环孢霉素A预处理对大鼠移植肝脏影响的实验研究

目的：研究环孢霉素A（CsA）预处理保存大鼠肝脏对原位移植后的植肝功能影响。方法：将大鼠随机分为A组（对照组，HTK液保存组）和B组（实验组，HTK液＋CsA保存组），两组均保存12h后行原位肝移植，分别于供肝保存0h、12h及植术后7d检测各组血清谷丙转氨酶（AST），谷草转氨酶（AST），乳酸脱氢酶（LDH）浓度及各时间段线粒体呼吸功能RCR及P／O值。通过HE染色及原位凋亡染色观察各组肝脏组织细胞形态学改变及凋亡情况。结果：B组血清ALT、AST、LDH活性于保存12h显著低于A组，B组各时间段RCR及P／O值于保存12h，移植术后0．5h及术后7d均高于A组。细胞形态学检查B组移植肝组织细胞结构改变轻微，凋亡指数于保存12h．术后0．5h均低于A组。结论：CsA预处理供肝主要通过保护线粒体功能减轻冷保存期和再灌注对大鼠供肝的损伤及抑制肝细胞的凋亡，使大鼠原位肝移植后存活率升高。     

硫酸锌预处理对成年大鼠缺氧／复氧心肌细胞超微结构的影响

目的：研究硫酸锌预处理对成年大鼠缺氧／复氧心肌细胞超微结构的影响。方法：分离培养SD成年大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧／复氧损伤模型,将细胞随机分为正常组（N）,缺氧复氧组（H／R）,缺氧预处理组（HP）,硫酸锌（ZnSO4）预处理组（ZnP）,分别进行相应处理,然后用透射电镜对各组心肌细胞超微结构进行观察,并进行线粒体评分。结果：N组、HP组、ZnP组超微结构优于H／R组,线粒体评分较H／R组低（P〈0．05）,HP组、ZnP组超微结构变化相似且线粒体评分无统计学差异,但均高于N组（P〈0．05）。结论：缺氧／复氧可造成成年大鼠心肌细胞超微结构的损伤,ZnSO4预处理、缺氧预处理均能减轻这种损伤,且两者效果相当。     

糖尿病大鼠外周血管病变中结缔组织生长因子的表达及其意义

目的 初步探讨结缔组织生长因子在糖尿病外周血管病变发生过程中的作用.方法 24只健康SD大鼠随机分成糖尿病组（A组）和对照组（B组）.A组腹腔注射链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型;12周后处死,取双侧股动脉HE染色观察管壁病变情况,免疫组织化学染色检查CTGF在血管壁中的表达情况,电镜观察血管壁的超微结构.结果 ①HE染色：血管管腔面积与血管外截面面积之比（ST）,A组较B组降低（P＜0.05）血管壁厚度与血管外径之比（WT）,A组较B组增加（P＜0.05）,提示A组管腔狭窄,血管顺应性降低.②免疫组化染色：A组CTGF表达呈阳性（＋）,并主要表达于血管内皮细胞和平滑肌细胞胞浆内;而B组大鼠外周血管CTGF表达基本呈阴性（-）,两组间差异有统计学意义（P＜0.05）.③电镜观察：A组血管内皮细胞及平滑肌细胞肿胀变形,体积增大,胞浆丰富,内有发达的细胞器,以增生的粗面内质网及线粒体为主,血管基底膜增厚.结论STZ诱导的糖尿病大鼠外周血管在病程12周时出现了明显的病理变化,包括动脉管腔狭窄、内皮细胞损伤、平滑肌细胞肥大、细胞外基质增生及血管基底膜增厚;同时,CTGF在内皮细胞及平滑肌细胞上的表达出现显著增强,提示血管病变可能与CTGF表达增加有关.     

雷公藤内酯醇对AngⅡ介导的肾小球系膜细胞核因子-κB活化及MCP-1表达的影响

目的：观察不同剂量雷公藤内酯醇对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的肾小球系膜细胞（GMC）核因子-κB（NF-κB）活化及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的影响，探讨雷公藤内酯醇抑制肾小球系膜细胞炎症因子表达的可能机制。方法：分离培养大鼠GMC，用10^-6mol／L AngⅡ刺激GMC，将培养的大鼠GMC随机分为5组：正常培养对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ和3种不同浓度的雷公藤内酯醇共孵育组。分别采用酶联免疫激光扫描共聚焦显微镜、ELISA、RT—PCR法、Western Blot法，检测GMC内NF-κB p65核易位阳性率、细胞培养上清液中MCP-1水平、GMC内MCP-1 mRNA表达及ⅠκBα蛋白表达水平。结果：雷公藤内酯醇呈剂量依赖性下调AngⅡ介导的大鼠GMC内NF-κB p65水平，抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC MCP-1及MCP-1 mRNA的表达，抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC内ⅠκBα蛋白表达下调。结论：雷公藤内酯醇能够抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC ⅠκB的磷酸化降解及NF—κB活化；抑制AngⅡ诱导的大鼠GMCMCP-1 mRNA表达MCP-1分泌。     

甲基强的松龙对脊髓损伤后伤段脊髓线粒体功能的影响

目的：探讨脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离钙的变化和早期使用甲基强的松龙（MP）对其的影响。方法：54只SD大鼠，随机分组为假手术组（对照组）、脊髓损伤组（SCI组，采用Allen’s打击法造成大鼠脊髓损伤模型）和脊髓损伤后应用MP治疗组（MP组），每组又分为处理后6h、12h、24h三个时间相，每个时间相6只。在各时间相处死动物后提取伤段脊髓线粒体，测定线粒体呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）、磷氧比（P／0）和线粒体内游离Ca^2＋浓度。结果：SCI组在伤后6h、12h和24hR3、RCR和P／0显著低于对照组，R4和线粒体内游离Ca^2＋浓度显著高于对照组。差异有显著性（P〈0．01）；伤后6h和12h MP组R3、RCR和P／0高于SCI组，R4和线粒体内游离Ca^2＋浓度低于SCI组，差异有显著性（P〈0．01）；MP组R3、R4和RCR在6h和12h时与对照组之间无显著性差异，24h时R3、RCR和P／0低于正常对照组，有显著性差异（P〈0．05）。结论：脊髓损伤后伤段脊髓线粒体呼吸功能和线粒体内游离Ca^2＋浓度明显受到影响，线粒体内膜通透性增加，线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用甲基强的松龙可明显改善线粒体的呼吸功能，抑制Ca^2＋内流，保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

高糖培养下系膜细胞JAK2／STAT3信号转导通路活性变化及与活性氧簇作用的研究

目的：通过观察高糖培养条件下大鼠肾小球系膜细胞P-STAT3的表达变化,探讨糖尿病状态下JAK2／STAT3途径活性的变化及该通路与活性氧簇（ROS之间的相互作用。方法：用传代培养的大鼠肾小球系膜细胞同步化后分组：（1）正常糖浓度组（含5．5mmol／L）,高糖浓度组（25mmol／L）,甘露醇组（5．5mmot／L糖＋19．5mmol甘露醇）,正常糖＋AG-490（浓度10／μmol／L）组,高糖＋AG-490（浓度10μmol／L）组。继续观察培养后用Westem Blot及细胞免疫化学方法检测系膜细胞STAT3、P-STAT3表达的变化。（2）正常糖浓度组（N）,高糖浓度组（H）,甘露醇组（M）,正常糖＋Apocynin组（N＋A,Apocynin浓度为100μmol／L）,高糖＋Apocynin组（H＋A,Atx）cynin浓度为100μmol／L）,收集上清液,用比色法检测系膜细胞ROS水平。（3）NADPH氧化酶抑制剂Apocynin预处理,分组同（2）,Apocynin提前1h加入,与正常糖或高糖同时培养后,用Westem Blot方法检测系膜细胞P-STAT3表达。结果：（1）高糖培养大鼠肾小球系膜细胞P-STAT3的表达较正常糖浓度组明显升高,甘露醇组与正常糖浓度组相比差异无统计学意义;各组之间STAT3表达差异无统计学意义。（2）高糖条件下,ROS产生明显升高,NADPH氧化酶抑制剂Apocynin可明显降低ROS的产生。（3）高糖条件下,Apocynin经预处理,在正常糖浓度和高糖浓度同时培养48h后,正常糖浓度组和正常糖＋Apocynin组对比P-NTAT3的表达差异无明显区别;高糖十Apocynin组较正常糖浓度组有明显区别,但与高糖组相比明显降低。结论：高糖通过磷酸化方式激活大鼠肾小球系膜细胞JAK2／STAT3信号转导通路;高糖作用下,肾小球系膜细胞ROS产生增加,并具有时间依赖性;高糖状态下ROS可激活肾小球系膜细胞的JAK2／STAL信号传导通路,证明ROS可能参与糖尿病肾病的发生和发展过程。     

二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的研究线粒体内膜ATP敏感性钾通道（Mito-KAw）特异性开放剂二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取离体培养的大鼠海马神经元，随机分为4组：对照组（A组）、二氮嗪30μmol／L组（B组）、二氮嗪1（30μmol／L组（C组）、二氮嗪100μmol／L＋Mito-KATP特异性阻断剂5．羟葵酸100μmol／L组（D组），各组神经元每天给予相应药物预处理1h，连续3d，继而缺氧4h复氧24h，观察神经元的活力、凋亡率、Bax和Bd．2蛋白的表达水平。结果与其它3组比较，C组海马神经元活力增强，凋亡率降低，Bcl．2蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平下降（P〈0．01）。结论100μmol／L二氮嗪预处理通过改善Bcl-2与Bax蛋白表达的失衡，降低神经元的凋亡，对大鼠海马缺氧复氧神经元产生了保护效应。     

银杏内酯B对缺氧/复氧心肌细胞Caspase-3/PTEN/Akt通路及细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对缺氧/复氧心肌细胞半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)/10号染色体缺失张力蛋白同源的磷酸酶基因（chromosome 10 deletion phosphatase-tension protein homologue,PTEN）/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路及细胞增殖凋亡的影响。方法 体外培养H9C2细胞,对照组用无血清DMEM高糖培养基在37℃、5%CO2条件下培养28 h,其余各组制备缺氧/复氧模型,GB低剂量组和GB高剂量组在缺氧/复氧前1 h分别用终浓度为50μmol/L和200μmol/L的GB预处理,卡维地洛组在缺氧/复氧前1 h用终浓度为10μmol/L的卡维地洛预处理。检测H9C2细胞增殖和细胞凋亡,同时检测H9C2细胞中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、PTEN、Akt、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt...     

丙酮酸乙酯对缺氧／复氧损伤小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成及白细胞介素-1和6表达的影响

目的：探讨丙酮酸乙酯（EP）对缺氧／复氧损伤小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮（N0）及白细胞介素-1（IL-1）、IL-6表达的影响。方法：采用原代培养小鼠腹腔巨噬细胞和缺氧／复氧诱导损伤模型,墨汁吞噬实验鉴定巨噬细胞纯度,于缺氧3h后复氧1、3、6、9h时收集上清液,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）活性,采用噻唑兰法测定其存活率。在缺氧3h／复氧6h（H3／R6）损伤实验中,细胞分为正常对照组、损伤组和加入不同浓度EP（20、2、0．2mmol／L）后的H3／R6损伤组,取各组细胞上清,硝酸还原酶法测定其NO生成量,放射免疫分析法检测细胞上清中IL-1、IL-6的表达。结果：细胞培养5d后,墨汁吞噬实验鉴定细胞吞噬率达99％以上。与正常对照组相同时间点相比,缺氧3h后复氧1、3、6和9h时,细胞存活率明显下降,上清中MDA含量明显增加（P〈0．05）,但复氧6h组与复氧9h组间差异均无显著性。与正常对照组相比,H3／H6损伤组NO生成量降低,IL-1、IL-6含量明显升高（P〈0．05）;不同浓度EP处理后结果显示,0．2和2mmol／LEP可明显促进N0的生成,降低IL-1和IL-6的含量（P〈0．05）;而20mmol／LEP处理可降低NO生成,提高IL-1和IL-6的表达。结论：低浓度EP对小鼠腹腔巨噬细胞缺氧／复氧损伤有保护作用,其途径可能是通过上调NO含量,下调IL-1和IL-6表达水平实现的。     

微管解聚剂在缺氧早期大鼠心肌细胞线粒体损害中的作用

目的了解微管解聚剂在缺氧早期大鼠心肌细胞线粒体损害中的作用。方法常规方法分离培养Wistar乳鼠心肌细胞，分为正常组、微管解聚组（培养液中加入4μmol／L秋水仙碱）、缺氧组、缺氧解聚组（4μmol／L秋水仙碱联合缺氧处理）。分别采用激光共聚焦显微镜检测4组细胞线粒体分布情况，透射电镜观察线粒体形态变化，生物氧耗呼吸仪检测呼吸调节比（RCR），高效液相色谱仪检测腺苷三磷酸（ATP）含量。缺氧组及缺氧解聚组所设时相点为缺氧后10、20、30、60min。结果正常组线粒体呈粒状、排列规则，微管解聚组较之发生轻微改变：缺氧20、30、60min，缺氧解聚组线粒体分布的无规律性及形态结构损害均较缺氧组严重；细胞RCR分别为1．58±0．37、1．51±0．32、1．12±0．11，明显低于缺氧组3．85±0．56、2．98±0．44、1．79±0．73（P〈0．01）；ATP含量分别为（419±83）、（326±73）、（295±58）ng／mg，亦明显低于缺氧组（475±68）、（397±59）、（336±67）ng／mg（P〈0．01）。结论微管解聚剂可加重缺氧引起的心肌细胞线粒体分布紊乱和形态结构损害，以及线粒体呼吸功能和能量代谢障碍，它在线粒体缺氧损害机制中具有重要作用。     

低氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌纤维化的影响

目的:探讨低氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌纤维化的影响。方法:体外培养阴茎海绵体平滑肌细胞,免疫组化鉴定细胞;常规氧浓度(21%O2浓度)分别培养12、24、48、72h作为对照,低氧(1%O2浓度)干预12、24、48、72h,RT-PCR分别测定各组TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的相对表达量。结果:体外培养的阴茎海绵体平滑肌细胞生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;RT-PCR结果提示TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的相对表达量在48h内与低氧时间成正相关,时间进一步延长不能增加其相对表达量。结论:在低氧环境下,SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的相对表达量随时间的延长逐渐增加,48h达到最大值。低氧可导致SD大鼠阴茎海绵体平滑肌纤维化。     

Effects of Gingko biloba extract (EGb 761) on vascular smooth muscle cell calcification induced by β-glycerophosphate

Objective To investigate the effects of Gingko biloba extract (EGb 761) on calcification induced by β-glycerophosphate in rat aortic vascular smooth muscle cells. Methods Rat aortic vascular smooth muscle cells were cultured with various concentrations of EGb 761 and β-glycerophosphate for 7 days. Calcium content in the cells, alkaline phosphatase activity, cell protein content, NF-κB activation, and reactive oxygen species production were assayed, respectively. Results The calcium depositions of vascular smooth muscle cells of the β-glycerophosphate group were significantly higher than those of the control group (p?p?p?Conclusions EGb 761 significantly reduced deposition of calcium induced by β-glycerophosphate in rat aortic vascular smooth muscle cells. It not only reduced the deposition of calcium, but also inhibited osteogenic transdifferentiation, which may be associated with decreasing expression of alkaline phosphatase, down-regulating the NF-κB activity, and reducing reactive oxygen species production of vascular smooth muscle cells, and may have the potential to serve as a role for vascular calcification in clinical situations.     

Mitochondrial reactive oxygen species promote p65 nuclear translocation mediating high-phosphate-induced vascular calcification in vitro and in vivo

Hyperphosphatemia is the major risk factor associated with vascular calcification (VC) in end-stage renal disease. As oxidative stress is increased in uremia, we studied the role of mitochondrial reactive oxygen species (ROS) and nuclear factor-κB signaling in phosphate-induced VC. In an in vitro calcification model (β-glycerophosphate (BGP) induction) using bovine aortic smooth muscle cells, the production of intracellular and mitochondrial ROS, or superoxide anion, was stimulated by increased mitochondrial membrane potential. This effect was blocked by the superoxide dismutase (SOD) mimic MnTMPyP, a respiratory chain inhibitor rotenone, or a protonophore. Calcium deposition and the switch of smooth muscle cells from a contractile to an osteogenic phenotype were decreased when mitochondrial ROS generation was inhibited by the respiratory chain inhibitor, MnTMPyP, or the overexpression of SOD1 and SOD2 and uncoupling protein 2. The phosphorylation of IkKβ, IκBα degradation, and p65 nuclear translocation were increased by BGP but reversed when mitochondrial ROS production was blocked by protonophore or MnTMPyP. Knockdown of endogenous p65 or overexpression of IκBα reduced calcium deposition in the cultured cells. Furthermore, in a rat model of dietary adenine-induced chronic renal failure, MnTMPyP reduced aortic ROS levels, p65 activation, and calcium deposition. Thus, mitochondrial ROS-mediated p65 nuclear translocation is involved in phosphate-induced VC.     

低氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨低氧和SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)凋亡的关系。方法:体外培养CCSMC,免疫组化鉴定细胞;低氧(1%O2浓度)干预12、24、48、72 h,常规氧浓度作为对照,流式细胞术测定细胞周期变化和凋亡情况。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化DAB法染色阳性。流式细胞术检测CCSMC G0/G1期在48 h内细胞比例逐渐增加,后下降;S期细胞比例与G0/G1期呈相反趋势;G2/M期细胞比例无明显规律。结论:CCSMC在低氧环境下,随时间的延长凋亡程度加重,48 h达到最大值,进一步延长时间细胞裂解,不能加重凋亡。     

糜酶途径对犬血管平滑肌细胞产生血管紧张素Ⅱ的影响

目的:探讨糜酶途径对犬血管平滑肌细胞(VSMC)产生血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响。方法:通过组织块贴壁法培养犬动脉VSMC,分为5组:对照组、AngⅠ组、卡托普利组、糜酶抑素组、联合用药组。对照组中仅为空白培养液,其他各组均加入AngⅠ,卡托普利组、糜酶抑素组和卡托普利+糜酶抑素组再分别加入相应的干预药物。应用放射免疫法检测培养液中AngⅡ含量等。结果:本实验成功培养出犬VSMC,含AngⅠ各组的AngⅡ浓度均高于对照组(P0.05);卡托普利组的AngⅡ浓度减少,但与AngⅠ组比较差异无统计学意义(P0.05);糜酶抑素组明显低于AngⅠ组和卡托普利组(P0.05);卡托普利+糜酶抑素组作用更强一些,但与糜酶抑素组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:糜酶在犬VSMC的AngⅡ生成过程中起着重要作用,其抑制剂可抑制AngⅡ生成。     

Pulmonary veins in high-altitude residents: a morphometric study.

The thickness of the media of pulmonary veins and arteries was morphometrically assessed in 12 normal adults resident at altitudes over 3000 m and 12 resident at sea level. The pulmonary veins in the latter group were very thin walled. The average thickness of the pulmonary venous media in the group of highlanders was significantly thicker but this appeared to be due to prominent medial hypertrophy in seven individuals, five others having normal or near-normal pulmonary veins. In six of the 12 highlanders bundles of longitudinal smooth muscle cells occurred in the venous intima. There was close correlation between the thickness of the venous and that of the arterial media, suggesting an individual reactivity with a simultaneous response of all pulmonary vascular smooth muscle to high-altitude hypoxia. Hypertrophy of the media of pulmonary veins is likely to be an expression of venoconstriction and narrowing of the venous lumen may be enhanced by the development of longitudinal smooth muscle cells in the intima. Possibly venoconstriction is one of the factors responsible for high-altitude pulmonary oedema.     

缺氧对人脐静脉内皮细胞株增殖与活力的影响

目的了解缺氧对人脐静脉内皮细胞增殖与活力的影响。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞株 EA.hy926分为常氧组和缺氧组。常氧组常规培养,缺氧组细胞充入混合气体(含体积分数94%N_2、5%CO_2、1%O_2)后置于37℃缺氧培养1、3、6、12 h。提取两组细胞总蛋白,用蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平;以噻唑蓝法检测细胞活力,并用流式细胞仪检测细胞周期。结果与常氧组比较,缺氧组细胞培养1 h VEGF 表达增高,6 h 达高峰,12 h 降低但仍明显高于常氧组;培养3 h 时细胞 PCNA 蛋白表达开始升高,6 h 达峰值并持续至12 h。培养1、3 h,缺氧组细胞活力较常氧组明显增高(P<0.05),6 h 开始下降,至12 h 时低于常氧组但差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧组细胞培养1、3、6 h,G_0/G_1期细胞均较常氧组少,S 期和 G_2/M 期细胞增多,增殖指数(PI)各为(43±9)%、(39±11)%、(40±11)%,均高于常氧组(32±9)%,其中3、6 h 时差异有统计学意义(P<0.05);12 h 时 PI 为(27±4)%,降至常氧组水平以下(P<0.05)。结论缺氧早期可促进人脐静脉内皮细胞增殖,但随着缺氧时间的延长细胞增殖将受抑制。     

腺病毒介导的激活大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中NO／cGMP通路的实验研究

目的：探讨靶向大鼠iNOS基因的shRNA重组腺病毒载体对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞iN0s基因的激活作用,为阴茎勃起功能障碍（ED）的基因治疗提供实验依据。方法：将前期构建的重组腺病毒AdS—iN—OSrshRNA-EGFP（AdU6／shiNOS）和对照病毒AdU6／shControl,分别转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,分别在不同病毒MOI（25,50,75）值下72小时后采样检测。采用realtimeRT-PCR半定量检测AdU6／shiNOS对细胞iNOS基因mRNA表达影响;Western—blot法检测海绵体平滑肌细胞iNOS蛋白表达变化。然后培养基中加L—Arg（10mmol／L）,用酶联免疫法检测病毒转染72小时后海绵体平滑肌细胞内cGMP的浓度变化,记录AdU6／shiNOS对平滑肌细胞内cGMP的影响。结果：AdU6／shiNOS转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞72小时后,和空白对照组、阴性对照组相比iN0s基因在mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P〈O．05）,呈剂量依赖性,MOI一75时RNAa效果最好。而且转染72小时后,实验组原代平滑肌细胞内cGMP水平显著高于对照组及空白组（Pd0．05）。结论：利用腺病毒介导的RNAa技术,提高海绵体平滑肌细胞iN0s基因表达获得成功,可以增加阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平,激活了NO／cGMP通路,这为勃起功能障碍的基因治疗研究开辟了新的方向。     

缺氧状态下大鼠肝细胞糖酵解变化的实验研究

目的　探讨缺氧状态下肝细胞糖酵解的改变。　方法　配制 3种不同浓度的低氧混合气体 ,用以体外培养大鼠正常肝细胞株BRL ,相应地设为A、B、C组 ,每组设 1、2、4、8、16h 5个缺氧时相点。另以正常肝细胞作为对照。采用生物化学方法 ,检测各时相点肝细胞糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶 (PFK)、丙酮酸激酶 (PK)、乳酸脱氢酶 (LDH)的活性以及培养液中乳酸 (LA)含量的变化。　结果　 (1)与正常值比较 ,A、B组BRL细胞的LDH活性在各缺氧时相点均明显增加(P <0 .0 5 ) ,C组细胞的LDH活性从缺氧 2h开始明显增加 (P <0 .0 5 )。 (2 )与正常值比较 ,A组细胞的HK活性在 1、2、4、16h时明显升高 (P <0 .0 5 ) ;B、C两组细胞的HK活性在 1h时明显升高 (P<0 .0 5 )。A组细胞的PFK活性在 1、4h时明显升高 (P <0 .0 5 ) ;B、C两组细胞的PFK活性在 4h时明显升高 (P <0 .0 5 )。 3组细胞的PK活性在各缺氧时相点均明显增高 (P <0 0 5 )。 (3)与正常值比较 ,A、B两组细胞培养液的LA浓度在缺氧 2h时开始增加 (P <0 .0 5 ) ,C组细胞的LA浓度在缺氧 4h时开始增加 (P <0 .0 5 ) ,并均随时间的延长而升高。　结论　缺氧可启动肝细胞糖酵解。