用咖啡因作探药,快速测定人体细胞色素P—450CYP1A2酶的活性

AIM: To develop a rapid HPLC method for the determination of cytochrome P-450 CYP1A2 activity. METHODS: A 300-microL plasma was prepared by extraction with 5-mL chloroform/isopropanol (9:1), and beta-hydroxyletheophylline was added as internal standard (IS). Samples were separated on an ODS column by a gradient elution system, of which mobile phase consisted of 0.05% acetic acid, acetonitrile, and methanol. The compounds of interest were monitored at 282 nm by UV detector. RESULTS: No potential interfering peaks were found. Paraxanthine (17X), IS and caffeine (137X) were rapidly eluted with baseline resolution, and their retention time was less than 13 min. The detection limits of both 17X and 137X were 0.1 mumol.L-1. Linear relations ranged over 1-100 mumol.L-1 and 1-200 mumol.L-1 with correlation coefficient of 0.9999 and 0.9987, respectively, for 17X and 137X. The coefficients of variation were within 6% for 17X, and 10% for 137X. The average recoveries for both compounds were ranged from 96% to 108%. CONCLUSION: This method is sensitive and rapid, and can be used for population studies of CYP1A2.     

四氯化碳抑制大鼠肝细胞色素P450同工酶的研究

细胞色素Ｐ45 0 (ＣｙｔｃｈｒｏｍｅＰ45 0 ,ＣＹＰ) ,是四氯化碳(ＣＣｌ4 )在体内进行代谢活化的主要酶类。研究表明 ,ＣＣｌ4 的活化产物 ,如·ＣＣｌ3 等对ＣＹＰ酶类本身也产生破坏作用 ,而不同亚型ＣＹＰ对于ＣＣｌ4 的破坏作用表现不同的敏感性 ,并且可能受到不同剂量不同接触时间等因素影响[1～ 3] 。弄清这些问题 ,对揭示ＣＣｌ4 对机体的损伤机制 ,及对有效地进行ＣＣｌ4 的防护都有一定的意义。鉴于此 ,本实验主要对ＣＣｌ4对苯巴比妥钠 (ＰＢ)诱导型ＣＹＰ2Ｂ1和 3 甲基胆蒽 (3 ＭＣ)诱导型ＣＹＰ1Ａ1和 1Ａ2抑制作用的剂量效应…     

细胞色素P450同工酶在外源物代谢中的作用

细胞色素Ｐ４５０酶系（ＣＹＰ）中的Ｐ４５０Ⅰ￣Ｐ４５０Ⅳ家族是代谢外来化合物的主要酶系。环境致癌主要是ＣＹＰ１Ａ的底物，ＣＹＰ２Ｄ６的突出特征是它的遗传多态性，而ＣＹＰ２Ｅ１主要参与乙醇等小分子化合物的代谢，ＣＹＰ３Ａ则是参与大多数临床口服药物代谢的主要同工酶。本文综述了细胞色素Ｐ４５０铎外源性化合物代谢转换及调控研究，对ＣＹＰ１Ａ、ＣＹＰ２Ｅ的诱导机制及ＣＹＰ３Ａ的主要抑制机制也作了叙述。     

外源物对细胞色素P450同工酶表达的基因调控

细胞色素P450（CYP450）酶系中的1,2,3,4家族是代谢外来化合物的主要酶系。外源物进入体内,因其代谢活性的不同以及CYP450各家族敏感程度的差异,使CYP450的活性和表达受到不同程度的影响。近年来,可通过分子诊断学（如分子探针等）实验方法鉴定受影响的CYP450同工酶的种类,并精确了解外源物在代谢过程中对CYP450的调控方式。本文从的物在CYP450基因水平上的调节（包括对DNA、转录、mRNA及蛋白质合成水平的影响）和芳烃受体（AhR)对CYP450基因的调节等方面进行了综述。CYP450同工酶的存在类型及表达水平可直接影响机体对外源物的代谢转化,这与环境致癌物、化学毒物、药物等外源物对机体的致癌风险、中毒反应及药物间相互作用密切相关。对CYP450同工酶的合理调控将对防治疾病、维护人类健康有重要意义。     

植物药及果蔬对药物代谢酶P450活性的影响

中草药及其他植物药在我国及东南亚国家应用广泛，在欧美也逐渐受到重视，一些中草药及植物药可能诱导或抑制肝脏细胞色素P450(CYP)药物代谢酶，从而引起自身及其他合用药物代谢的改变，因此可能导致药物不良反应和药物相互作用。     

混合探针底物法测定五味子成分对大鼠肝脏细胞色素P450同工酶的影响

研究大鼠多次口服五味子成分和体外对肝脏细胞色素P450酶(CYP450)6种同工酶的影响。采用超速离心法制备正常及多次口服五味子醇/水提物的大鼠肝微粒体并与探针药进行体外温孵,应用液相色谱?串联质谱分析方法测定CYP450的6种同工酶特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D2)、双氯芬酸钠(CYP2C6)、美芬妥英(CYP2C11)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2)在大鼠肝微粒体的代谢产物生成(对乙酰氨基酚、右啡烷、4-羟基双氯芬酸钠、4-羟基美芬妥英、6-羟基氯唑沙宗、1-羟基咪达唑仑)以反映各CYP450同工酶活性。五味子醇提物(28～120μg.mL-1)体外对大鼠肝微粒体CYP450的6个同工酶均有不同程度的抑制作用。大鼠多次口服五味子醇提物(1.5 g.kg-1,qd×7d)对肝脏CYP3A1/2和CYP2E1有显著诱导作用,对CYP2D2和CYP2C11有明显抑制作用,而对CYP2C6和CYP1A2无明显影响。五味子水提物(100～500μg.mL-1)体外对大鼠肝脏CYP450同工酶亦有抑制作用;体内多次给药(1.5 g.kg-1,qd×7d)对肝脏CY...     

以咖啡因为代谢探针测定细胞色素P450 CYP2A6活性

细胞色素P450CYP2A6（CYP2A6）是体内重要的药物代谢酶之一，主要在肝脏表达，约占肝脏细胞色素P450酶的5％。CYP2A6参与抗肿瘤药（环磷酰胺和异环磷酰胺）、麻醉药（氟烷和甲氧氟烷）、前致癌物（黄曲霉素B1、亚硝胺盐等）、环境化合物（汽油醚）及烟草中尼古丁的代谢。CYP2A6活性与这些物质的疗效或毒性以及一些肿瘤的易感性密切相关，测定CY1Y2A6活性有助于预测药物疗效、预防药物毒副反应及肿瘤病因调查。     

烟雾暴露对孕大鼠肝脏和胎盘细胞色素P450同工酶表达的影响

目的研究烟雾暴露对孕大鼠肝脏和胎盘细胞色素P450(CYP)同工酶表达的影响,探讨孕期烟雾暴露的毒理学意义。方法7只Wistar雌大鼠和14只孕大鼠分为正常未孕组、正常受孕组和吸烟受孕组。从妊娠d9起,吸烟组孕大鼠在特制的半封闭动物饲养箱中熏烟,每日3次(8:00am,12:00am,4:00pm),每次持续15~20min。孕d21剖腹取母体肝脏和胎盘,提取RNA,RT-PCR技术测定CYP同工酶表达的变化。结果与正常未孕组相比,正常受孕大鼠肝脏CYP1A1,1B1,2B1/2,2E1,3A1mRNA的表达分别为75.1%(P<0.05),117.2%(P<0.01),131.6%,130.5%和85.1%(P<0.05);与正常受孕组相比,吸烟孕大鼠肝脏CYP1A1,1B1,2B1/2,2E1,3A1mRNA表达分别为128.9%(P<0.05),96.4%,127.7%,101.8%及175.5%(P<0.05);同时胎盘CYP1A1,1B1,2B1/2及2E1mRNA表达分别为127.1%(P<0.05),116.5%,90.1%及150.2%(P<0.01)。结论孕期烟雾暴露可影响孕大鼠肝脏和胎盘中一些与外源物代谢密切相关的CYP同工酶表达。     

咖啡因试验与氯氮平体内代谢的相关性

通过检测尿中咖啡因（Ｃａｆ）及其代谢产物,探讨细胞色素Ｐ４５０ １Ａ２（ＣＹＰ１Ａ２）与体内氯氮平（ＣＬＺ）去甲基代谢物的关系。方法单剂ｐｏ Ｃａｆ１５０ｍｇ,ｈ５末采取尿样,以Ｃａｆ代谢产物和Ｃａｆ的比值「（１７Ｘ＋１７Ｕ）／１３７Ｘ」反映ＣＹＰ１Ａ２活性。２ｄ后单剂ｐｏＣＬＺ１０ｍｇ,收集０－２４ｈ尿样。０－２４ｈ悄中ＣＬＺ剩余量占给药剂量的分率（ＣＬＺ％）反映ＣＬＺ清除;０－２４ｈ尿中去甲     

细胞色素P4501A2活性与奥氮平代谢的相关性研究

目的 研究奥氮平(抗精神病药)体内代谢与细胞色素P450酶亚型1A2(CYP1A2)活性的相关性.方法 15例男性健康志愿者单次口服咖啡因150mg,第5 h末采血;2天后单次口服奥氮平10 mg,收集血样;用高效液相色谱电化学法测定奥氮平血浆浓度,紫外法测定咖啡因及其代谢产物次黄嘌呤的血浆浓度.结果 次黄嘌呤与咖啡因的比值与奥氮平清除的奥氮平AUC0.96的倒数不相关(γ=0.057,P=0.84).结论 CYP1A2酶活性与奥氮平体内代谢不相关.     

大青叶对小鼠肝脏CYP2E1酶活性及信使核糖核酸表达的影响

目的了解大青叶对细胞色素P450 2E1(CYP2E1)酶活性及其信使核糖核酸(mRNA)表达的影响.方法以小鼠为研究对象,实验组按每天7.8 g·kg-1·d-1和0.78 g·kg-1·d-1大青叶提取液灌胃,对照组给予生理盐水.于3,6,9 d后处死,提取肝微粒体,通过测定苯胺羟化酶反映CYP2E1酶活性;运用反转录FCR(RT-PCR)技术检测CYP2E1转录水平.结果实验组小鼠肝微粒体CYP2E1酶活性增加,于第3天达高峰,诱导率在4.96%～84.27%之间;各组CYP2E1与β-Actin RT-PCR扩增条带像素灰度的比值差异无显著性.结论大青叶提取液能使小鼠微粒体CYP2E1酶活性增加,但对其转录水平无影响.     

HPLC直接进样测定咖啡因代谢物评价三种药物代谢酶活性

目的：建立测定尿中咖啡因的5种主要代谢物：5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基尿酸（AFMU）、1-甲基尿酸（1U）、1-甲基黄嘌呤（1X）、1，7-二甲基尿酸（17U）和1，7-二甲基黄嘌呤（17X）的高效液相色谱法，以评价N-乙酰基转移酶（NAT2）、细胞色素P450酶1A2（CYP1A2）和黄嘌呤氧化酶（XO）三种药物代谢酶的活性。方法：采用反相高效液相梯度洗脱法直接进样测定尿液内咖啡因代谢产物AFMU、1U、1X、17U和17X的相对含量，计算AFMU／（AFMU＋1X＋1U）、（AFMU＋1X＋1U）／17U和1U／（1X＋1U），绘制概率分布直方图，分别反映NAT2、CYP1A2和XO的活性。结果：NAT2活性呈两态分布，快、慢乙酰化代谢表型的临界点为0．26，CYP1A2和XO酶活性呈近似正态分布。结论：本方法简便、准确、快速，适合于尿中咖啡因代谢物的测定及NAT2、CYP1A2和XO等药物代谢酶活性的研究。     

复方银杏叶制剂对酒精性肝损伤的防护作用及机制

目的观察银杏叶制剂(CGB)对酒精性肝损伤的防护作用。方法白酒-玉米油混悬液ig给予大鼠造肝损伤模型,连续10周,造模同时分别ig给予银杏叶提取物(GBE)0.8 g·kg-1,CGB 2.4,0.8和0.4 g·kg-1或联苯双酯0.15 g·kg-1。取血测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)。并观察肝组织病理及肝细胞线粒体超微结构变化。采用"cocktail"探针药物法测定大鼠ig给予CGB前后血浆中相应的CYP2E1和CYP3A4酶探针氯唑沙宗和氨苯砜的血药浓度,并计算药代动力学参数。通过药代动力学参数的变化,评价CGB对CYP2E1和CYP3A4酶活性的影响。结果连续ig给予乙醇后,大鼠血清转氨酶显著高于正常对照组(P<0.01),与模型组比较,CGB 0.8和2.4 g·kg-1组ALT和AST显著降低(P<0.05);CGB 0.8和2.4 g·kg-1组肝匀浆MDA显著降低、GSH和SOD明显升高(P<0.05)。ig给予CGB前,模型组大鼠氯唑沙宗和氨苯砜的AUC0-24,cmax均较正常对照组显著降低(P<0.05);CGB可使正常大鼠血浆氯唑沙宗和氨苯砜AUC0-24下降(P<0.05),使模型组大鼠血浆氯唑沙宗和氨苯砜的AUC0-24和cmax显著升高(P<0.05)。结论 CGB对酒精性肝损伤有防护作用,其机制与氧化应激干预相关。     

中药对细胞色素P450代谢影响的研究进展

细胞色素P450（CYP）是微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族,在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用。本文通过查阅国内外相关文献,对近几年关于中药对CYP酶影响的研究进展作一综述,分别介绍了CYP1A1、CYP1A2、CYP2A6、CYP2C、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4和CYP3A4这几种主要的药物代谢酶。研究CYP酶对新药筛选、给药个体化等具有重要意义。     

肝细胞色素P_(450)与药物代谢的研究进展

外源性化合物特别是药物进入体内后 ,很多都经过肝脏代谢 ,而肝药酶ＣＹＰ４５０ 是肝代谢药物的主要酶系。ＣＹＰ４５０ 同工酶能代谢药物使其失活 ,也能使某些无活性的物质转化成活性物质而产生药理作用或毒性。肝脏中ＣＹＰ４５０ 的不同类型及不同含量将直接影响药物的代谢转化、药物间相互作用等 ;同时 ,外源性化合物也能影响ＣＹＰ４５０ 在肝脏的表达 ,从而诱导或抑制其活性。了解ＣＹＰ４５０ 的特性 ,调控ＣＹＰ４５０ 的表达水平有助于临床合理用药及预防疾病 ,也一直是该领域的研究热点之一。１肝细胞色素Ｐ４５０ 同工酶迄今为…     

中药对细胞色素P450酶活性影响及研究方法进展

细胞色素P450酶是机体肝脏中最重要的代谢系统,参与临床上所用大部分药物的生物转化过程;中药成分复杂,在临床上常与西药联用。该文通过查阅国内外相关文献,总结中药对CYP450酶的影响作用的研究进展,重点介绍了CYP450酶的几种主要亚型以及目前主要的研究方法,对新药筛选、临床合理用药提供重要依据。     

半枝莲粗提物对小鼠肝脏药物代谢酶的调节作用

目的通过研究半枝莲水提物和乙醇提取物对昆明（KM）小鼠细胞色素P450酶（CYP）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性的抑制作用,研究半枝莲与其他药物合用时可能发生的相互作用。方法按照随机对照原则,以半枝莲水提物和乙醇提取物1、2和5g·kg^-1·d^-1剂量为低、中和高剂量连续灌胃给药5d,以HPLC方法检测探针药及其代谢产物量来表示相应酶的活性;以分光光度法测定细胞溶质中GST酶活性。结果与对照组比较,中、高剂量半枝莲水提物组与乙醇提取物组CYP2C与CYP3A活性显著下降;高剂量水提物组GST活性显著下降;而各组CYP2D与CYP2E1活性未见改变。结论半枝莲水提物和乙醇提取物对KM小鼠的细胞色素P450酶和GST活性都有不同程度的抑制作用,呈现出剂量相关性。     

酮康唑对大鼠肝脏CYP450酶系的影响*

目的:观察酮康唑对大鼠肝细胞色素P450及其主要亚型的影响。方法:Sprague-Dawley大鼠用140,280,420μmol.kg-1.d-1酮康唑连续灌胃7 d,测定肝脏微粒体中总CYP450含量和CYP1A1,1A2,1B1,2B1/2,2E1和3A亚型活性。结果:不同剂量酮康唑给药后大鼠肝脏脏器系数、CYP1A1和1B1亚型活性明显增高(P<0.05,P<0.01);总CYP450含量和CYP3A活性显著降低(P<0.01);低剂量的酮康唑抑制CYP1A2和CYP2B1/2亚型的活性,高剂量却出现了诱导作用(P<0.05,P<0.01)。各剂量组对CYP2E1均无明显影响。结论:酮康唑对大鼠肝脏CYP450及主要药物代谢亚型CYP1A1,1A2,1B1,2B1/2和3A有影响,临床长期用药或与经肝脏CYP450代谢的药物联合应用时要注意监测血药浓度和肝脏功能,防止药物代谢减缓出现蓄积中毒或药物代谢加快而降低药效。