管平滑肌细胞可能通过释放IL-1α促进周围正常细胞IL-6的表达,进而上调CRP和p-Akt的表达,从而促进细胞增殖迁移。     

Arresten对血管平滑肌细胞作用和机制的研究

目的探讨arresten蛋白对人血管平滑肌细胞的作用以及可能的相关调控机制。方法采用实时活细胞动态成像实验检测不同浓度arresten对血管平滑肌细胞增殖能力的影响;采用蛋白芯片检测在arresten作用下血管平滑肌细胞内差异性表达的相关细胞因子;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关细胞因子的差异性表达。结果实时活细胞动态成像显示arresten能够抑制血管平滑肌细胞增殖水平;蛋白芯片实验显示arresten作用下血管平滑肌细胞内Angiogenin、Endoglin及TIMP-1具有差异性表达;RT-PCR结果验证了在arresten作用下血管平滑肌细胞内Angiogenin的差异性表达,Endoglin和TIMP-1表达差异不明显。结论arresten对血管平滑肌细胞增殖有抑制作用,其机制可能通过Angiogenin参与信号通路的调节来发挥作用。     

移植血管平滑肌细胞PCNA表达及药物影响的研究

目的　探讨 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 等药物对兔静脉移植模型早期增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 表达的影响。　方法　兔颈静脉移植于颈动脉后应用 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 、 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 、 Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ 和 Ｖｅｒａｐａ ｍｉｌ 治疗, 并于不同时间采用免疫组化方法观察血管平滑肌 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达的变化。　结果　术后３ 、７ 、１４ 天均有 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达;３ 天时 Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ 、 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 两组 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达与对照组差异不显著;相反 Ｖｅｒａｐａ ｍｉｌ 及 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ两组的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 指数均低于对照及其他两组;术后７ 、１４ 天动、静脉 Ｖ Ｓ Ｍ Ｃ 中的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 各组的表达均与术后３ 天相同只是强度略有下降;移植静脉 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 指数均略低于相应动脉。　结论　 Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ 、 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ对血管移植后动、静脉 Ｖ Ｓ Ｍ Ｃ 内的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达无影响, Ｖｅｒａｐａ ｍｉｌ 及 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 对移植静脉及相应动脉平滑肌细胞的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达有抑制作用     

辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中胱冬肽酶-3活性的影响

目的探讨γ射线对胱冬肽酶-3(Caspase-3)基因在犬胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡中的活性影响。方法将^103pd放射性支架和普通支架分别植入犬肝外胆管内，取出胆管标本，用免疫组化进行平滑肌细胞凋亡染色，并在JEM-1200EX电镜下观察凋亡细胞超微结构变化；又用RT-PCR检测7射线诱导犬胆管壁凋亡的增殖平滑肌细胞中Caspase-3基因的mRNA。结果^103pd支架组犬胆管组织中Caspase-3基因表达较普通支架组明显，且Caspase-3基因高表达组犬胆管出现明显增殖平滑肌细胞凋亡，而且犬肝外胆管无明显狭窄；而普通支架Caspase-3基因低表达，且犬胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡，而且犬肝外胆管有明显狭窄。结论辐射可以使Caspase-3基因活性增高，切与细胞凋亡有关；^103pd放射性支架通过激活Caspase-3基因，促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡，可以抑制犬肝外胆管狭窄。     

自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管内膜增生是血管增生性疾病共同的生理特征,增殖的内膜由血管平滑肌细胞(VSMC)、成纤维细胞、肌成纤维细胞组成,其中,VSMC的增殖及迁移在内膜增生中发挥着重要作用.自噬是一种有助于细胞稳态的重要生物学过程,已被证实在VSMC增殖中具有关键性作用,既能抑制VSMC的增殖,维护细胞的正常功能,又能促进VSMC的增殖,导...     

坏死细胞释放IL-1对血管平滑肌细胞增殖及炎性反应的影响

目的 研究坏死血管平滑肌细胞对周围正常细胞增殖及炎性因子分泌的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 无血清低糖低氧条件下培养细胞,建立细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液,用于干预正常血管平滑肌细胞.实验设坏死上清组、IL-1组、坏死上清+IL-1RA组和对照组.MTT法检测各组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组MCP-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达;ELISA检测各组MCP-1、IL-6和IL-8的分泌;Western blot检测各组NF-kB的激活情况.结果 NCS组和IL-1组细胞增殖能力均显著高于对照组(P＜0.01),NCS+IL-1 β组细胞增殖能力显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.01);NCS组和IL-1 β组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1 β组的MCP-1、IL-6及IL-8蛋白的分泌均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6和IL-8蛋白的分泌显著低于NCS组及IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1组NF-kB的活性显著高于对照组(P＜0.05),与NCS组和IL-1组相比NCS+IL-1RA组NF-kB的活性显著降低(P＜0.05).结论 坏死血管平滑肌细胞能够促进正常细胞的增殖,诱导NF-kB的激活以及炎性因子的释放,并且这种促进作用可能与IL-1的大量释放有关.     

终末期肾病患者血管平滑肌细胞凋亡情况及其影响因素分析

目的：观察终末期肾病（ESRD）患者血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡情况及其影响因素.方法：在ESRD患者行动静脉内瘘手术时留取桡动脉0.5～1 cm,共43例.年龄相匹配的因外周血管疾病行血管手术4例患者的动脉作为对照,对照组肾功能正常.采用DNA片段原位缺口末端标记技术（TUNEL法）检测上述二组动脉血管平滑肌细胞凋亡情况,结果用凋亡指数表示.临床指标包括血钙、血磷、钙磷乘积、全段甲状旁腺素（iPTH）、血浆白蛋白（Alb）、血红蛋白（Hb）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、C-反应蛋白（CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）.采用Pearson相关分析计算凋亡指数与上述临床指标的相关性.结果：ESRD患者的动脉中膜可见到明显的VSMC凋亡,而在对照组血管中膜,只见到极少量凋亡的VSMC.ESRD患者的VSMC凋亡指数与临床指标中的血磷、钙磷乘积、LDL水平呈显著正相关（P＜0.05）.结论：ESRD患者动脉存在明显的VSMC凋亡;血磷、钙磷乘积和LDL升高可能是VSMC凋亡的促进因素.     

微小RNA-17-5p下调同源盒蛋白HOXB13抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的:探讨微小RNA(miR)-17-5p调控同源盒蛋白(HOXB13)的分子机制。方法:从SD大鼠胸主动脉分离和培养血管平滑肌细胞(VSMCs);利用细胞计数试剂盒检测细胞增殖;反转录定量聚合酶链反应检测miRNA和miR-17-5p的表达;细胞转染miR-17-5p mimics、anti-miR-17-5p和小干...     

动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)在动脉粥样硬化组织中的表达以及选择性COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的人血管平滑肌细胞(VSMCs)在细胞增殖和凋亡中的作用.方法 对22例动脉粥样硬化组织切片进行COX-2免疫组织化学染色;对体外培养的原代人VSMCs以不同浓度的塞来昔布处理24 h,以噻唑蓝(MTT)细胞增殖及细胞毒性检测法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞早期凋亡.结果 免疫组织化学染色阳性表达率为95％,且在血管内膜、中膜和外膜均有阳性细胞存在;体外培养的人VSMCs中加入塞来昔布可明显抑制COX-2的表达;浓度为0、10、20、40、80 μmol/L的塞来昔布作用于VSMCs 24 h后,以MTF法检测细胞存活率分别为100.00％、90.06％、81.38％、75.41％、68.90％;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率分别为0.02％、0.62％、0.92％、1.17％、1.63％.结论 COX-2大量表达于动脉粥样硬化组织中,特别表达于炎性巨细胞以及中层VSMCs中,塞来昔布可抑制体外培养的人VSMCs中COX-2的表达,从而抑制其增殖并诱导其凋亡,两者均呈剂量依赖性.     

硫酸吲哚酚对大鼠主动脉平滑肌细胞增生影响的机制研究

目的：探讨硫酸吲哚酚（indoxyl sulfate,IS）对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）增生的影响以及这种变化和氧化应激的关系。方法实验均分为8组：正常组、IS 100μM组、IS 300μM组、IS 500μM组、辛伐他汀10μM＋正常组、辛伐他汀10μM＋IS 100μM组、辛伐他汀10μM＋IS 300μM组、辛伐他汀10μM＋IS 500μM组。采用WST-1法检测VSMC增殖情况;硫代巴比妥酸法检测培养基中丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;ELISA方法测定晚期氧化蛋白产物（advanced oxidation protein products,AOPP）。结果与正常组比较,IS 300μM组和 IS 500μM 组上清液的 WST-1（OD 值）[（1.55±0.27）比（1.18±0.25）与（1.73±0.30）比（1.18±0.25）,P〈0.01]含量、MDA含量[（2.60±0.47）μg/ml比（1.59±0.21）μg/ml与（2.82±0.54）μg/ml比（1.59±0.21）μg/ml,P〈0.01]和 AOPP 含量[（67.94±8.58）μmol/L 比（54.97±8.46）μmol/L与（72.09±9.49）μmol/L比（54.97±8.46）μmol/L,P〈0.01]均明显增高。与同浓度 IS 组相比,辛伐他汀10μM＋IS 300μM 组和辛伐他汀10μM＋IS 500μM 组上清液 WST-1（OD 值）[（1.22±0.24）比（1.55±0.27）与（1.32±0.30）比（1.73±0.30）,P〈0.05]、MDA[（1.64±0.38）μg/mL 比（2.60±0.47）μg/ml 与（1.70±0.40）μg/ml 比（2.82±0.54）μg/ml,P〈0.01]含量和 AOPP 含量[（55.56±7.41）μmol/L比（67.94±8.58）μmol/L 与（55.54±6.80）μmol/L 比（72.09±9.49）μmol/L,P〈0.05]均明显降低。大鼠 VSMC 上清液的 WST-1含量与 MDA 含量呈正相关（r=0.621,P〈0.01）,大鼠VSMC上清液的WST-1含量与AOPP含量呈正相关（r=0.581,P〈0.01）。结论 IS可浓度依赖性地促进大鼠 VSMC增生,其作用可能与 IS增加 VSMC的氧化应激有关;辛伐他汀可抑制此作用。     

The effects of nicotine on vascular smooth muscle cell chemotaxis induced by thrombospondin-1 and fibronectin

Background

Vascular smooth muscle cell (VSMC) migration is an important process in many vascular disorders. Nicotine, thrombospondin-1 (TSP-1) and fibronectin (Fn) separately induce VSMC migration. The hypothesis of this study was that nicotine treatment of vascular cells would augment TSP-1-induced and Fn-induced VSMC migration.

Methods

VSMCs or endothelial cells (ECs) were treated with serum-free medium or nicotine. Migration of VSMCs was assessed using a modified Boyden chemotaxis chamber to serum-free medium, TSP-1, Fn, EC basal medium, and conditioned EC medium or nicotine-treated conditioned EC medium alone or with supplemented TSP-1 or Fn.

Results

Nicotine treatment increased VSMC chemotaxis to serum-free medium, but TSP-1 or Fn had no further effect on chemotaxis. Conditioned EC and nicotine-treated conditioned EC enhanced VSMC chemotaxis, which was further augmented by Fn supplementation.

Conclusions

Nicotine-stimulated EC derived factors induce VSMC migration, which is augmented by the addition of Fn.     

静止压力对血管平滑肌细胞容积调节性氯电流的影响

目的 观察不同静止压力对血管平滑肌细胞容积调节性氯电流(ICl,vol)的影响.方法 将胚胎鼠血管平滑肌细胞株A10细胞分别在正常大气压下、100、200 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)的静止压力下培养,流式细胞仪测试样品的细胞周期与凋亡率,膜片钳全细胞记录技术观察细胞ICl、vol的变化.结果 100 mm Hg静止压力下培养的A10细胞基础电流在+100 mV和-100 mV分别为(32.08±3.22)、(-12.50±1.34)pA/pF,低渗激活的电流在+100 mV和-100 mV分别为(77.91±8.38)、(-39.39±5.72)pA/pF,较对照组(20.49±2.30)、(-9.14±1.35)和(42.34±4.34)、(-24.02±2.71)pA/pF显著增强(P<0.05);当压力达200 mm Hg时,在+100 mV和-100 mV电流密度分别为(12.16±1.29)、(-5.80±0.87)pA/pF(Ib),(28.29±5.20)、(-14.33±2.49)pA/pF(Ihypo),较对照组显著减弱(P<0.05).结论 容积调节性氯通道在静止压力诱导细胞增殖与凋亡过程中发挥了重要作用.     

血管平滑肌细胞在几种基质膜片上生长情况及三种接种培养方法的比较

目的 筛选适合于组织工程血管构建的可降解基质材料及最佳的接种培养方式。方法 将血管平滑肌细胞接种于几种现有的可降解基质材料上，采用MTT法观察细胞在几种基质材料上的生长情况；比较静态、水平摇床、旋转接种三种接种培养方式。结果 细胞相容性比较好的材料有：PGA、胶原加黏多糖、脱钙骨等。三种接种方法的接种率为：静态1．5％。水平摇床7．2％，旋转接种培养53．5％。结论 PGA、胶原加黏多糖、脱钙骨三种材料适合于组织工程血管再造的应用。而三种接种培养方式以旋转接种培养的效率最高。     

改良组织块法成人主动脉血管平滑肌细胞的培养

目的 建立成人主动脉血管平滑肌细胞体外培养的有效方法.方法 无菌条件下分离成人主动脉的平滑肌层,剪成1 mm3的碎片,0.1％ Ⅰ型胶原酶预处理1h,组织块贴壁法,以含胎牛血清20％的DMEM低糖培养基培养.倒置显微镜观察培养细胞的形态学特点,免疫荧光法检测平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 培养至4～5d组织块边缘即有少量细胞爬出,呈长梭形,胞质丰富;培养至1～2周组织块边缘细胞融合,呈典型的“峰谷”样表现.免疫荧光染色结果显示胞质内α-SMA的表达丰富,荧光强度在(++)～ (+++).结论 胶原酶预处理组织的改良组织块贴壁法培养人主动脉血管平滑肌细胞是一种可行有效的实验方法.     

STAT3信号通路与血管重塑中平滑肌细胞表型转化及增殖关系

目的 观察静脉桥再狭窄模型中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖活性的变化,探讨信号转导子和激活子3蛋白(STAT3)的表达与VSMC表型转化及增殖活性的关系.方法 建立猪静脉桥再狭窄模型,采用血管病理形态学、免疫组织化学和免疫印迹(Western blot)方法,观察术后7、14、30 d血管蓖塑及血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌ot肌动蛋白(SM-α actin)和STAT3表达变化及其相关性.结果 (1)术后7 d新牛内膜形成逐渐增厚,于术后30 d达最大;重塑指数和外弹力板围绕面积(EELA)术后7 d稍有增大,其后不断减小,术后14～30 d明显减小(P<0.05).(2)免疫组织化学和Western blot测定STAT3蛋白显示,术后7 d中膜VSMC中阳性表达明显,术后14 d中膜VSMC和内膜VSMC中阳性表达均增加达高峰;术后30 d中膜VSMC中有较少部分阳性表达,内膜VSMC中阳性表达较14 d减少.血管中膜中STAT3和PCNA的蛋白呈显著性正相关(r=0.726,P<0.05).结论 血管平滑肌细胞的表型转化和增殖活性改变对内膜增生和血管重塑起着重要作用,STAT3信号通路与血管重塑中VSMC的增殖高度相关,参与并促进了VSMC的表型转化和增殖.     

诱导骨髓基质细胞成血管平滑肌细胞的研究

目的 探讨体外诱导犬骨髓基质细胞(SMSC)为血管平滑肌细胞(VSMC)及其成血管的能力.方法 用含血小板源性生长因子(PDGF-BB)10ìg/L的内皮细胞培养液-2(EGM-2)诱导,无PDGF-BB的EGM-2培养液为对照,检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SM actin)与肌钙结合蛋白(calponin)的表达并接种于聚羟基乙酸(PGA)培养4周后取材.结果 诱导组(n=5)细胞逐步呈平滑肌样转变,表达a-SM actin与calponin,流式细胞仪阳性率分别为(45.16±0.97)%、(37.54 4±1.15)%,可成血管样结构,对照组(n=5)变化不明显,阳性率(7.92±1.04)%、(6.37±0.83)%,成血管样结构能力差.结论 体外可诱导犬BMSC为VSMC并有成血管样结构的能力.     

Differential effect of nitric oxide on thrombospondin-1-, PDGF- and fibronectin-induced migration of vascular smooth muscle cells

Background

Neointimal hyperplasia involves the migration of medial vascular smooth muscle cells (VSMCs) in response to arterial injury. Thrombospondin-1 (TSP1), platelet-derived growth factor (PDGF), and fibronectin (Fn) induce VSMC migration. Nitric oxide (NO) limits VSMC migration. The hypothesis of this study is that NO would dose dependently inhibit TSP1-induced, PDGF-induced, and Fn-induced VSMC chemotaxis.

Methods

VSMCs were pretreated with serum free media or the NO donors diethylenetriamine NONOate or S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine. Chemotaxis to TSP1, PDGF, or Fn was determined. Analysis of variance with post hoc testing was done. P values < .05 were considered significant.

Results

PDGF, TSP1, and Fn induced VSMC chemotaxis. NO donors inhibited chemotaxis of VSMCs to PDGF in a concentration-dependent manner. NO donors had a variable effect on TSP1-induced chemotaxis. NO donors did not inhibit Fn-induced chemotaxis.

Conclusion

The complex interactions of these proteins in vivo will need to be considered when developing NO-dependent therapies for neointimal hyperplasia.