寻常型银屑病与单纯疱疹病毒1型相关性的研究

目的 探讨寻常型银屑病与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的可能相关性。方法 应用PCR法检测患者皮损、外周血单一核细胞(PBMCs)和咽拭子中HSV-1DNA,ELISA法检测患者血清中抗HSV-1的IgM、IgG抗体,并与正常人对照做比较。结果 患者皮损、PBMCs和咽拭子中HSV-1DNA检出率分别为37.5%、18.6%和18.8%,血清中抗HSV-1的IgM、IgG抗体检出率分别为37.2%和53.5%.经χ²检验,患者皮损、PBMCs中HSV-1DNA和血清中IgM抗体检出率显着高于正常人对照,点滴状患者的皮损、PBMCs和咽拭子中HSV-1DNA以及血清中抗HSV-1IgM抗体检出率显着高于斑块状患者。结论 寻常型银屑病尤其是皮损呈点滴状者与HSV-1显着相关,患者可能存在HSV-1的近期感染。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型野生株型特异的B细胞表位糖蛋白G的保守性

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染可检测型特异的病毒抗原、病毒DNA和型特异的HSV抗体而进行实验诊断。由于多数HSV-2感染无症状,因此检测HSV-2特异抗体在HSV-2感染的诊断中很重要。单纯疱疹病毒Ⅱ型的糖蛋白G(gG－2)在其加工过程中裂解为分     

TOPO定向克隆和表达Ⅱ型单纯疱疹病毒gG基因的免疫优势表位片段

目的 通过基因工程技术,克隆和表达Ⅱ型单纯疱疹病毒gG基因的免疫优势表位片段。方法 以PCR法扩增HSV-2的gG基因的免疫优势表位片段;将PCR产物与TOPO定向表达载体连接;然后鉴定含有目的基因的重组表达载体;并转化BL21Star^TM菌株诱导表达目的蛋白;以免疫印迹法检测表达的目的蛋白。结果 PCR法扩增出616bp的DNA片段;通过PCR法及测序法证实重组质粒中含有616bp的DNA片段,其中99.5%序列与目的基因序列一致。SDS-PAGE结果显示重组蛋白在3h时的表达产量最高。免疫印迹法通过抗gG的单克隆抗体,证实重组蛋白在大肠杆菌中的表达。结论 Ⅱ型单纯疱疹病毒的gG免疫优势表位基因片段的成功表达,为制备国产的HSV-2血清诊断试剂提供资料。     

白介素2基因佐剂协同HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导小鼠免疫应答

目的 研究白介素2(IL-2)cDNA协同HSV-2多表位复合DNA疫苗免疫对小鼠体液和细胞免疫应答的影响.方法 利用真核表达质粒pcDNA3.1分别构建HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗HV-pcDNA3.1和IL-2的真核表达质粒IL-2-pcDNA3.1.15只C57/BL6小鼠分为3组,分别接受pcDNA3.1空载体注射、HV-pcDNA3.1单独免疫或HV-pcDNA3.1及IL-2-pcDNA3.1联合免疫.共免疫2次,间隔2周.末次免疫3周后.ELISA法检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ,淋巴细胞特异性增殖反应和乳酸脱氢酶法检测杀伤性T淋巴细胞(CTL)功能.结果 与HV-pcDNA3.1单独免疫组相比.IL-2-pcDNA3.1的协同免疫可以提高小鼠血清中和IFN-γ表达(1956.19±219.60ng/L,P<0.05),增强淋巴细胞特异性增殖反应(促细胞增殖率为2.75%±0.26%,P<0.05)和CTL活性(47.91%±15.09%,P<0.05).小鼠血清HSV-2特异性IL-2水平在协同免疫组为(1421.16±220.98)ng/L,HV-pcDNA3.1单独免疫组为(1246.84±157.02)ng/L.两组间差异无统计学意义.结论 IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导的细胞免疫应答水平.     

脂质体包裹HSV-2gD-HSP70融合蛋白诱导小鼠免疫应答的研究

目的 探讨局部外用脂质体包裹单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)与结核杆菌热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70融合蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况。方法 局部外用脂质体包裹gD,gD+HSP70,HSP70-gD融合蛋白分别免疫BALB/c小鼠3周,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gD IgG水平,同时分离小鼠脾淋巴细胞,并用HSV-2gD蛋白刺激,用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况及ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平。结果 脂质体包裹gD、gD+HSP70和HSP70-gD均可以诱导小鼠产生针对HSV-2gD蛋白的抗体并诱导脾淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ和IL-4,脂质体包裹HSP70-gD组在血清抗体水平、脾淋巴细胞刺激指数及其分泌IFN-γ、IL-4水平方面均显著高于脂质体包裹gD+HSP70组和gD组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP70可以促进gD蛋白诱导小鼠特异性免疫应答反应。     

138例男男性接触者性传播感染相关血清学检测

目的 对男男性接触者进行相关血清学检测,以了解该人群的性传播感染情况,为干预提供依据。方法 对男男性接触者进行问卷调查,取血清进行艾滋病病毒、梅毒、单纯疱疹病毒(HSV)2型、乙型肝炎、丙型肝炎和戊型肝炎检测。结果 共调查138例男男性接触者,抗-HIV检测均阴性。梅毒螺旋体明胶凝集试验阳性23例占16.7%,其中快速血浆反应素试验阳性10例占7.2%。抗HSV-2-IgG、HBsAg、抗-HCV、抗-HEV阳性率分别为7.8%、9.7%、0和16.1%。结论 男男性接触者中有一定程度的性传播感染血清阳性率,应重视对该人群的性病艾滋病的防治工作。     

疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗的初步免疫评价

将疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D(gD)多聚核苷酸疫苗肌注免疫豚鼠,初步评价其在体内所诱发的体液免疫和细胞免疫反应水平.将12只豚鼠分为3组,各组分别于舌肌注射pcDNA-gD多核苷酸疫苗、pcDNA3质粒及生理盐水,每周1次,共3次.ELISA检测豚鼠血清中gD抗体的水平;MTT法评价脾T淋巴细胞增殖反应.pcDNA-gD免疫组全部豚鼠均诱发抗HSV-2抗体(0.283±0.075);pcDNA3质粒组(0.062±0.015)和生理盐水组(0.057±0.016)的抗HSV-2抗体为阴性.pcDNA-gD免疫组豚鼠脾淋巴细胞增殖反应(2.08±0.1 8)程度明显高于对照组(P＜0,01).提示疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗可在豚鼠体内诱发体液免疫和细胞免疫反应.     

单纯疱疹病毒的生物学特点及其潜伏复发机制研究进展

目的：单纯疱疹病毒属疱疹病毒a亚科,是双链DNA病毒,可分为HSV-1及HSV-2两种血清型,感染后可在体内长期潜伏,易复发,给相关疾病的治疗及预防造成了巨大困难。阐明病毒潜伏感染及复发的相关机制,对进一步揭示HSV感染复发发生的本质,以有效防治HSV感染及潜伏复发有重要意义。本文综述了单纯疱疹病毒的生物学特点及其潜伏复发机制研究进展。     

人乳头瘤病毒11型DNA疫苗协同CD80基因诱导小鼠特异性免疫反应

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)11E7、L1-E7DNA疫苗质粒协同共刺激分子CD80诱导的特异性免疫反应.方法 将所构建的pcDNA3.1(+)/HPV11E7、E7-CD80、L1-E7DNA疫苗质粒分别经肌内注射免疫小鼠,并设L1-E7质粒与CD80质粒共同注射组,PCR和RT-PCR检测质粒DNA的组织分布和目的基因RNA转录,MTT法测脾淋巴细胞增殖活性,ELISA检测脾淋巴细胞培养上清细胞因子的表达水平及血清抗体的水平.结果 免疫小鼠后,质粒主要分布在注射部位.DNA疫苗诱导机体产生特异性脾淋巴细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ增加,产生HPV11E7 IgG/L1 IgG抗体;与CD80基因嵌合后,脾淋巴细胞增殖和分泌活性显著增强;与CD80联合免疫组所诱导的细胞免疫反应和体液免疫均显著强于L1-E7单独免疫组.结论 HPV11DNA疫苗能诱导小鼠产生特异性免疫反应,CD80可加强其免疫效果.     

疱疹病毒II型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗的初步免疫评价

将疱疹病毒II型(HSV-2)糖蛋白D(gD)多聚核苷酸疫苗肌注免疫豚鼠,初步评价其在体内所诱发的体液免疫和细胞免疫反应水平。将12只豚鼠分为3组,各组分别于舌肌注射pcDNA-gD多核苷酸疫苗、pcDNA3质粒及生理盐水,每周1次,共3次。ELISA检测豚鼠血清中gD抗体的水平;MTT法评价脾T淋巴细胞增殖反应。pcDNA-gD免疫组全部豚鼠均诱发抗HSV-2抗体(0.283±0.075);pcDNA3质粒组(0.062±0.015)和生理盐水组(0.057±0.016)的抗HSV-2抗体为阴性。pcDNA-gD免疫组豚鼠脾淋巴细胞增殖反应(2.08±0.18)程度明显高于对照组(P<0.01)。提示疱疹病毒II型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗可在豚鼠体内诱发体液免疫和细胞免疫反应。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型细胞毒性T淋巴细胞表位重组DNA疫苗的构建表达及鉴定

目的：针对单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）包膜糖蛋白gD和gB的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）表位,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。方法：用PCR方法从已构建好的pc-gD真核表达质粒中扩增gD片段,将其与CTL表位共同连接到pVAX1载体,构建重组真核表达质粒pVAX-gD-CTL。采用免疫组化和Western-blotting法鉴定重组质粒的表达情况,免疫BALB／c小鼠,进行CTL活性鉴定。结果：构建的重组质粒能在非洲绿猴肾细胞（COS-7细胞）内表达。该重组DNA疫苗免疫接种BALB／c小鼠后,其CTL活性增高。结论：成功构建HSV-2 pVAX-gD-CTL重组真核表达质粒,并能在真核细胞内表达,该DNA疫苗对细胞免疫有明显的促进作用。     

Evaluation eines dominant-negativen rekombinanten Herpes-simplex-Virus (HSV) Typ 1 als Impfstoff gegen Herpes genitalis bei Mäusen und Meerschweinchen

Genital herpes caused by herpes simplex virus (HSV) is one of the most common sexually transmitted diseases worldwide. Currently, no safe and effective vaccine against HSV is available. CJ9-gD is a completely replication-defective HSV-1 recombinant which inhibits replication of wild-type HSV-1/-2 in co-infected cells (dominant-negative effect). Moreover, it expresses high levels of HSV-1 major antigen glycoprotein D (gD). Immunization with CJ9-gD induces strong and long-lasting humoral and Th1-like cellular immune responses against both HSV-1 and HSV-2 in mice protecting immunized animals significantly against genital challenge with HSV-1 or HSV-2. Guinea pigs immunized with CJ9-gD were significantly protected against primary and recurrent HSV-2 genital disease and latent infection.     

疱疹病毒gD基因多聚核苷酸疫苗的构建和表达

目的：构建疱疹病毒gD2基因多聚核苷酸疫苗并在实验动物中得到表达。方法: 将构建的pcDNA3－gD2的质粒DNA注射入豚鼠的舌肌中,每周1次,共3次,最后1次免疫48h后引颈处死豚鼠,并取其舌、肝、脾、肾、心脏及股四头肌,用免疫组化法（SP法）检测gD2抗原的表达。结果：重组质粒组gD2真核表达载体免疫接种后,均可在舌肌测到抗原表达,而对照组均为阴性。结论：重组质粒gD2真核表达载体可以在豚鼠舌肌中表达,对建立基因免疫防治疱疹病毒感染奠定一定基础。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型新型DNA疫苗的构建

目的：针对Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）包膜糖蛋白gD以及包膜糖蛋白gB的CTL表位,构建重组真核表达质粒pVAX—gD—CTL。方法：根据GeneBank提供的HSV-2G株糖蛋白D基因（gD）序列设计PCR引物,以已构建好的pc—gD为模板,特异性扩增HSV-2gm片段,将其克隆于pVAX1载体中构建成质粒pVAX—gD,再将其双酶切后引入CTL片段构建重组真核表达质粒pVAX—gD—CTL。结果：将重组的pVAX—gD—CTL真核表达质粒转化大肠杆菌后,筛选阳性克隆进行酶切及测序鉴定。结论：初步构建HSV-2 pVAX—gD—CTL重组真核表达质粒。     

中药黄白液对豚鼠生殖器疱疹复发感染模型的影响

目的　从动物实验角度进一步探讨中药黄白液防治复发性生殖器疱疹的疗效与作用机理。方法　 5 0只雌性豚鼠以阴道接种建立生殖器疱疹初发模型及紫外线照射法诱导复发皮损 ,观察了黄白液三个剂量 (1.41g/ml,1.12 8g/ml和 0 .90 2 g/ml)对感染豚鼠的外阴皮损、阴道拭子病毒滴度及干扰素效价的影响 ,并以阿昔洛韦及生理盐水作了对照。结果　黄白液对初发及复发感染豚鼠外阴皮损积分的改变与阿昔洛韦相当 (P >0 .0 5 ) ,诱导感染豚鼠干扰素产生的功能则明显优于对照组 (P <0 .0 1) ,其中又以高剂量 (1.41g/ml ,相当于人剂量 12 0g/ 10 0ml)为优。在复发感染中 ,黄白液组有 5只豚鼠未出现皮损。初发感染豚鼠测得的阴道拭子病毒滴度的结果显示阿昔洛韦优于黄白液低剂量组及黄白液中剂量组 (P <0 .0 5 ) ,而复发感染中则以黄白液组为优。结论　黄白液不仅有直接抑制HSV Ⅱ复制与排放的功能 ,还能通过提高机体免疫力 ,持续抗病毒 ,从而能有效控制生殖器疱疹的复发     

Immunization with a dominant-negative recombinant HSV type 1 protects against HSV-1 skin disease in guinea pigs

CJ9-gD belongs to a new class of replication-defective recombinant herpes simplex viruses (HSVs) type 1 that can function in trans to prevent the replication of wild-type HSV in co-infected cells. Furthermore, CJ9-gD cannot establish latent infection in vivo and it expresses high levels of the major HSV-1 antigen glycoprotein D immediately following infection. In this study we show that guinea pigs immunized with CJ9-gD developed at least 9,600-fold higher titers of HSV-1-specific neutralization antibodies than mock-immunized controls. After challenge with wild-type HSV-1, all 10 mock-immunized guinea pigs developed multiple skin lesions with an average of 53.3 lesions per animal, whereas only 2 minor lesions were found in 1 of 10 CJ9-gD-immunized animals, representing a 267-fold reduction on the incidence of primary herpetic skin lesions in immunized animals. Quantitative PCR analysis revealed that the amount and frequency of wild-type HSV-1 viral DNA present in dorsal root ganglia of immunized animals was significantly lower than that in mock-immunized controls. Collectively, we demonstrate that vaccination with CJ9-gD elicits strong and protective immune responses against primary HSV-1 skin disease and reduces the extent of latent infection by challenge virus.     

生殖器疱疹动物模型的建立及应用

生殖器疱疹主要是由2型人类单纯疱疹病毒引起的性传播疾病.在动物阴道内注射病毒液可以建立生殖器疱疹动物模型,在此基础上还可以进一步建立复发感染模型.利用雌性豚鼠建立生殖器疱疹动物模型对于需要观察皮损变化方面的药效学等研究是较为理想的选择.通过观察豚鼠/小鼠外阴及阴道皮损病变情况并进行评分可以用于生殖器疱疹发病机制的研究,还可以用于抗疱疹病毒新药和疫苗的研究.

Abstract：

Genital herpes is a kind of sexually transmitted disease mainly caused by herpes simplex virus type 2(HSV-2). Injecting virus into the vagina of animals is a common method to establish animal models of genital herpes, which can be used as a basis for the building of recurrent infection models. It is an ideal option to set up animal models of genital herpes by using femal guinea pigs for the observation of drug efficacy in skin lesions. To assess the lesion changes in vulva and vagina of guinea pigs or mice after the inoculation by a scoring method may be used to study the pathogenesis of genital herpes and to develop new antiviral agents and vaccines.     

生殖器疱疹患者病毒DNA的定量测定研究

目的 对生殖器疱疹病毒(HSV)患者病毒DNA进行定量测定.方法 以标准的HSV质粒作为标准,用聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA),定量测定HSVDNA.结果 100例生殖器疱疹患者中93例HSV测定阳性,7例阴性.在93例阳性者中有58例为HSV-2(占62.4%),35例为HSV-1(占37.6%).93例阳性者定量测定结果,250μL标本混悬液中DNA质粒数为115～1.1×10⁵个,平均7.1×10⁴个;58例HSV-2阳性者,250μL标本悬液DNA质粒数为136～1.1×10⁵个,平均7.6×10⁴个;35例HSV-1阳性者DNA质粒数为115～9.4×10⁴个,平均6.3×10⁴个.分别随机取HSV-2和HSV-1阳性患者各8例已淬取和纯化的DNA混悬液10μL,定量测定结果显示:HSV-2患者最高为2.7×10⁴个DNA质粒数,最低35个,平均1.8×10⁴个.HSV-1最高2.5×10⁴个,最低29个,平均1.6×10⁴个.结论 所用几种检测法中ELISA定量总阳性率为93%,与DNA印迹法阳性率相同.诊断PCR阳性率为91%,HSV分型PCR阳性率为88%.     

免疫调节剂对亚临床型生殖器疱疹豚鼠模型排毒及IL-2和IL-4水平的影响

目的观察匹多莫德联合铜绿假单胞菌注射液治疗亚临床型生殖器疱疹(genital herpes,GH)豚鼠模型的排毒及机体免疫的情况,借以揭示人类亚临床型GH患者联合服用免疫调节剂后的疗效。方法以人单纯疱疹病毒(HSV)-2Sav感染从未感染过HSV的雌性中华彩豚,建成GH豚鼠模型,待其症状好转后,通过聚合酶链反应(PCR)检测豚鼠外生殖器及生殖道拭子HSV-DNA的阳性率,酶联免疫吸附试验(ELISA)测出其血清白细胞介素(IL)-2、IL-4的浓度,再分别与空白对照组及用药组比较。结果亚临床型GH豚鼠模型仍有HSV排泌,且其IL-2浓度显著低于空白对照组(P0.01),而IL-4浓度高于空白对照组(P0.05);用药组的豚鼠HSV-DNA阳性率明显减少,而其血清IL-2浓度高于亚临床GH豚鼠模型组,IL-4的水平低于亚临床GH豚鼠模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论亚临床型GH豚鼠模型确实存在HSV排泌,同时其血清中细胞因子的分泌也发生了异常,匹多莫德联合铜绿假单胞菌注射液治疗后不仅能减少HSV排泌,还能改善机体免疫失衡状态。