利用自组装单分子层技术在传感器金膜表面构建DNA探针修饰电极的研究

目的在压电基因传感器阵列表面构建DNA探针修饰的金膜电极. 方法利用自组装单分子层(self-assembled monolayer, SAM)技术将5′端带有巯基的DNA探针共价交联到压电基因传感器的金膜表面,利用循环伏安计(circled voltammeter, CV),扫描隧道显微镜(scanning tunnel microscope, STM)分别观察探针交联前后金膜表面电化学表征及微观结构的改变. 结果 CV测量结果显示随着DNA探针在传感器金膜表面的吸附,界面电容减小;STM扫描结果更是直观地显示探针非常均匀、规整地在金膜电极表面形成一层SAM. 结论利用SAM技术可以很好地将DNA探针固定在压电基因传感器金膜表面.     

扫描探针电子显微镜综述

新的设计思想带来新的技术革命,STM巧妙地利用探针近场(近距离)探测方法、隧道电流理论、压电陶瓷扫描方法等现代科学技术,大大扩展了显微技术的深度。借鉴STM的方法,许多新型的显微仪器和探测方法相继诞生。这些显微仪器适用于不同的领域,具有不同的功能。虽然它们功能各异,但都有一个共同的特点:使用探针在样品表面进行扫描。科学界把这类显微仪器归纳到一起,统称为扫描探针显微镜。本文分别对扫描探针显微镜家族中的原子力显微镜,近场光学显微镜和弹道电子发射显微镜的性能和特点进行综述。     

乙型肝炎病毒核酸探针压电晶体传感器的初步研究

核酸探针压电晶体传感器,即由特异的单链DNA片断与压电晶体镀膜电板交联固定制成探针,并与标本中待测的变性DNA杂交成双链,杂交前后DNA量的变化,可通过压电晶体振荡频率的改变判定。从含pBR322-HBVDNA的大肠杆菌HB101中提取纯化重组质粒DNA,制成乙型肝炎病毒核酸探针压电晶体传感器,检测12例乙型肝炎感染者血清标本,结果显示5例阳性,与PCR检测结果一致,提示其具有良好的特异性与敏感性,并且更快速、简便。     

核酸探针的荧光标记初探

一般探针标记物应具备三个条件,标记后的探针的分子结构尽可能与原来的分子结构相同;检测方法要简便、准确;安全无害。目前常用的杂交探针标记可分为放射性和非放射性两大类。前者易标记一直得到广泛应用,但因其有半衰期,存在放射性污染等问题。因此人们对非放射性标记越来越感兴趣。常用的非放射性标记物有生物素、地高辛精和荧光素。本文是应用异硫氰酸荧光素标记ＩｇＧ、通过交联剂同ＤＮＡ结合制成探针,探讨其检测灵敏度。１　材料和方法１．１　质粒片断的制备质粒的转化、筛选及提取按文献〔１〕的方法进行。质粒的消化：取１０…     

核酸探针对医学细菌诊断的研究进展

目前,核酸探针技术的发展和应用,已为传染病诊断、流行病学调查、食品卫生检验、肿瘤和人类遗传病的早期检测等工作提供了一个敏感、简便、快速和比较特异的有用手段。在预防医学,特别是在军事预防医学中,核酸探针检测技术具有特殊的优越性。如对部队进行痢疾、产毒大肠菌等肠道传染病的流行病学和带菌者的大样本(几千到几万人份)调查,部队驻地疫源地区疾病检测、食品和水源致病菌污染的检验等。本文仅就与沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、军团杆菌和战伤(创伤、烧伤)厌氧菌感染有关的拟杆菌等基因探针诊断的研究进展介绍如下:     

核酸探针用于检测沙门氏菌的实验研究

核酸探针是近年用于微生物的鉴定具有快速准确的特点。我们应用核酸探针对28株沙门氏菌进行检测,获得了满意的效果,而19株非沙门氏菌全部阴性。同批标本还做了增菌与不增菌的对比,凡经增菌的标本全部阳性,未经增菌的标本由于菌含量少,不能检出,提示该探针的敏感性有待改进。     

核酸探针长度对量子点微生物传感器的影响

目的探讨并明确量子点核酸传感器检测微生物核酸样本时探针长度对杂交效率和检测结果的影响。方法首先合成金黄色葡萄球菌16S rDNA探针,然后在其5′端添加不同长度的重复碱基序列,分别合成5条长度不同的以胸腺嘧啶结尾的探针;采用巯基法固定金黄色葡萄球菌16S rDNA探针于石英晶体微阵列上,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品频率漂移量以判断不同核酸长度时的杂交效率,并用荧光显微镜观察形成不同双链复合物的荧光强度和荧光效率,以此判断不同碱基序列长度探针对荧光效率和杂交效率的影响,并运用SPSS软件对数据进行统计分析。结果对于普通的短链核酸杂交反应,随着探针长度增加,杂交效率呈现依次递增的趋势,当离子强度为40mmol/L时,杂交效率和荧光强度增加最快,其后再增加探针长度,杂交效率增加速度变缓。结论探针长度是影响杂交效率的主要原因之一,通过增加探针长度可以提高杂交效率和荧光强度,但同时也会增加二聚体产生概率,故应根据实际需要设计长度适合的探针。     

肽核酸探针在生物传感器检测中的研究进展

利用生物传感器进行病原微生物的快速检测是近年发展起来的新型检测技术，生物传感器是生物活性材料（如酶、蛋白质、DNA、抗原、抗体、生物膜等）与物理化学换能器有机结合的一中新型检测装置，其原理是利用生物识别和生物学反应，产生的信息被物理或化学换能器转变成可定量和可处理的电信号，且信号的强度与靶标物的浓度成正比比例。     

探针浓度值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响

目的探讨双体肽核酸（bisPNA）探针浓度值对漏声表面波（LSAW）-bisPNA基因传感器检测系统的影响。方法LSAW基因传感器表面分别固定终浓度为0.001、0.005、0.01、0.05、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0μmol/L的bisPNA探针后,分别观察其与相应的HPV靶序列杂交时相位变化及反应所需时间。结果与HPV靶序列杂交所引起的相位变化值是先升后降,以1.0μmol/L探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势。结论1.0μmol/L bisPNA探针固定浓度最为适宜。     

用光生物素标记核酸探针鉴定临床分离的12株非结核杆菌

近年来由于结核病防治工作的稳步开展,结核杆菌的感染率逐年下降,但非结核分枝杆菌引起的非结核分枝杆菌病却日趋增多。由于免疫缺陷病毒感染(HIV)的流行,HIV与结核杆菌及非结核杆菌具有共染性,因而近年来非结核分枝杆菌的菌种数大增,对非结核分枝杆菌的研究日益引起各国的重视。但由于分枝杆菌传统鉴定方法复杂,需要时间长(1—2周),尚不能适应临床需要。近年来新建立的气相色谱法、裂解气相色谱法及BGCtec技术等已用于菌型鉴定,但所需仪器价格昂贵,难以普及。     

NaBH4还原对Love波免疫传感器再生能力的影响

目的提高检测B型葡萄球菌肠毒素的Love波免疫传感器的再生能力,以优化Love波免疫传感器的设计。方法传感器由压电石英基片、叉指换能器和SiO2声波导层构成。采用戊二醛共价交联法构建抗体分子探针传感界面。为提高传感器的再生能力,选用NaBH4还原连接于戊二醛和抗体分子之间的Schiff’s base结构,通过实验确定NaBH4还原步骤和最佳浓度,并用原子力显微镜(AFM)对改良后的戊二醛法固定抗体以及捕获SEB后的表面进行成像表征。结果采用优化后的固定化方案制备的免疫传感器对10-6g.mL-1SEB有明显响应,并可以重复使用3次,NaBH4的最佳浓度为100 mmol.L-1。结论先共价交联抗体分子,再用浓度为100 mmol.L-1的NaBH4还原共价双键为稳定的单键能明显改善Love传感器对SEB的响应能力和再生能力。