人羊膜作为载体体外培养兔角膜上皮细胞移植治疗碱烧伤动物的实验研究

目的观察培养生长于人羊膜的兔角膜上皮细胞使其扩增并移植治疗角膜碱烧伤的效果。为培养角膜上皮细胞移植技术及应用于临床实践提供最佳的理论和实验依据。方法新西兰白兔30只（30眼）,随机分为3组（n=10）,右眼制成碱烧伤模型。A组：角膜上皮细胞羊膜移植组;B组单纯羊膜移植组;C组为对照组（碱烧伤后不作任何移植）。术后观察角膜透明度、角膜新生血管及上皮修复情况,裂隙灯显微镜照相记录。3组均于术后1周、2周、1个月及3个月时各取1眼角膜标本行病理组织检查。结果A组除1眼移植片在第7天脱落外,所有移植片在术后3d水肿消退,角膜逐渐透明。B组移植片持续水肿,眼前段炎性反应稍重,但较碱烧伤对照组轻。C组角结膜高度水肿浑浊,烧伤后观察3个月未发现角膜恢复透明现象。病理组织检查显示：A组角膜及周边上皮细胞为多层结构,角膜新生血管消失,基质的炎性细胞浸润减退;B组覆盖上皮细胞表现为完整上皮细胞型,C组角膜浑浊,新生血管及肉芽组织形成。结论人羊膜作载体体外培养兔角膜上皮细胞移植重建角膜基底膜和角膜上皮结构治疗兔碱烧伤后的角结膜损伤是一种合理有效的方法。     

多孔纳米羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶人工角膜的实验研究

目的 评价多孔纳米羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶(NHA-PAH)人工角膜在兔角膜内的生物学反应。方法 将NAH-PAHKPro加工成直径10．0mm，周边支架为2．5mm．中央光学部与裙袢连接部呈阶梯状，植入10只新西兰白兔角膜板层囊袋内。术后眼前段裂隙灯照相并分别于1月、2月、3月、4月、6月行术眼角膜组织病理学检查。结果 术后1个月大部分新生血管长入角膜中央，3月时新生血管生长达到高峰，术后6个月角膜中央存留大量变细的新生血管，未见人工角膜排出、基质融解、房水渗漏和感染。HE染色见术后1个月时成纤维细胞、新生血管及少量炎细胞长入裙袢孔隙内，伴有少量胶原形成。术后3个月所有孔隙均被胶原细胞和新生血管组织充填，成纤维细胞在孔隙内沿纵行方向一致性生长，胞头丰富，胞核小。中央光学部透明。结论 NHA-PAHKPro组织相容性好，具有临床应用的前景。     

兔眼角膜去端肽猪皮Ⅰ型胶原膜移植的研究

目的 探讨去端肽猪皮I型胶原行板层角膜移植术后的角膜愈合情况,及其作为角膜移植替代物的可行性.方法 实验研究.选用中国白兔100只,其中80只兔根据角膜植片来源不同随机分为胶原材料实验组(A组)及同种异体对照组(B组),两组均行单眼前板层角膜移植术.各组根据不同处死时间,随机分为3 d、14 d、1个月、3个月和6个月亚组,每组8只.余20只兔(40只眼)作为B组角膜移植供体来源.术后行大体、裂隙灯观察角膜愈合情况并记录角膜透明度与角膜新生血管(CNV)评分情况,HE染色组织学观察以及上皮细胞标志蛋白K3的免疫组化检测.结果 采用Friedman秩和检验行组内比较,两两之间比较行Wilcoxon符号秩和检验.结果 两组术后角膜透明度逐渐升高(A组:x2=31.250,P=0.000;B组:x2=32.566,P=0.000),1、3及6个月两组角膜透明度评分(A组:2.50、1.94、1.94;B组:2.88、2.25、1.63)比较差异无统计学意义(Z=-1.414,0.000,-0.743;P=0.157,1.000,0.458).术后7 d两组均有CNV长入,A组CNV评分逐渐增高,14 d最高,术后1个月变化不明显,后逐渐减轻(x2=20.727,P=0.001);B组CNV评分逐渐增高,14 d达高峰,后逐渐减轻(x2=25.562,P=0.000);术后6个月两组CNV比较差异有统计学意义(Z=-2.070,P=0.038).组织学观察A组术后1个月胶原材料几乎完全降解,胶原排列趋于规则,术后6个月胶原排列基本规则,但两组局部均有不同程度胶原紊乱区.结论 去端肽猪皮I型胶原可促进角膜上皮细胞与基质细胞重建,但完全取代同种异体角膜植片还需进一步研究.

Abstract：

Objective To investigate corneal wound healing in rabbit after lamellar keratoplasty with porcine type I atelocollagen. Methods One hundred Chinese white rabbits, 80 rabbits were randomly divided into collagen materials group (group A) and allograft group (group B) , and group A and B were operated for the lamellar keratoplasty in one eye. Rest 20 rabbits'eyes (40 eyes) were used as the source of allograft for group B. After operation,the rabbits'eyes were observed by naked eyes and slit lamp, and recorded the score of the transparency and neovascularization of the cornea. The rabbits were sacrificed at 3rd, 14th day, the 1st, 3rd, and 6th month (each group eight eyes). The corneas were observed by histopathology, and the epithelial cells marker protein K3 were detected by immunohistochemistry. The results were analyzed by Rank sum test. Results The transparency of the cornea was increased gradually in A and B groups, and reached the peak on the 6th month(group A; x2 =31.250, P=0.000; group B: x2= 32.566, P = 0.000). The difference had not statistics significance in the comparison of the transparency from the 1st to 6th month(Z= -1.414, 0.000, -0.743;P=0. 157, 1.000, 0.458). The two groups had corneal neovascularization after 7 days, the intensity of corneal neovascularization in A group increased gradually, reached the peak on day 14, then decreased gradually (x2 = 20.727, P = 0.001); the intensity of corneal neovascularization in B group increased gradually, reached the peak on day 14, and then decreased gradually (x2 =25. 562, P =0. 000). The difference had statistics significance in the comparison of the neovascularzation of the cornea on the 6th month between A and B group(Z=-2.070,P=0.038).Histopathology showed the collagen material nearly disappeared after 1 month of surgery and arrangement of collagen tends to be regular.On the 6th month,arrayed collagen was regular in general,but disordered partly.Conclusions Porcine type I atelocollagen can promote corneal cells regeneration.But it needs more study to be a cornea substitute that can completely replace the corneal allogaft.     

单纯去细胞猪角膜基质穿透性角膜移植治疗兔角膜溃疡

目的:探讨单纯去细胞猪角膜基质材料诱导兔自体角膜细胞再生及修复兔角膜溃疡的可行性.方法:新西兰白兔10只制作成角膜溃疡模型,接受单纯去细胞猪角膜材料的穿透性角膜移植术,排除发生手术并发症眼(2只),剩余8只术后进行大体观察(裂隙灯检查),观察植片透明度、新生血管、上皮修复情况.分别于3,6,8,16和24wk取材进行组织学观察,并取16wk兔行超声生物显微镜(UBM)检查、32wk兔行透射电镜检查.结果:角膜溃疡修复,眼表重建8只.初期角膜上皮反复糜烂,荧光素纳染色有荧光堆积,HE 组织学检查提示4wk时上皮细胞复层化.角膜基质细胞沿材料板层生长,排列规律;3～7d角膜缘新生血管发生,位于浅基质层,1～20d达高峰,深入植片或沿缝线环形生长,拆线后逐渐消退,32wk后闭锁仅余3～4支微血管;UBM提示角膜恢复自然曲率,植床与植片尚未修复完善.TEM 提示成纤维细胞分泌胶原原纤维,参与材料改建.结论:CACM支持细胞3D生长,促进自体细胞长入,参与角膜修复改建.     

准分子激光角膜切削术后转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化观察

目的观察准分子激光角膜切削术（ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ,ＰＲＫ）术后,猴角膜愈合过程中角膜转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｅｔａ,ＴＧＦβ）的表达,以及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达情况,探讨ＴＧＦβ与ＰＲＫ术后角膜愈合过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的关系。方法对３只（６只眼）恒河猴行ＰＲＫ治疗。输入－１０００Ｄ治疗程序,切削深度为１０３μｍ。分别于术后１、３及６个月行光镜、电镜及免疫组化检查。结果术后１个月,ＴＧＦβ在角膜上皮层染色阳性,上皮下也可见少量成纤维细胞染色阳性;３个月,角膜上皮染色减弱;６个月时染色呈阴性;对照组为阴性。Ⅰ、Ⅲ型胶原于术后１、３及６个月时均有较强的阳性染色,对照组Ⅰ型胶原染色阳性,Ⅲ型胶原染色阴性。结论ＴＧＦβ参与ＰＲＫ术后角膜的愈合过程,并且可能与术后角膜上皮下新生胶原中Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成有关。     

超薄角膜瓣准分子激光原位角膜磨镶术和准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术对兔角膜组织愈合影响的对比研究

目的 探讨超薄角膜瓣准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)和准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术(LASEK)对兔角膜组织愈合的影响.方法 实验研究.32只新西兰白兔随机分为两组各16只,一组右眼行超薄角膜瓣LASIK,另一组右眼行LASEK,左眼对照.两组兔眼均行-10.00 D准分子激光切削.术后裂隙灯显微镜观察角膜情况,术后1、3个月取两组兔激光切削区角膜分别进行光镜、透射电镜检查,并采用免疫组化和RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白及转化生长因子β1(TGF-β1)在其中表达水平.RT-PCR结果采用灰度扫描,结果采用t检验进行组间比较.结果 超薄角膜瓣LASIK组术后角膜愈合反应轻、恢复快,角膜保持透明,无角膜上皮下雾状混浊(haze)发生.LASEK组术后角膜愈合反应重,恢复慢,1个月时角膜发生1级haze(62.5%)和2级haze(37.5%),3个月时发生0.5级haze(43.75%)和1级haze(56.25%).术后1、3个月超薄角膜瓣LASIK组和LASEK组角膜前基质内均有Ⅲ型胶原、FN和TGF-β1蛋白及其mRNA的表达,但LASEK组的表达明显增强(t=18.47,11.98;P<0.01);两组间Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA的表达无统计学意义(t=0.72,0.36,0.47,2.38;P>0.05).超薄角膜瓣LASIK组术后3个月Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN、TGF-β1 mRNA的表达与正常对照组差异无统计学意义(t=2.42,1.54,-0.83;P>0.05).结论 动物实验提示,模拟高度近视治疗的超薄角膜瓣LASIK术后角膜组织愈合反应明显优于LAsEK术后.(中华眼科杂志,2009,45:594-600)     

大鼠角膜新生血管生长与其周围基质内相关生物因子表达关系的研究

目的 探讨角膜新生血管周围间质相关生物因子与新生血管生长之间的关系.方法 实验研究.40只Wister大鼠采用NaOH滤纸烧灼法制作碱烧伤角膜新生血管模型.术后1、3及7 d,免疫荧光法检测角膜新生血管周围角膜基质间质相关生物因子包括转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞激活蛋白(FAP),并观察它们与新生血管之间的关系,以血小板内皮细胞黏附因子(CD31)标记血管内皮细胞.采用RT-PCR方法 检测术后3、7 d的FAP在角膜中不同位置的表达.苦味酸天狼猩红-偏振光法检测术后7 d角膜基质中主要胶原Ⅰ型和Ⅲ型胶原的改变.结果 碱烧伤后1、3及7 d角膜冰冻切片免疫荧光单染与双染显示,角膜基质首先出现TGF-β1阳性表达,然后随着新生血管的形成出现α-SMA、FAP同时阳性的细胞,正常角膜组织内无阳性表达.FAP阳性基质细胞位于CD31阳性的血管内皮细胞周围,与血管内皮细胞伴行生长,两者无明显的先后顺序.RT-PCR结果 显示,新生血管生长到达的位置出现FAP阳性表达.角膜新生血管生长后基质中Ⅰ型、Ⅲ型胶原重新排列.结论 角膜新生血管形成时,血管周围基质相关生物因子发生了改变,出现了FAP阳性的基质细胞,此细胞包绕并伴随血管内皮细胞生长;角膜基质中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蕈新排列以适应新生血管的生长.(中华眼科杂志,2009,45:158-163)     

改良聚羟乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一体化人工角膜植入兔与猴角膜的研究

目的 探讨聚羟乙基丙烯酸甲酯（PHEMA）海绵支架材料与角膜组织的生物相容性,评价改良PHEMA-聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）一体化人工角膜植入兔与猴角膜的初步临床效果。方法通过两个阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化人工角膜。实验分为两个部分完成。第1部分（A组）：将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2、4周及2、3、4个月分别行组织病理、免疫组织化学及电镜检查,观察海绵边裙与角膜组织的生物学愈合情况。第2部分（B组）：8只兔眼和2只猴眼角膜囊袋内Ⅰ期植入一体化人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后3个月时行Ⅱ期手术切除术眼角膜中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访时间3—6个月,初步观察临床治疗效果。结果（1）A组：10只兔眼随访期间未见并发症。组织病理学显示,PHEMA海绵边裙材料植入术后2周始有成纤维细胞长入,术后2—3个月时多量成纤维细胞长入并伴有新生血管生长;免疫组织化学显示,海绵孔隙中长入的细胞和角膜基质细胞均对波形蛋白免疫反应呈阳性;电镜下可见,成纤维细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并分泌胶原和细胞外基质。（2）B组：6只兔眼的一体化人工角膜均在位,另2只兔眼Ⅰ期术后有前板层角膜基质融解。2只猴眼于Ⅰ期和Ⅱ期术后均未见明显并发症。结论PHEMA海绵能与角膜组织良好的生物学愈合;改良PHEMA—PMMA一体化人工角膜植入术后能获得相对稳定的治疗效果。（中华眼科杂志．2007,43：602-607）     

紫外光/核黄素-维生素E聚乙二醇琥珀酸酯交联方案对兔眼角膜基质超微结构和胶原纤维的影响

目的 探讨紫外光/核黄素-维生素E聚乙二醇琥珀酸酯交联方案(也称个性化快速角膜胶原交联手术，CF-CXL)对兔眼角膜基质超微结构和胶原纤维的影响。方法 选取15只10～15周龄SPF级新西兰大白兔进行实验，所有动物右眼作为实验眼，均行CF-CXL,左眼作为对照眼。术后1周、1个月和3个月，注射过量戊巴比妥钠处死实验动物，取中央区角膜进行透射电镜检查。采用裂隙灯显微镜和眼前节OCT观察兔眼角膜的透明度、角膜厚度以及角膜胶原交联反应发生的深度。采用透射电镜对中央区角膜基质胶原纤维进行评估，以角膜胶原纤维横截面面积来评估胶原纤维的变化，使用ImageJ图像处理软件测量胶原纤维横截面面积。结果 裂隙灯显微镜下观察可见，实验眼术后1周组、1个月组和3个月组角膜均保持透明，无角膜上皮损伤、角膜上皮下雾状混浊以及角膜瘢痕发生。与术前相比，实验眼术后1周组兔眼中央角膜厚度变薄，术后1个月组和3个月组变化不大。透射电镜检查结果显示，实验眼术后不同时间组均可见角膜基质中横行、纵行、斜行的胶原纤维板层分布，胶原纤维板层之间角膜基质细胞填充；角膜基质细胞内可见到散在分布的胶原原纤维；在胶原纤维的纵切面中，纤维...     

改良PHEMA-PMMA一体化人工角膜治疗兔角膜碱烧伤的实验研究

目的评价改良聚羟乙基丙烯酸甲酯（PHEMA）-聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）一体化人工角膜时兔角膜碱烧伤的治疗效果。方法通过两阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化人工角膜。将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间，另10只碱烧伤兔眼角膜囊袋内1期植入一体化PHEMA—PMMA人工角膜，术后用组织病理、免疫组织化学和电镜检查观察海绵边裙与角膜组织的生物学愈合情况。术后2个月行II期手术．术后随访观察3～6个月。结果接受板层间植入术的10只兔角膜未见任何并发症。术后2周成纤维细胞长入PHEMA海绵，术后2～3个月多量细胞长入伴有新生血管；海绵孔隙中生长细胞和角膜基质细胞波形蛋白（Vim）免疫反应阳性；电镜下，细胞在海绵材料间隙中生长状态良好，并分泌胶原和细胞外基质。接受人工角膜移植术的10只碱烧伤兔眼中，1眼1期术中角膜穿孔而被排除，另9眼Ⅱ期术后，3眼2周内人工角膜镜柱偏位，6眼观察期间人工角膜在位。结论PHEMA海绵能够与角膜组织达到良好的生物学愈合；人工角膜的片型和整体强度有待进一步改良。     

PRK术后角膜基质内Ⅰ型和Ⅲ型胶原的mRNA表达

目的：从分子水平探讨ＰＲＫ术后前基质内Ⅰ型和Ⅲ型胶原的，ＲＮＡ表达情况。方法：２４只新西兰白兔，双眼行－５．０Ｄ近视治疗。于术后３天、１、２、３、４周取下角膜，用原位杂交方法观察Ⅰ型和Ⅲ型胶原的基因表达情况。结果：所有眼Ⅰ型胶原的ｍＲＮＡ表达均为阳性。术后２周时，Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ表达阳性，到４周时表达较明显。讨论：ＰＲＫ术后上皮下混浊与新生胶原的形成有关，且Ⅲ型胶原是新生胶原的主要成分。     

襻状支架人工角膜植入术的动物实验研究

目的：观察兔角膜碱烧伤后新生血管性角膜白斑在应用分子定向重排PMMA襻状支架人工角膜植入后的改变情况。方法：14只新西兰白兔，建立碱性角膜化学伤后偏中心新生血管性角膜白斑模型。将上述烧伤后1个月的新生血管性角膜白斑实验兔随机分为2组，每组7只，分别植入分子定向重排PMMA襻状支架人工角膜(实验组)和Fydorov-Zyev人工角膜(对照组)。结果：实验组：术后术眼均见刺激症状和角膜水肿，植床角膜水肿5—7d逐渐浅轻，2w后术眼刺激症状消失。术后人工角膜在位透明，1眼于术后7d出现人工角膜后膜，3眼于术后4—5w出现人工角膜前膜，钻除后有复发。对照组：人工角膜支架及自体耳软骨植入(第一期手术)后，术眼充血明显，植床角膜水肿，7—10d后逐渐消失，术后3w眼部刺激症状基本消失。人工角膜镜柱植入(第二期手术)后，术眼混合充血，近创缘处植床角膜水肿，2w后刺激症状基本消失，2眼于镜柱植入后5—10d出现人工角膜后膜，清除后1w又复发，3眼于术后4—6w出现人工角膜前膜，钻除后均有复发。结论：①襻状支架人工角膜与角膜植床之间的界面比Fydorov-Zyev型人工角膜的面积小，能减少支架对组织的损伤。②分子定向重排PMMA具有良好的生物相容性。③动物实验证实，襻状支架人工角膜植入后能稳定存留，无严重并发症，为应用于临床奠定了实验基础。     

新生血管离断术联合石菖蒲液治疗单疱病毒性角膜炎并发基质型新生血管

目的：探讨新生血管离断术联合石菖蒲波治疗单纯疱疹性角膜炎(herpes simplex keratitis，HSK)并发基质型新生血管长入角膜层间的疗效。方法：对16例反复发作的HSK并发基质型新生血管长入角膜层间的患者，施行了新生血管离断术，并用石菖蒲波滴眼。结果：随访10个月至2年6个月，16例患者15例角膜透明度增强，新生血管消退，视力均有不同程度的提高。1例半年后复发两次。结论：对HSK并发基质型新生血管长入角膜层间的患者，施行新生血管离断术后给予石菖蒲波滴眼，疗效显著而且巩固。     

角膜缘血管选择性电凝联合羊膜移植治疗角膜新生血管

目的评价角膜缘血管选择性电凝联合羊膜移植治疗角膜新生血管的临床疗效。方法对感染、外伤等原因导致的角膜新生血管62眼行角膜缘血管选择性电凝联合羊膜移植术。所有患者术后随访12个月。结果术后5d视力提高1行以上者50眼，术后视力未见变化12眼。原有新生血管数量减少，角膜水肿混浊程度减轻，角膜炎症、角膜渍疡得到改善，角膜透明性有所提高。术后12个月，新生血管完全消失24眼，占38．71％；复发22眼，占35．50％．结论角膜缘血管选择性电凝联合羊膜移植治疗角膜新生血管有效，无明显副作用，能减轻急性期的炎症反应，为角膜复明手术提供良好的条件，但远期效果及复发问题有待进一步观察。     

羟基磷灰石表面改性人工角膜支架植入兔角膜后基质金属蛋白酶-2及胶原纤维的表达

目的 探讨经羟基磷灰石(HA)表面改性的三襻式人工角膜钛支架植入兔角膜板层后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及胶原纤维的表达,评价其生物相容性.方法 实验研究.24只新西兰白兔采用单纯随机抽样方法随机分为3个组,HA-Ti支架组(9只)及Ti支架组(9只)分别于右眼角膜板层植入HA表面改性后的三襻式人工角膜钛支架(HA-Ti)及人工角膜钛支架(Ti),6只仅制备囊袋不植入支架作为对照组.观察人工角膜支架的生物相容性及新生血管生长情况,并分别于术后2周、4周、16周取材,角膜组织行苏木素-伊红染色、并用免疫组织化学方法检测各组角膜基质中MMP-2的表达并进行半定量分析;用苦味酸天狼猩红苏木素染色的方法观察支架植入后对胶原的影响.多组间比较应用单因素方差分析,组间两两比较应用SNK-q检验.结果 观察期间Ti-HA支架组及Ti支架组均未见角膜感染、溶解、支架排出.早期实验组角膜有水肿及新生血管长入,HA-Ti支架组新生血管明显多于Ti支架组.组织学观察术后2周,植入HA-Ti支架组角膜基质内2周可见少量炎性细胞(中性粒细胞及噬酸细胞为主),此后逐渐减少.支架周围2周时可看到较多成纤维细胞,16周时成纤维细胞减少,粉染的胶原纤维增多.术后2周,HA-Ti支架组、Ti支架组及对照组MMP-2阳性细胞IOD值分别为103.729±15.112、84.439±13.699、69.310±13.078,组间比较差异有统计学意义(F =6.083,P＜0.05),但Ti支架组和对照组差异无统计学意义(F=3.209,P＞0.05);4周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值逐渐降低,分别为88.963±9.017、53.005±4.605、49.326±4.443,组间比较差异有统计学意义(F=47.074,P＜0.01);16周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值分别为72.176±12.815、50.014±8.813、46.734±11.670,组间比较差异有统计学意义(F=6.079,P＜0.05).偏光镜下观察见角膜组织内4周有大量绿色的Ⅲ型胶原纤维及黄红色Ⅰ型胶原纤维,16周时角膜内主要为鲜红色的Ⅰ型胶原纤维,仍有少量的Ⅲ型胶原纤维.结论 兔角膜植入HA-Ti支架引起MMP-2活化,持续高表达并未造成对角膜的溶解;其影响周围角膜细胞外基质中Ⅲ型胶原纤维向Ⅰ型胶原纤维的转化,利于支架稳定,HA-Ti支架具有较好的生物相容性.     

组织工程上皮移植治疗烧伤后部分角膜结膜化的初步观察

目的 探讨组织工程上皮移植治疗眼表烧伤后因角膜缘干细胞功能障碍导致角膜结膜化的临床疗效.方法 系列病例研究.选择2007年12月至2008年5月期间,在首都医科大学附属北京同仁医院、北京同仁眼科中心收治的6例(6只眼)因化学烧伤、热烧伤所致的角膜结膜化患者,采用组织工程上皮移植治疗,术后随访观察6～12个月,对患者的视力、角膜新生血管及角膜透明度进行评估.结果 在随访期内,术后6例患者中有5例视力轻度提高,1例视力无变化.6例患者术后角膜新生血管较术前改善,但是在随访末期有1例患者术后新生血管再次长入角膜并大于1/2象限.5例患者的角膜透明度较术前提高.4例患者角膜基本透明,2例患者角膜轻度混浊.结论 组织工程上皮移植治疗眼烧伤后角膜结膜化可改善眼表损伤程度.     

兔LASEK与PRK术后角膜Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的Western Blot研究

目的:用WesternBlot法比较准分子激光上皮下角膜磨削术(LASEK)与准分子激光角膜切削术(PRK)术后角膜Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的动态变化情况。方法:52只新西兰白兔分为8组,对每只兔右眼行LASEK,左眼行PRK。术后1d、7d、1个月、3个月、4个月、5个月、6个月观察Haze情况,处死动物取角膜行Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的动态变化过程的免疫组织化学检查与WesternBlot检测。结果:经免疫组化和WesternBlot研究发现:LASEK组术后角膜基质中Ⅰ、Ⅲ型胶原开始增生的时间早于PRK组,表达的强度与PRK组有显著差异;两组的Ⅴ、Ⅵ型胶原动态变化曲线相似,达到表达高峰的时间一致,PRK组Ⅴ、Ⅵ型胶原的表达均明显高于LASEK组,术后6个月时LASEK组表达显著弱于PRK组。结论:PRK手术后角膜基质中Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ型胶原的表达强度、达到高峰及恢复正常的时间与LASEK相比存在显著差异,表明PRK术后基质内有胶原的过量沉积,可能是临床PRK术后Haze严重及屈光回退的组织学基础。WesternBlot法是一种可比较准确地半定量检测胶原含量动态变化的研究方法。     

AlphaCor人工角膜移植治疗兔角膜碱烧伤

目的评价AlphaCor人工角膜移植对兔角膜碱烧伤的治疗效果。方法用1mol/LNaOH烧伤兔左眼建立角膜碱烧伤模型,选择角膜白斑、角膜缘新生血管〉2个象限的5只兔眼行人工角膜移植术。AlphaCor人工角膜移植手术分2期进行：Ⅰ期手术,将AlphaCor人工角膜植入角膜板层间;Ⅱ期手术,暴露人工角膜光学区。术后观察人工角膜、受体角膜及眼前节情况。结果碱烧伤后2～6周形成带新生血管的角膜白斑。Ⅰ期术后5例人工角膜均在位,2例人工角膜出现白色沉积物,其中1例并发角膜浅层基质溶解,另3例无并发症发生。Ⅱ期手术中麻醉死亡1例,其余术后人工角膜均在位,1例术后6周发生角膜感染、穿孔,另3例术后4～6周发生人工角膜前膜增生,未见其他并发症发生。结论 AlphaCor人工角膜移植治疗兔角膜碱烧伤具有良好的生物相容性,效果较好。     

准分子激光术后大鼠角膜上皮下雾状混浊中Ⅰ型前胶原的测定

目的探讨准分子激光术后大鼠角膜中Ⅰ型前胶原的变化,比较角膜非手术区、手术野透明区与上皮下雾状混浊（haze）区的Ⅰ型前胶原含量的差异。方法32只6月龄清洁级SD大鼠按照手术前后被处死的时间不同平均分为8组。28只大鼠的一侧眼被施行准分子激光角膜切削术（PRK）。术后每日裂隙灯显微镜下观察术眼角膜情况,角膜haze的分级参照Seiler标准。分别于手术前和术后1、3、7、15d及1、2、3个月处死动物,行苏木精-伊红染色,观察手术区角膜的形态变化,采用免疫组织化学法检测角膜Ⅰ型前胶原在术眼角膜组织中的表达,并以光密度（OD）值表示。对不同时间采集的角膜非手术区、手术野透明区与haze区中Ⅰ型前胶原含量进行定量分析。结果臼术后3d起,术眼角膜上皮开始移行覆盖切削区并逐渐增厚,基质纤维细胞增生活跃;术后1个月时术眼角膜上皮基底膜开始形成,基质胶原纤维排列紊乱;术后3个月角膜基质胶原重塑过程基本完成,角膜结构趋于正常。大鼠角膜术后haze分级与Ⅰ型前胶原含量呈正相关（r=0．406,P〈0．05）;非手术区各时间段角膜平均OD值均无明显变化（t=5．719,P〉0．05）;手术区角膜中的Ⅰ型前胶原含量明显高于非手术区（P〈0．05）;haze区平均OD值明显高于非haze区（t=5．578,P〈0．05）。免疫组织化学检测表明,角膜上皮中Ⅰ型前胶原的阳性表达在术后7d最多,并终止于术后1个月,而角膜细胞间质中Ⅰ型前胶原持续至整个修复过程。结论Ⅰ型前胶原含量的增加可能是haze形成的主要因素之一,为进一步研究准分子激光术后角膜前胶原的变化提供理论支持。     

兔眼碱烧伤行羊膜移植术后转归的实验研究

目的探讨兔眼碱烧伤行羊膜移植术后在眼表大体结构、病理组织学和超微结构三个方面的转归状况。设计随机对照实验性研究。研究对象60只新西兰白兔(120眼),按照伤后不同时间手术随机分为5组,包括保存羊膜移植组(A1组、A2组)、新鲜羊膜移植组(B1组、B2组)和对照组。每组12只兔(24眼)。方法分别应用保存羊膜和新鲜羊膜,在兔眼碱烧伤后第1天和第15天行羊膜移植术,裂隙灯检查术后第1、3、7、10、15、30天时羊膜在位情况,术后第3、7、15、30天作病理学和透射电子显微镜检查。主要指标裂隙灯显微镜观察角膜透明度、新生血管及球结膜充血情况;病理学检查和透射电子显微镜观察羊膜移植术后羊膜的动态变化。结果羊膜移植术后第30天,羊膜移植组兔眼的新生血管程度减轻,角膜透明度有不同程度的恢复,与对照组差异有显著统计学意义(P<0.001),早期羊膜移植组(A2组、B2组)的疗效明显优于晚期移植组(A1组、B1组)(P<0.001)。新鲜羊膜移植组(B2组)疗效优于保存羊膜移植组(A2组)(P<0.05)。病理学结果:术后第30天,角膜各层结构恢复完整,可见少量嗜酸性粒细胞和少量残存的新生血管。透射电镜检查:新鲜羊膜组术后第15天,羊膜上皮完整,基底层变薄,羊膜和角膜组织间形成连接,羊膜基底层面与角膜表面融合。30天后,角膜表面可见一层羊膜上皮细胞,羊膜基底层消失。结论碱烧伤早期羊膜移植对抑制角膜新生血管形成、减轻炎症和恢复角膜透明度有较好的治疗效果,新鲜羊膜优于保存羊膜。