血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究

目的 :血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣｓ)增殖与迁移在动脉粥样硬化 (ＡＳ)的早期、中期或ＡＳ进展期或血管事件的发病机制中起着关键性作用。方法 :采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测ＶＳＭＣｓ的迁移效应 ;以ＭＴＴ法、[3Ｈ]-Ｔｄｒ掺入法、[3Ｈ]-脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应 ;将培养的ＶＳＭＣｓ分为 5组 ;2 %胎牛血清 ( 2 %ＦＣＳ)组、ＡｎｇⅡ组 (其浓度为 1 0 - 1 0 ～ 1 0 - 6ｍｏｌ/Ｌ)、Ｌｏｓａｒｔａｎ组 (其浓度为 1 0 - 7～ 1 0 - 5ｍｏｌ/Ｌ)、ＭＣＰ - 1ｍｃＡｂ组 (终浓度为 1 0 μｇ/ｍＬ)和阳性对照…     

血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究

目的 :研究血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣｓ)增殖与迁移在动脉粥样硬化 (ＡＳ)的早期、中期或ＡＳ进展期或血管事件的发病机制中的作用。方法 :采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测ＶＳＭＣｓ的迁移效应 ;以ＭＴＴ法、3 Ｈ ＴｄＲ掺入法、3 Ｈ 脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应 ;将培养的ＶＳＭＣｓ分为 5组 :2 %胎牛血清 (2 %ＦＣＳ)组、ＡｎｇⅡ组(其浓度为 10 -10 ～ 10 -6Ｍｏｌ/Ｌ)、Ｌｏｓａｒｔａｎ组 (其浓度为10 -7～ 10 -5Ｍｏｌ/Ｌ)、ＭＣＰ 1ｍｃＡｂ组 (终浓度为 10 μｇ/ｍｌ)和阳性对照组 (含 5 %的酵母多糖…     

体外快速筛选和鉴别Coxsackievirus B3有毒株和无毒株方法

由于缺乏有效的体外鉴别柯萨奇病毒Ｂ3 (ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ3 ,ＣＶＢ3 )致病性的方法 ,长期以来接种乳鼠体内观察心肌病变。本研究所用的ＨｅＬａ细胞和人脐静脉内皮细胞均从中国典型物培养保藏中心 (武汉 )购买。标准病毒株ＣＶＢ3 /0 (非致病株 )由Ｂｅｃｋ教授 (ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＮｏｒｔｈ ｅｒｎＣｏｌｏｒａｄｏ,ＵＳＡ)惠赠 ,ＣＶＢ3ｍ(致病株 )由钟学宽教授 (哈尔滨医科大学 )惠赠 ,ＣＶＢ2 、ＣＶＢ6,脊髓灰质炎病毒由同济医科大学病毒室提供。阳性质粒 :Ｐｓｖｃｖｂ3 5 9(携带ＣＶＢ3 致病株全基因组 )和Ｐ…     

超广谱β-内酰胺酶基因分型的初步研究

按质粒所携带编码基因同源性的不同 ,将超广谱 β 内酰胺酶 (Ｅｘｔｅｎｄｅｄｓｐｅｃ ｔｒｕｍ β ｌａｃｔａｍａｓｅｓ,ＥＳＢＬｓ)分为 4类 ,即ＴＥＭ型、ＳＨＶ型、ＴＥＭ ＳＨＶ混合型和非ＴＥＭ 非ＳＨＶ型 (包括ＰＥＲ、ＴＯＨＯ、ＣＴＸ Ｍ、ＯＸＡ型等 )。本文报告绍兴地区产ＥＳＢＬｓ细菌基因分型的初步结果。临床标本分离、并经纸片扩散法确证为产ＥＳＢＬｓ的细菌 42株 (其中大肠埃希菌 2 6株 ,肺炎克雷伯菌 16株 )。用ＰＣＲ进行酶基因分型。ＰＣＲ扩增引物 ,根据ＴＥＭ 1和ＳＨＶ 1编码基因序列设计 ,ＴＥＭ引物序列分别为…     

3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立

采用ＨＳＶ1、ＨＳＶ2和ＨＣＭＶ 3种疱疹科病毒的病毒细胞培养液 ,用冻融法、煮沸法、蛋白酶Ｋ法、ＮＰ40 (乙基苯基聚乙二醇 )法、综合法及改良通用法提取病毒ＤＮＡ。综合法是将 3种病毒细胞培养混合物各 2ｍｌ,2 5 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 10ｍｉｎ ,用2ｍｌ冷ＰＢＳ缓冲液溶解沉淀 ,12 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ ,用 1ｍｌ胰酶 (0 2 5 % )溶解沉淀 ,5 0℃保温 18ｈ ,加入等体积的酚 /氯仿 /异戊醇 (2 5 2 4 1) ,30 0 0ｒ/ｍｉｎ离心10ｍｉｎ ,取水相加入 1/ 2体积 7 5ｍｏｌ/Ｌ的ＮＨ4 (ＡＣ) ,2倍无水乙醇 , 2 0℃放置 30ｍｉｎ ,10 0 0 0…     

固定剂对MHCⅡ类抗原的影响

主要组织相容性 (ＭＨＣ)Ⅱ类抗原在同种异体心脏移植急性排斥免疫应答中起着重要作用〔1〕,因此检测ＭＨＣⅡ类抗原对研究心脏移植后的急性排斥具有重要意义。1　材料与方法1.1　材料　实验动物选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠和ＳＤ大鼠各 16只 ,体重 30 0～ 4 5 0 ｇ ,♀♂不限 ,由中山医科大学实验动物中心提供 ,为清洁级。一抗为大鼠ＭＨＣＣｌａｓｓⅡ类分子Ｉ Ａ亚区的单克隆抗体Ｉａ(ＯＸ6 ) ,购自美国ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ公司 ,二抗和显色系统采用Ｄａｋｏ公司ＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭ +Ｓｙｓｔｅｍ试剂盒 ,购自美国Ｄａｋｏ公司。冷冻切片采…     

孕妇TORCH感染与生殖健康的研究现状

弓形体 (ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ,Ｔｏｘ)、风疹病毒 (ｒｕｂｅｌｌａｖｉｒｕｓ,ＲＵＶ)、巨细胞病毒 (ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｒｉｒｕｓ,ＣＭＶ)、单纯疱疹病毒 (ｈｅｒｐｅｃｓｉｍ ｐｌｅｘｖｉｒｕｓ ,ＲＵＶ)、巨细胞病毒 (ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ)、单纯疱疹病毒 (ｈｅｒｐｅｃｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ-Ⅱ ,ＨＳＶ -Ⅱ )是一组病原体 ,称之为ＴＯＲＣＨ系列病原体感染。极易造成胎儿先天缺陷或发育异常。由于孕妇感染其中一种或多种病原体后 ,孕妇不表现出明显症状 ,却可以出现习惯性流产、死胎、死产及某些先天缺陷或…     

人巨细胞病毒UL57基因原核表达克隆的构建、表达及初步纯化

现有的ＩｇＭ血清学试验对ＨＣＭＶ的诊断存在敏感性和特异性较差问题 ,其主要原因是迄今采用的抗原仍为从纯化的病毒颗粒中提取的病毒抗原性物质或粗提的病毒全抗原成分。近几年来人们致力于探讨能替代ＨＣＭＶ全病毒抗原的基因工程抗原 ,以完善ＩｇＭ特异性血清学试验。本文通过构建ＨＣＭＶＤＮＡ结合蛋白的一段基因的原核表达克隆 ,从而对表达产物的抗原性进行初步分析。通过Ｏｌｉｇｏｓｉｓ软件设计ＵＬ5 7基因(ａａ5 40～ 6 0 4)两端引物 ,并在引物的 5′端分别引入ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ内切酶识别序列及保护位点。引物序列如下 :…     

实验性病毒性心肌炎小鼠血清ICAM-1、TNF-α和IL-2水平及意义

病毒性心肌炎 (ＶＭＣ )主要是由柯萨奇Ｂ组病毒侵犯心脏所致 ,并以心肌炎性坏死和间质单个核细胞浸润为主要病理变化。病毒感染引起的细胞免疫功能紊乱而致的心肌损害 ,是ＶＭＣ发病的重要机制之一[1] 。而多种细胞因子则是ＶＭＣ发病过程中的重要介质 ,我们建立了ＶＭＣ小鼠模型 ,并观察其血清中ＩＣＡＭ 1、ＴＮＦ α及ＩＬ 2的水平 ,现报告如下。1　材料和方法1 1　动物　选取 4～ 6周龄雄性ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,体重 14±2ｇ,由中科院上海实验动物中心提供。1 2　病毒　柯萨奇Ｂ3 病毒 (ＣＶＢ3 )、Ｎａｎｃｙ株 ,由上海医科大学卫生部病…     

氧氟沙星、叠氮胸苷单独及与干扰素合用对黄病毒增殖的影响

选用氧氟沙星 (ＯＦＬＸ)和叠氮胸苷(ＡＺＴ)单独投入及与ＩＦＮ并用 ,观察其抗病毒活性结果如下 :1　材料和方法1 1　病毒和细胞　所用黄病毒为乙型脑炎病毒ＪＥＶ的ＪａＧＡｒ - 0 1株。细胞是人肝癌细胞株ＨｅｐＧ2。细胞培养所用培养液为ＤＭＥＭ加 10 %胎牛血清 (ＦＣＳ)。1 2　感染病毒　病毒感染剂量为 10ｍ .ｏ.ｉ(ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ) ,37℃吸附 6 0ｍｉｎ ,在 5 %ＣＯ2 孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中 ,2 4ｈ后采取培养上清液 ,测定病毒的含量。1 3　病毒滴定　用空斑形成…     

第三相蛋白分离结合水平双相凝胶电泳对福赛类杆菌蛋白分离影响的研究

福赛类杆菌菌株 (ＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｆｏｒｓｙｔｈｕｓＡＴＣＣ430 37)在以ＴＳＢ为基础培养基中加入酵母提取物 ,氯化血红素 ,维生素Ｋ3,ＤＴＴ及ＮＡＭ ,37℃厌氧 (80 %Ｎ2 ,10 %Ｈ2 ,10 %ＣＯ2 )培养 7ｄ ,超声波破碎细胞 ,然后用ＲｅａｄｙＰｒｅｐＴＭ ＳｅｑｕｅｎｔｉａｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ试剂盒按说明书对超声破碎细菌全细胞蛋白进行分步系列提取。提取蛋白液采用ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＤｒｙＳｔｒｉｐ试剂盒 ,在ｐＨ梯度 3～ 10 ,长度为 110ｍｍ的ＩＰＧ凝胶条上 ,放置于ＭｕｌｔｉｐｈｏｒⅡ水平型电泳仪上 15℃恒温等…     

HI-SIV和HIVgp120干预CD_3/CD_4信号转导通路的研究

目的和方法 :在ＨＩＶ感染的早期及无症状的病毒携带者体内ＣＤ 4Ｔ淋巴细胞对抗原和有丝分裂原刺激缺乏ＩＬ - 2表达和增殖反应 ,甚至在ＣＤ 4Ｔ淋巴细胞进行性减少之前就已经有明显的免疫缺陷。形成这一损伤的确切机制尚不十分清楚 ,但已有研究证实ＨＩＶｇｐ1 2 0和ＣＤ4分子结合 ,从而抑制Ｔ淋巴细胞抗原受体 (ＴＣＲ)信号转导有关。本研究采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ及电泳迁移率改变检测法 (ＥＭＳＡ)观察了ＨＩＶｇｐ1 2 0多肽片段和灭活ＳＩＶ病毒 (ＨＩ-ＳＩＶ)对ＣＤ3/ＣＤ4活化刺激诱导的ＴＣＲ信号转导通路的影响 ,了解病毒蛋白…     

细菌内毒素对成纤维细胞合成IL6、IL8的诱导作用

我们曾证明 ,ＬＰＳ可促进成纤维细胞生长增殖 ,并可促进胞内诱导型一氧化氮合酶的表达[1] 。为探讨成纤维细胞在抗感染免疫中的作用机制 ,本文观察了ＬＰＳ对ＮＩＨ3Ｔ3细胞分泌ＩＬ 6和ＩＬ 8的诱导作用。1　材料和方法1 1　主要试剂　ＬＰＳＥ ｃｏｌｉＯ111:Ｂ4 购自第二军医大学微生物教研室。ＤＭＥＭ培养液为ＧＩＢＣＯ(ＵＳＡ)产品。新生牛血清 (ＮＣＳ)为杭州四季青生物工程研究所产品。ＩＬ 6和ＩＬ 8检测用ＥＬＩＳＡ药盒均为英国Ａｍｅｒｓｈａｍ公司产品。1 2　细胞株　ＮＩＨ3Ｔ3细胞引自中国科学院上海细胞生物所 ,接种于含 …     

乙型肝炎病毒在丁型肝炎病毒包装中的作用机理研究

用含ＨＢＶ全基因和ＨＢＶ大、中、小分子表面蛋白基因的真核细胞表达质粒（ＣＭＶ－ＨＢＶ、ＣＭＶ－ＬＳ、ＣＭＶ－ＭＳ、ＣＭＶ－Ｓ）分别与含ＨＤＶ ｃＤＮＡ三聚体的重组质粒共转染ＣＨＯ细胞。转染后３天在上述４种转染细胞内及培养上清中均检出了ＨＤＶ ＲＮＡ和ＨＤＡｇ表明上述４种转染细胞的培养上清中均有ＨＤＶ病毒颗粒的包装和分泌。提示：ＨＤＶ病毒的包装可能仅需ＨＢＶ Ｓ 基因及其小分子表面蛋白的辅助。     

免疫酶染色法检测心肌炎患者柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体

病毒性心肌炎可由多种病毒引起 ,以ＣｏｘＢ组病毒 (ＣＢＶ)多见。诊断ＣＢＶ感染的方法要求早期 ,快速 ,特异 ,简便。我们采用免疫酶染色法检测心肌炎患者血清中ＣＢＶＩｇＭ ,同时与患者咽拭子病毒分离法和微量中和试验相比较 ,企图找到早期、快速诊断ＣＢＶ感染的方法。自 1994年以来共收集到 12 9例成年心肌炎住院患者住院当天血 (其中单份血 10 3份 ,双份血 2 6份 ) ,以 40例健康人血作为对照组。用ＣＢＶ感染Ｈｅｐ 2细胞制成细胞涂片 ,待检血清 1∶8～ 1∶6 4稀释进行免疫酶染色法检测ＣＢＶＩｇＭ ,以全片≥ 5个细胞呈棕黄色为阳性 …     

肌醇磷酯-3激酶介导血管紧张素Ⅱ激活血管平滑肌 细胞系裂素活化的蛋白激酶

作者以前的研究显示血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )通过Ｒａｓ -ＰＫＣｚｅｔａ -ＭＥＫ途径激活血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)系裂素活化的蛋白激酶或细胞外信号调节激酶 (ＥＲＫ1 /2 )。然而 ,这不能解释ＡｎｇⅡ促进ＶＳＭＣ增生的作用可被ＰＩ3Ｋ的抑制剂Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ所阻断。我们推测ＰＩ3Ｋ也可能参与了ＡｎｇⅡ激活的ＥＲＫ1 /2的调节。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫沉淀加Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析显示正常培养的ＶＳＭＣ表达ＰＩ3Ｋ ,ＡｎｇⅡ和血小板源性生长因子 (ＰＤＧＦ)刺激并不影响ＰＩ3Ｋ的表达 ,但可提高ＰＩ3Ｋ对抗其抗…     

携带人多药抗性基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的…

从ｐＨａｍｄｒｌ／Ａ质粒用ＸｈｏⅠ和ＳａｃⅡ将ｍｄｒｌ基因切下后克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒的相应酶切位点获得测序质粒ｐＢＳｍｄｒｌ，测定了ｒｄｒｌ基因的两端序列。用ＥｃｏⅠＣＲＩ和ＸｈｏⅠ从ｐＢＳｍｄｒｌ切下ｍｄｒｌ基因，定向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ和ｐＭＳＣＶ２．１，得到携带ｍｄｒｌ基因的逆转录病毒载体ｐＬｍｄｒｌＳＮ和ｐＭＳＣＶｍｄｒｌ。用ＰＡ３１７病毒包装细胞包装后三种携带ｍ     

IL-1和IL-6对多发性骨髓瘤细胞与骨髓基质细胞粘附作用的影响

多发性骨髓瘤(ＭＭ)患者外周血中存在骨髓瘤细胞前体细胞,而骨髓瘤细胞却很少在外周循环中出现[1]。为了探讨骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞(ＢＭＳＣｓ)之间关系及ＭＭ患者ＢＭＳＣｓ的特性和功能,我们建立了人ＢＭＳＣｓ培养方法,研究了骨髓瘤细胞与ＢＭＳＣｓ的粘附效应以及ＩＬ1、ＩＬ6和骨髓瘤细胞与ＢＭＳＣｓ粘附效应的影响。1　材料和方法11　细胞株　人骨髓瘤细胞株ＫＭ3由昆明医学生物学研究所1988年所建。12　主要试剂　重组人ＩＬ1、ＩＬ6购自原平生物技术公司。13　研究对象　确诊ＭＭ患者16例,平均年龄58岁;其中初治7例,难治性ＭＭ…     

多发性硬化病中3种疱疹病毒DNA的检测

多发性硬化症(ＭＳ)与病毒感染的关系颇受国内外学者重视。ＭＳ患者血中同时检测出Ⅰ型单纯疱疹病毒(ＨＳＶ1),ＥＢ病毒(ＥＢＶ)、人类巨细胞病毒(ＨＣＭＶ)ＤＮＡ,国内目前尚未见报道。我们采用ＰＣＲ方法检测ＭＳ患者血中3种疱疹病毒ＤＮＡ,以探讨ＭＳ的发病与病毒的关系。材料与方法病例与对照:患者19例,均经临床确诊为ＭＳ。男9例,女10例,年龄16～52岁。健康体检者30例为对照组,男15例,女15例,年龄17～55岁。材料:ＰＣＲ检测试剂盒,华美生物工程公司提供。扩增片段ＨＳＶ1453ｂｐ,ＥＢＶ269ｂｐ,ＨＣＭＶ300ｂｐ。碱基序列为:ＨＳＶ1:5…     

STUDY ON SOLUBILITY OF APATITE CERAMIES IN VITRO

ＳＴＵＤＹＯＮＳＯＬＵＢＩＬＩＴＹＯＦＡＰＡＴＩＴＥＣＥＲＡＭＩＥＳＩＮＶＩＴＲＯＳＴＵＤＹＯＮＳＯＬＵＢＩＬＩＴＹＯＦＡＰＡＴＩＴＥＣＥＲＡＭＩＥＳＩＮＶＩＴＲＯＬ．ＮｉｎｇＭ．Ｘｕｅ（ＳｈａｎｇｈａｉＳｅｃｏｎｄＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ...