平滑肌细胞移植对心肌梗死后早期心肌基质金属蛋白酶2、9和抑制因子3含量的影响

目的评价平滑肌细胞移植对心肌梗死后早期心肌间质重构的影响。方法选用48只雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分成对照组(n=24)和平滑肌细胞移植组(n=24),经左冠状动脉远端结扎后建立心肌梗死动物模型,立即对梗死区边缘行室壁注射含有1×106个平滑肌细胞或不含细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)0.5ml。在移植后1周,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫杂交观察大鼠心肌内基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白变化。结果植入的平滑肌细胞能够存活;平滑肌细胞移植组大鼠缺血区TIMP-3mRNA(1.06±0.22vs.0.81±0.19,t=-2.358,P=0.033)及其蛋白含量(3.33±0.53vs.1.63±0.47,t=-6.802,P0.001)明显高于对照组;平滑肌细胞移植组大鼠缺血区MMP-2、MMP-9mRNA(0.49±0.12vs.1.16±0.18,t=8.453,P0.001;0.45±0.12vs.0.80±0.11,t=5.884,P0.001)及其蛋白含量(3.98±1.08vs.6.05±0.91,t=4.139,P=0.001;0.39±0.14vs.0.57±0.17,t=2.409,P=0.031)明显低于对照组。结论移植的平滑肌细胞可在心肌梗死区及其周围存活,并且增加梗死后心肌中TIMP-3mRNA和蛋白的含量,降低MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白含量,抑制心肌不良重构。     

去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭力的影响

目的:研究去甲斑蝥素抑制基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达对前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:将去甲斑蝥素作用于前列腺癌PC-3细胞后,Western-blot和实时荧光定量PCR检测MMP-9表达水平的变化,划痕实验和侵袭实验检测PC-3细胞侵袭力的变化,透射电镜观察PC-3细胞的伪足形态变化。结果:去甲斑蝥素干预组PC-3细胞中MMP-9的mRNA表达量显著低于空白对照组(P<0.05),同时,去甲斑蝥素干预组PC-3细胞中MMP-9的蛋白表达量显著低于空白对照组(P<0.05);迁移与侵袭实验结果显示,去甲斑蝥素干预组PC-3细胞划痕愈合程度较空白对照组显著降低(P<0.05);去甲斑蝥素干预组PC-3细胞侵袭能力显著低于空白对照组(P<0.05),透射电镜观察发现去甲斑蝥素干预组PC-3细胞的伪足较空白对照组明显减少。结论:去甲斑蝥素作用于前列腺癌PC-3细胞后,PC-3细胞的侵袭能力下降,可能与MMP-9蛋白表达水平下降使PC-3细胞的侵袭伪足减少有关。     

基质金属蛋白酶-2及其组织抑制因子在移植肝慢性排斥反应中的表达

基质金属蛋白酶是一种可降解细胞外基质（ECM）的酶，它在组织纤维化、肿瘤侵袭、缺血-再灌注损伤及器官移植后慢性移植物功能丧失中的作用，近年日益引起人们的重视，成为新的研究热点。迄今有关基质金属蛋白酶对肾移植后慢性排斥反应的影响以及在肝纤维化中的作用的报道较多，但它在肝移植后慢性排斥反应中的作用尚不明了。为此，我们以正常肝组织、发生肝硬化的肝组织、移植后发生慢性排斥反应的肝组织为观察对象，应用免疫组化的方法，观察基质金属蛋白酶-2（MMD2）及其组织抑制因子（TIMP-2）在肝组织中的表达，以期探讨其在肝移植慢性排斥反应中可能起到的作用。     

基质金属蛋白酶9及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1在大鼠外伤性脑水肿中的表达及意义

目的 探讨大鼠脑损伤中基质金属蛋白酶9(MMP9)及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的表达变化规律及意义.方法 采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑损伤模型,采用干湿重法测定脑组织含水量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对大鼠脑损伤模型中MMP9及TIMP1 mRNA进行检测并分析两者比值.结果 实验组脑组织含水量(BWC),MMP9mRNA及TIMP1 mRNA表达量及两者比值均明显高于对照组,P值分别为0.013、0.000、0.000及0.011,差异有统计学意义(P<0.05),MMP9 mRNA与TIMP1mRNA表达量及两者比值与BWC均呈正相关,r值分别为0.654、0.355(P<0.05).结论 MMP9/TIMP1的比例失衡可能在外伤性脑水肿的发生发展过程中起重要作用.     

基质金属蛋白酶2、9和金属蛋白酶抑制因子1在结直肠癌肝转移诊断中的作用

目前研究认为基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)及其抑制剂(ＴＩＭＰｓ)在肿瘤的侵袭、转移中起着重要作用 ,其中ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 9和ＴＩＭＰ 1在消化道肿瘤中表达尤为重要[1,2 ] 。本研究旨在探讨它们在结直肠癌肝转移的临床价值。资料与方法1.标本染色 :收集 1997年 1～ 12月因结直肠癌在我院手术治疗的患者标本 ,石蜡块切片 ,1张做常规ＨＥ染色 ,另取3张分别用ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 9和ＴＩＭＰ 1鼠抗单克隆抗体行免疫组化染色 (Ｅｎｖｉｓｉｏｎ法 ) ,以肿瘤细胞外基质层的胞浆内及毛细血管内皮细胞浆内出现棕黄色颗粒作为阳性 ,未出现棕黄色颗粒…     

金属蛋白酶抑制基因RECK和基质金属蛋白酶2、9在膀胱癌组织中的表达及意义

我们采用RT—PCR方法检测金属蛋白酶抑制基因RECK及基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）基因在43例膀胱癌（TCC）组织标本中的表达，探讨以上基因与TCC侵袭、转移等生物学行为的关系。现报告如下。     

不同发育时期胎儿皮肤中基质金属蛋白酶-9,2及金属蛋白酶-2抑制因子基因表达的变化

目的:研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制因子(TIMP-2)在不同胎龄的胎儿皮肤中表达的变化特征及其可能的生物学意义.方法:用病理学技术检测不同发育时期胎儿皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～33周)的胎儿皮肤总RNA后,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这3种基因在不同组织中的表达变化规律.结果:MMP-9、MMP-2和TIMP-2基因在不同发育时期的胎儿皮肤组织中的表达变化规律相似.在早期妊娠胎儿皮肤中,这3种基因表达较弱,随着胎儿生长发育,MMP-9,MMp-2和TIMP-2基因表达逐渐增强,妊娠晚期的皮肤组织内,这3种基因表达产物的灰密度比值分别是妊娠早期的8.8、2.4和3.1倍,基因表达水平显著升高(P＜0.05).结论:MMP-9,2和TIMP-2对皮肤的生长发育、结构功能的维持以及创面修复具有重要的调节作用.妊娠早期,TIMP-2基因低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕愈合相关,而妊娠晚期皮肤中TIMP-2基因表达增强可能是创面愈合后形成瘢痕的机制之一.     

基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响

目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3（tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3）基因转染血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）移植,对急性心肌梗死（acute myocardialinfarction,AMI）后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×10^6个TIMP-3基因转染VSMCs（A组）、1×10^6个VSMCs（B组）或不含细胞的PBS液（C组）各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase9,MMP-9）蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%（P〈0.01）;B组小于C组（P〈0.01）。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g（P〈0.01）;B组小于C组（P〈0.01）。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1（P〈0.01）;B组高于C组（P〈0.01）。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6（P〈0.01）;B组低于C组（P〈0.01）。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。     

子宫内膜癌组织中基质金属蛋白酶-7及其组织抑制剂-2的表达

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)及其组织抑制剂-2(TIMP--2)的表达,分析其与EC侵袭、转移的关系。方法选取64例EC组织标本及同期子宫内膜不典型增生组织标本20例、正常子宫内膜20例为对照组。用免疫组织化学方法检测MMP-7、TIMP-2的表达。结果 MMP-7在EC中阳性表达强度显著高于正常子宫内膜(P0.05);与不典型增生组比较差异无统计学意义(P0.05);MMP-7的阳性表达强度在不典型增生组高于正常内膜组(P0.05);MMP-7与手术-病理分期、肌层浸润深度、组织学分级及淋巴结的转移相关(P0.05)。TIMP-2在EC中阳性表达强度显著高于正常子宫内膜组和不典型增生组(P0.05);正常子宫内膜组和不典型增生组比较TIMP-2的表达无统计学意义(P0.05);TIMP-2仅与有无淋巴结转移有关(P0.05)。MMP-7和TIMP-2在EC组织中的表达呈正相关性(r=0.654,P0.001)。结论 MMP-7与TIMP-2在EC组织中均呈高表达;且子宫内膜不典型增生组MMP-7的表达强度明显高于正常内膜组,可能与EC前病变以及EC的发生发展、浸润和转移相关。     

去甲斑蝥素对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的抗癌作用机制

目的 探讨去甲斑蝥素（NCTD）对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的抗癌作用机制。方法 在建立裸鼠胆囊癌移植瘤动物模型的基础上进行肿瘤增殖、侵袭、转移体内干预实验,实验分空白对照、氟尿嘧啶、NCTD、NCTD＋氟尿嘧啶4组。6周末应用链霉素亲和生物素复合物（SABC）法检测移植瘤增殖细胞核抗原（PCNA）、Ki-67、细胞周期素D1（cyclin D1）、p27、Bcl-2蛋白,逆转录PCR（RT-PCR）检测PCNA、cyclin D1、p27、Bcl-2、Bax、存活素（Survivin）基因mRNA。HE染色观察瘤周癌细胞浸润、侵袭,解剖显微镜下观察肺组织转移瘤结节,并采用SABC和RT-PCR检测nm23、金属蛋白酶2（MMP2）及其组织抑制剂（TIMP2）蛋白和mRNA。结果 NCTD组增殖相关PCNA、Ki-67、cyclin D1蛋白表达下降,p27蛋白表达上升;PCNA mRNA、cyclin D1 mRNA表达下降,p27 mRNA表达增高。NCTD组凋亡相关Bcl-2蛋白表达下降;Bcl-2 mRNA、Survivin mRNA表达下降,Bax mRNA表达增高。NCTD显著减少荷瘤鼠移植瘤的瘤周癌细胞浸润和肺转移结节（P〈0．01）;NCTD组转移相关MMP2蛋白表达下降,nm23、TIMP2蛋白表达上升;nm23-H,mRNA、TIMP2 mRNA表达增高。结论 NCTD抑制荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤增殖、侵袭和转移的机制可能与NCTD干扰胆囊癌移植瘤细胞周期,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻止细胞迁移运动,以及影响细胞增殖、细胞周期调控、细胞凋亡、细胞基质溶解和转移相关基因蛋白表达有关。     

组织芯片技术研究胆囊癌MMP-2和TIMP-2的表达及意义

目的 研究胆囊癌中MMP-2和TIMP-2的表达及其临床意义。方法 利用组织芯片技术,通过免疫组化的方法检测52例胆囊癌标本和11例正常胆囊组织标本中的MMP-2、TIMP-2的表达情况。结果 MMP-2在胆囊癌组织中的表达明显高于正常胆囊组织,TIMP-2在胆囊癌组织中的表达低于正常组织,MMP-2与TIMP-2的改变与肿瘤的病理分型、病理分级无关。结论 TIMP-2和MMP-2参与胆囊癌的发生发展过程。     

去甲斑蝥素对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤增殖和凋亡的体内干预实验

目的探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤增殖和凋亡的影响。方法建立裸鼠人胆囊癌种植瘤模型,实验分为对照组、5-FU组、NCTD组、NCTD 5-FU组4组。测定移植瘤大小、生长曲线和抑瘤率,应用流式细胞术、光学和电子显微镜观察移植瘤细胞的细胞周期、凋亡率和形态学改变。数据统计采用SPSS11·5软件包方差分析或χ2检验。结果NCTD对荷瘤鼠的半数致死量(LD50)为139·96mg·kg-1。应用1/5LD50即可使裸鼠移植瘤明显缩小(5·61±0·39vs.9·78±0·61cm3,P=0·000),抑瘤率增高(42·63%vs.0,P=0·012);移植瘤细胞周期中S期细胞明显减少(43·47%±2·83%vs.69·85%±1·96%,P=0·000),凋亡率上升(5·49%±0·59%vs.15·08%±1·49%,P=0·000);与5-FU合用时上述作用更明显(P=0·000)。NCTD作用后的移植瘤细胞经光镜检查见胞核固缩,核碎裂等现象;电镜显示典型的凋亡细胞及凋亡小体。结论NCTD可明显抑制荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的增殖和生长,若与5-FU合用呈协同效应,可加强其抗癌作用。     

胆囊癌组织中c-erbB-2,nm23H_1癌基因产物的表达及意义

目的　探讨癌基因c erbB 2和肿瘤转移抑制基因nm2 3H1的产物在胆囊癌组织中的表达与其生物学意义。方法　采用免疫组织化学方法检测胆囊癌标本中c erbB 2和nm2 3H1蛋白的表达 ,分析其与临床病理间关系。结果　c erbB 2和nm2 3H1蛋白的阳性表达率分别为 43 75 % (2 8/ 6 4)和 5 4 6 9% (35 / 6 4)。Ⅳ期胆囊癌中c erbB 2蛋白阳性率 (80 % )明显高于其他期胆囊癌 (P <0 0 1) ,c erbB 2阳性组平均生存期差于阴性组 (P <0 0 5 )。而nm2 3H1蛋白的表达与肿瘤的分化、分期和预后无关。结论　在胆囊癌中 ,c erbB 2和nm2 3H1参与肿瘤发生发展过程 ,c erbB 2的表达与肿瘤的转移和预后有着密切关系。     

胆道癌NDPK/nm23的表达及意义

目的　研究转移抑制基因ＮＤＰＫ／ｎｍ２３ 在胆道良恶性病变中的表达及与转移性的关系。方法　４３ 例胆囊腺癌,２０ 例胆管癌,８ 例胆囊腺瘤和５ 例胆囊炎的石蜡包埋组织切片,经免疫胶体金方法（ＩＧＳＳ）染色,并在显微镜下计数阳性细胞。结果　胆囊腺癌中ＮＤＰＫ 在转移性及非转移性肿瘤中的表达率分别为２３．５％ （４／１７） ,和３４．６％（９／２６） ,两者间无显著性差异（ Ｐ＞ ０．０５）,而胆管癌中分别为１４．３％（１／７）和４６．１％ （６／１３）,两者间有显著性差异（ Ｐ＜ ０．０５）。ＮＤＰＫ在良恶性病变中的表达无显著性差异,并与肿瘤的病理分级无关。结论　ｎｍ２３ 基因可能在胆囊腺癌和胆管癌的转移过程中起不同的调节作用,其表达程度与胆管癌的转移呈负相关而与胆囊腺癌的转移无关。     

MMP-2、MMP-9及TIMP-3在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶2，9（MMP-2，MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子3（TIMP-3）在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统对35例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜中MMP-2，MMP-9，TIMP-3的表达进行检测分析。结果MMP-2，MMP-9在膀胱癌中呈高表达，且随分期、分级的增高而增高；TIMP-3在膀胱癌中亦呈高表达，且与分级呈正相关，但与分期不相关。结论MMP-2，MMP-9和TIMP-3参与膀胱癌侵袭转移，在膀胱移行细胞癌中的表达对其预后判断具有参考价值。     

利用裸鼠建立人前列腺梭形细胞瘤细胞系PC-98106的研究

目的：建立人前列腺肿瘤细胞系PC－98106，为前列腺肿瘤基础研究提供实验模型。方法：由前列腺肿瘤手术标本中取组织块，分别包埋在3只裸鼠右后肢皮下，瘤块增殖后再次包埋于另1只裸鼠皮下，取移植瘤进行体外培养。结果：3个移植瘤均增殖，裸鼠体内传代后增殖速率加快。体外培养建立的前列腺肿瘤细胞系PC－98106其形态结构、分化程度与原发瘤保持一致，染色体形态人类核型，众数维持在64－73之间，占80％，细胞周期分析G1期53．2％，G2期17．0％，S期29．8％，G2／G1＝1．876，为亚三倍体细胞，细胞群体培增时间为16．7h，前列腺特异性抗原（PSA）表达阴性。结论：PC－98106与原发癌保护相同的生物学特性，体外连续传代1年以上，传代120代，细胞形态不变，生长周期恒定，已成为一个稳定细胞系。     

奥曲肽对人胆囊癌裸鼠皮下种植瘤的抑制作用

目的：探讨奥曲肽对人胆囊癌裸鼠皮下种植瘤生长的影响及其机制。方法：建立人原发性胆囊癌皮下种植瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分成实验组和对照组各9只,分别自腹腔注射奥曲肽100 μg/(kg·d)和生理盐水,用药共6周。观察两组种植瘤生长情况。流式细胞术测定肿瘤细胞凋亡率,免疫组化法检测p53,bcl-2,Ki-67的表达。结果：实验组裸鼠皮下种植瘤的生长明显受到抑制,实验组肿瘤重量显著低于对照组［(0.99±0.54)g vs. (1.58±0.51)g,t=2.38,P<0.05］,抑瘤率达37.3%,肿瘤细胞的凋亡率显著高于对照组［(7.76±2.62)% vs. (4.27±1.50)%,P<0.01］;实验组的p53,bcl-2,Ki-67阳性细胞百分率均低于对照组［(79.48±5.22)%vs. (87.13±8.26)%,(46.72±6.40)%vs.(53.85±7.72)%,(37.56±6.67)%vs(45.45±8.73)%,P均<0.05］。结论：奥曲肽能抑制人胆囊癌裸鼠皮下种植瘤的生长,可能系通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的机制而实现的。     

奥曲肽对人胆管癌QBC939裸鼠种植瘤的抑制作用

目的:探讨奥曲肽(OCT)对人胆管癌QBC939裸鼠种植瘤的作用及其可能的机制。方法:建立人胆管癌QBC939裸鼠种植瘤模型12只,随机均分为实验组和对照组,分别皮下注射OCT[100μg/(kg.d)]和等体积生理盐水,1次/d,连续4周,最后1次给药24 h后处死裸鼠,完整剥除瘤块,测量瘤体体积和重量,计算实验组抑瘤率;采用免疫组织化学方法分别检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在两组瘤组织中的表达情况及计数微血管密度(MVD);应用TUNEL法检测两组瘤组织凋亡情况。结果:实验组的种植瘤体积和重量明显小于对照组[(1934.85±272.88)mm3 vs.(2834.63±521.86)mm3;(1.77±0.23)g vs.(2.44±0.65)g](均P<0.05),实验组抑瘤率为29.20%;实验组瘤组织中HIF-1α的表达量和MVD况均明显少于对照组[(0.2605±0.0406)vs.(0.3284±0.1008);(13.61±1.87)vs.(17.44±2.24)](均P<0.05);实验组瘤组织的凋亡指数(AI)明显大于对照组(P<0.05)。结论:OCT对人胆管癌裸鼠种植瘤生长具有抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成有关。