重组腺相关病毒介导神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠海马P35表达的影响

目的观察重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因(rAAV2/1-hNPY-EGFP)转染对红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马组织中P35表达的影响,探讨其在癫痫发病机制中的作用以及NPY基因治疗慢性癫痫的可能机制。方法 Wistar健康老年雄性大鼠96只,随机分为四组,A组:海马CA3区间断注射KA 1.5μl(0.4μg/μl)5次制成慢性癫痫大鼠模型;B组:在A组模型基础上,脑室注射rAAV2/1-empty-EGFP 10μl,滴度为5×1011/ml;C组:在A组模型基础上,脑室注射rAAV2/1-hNPY-EGFP 10μl,滴度为5×1011/ml;D组:注射药物为生理盐水,方法同A组。将四组大鼠分别于基因导入后2 w和4 w,取大脑海马组织,荧光定量PCR技术检测大鼠海马中NPY和P35 mRNA的表达,免疫组织化学技术检测二者蛋白的表达。结果在注射后2 w,A、B、C组大鼠NPY和P35 mRNA及蛋白的表达水平均升高,与A组相比有明显差异(P<0.05);在注射后4 w,rAAV2/1-hNPY-EGFP在癫痫病理状态下的脑组织中实现有效表达,C组大鼠海马组织中NPY的表达明显升高,而P35的表达明显降低,与A组及B组大鼠相比有明显差异(P<0.05)。结论 rAAV2/1-hNPY-EGFP基因转染可以抑制KA致痫大鼠海马中P35的表达,进而发挥抗癫痫作用,为NPY基因治疗癫痫病提供了有力试验支持。     

左乙拉西坦对外伤性癫痫预防作用的实验研究

目的建立外伤性癫痫模型,观察左乙拉西坦(LEV)干预对大鼠行为学以及海马苔藓纤维出芽的影响,探讨LEV对外伤性癫痫的预防作用。方法 (1)外伤性癫痫模型建立:除正常对照组外,其余大鼠均立体定向注射5μl浓度为0.2 mol/L的氯化铁于右侧运动皮层,癫痫发作分级采用Racine(1972)评分标准,除死亡外发作至4级以及4级以上的随机分为3组,每组7只。(2)实验分组:正常对照组,等体积生理盐水连续灌胃7 d;模型对照组,右侧运动皮层注射氯化铁,而后给予等体积生理盐水连续灌胃7 d;低剂量预防组,右侧运动皮层注射氯化铁,造模清醒后立即给予LEV150 mg/kg,1次/d,连续灌胃7 d;高剂量预防组,右侧运动皮层注射氯化铁,造模清醒后立即给予LEV300 mg/kg,1次/d,连续灌胃7 d。(3)行为学观察:视频监控24 h大鼠行为学变化,采用Racine(1972)评分标准对癫痫发作进行观测和记录,记录大鼠造模后7 d内癫痫发作次数。(4)海马苔藓纤维出芽Timm染色:大鼠造模后15 d,海马冰冻切片做Timm染色,观察右侧海马CA3区苔藓纤维出芽情况,并选用Cavazos的标准对其进行评分。(5)统计学分析:用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析及LSD-t组间比较,评价LEV对外伤性癫痫的预防作用。以P0.05为差异有统计学意义。结果 LEV低、高剂量预防组与模型组相比明显减少癫痫发作次数及苔藓纤维出芽程度,差异有统计学意义(t值分别为11.36、5.88、18.39、8.12,均P0.05),低剂量预防组与高剂量预防组相比,差异有统计学意义(t值分别为8.22、3.58,均P0.05)。结论 LEV在外伤性癫痫模型中可以减少癫痫发作次数,抑制苔藓纤维出芽,提示LEV有预防外伤性癫痫的作用。     

rAAV2/1介导hNPY和增强型EGFP基因转染KA致痫老年大鼠脑组织的有效途径

目的 探讨重组2/1型腺相关病毒载体(rAAV2/1)介导人源性神经肽Y(hNPY)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因(rAAV2/1-hNPY-EGFP)转染红藻氨酸(KA)致痫老年大鼠脑组织的有效途径.方法 将造模成功的36只健康老年雄性Wistar大鼠,随机分为二组:海马注射组和脑室注射组.应用立体定向仪将rAAV2/1-hNPY-EGFP基因注射至颅内相应的靶区,于注射后2、3、4 w分别取材,脑组织冰冻切片,荧光显微镜检测rAAV2/1-hNPY-EGFP表达情况.结果注射后2 w两组均未见有rAAV2/1-hNPY-EGFP阳性细胞表达;注射后4 w rAAV2/1-hNPY-EGFP阳性细胞的表达体积和灰度值达到最大,脑室注射组要优于海马注射组.结论 脑室注射的方法可以有效地将rAAV2/1-hNPY-EGFP基因转染到癫痫脑组织中,为转基因治疗癫痫病提供了新的转染途径.     

颞叶癫痫大鼠学习记忆障碍与海马区PSD-95表达的关系

目的研究颞叶癫痫大鼠在Morris水迷宫中学习、记忆能力与大鼠海马区PSD-95表达变化的关系。方法随机将40只W istar大鼠分为海人酸（KA）组（28只）和对照组（12只）。KA组采用KA腹腔注射制作颞叶癫痫大鼠模型,根据是否出现自发性再发作（SRS）分SRS组（A组）、无SRS组（B组）;对照组（C组）注射生理盐水。通过Morris水迷宫测验观察各组大鼠注射KA或生理盐水2、6周时的空间学习、记忆能力,采用HE染色观察大鼠海马的组织病理学变化,免疫组化法检测大鼠海马CA1、CA3区PSD-95的表达。结果A组大鼠注射KA或生理盐水6周时海马区未见广泛神经元丢失及胶质增生,偶见局部神经元丢失及胶质增生;B、C组大鼠未见神经元丢失及胶质增生。与A组2周时及B、C组在2、6周时相比,A组6周时的学习、记忆能力明显下降（P〈0.01）,相应海马CA1、CA3区PSD-95表达均明显降低（P〈0.05）。结论颞叶癫痫长期反复发作时海马区PSD-95表达的减少,可能是导致颞叶癫痫大鼠学习、记忆障碍的机制之一。     

柴胡皂苷对癫痫大鼠皮质和海马区谷氨酸、γ-羟基丁酸含量的影响

目的观察柴胡皂苷对癫痫大鼠皮质和海马区谷氨酸、γ-羟基丁酸含量调节的影响。方法将健康SD大鼠给予反复腹腔注射氯化锂-匹罗卡品化学点燃建立大鼠癫痫的动物模型,将制备成功的癫痫大鼠模型随机分为模型对照组及柴胡皂苷组,各15只,另选择15只正常大鼠作为正常对照组。柴胡皂苷组予以腹腔注射柴胡皂苷悬浊液1.09 mL/(kg·d),模型对照组及正常对照组给予等量0.9%氯化钠,使用方法、剂量及使用频率和柴胡皂苷组相同至实验结束。比较各组大鼠癫痫发作情况、皮质和海马区谷氨酸和γ-羟基丁酸含量。结果治疗后4周、8周,与模型对照组比较,柴胡皂苷组癫痫发作次数减少、发作时间短,且柴胡皂苷组发作次数、发作时间持续降低(P 0.05)。与正常对照组比较,模型对照组和柴胡皂苷组皮质和海马区谷氨酸阳性细胞数较高(P 0.05);与模型对照组比较,柴胡皂苷组皮质和海马区谷氨酸阳性细胞数较少(P 0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组及柴胡皂苷组皮质和海马区γ-羟基丁酸阳性细胞数较少(P 0.05);与模型对照组比较,柴胡皂苷组皮质和海马区γ-羟基丁酸阳性细胞数较多(P 0.05)。结论柴胡皂苷可降低癫痫大鼠皮质和海马脑区兴奋性氨基酸谷氨酸水平,减缓病变神经元兴奋性,起到抗癫痫作用,提高γ-羟基丁酸含量,降低神经元兴奋性,抑制癫痫发作,缓解癫痫发作所致的神经系统受损,具有显著抑制癫痫发作、保护神经元作用。     

低频重复经颅磁刺激对氯化锂-匹鲁卡品慢性癫痫大鼠海马CA3区PGP、MRP1、MVP表达的影响

目的研究低频重复经颅磁刺激(rTMS)对氯化锂-匹鲁卡品慢性癫痫大鼠海马CA3区P-糖蛋白(PGP)、多药耐药相关蛋白(MRP)1及主穹隆蛋白(MVP)表达水平的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组,模型组,假刺激组,治疗组,每组15只。采用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射构建癫痫大鼠模型,治疗组采用rT MS治疗,比较各组治疗过程中癫痫发作次数及CA3区PGP、MRP1及MVP的表达水平。结果治疗组癫痫发作频率低于模型组及假刺激组(P0.05)。治疗组PGP、MRP1及MVP表达水平显著低于模型组及假刺激组(P0.05),较对照组显著升高(P0.05)。结论低频rTMS可抑制模型大鼠海马CA3区PGP、MRP1及MVP过度表达,低频rTMS的抗痫作用可能与之有关。     

癫痫大鼠海马内神经干细胞移植的实验研究

取胎鼠海马进行神经干细胞(NSC)的培养、鉴定与标记,以氯化锂-匹罗卡品诱导制成大鼠急性癫痫模型,于发作后第4天将以5-溴-2'-脱氧尿苷(Brdu)标记的NSC移植入大鼠海马,检测移植后NSC在宿主体内的存活情况,移植细胞对癫痫大鼠齿状回苔藓纤维出芽(MFS)的影响.发现移植后2个月NSC在宿主体内能够存活,并向移植区周围迁移;NSC移植组大鼠海马齿状回内分子层Timm染色颗粒明显少于未移植组.认为NSC移植入癫痫大鼠海马后能够存活,并能显著抑制海马齿状回MFS.     

远志总皂苷对癫痫模型大鼠NMDA受体表达的影响

目的观察远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)对癫痫模型大鼠N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)受体表达的影响,探讨TEN对癫痫继发认知障碍干预作用的机制。方法 32只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、模型组(12只)、远志总皂苷防治组(12只)。采用腹腔注射戊四氮(PTZ)溶液制作癫痫大鼠模型,远志总皂苷防治组在腹腔注射戊四氮的同时给予灌服远志总皂苷,对照组分别注射及灌服等剂量的生理盐水。采用免疫组化方法检测大鼠海马CA1区NMDA受体表达。结果模型组大鼠海马CA1区NMDA受体平均灰度值显著高于对照组,远志总皂苷防治组大鼠海马CA1区NMDA受体平均灰度值显著低于模型组。结论远志总皂苷可显著提高癫痫模型大鼠海马CA1区NMDA受体表达,这可能是其减轻癫痫继发认知障碍的部分机制。     

Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 SD大鼠24只随机分为假手术组、痴呆组和阻断剂组,每组8只。大鼠脑室注射凝聚肽Aβ_(25-35)5建立痴呆大鼠模型,阻断剂组1周后行阻断剂脑室注射,另2组等量注射人工脑脊液4周行Morris水迷宫测试;测试1周后取材行病理观察,采用TUNEL法检测海马CA1区锥体细胞凋亡情况。结果与假手术组比较,痴呆组大鼠平均潜伏期明显延长,平台象限滞留时间明显缩短(P0.05);与痴呆组比较,阻断剂组大鼠上述指标明显提高(P0.05)。与假手术组比较,痴呆组大鼠海马CA1区可见大量的凋亡锥体细胞,阳性锥体细胞数、总面积、平均吸光度(A)值明显升高(P0.05);与痴呆组比较,阻断剂组大鼠海马CA1区可见明显的阳性细胞和核固缩,但其阳性染色锥体细胞数、总面积、平均A值明显降低(P0.05)。结论Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂可明显抑制痴呆引起的海马CA1区锥体细胞的凋亡,提示其可能通过影响细胞凋亡,参与痴呆的发病过程。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2表达的影响

目的观察丁苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响,探讨NBP对VD的保护作用。方法将80只健康Wistar大鼠随机分为VD组(VD模型)、NBP治疗组(VD模型+NBP)、NBP对照组(假手术+NBP)、Sham组(假手术组),每组20只,每组又分为4个亚组:术后1、2、4、8 w,每个亚组5只。永久性双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型。NBP对照组和NBP治疗组大鼠术后1 d开始给予BNP腹腔注射,剂量为5 mg·kg~(-1)·d~(-1),Sham组和VD组给予生理盐水腹腔注射(0.2 ml/d)。各组大鼠连续腹腔注射给药7 d。术后各时间点(1、2、4、8 w)留取海马组织,免疫组化观察各组大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2的表达。结果VD组大鼠海马CA1区Bax蛋白表达灰度明显高于Sham组(P<0.05);4 w和8 w时,NBP治疗组大鼠海马CA1区Bax蛋白表达均明显低于VD组大鼠相应时间点(P<0.05)。8 w时VD大鼠海马CA1区Bax表达灰度明显高于1 w和2 w时(P<0.05)。NBP对照组大鼠海马CA1区Bcl-2表达灰度均明显高于Sham组(P<0.05);8 w时NBP治疗组大鼠海马CA1区Bcl-2表达灰度明显高于VD组(P<0.05)。结论VD大鼠海马CA1区促凋亡蛋白Bax过度表达,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有减弱趋势;NBP对VD大鼠海马CA1区细胞凋亡具有明显的保护作用,可以抑制缺血损伤导致的海马CA1区Bax蛋白过度表达,同时能够提高大鼠海马CA1区Bcl-2蛋白的表达水平,抑制细胞凋亡,促进细胞存活,发挥神经保护作用。     

远志总皂苷对癫痫模型大鼠nAChRɑ7亚基表达的影响

目的观察远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)对癫痫模型大鼠海马CA1区烟碱型乙酰胆碱受体ɑ7(nAChRɑ7)亚基表达的影响,探讨TEN对癫痫继发认知障碍改善的可能机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、癫痫模型组和TEN防治组3组。采用免疫组化方法对各组大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达进行检测。结果与对照组相比,癫痫模型组大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达减少(P0.05),与癫痫模型组相比,TEN防治组大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达明显升高(P0.05)。结论TEN能够显著提高癫痫模型大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达,这可能是其改善癫痫继发认知障碍的部分机制。     

颞叶癫痫大鼠学习记忆障碍与海马病理变化的相关性研究

目的 探讨大鼠颞叶癫痫发作后不同时问学习、记忆障碍程度与海马病理变化的相关性。方法 采用立体定向技术在大鼠右侧海马注射红藻氨酸诱发颡叶癫痫发作，观察其行为学表现、脑电图变化，Morris水迷宫评价不同时间段学习、记忆障碍程度，以及海马、皮质病理变化。结果 注射红藻氨酸大鼠出现颞叶癫痫发作，随发作时间延长出现不同程度学习、记忆障碍，定位航行实验示逃避潜伏期延长，空间搜索实验示原平台象限内游泳时问百分比下降，与对照组比较均有显著性差异（P〈0．05），发作后2个月达到高峰。右侧海马锥体细胞逐渐出现变性、坏死，由CA3区向CA4、CA2、CA1区扩展，2个月达到高峰；对侧海马锥体细胞也出现变性、坏死。但程度明显低于注射侧。结论 大鼠颡叶癫痫发作后，其学习、记忆障碍程度与海马变性、坏死程度具有一定相关性。     

通络救脑口服液对AD大鼠海马CA3区超微结构及C-反应蛋白表达的影响

目的 观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白_(1～40)(Aβ_(1～40))诱导的老年性痴呆(AD)模型大鼠海马CA3区超微结构及C反应蛋白(CRP)表达的影响.方法 140只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组及3个实验组(12、24、48 mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量组),共7组.采用大脑海马立体定向注射凝聚态Aβ_(1～40)诱导AD动物模型,药物干预4 w后,透射电镜观海马组织超微结构的变化,免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区CRP阳性目标积分光密度.结果 电镜观察结果 显示:模型组大鼠海马变性,通络救脑口服液能改善大鼠海马神经元病理改变.与假手术组比较,模型组大鼠海马区CRP蛋白表达增高(P＜0.05);与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组CRP蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 通络救脑口服液对AD模型大鼠脑内海马组织超微病理改变具有改善作用,并且能明显降低大脑海马组织CRP蛋白的表达,具有抗炎作用.     

小牛血清去蛋白注射液对致痫实验大鼠的影响

目的探讨小牛血清去蛋白注射液（DCBSI）对戊四唑（PTZ）诱导的大鼠癫痫的作用及其机制。方法健康SD大鼠38只,随机分为5组,对照组、癫痫组和DCBSI 3个剂量组（20、40、80 mg/kg）。观察大鼠腹腔注射PTZ前后癫痫发作的情况,按Racine分级标准记录,同时记录皮层脑电图（ECOG）,观察癫痫样放电的潜伏期及1 h内癫痫样放电活动持续时间。应用Western blot电泳分析海马内CA1区P38促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其上游MKK3、下游c-MYC相关蛋白的表达。结果对照组给予PTZ后均出现癫痫发作,程度均为5级;DCBSI组发作程度明显减轻。ECOG潜伏期延长,痫样放电1 h持续时间缩短。与对照组相比,癫痫组和DCBSI 3个剂量组大鼠CA1区蛋白表达强度升高（P〈0.05）;与癫痫组相比,DCBSI 3个剂量组大鼠CA1区蛋白表达强度降低（P〈0.05）。结论 DCBSI对PTZ诱导的癫痫大鼠的发作有明显的对抗作用,对癫痫大鼠海马具有保护作用,其作用与其抑制P38MAPK通路相关蛋白的表达相关。     

LncRNA H19通过PI3K/Akt通路对海人酸致癫痫大鼠海马神经细胞自噬的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)H19通过磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路对海人酸致癫痫大鼠海马神经细胞自噬的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、NC组(空载体)、LncRNA H19-shRNA组、LncRNA H19-shRNA+LY294002组(10μL、1μg/μL PI3K特异性抑制剂LY294002),每组10只。颈内皮下注射海人酸构建癫痫大鼠模型,造模成功后,对各组大鼠海马CA1区注射相应剂量LncRNA H19-shRNA、空载体、LY294002,观察大鼠行为学变化并检测大鼠脑电图;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测大鼠海马组织中LncRNA H19表达水平;苏木精-伊红(HE)及Nissl染色观察大鼠海马神经元损伤情况;透射电镜观察海马神经元自噬情况;免疫组化法及蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠海马组织Beclin-1、LC3蛋白表达情况。结果:对照组大鼠脑电图波形正常、无癫痫发作;与对照组比较,模型组大鼠脑电图出现高幅高频波形,癫痫发作,LncRNA H19表达水平、神...     

左乙拉西坦在外伤性癫痫中神经保护的实验研究

目的观察左乙拉西坦急性期干预对大鼠外伤性癫痫的行为学、海马神经细胞凋亡与胶质细胞增生的影响。方法三氯化铁皮层注射造模后,予以左乙拉西坦灌胃干预,将大鼠随机分为健康对照组、模型组及左乙拉西坦75mg/kg剂量预防组(低剂量组)、150mg/kg剂量预防组(中剂量组)、300mg/kg剂量预防组(高剂量组)、600mg/kg剂量预防组(极高剂量组)。观察各组大鼠造模7d后的癫痫行为学改变;采用Fluoro Jade-C荧光技术进行海马CA3区凋亡神经元计数;造模后14d采用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色观察海马CA3区胶质细胞增生。评价左乙拉西坦在大鼠外伤性癫痫急性期的海马神经保护作用。结果与模型组比较,除低剂量组外,中、高、极高剂量组癫痫发作次数、神经细胞凋亡与胶质细胞增生计数差异均有统计学意义(P0.05);与低剂量组比较,中、高、极高剂量组癫痫发作次数、神经细胞凋亡与胶质细胞增生计数差异均有统计学意义(P0.05)。结论大鼠外伤性癫痫急性期进行左乙拉西坦干预可以减少癫痫发作,抑制海马神经元凋亡和胶质细胞增生,具有神经保护作用。     

川陈皮素对糖尿病大鼠认知功能障碍的影响

目的探讨川陈皮素(NOB)改善糖尿病认知功能障碍的作用及可能机制。方法 12周龄健康雄性SD大鼠40只,随机选取32只,腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液建立糖尿病大鼠模型;余8只设为正常对照组给予等剂量缓冲液注射。造模成功后,随机分为糖尿病组(n=8),NOB高剂量组(n=6,30 mg/kg)、中剂量组(n=6,20 mg/kg)和低剂量组(n=6,10 mg/kg),阳性对照组即α-硫辛酸组(n=6,60 mg/kg)。正常对照组、糖尿病组均予腹腔注射等量生理盐水,1次/d,连续8 w。22周龄时行Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力及空间探索能力比较各组认知功能,采用Western印迹方法检测海马CA1区γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)、血红素氧合酶(HO)-1、Caspase-12的表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组水迷宫实验中潜逃潜伏期明显延长(P0. 01)、在目标象限停留时间明显缩短(P0. 01),提示大鼠学习记忆的能力明显下降;糖尿病组海马CA1区γ-GCS、HO-1、Caspase-12表达量增加(P0. 01)。与糖尿病组比较,NOB治疗后各组潜逃潜伏期明显延长、在目标象限停留的时间明显缩短(P0. 01,P0. 05),海马CA1区γ-GCS、HO-1表达量增加(P0. 05,P0. 01)、Caspase-12表达量减少(P0. 05,P0. 01),以中、高剂量组效果显著,两组间比较差异无统计学意义(P0. 05)。结论 NOB能够通过上调海马CA1区γ-GCS、HO-1表达、减少Caspase-12蛋白表达,增强抗氧化应激和抑制凋亡而改善糖尿病大鼠的学习和记忆能力。     

质粒PLXSN介导bcl-2基因对癫痫大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用

选择28只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、空质粒组和bcl-2组.24 h后用红藻氨酸(KA)局部注射诱导癫痫模型,以TUNEL方法检测凋亡细胞在大鼠海马CA3区的表达,采用免疫组织化学方法和半定量RT-PCR技术检测bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA的表达.结果 显示,生理盐水组与空质粒组CA3区有大量凋亡细胞,给予PLXSN-bcl-2基因后凋亡细胞数明显减少.与空质粒组比较,bcl-2组海马CA3区bcl-2阳性细胞百分比及bcl-2 mRNA表达均明显升高.认为质粒PLXSN介导bcl-2基因转入脑内,对KA致癫痫大鼠海马神经元凋亡有抑制作用,起到脑保护作用.     

弓形虫感染对大鼠海马BDNF和NMDA表达的影响

目的观察弓形虫慢性感染对大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基天冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR2A、NR2B表达的影响。方法将4w雄性Wistar大鼠随机分成3组:A组腹腔感染2 mL弓形虫速殖子2×107/mL;B组腹腔感染2 mL弓形虫速殖子2×105/mL和C组正常对照腹腔感染2 mL灭菌生理盐水。4w大鼠感染弓形虫速殖子9w后,应用免疫组化染色、原位杂交技术和图像处理方法分析海马BDNF,CA1、CA3和齿回状NR2A和NR2B的表达。结果BDNF的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠免疫组化海马BDNF阳性染色颗粒均高于对照组,分别为(54.27±23.18)、(50.39±19.34)和(44.68±22.74)mm2(P<0.05);原位杂交显示弓形虫感染A组和B组大鼠脑组织中BDNF mR-NA表达均增加,海马阳性杂交信号高于对照组,为(0.13±0.02)、(0.12±0.02)和(0.09±0.01)(P<0.05);NR2A蛋白的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠在CA3区表达的免疫反应灰度值较正常组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),而在CA1区和齿状回表达的免疫反应灰度值与对照组相比较差异均无显著性(P>0.05)。NR2B蛋白的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠在CA1和CA3区表达的免疫反应灰度值分别与对照组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);而在齿状回表达的免疫反应灰度值差异无显著性(P>0.05)。结论弓形虫慢性感染大鼠海马组织BDNF和BDNF mRNA表达增强,弓形虫感染可影响其海马NMDA受体的表达。     

基于HMGB1/TLR4信号通路使用迷走神经刺激治疗难治性癫痫的效果

目的 探究基于高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)4信号通路使用迷走神经刺激(VNS)治疗难治性癫痫大鼠的效果。方法 将40只大鼠随机分为空白对照组(A组)、难治性癫痫模型组(B组)、假刺激组(C组)、VNS组(D组)每组各10只。A组、B组不作任何刺激处理，C组左颈部植入VNS电极，但不刺激通电。D组左颈部植入VNS电极进行通电刺激。对比分析各组海马CA3区状况、每周癫痫发作次数、海马组织存活锥体细胞数、阳性细胞数、海马区单核趋化蛋白(MCP)-1、层黏连蛋白(LAP)、P糖蛋白(P-gp)灰度比值，HMGB1、TLR4蛋白表达。结果 与A组相比，B组、C组海马CA3区细胞数量最少，且出现形态的严重损伤，核仁溶解、缩小、模糊不清，核断裂现象严重；D组海马CA3区细胞数量大幅度增加、形态趋于正常，核仁状态恢复良好。刺激结束1 w后，与B、C组相比，D组刺激结束后癫痫发作频率显著减少(P<0.05)。与A组相比，B组、C组海马组织存活锥体细胞数明显减少、海马组织阳性细胞数明显增加(P<0.05),与B、C组比较，D组海马组织存活锥体细胞数明显增加，海马组织阳...