通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1表达的影响

目的:探索通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1的影响。方法:取原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组(通高组)、通脉大生片中剂量组(通中组)、通脉大生片低剂量组(通低组)、FSH组,分别于细胞生长对数期给药,取给药后1h、2h、6h、12h、24h、48h的细胞培养上清液,用酶联免疫法检测上清液中TGF-β1的表达量。结果:自然生长对照组各时间点的TGF-β1的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组于给药12h时TGF-β1的表达量达高峰,随后开始下降,48h降到最低,FSH组于给药2h后TGF-β1的表达量达高峰,随后开始下降,48h降到最低。结论:通脉大生片可能是通过增加TGF-β1的表达量来促进卵泡发育,以达到治疗排卵障碍性不孕的目的。     

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢指数和FSHR mRNA表达的影响

目的：探讨以＂补肾调冲法＂立法的通脉大生片对排卵障碍型不孕（ASR）大鼠卵巢FSHR mRNA表达的调节作用。方法：选取9日龄SD大鼠,给予颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚ASR大鼠模型,根据大鼠阴道涂片结果筛选造模成功大鼠,随机分组。灌胃5周后处死,取卵巢,计算卵巢指数。荧光定量RT-PCR检测计算各组大鼠卵巢FSHR mRNA表达量。结果：与正常组FSHR mRNA表达量比较,模型组降低且差异有统计学意义（P〈0.05）;与模型组FSHR mRNA表达量比较,通高组、右归丸组上调,差异有统计学意义（P〈0.05）,通中组、来曲唑组均上调,差异有显著统计学意义（P〈0.01）,通低组升高,差异无明显统计学意义（P〉0.05）;通高、中组FSHR mRNA表达量上调幅度明显高于通低组,尤以通中组最显著。结论：通脉大生片可治疗肾虚排卵障碍型不孕,其机制与调节FSHR mRNA的表达水平,提高卵巢反应性有关。     

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢P-Smad3表达水平影响研究

目的在前期研究的基础上,探讨以"补肾调冲法"立法的通脉大生片对大鼠卵巢TGF-β/Smads信号转导通路的调控作用,探索中医补肾调冲法促卵泡发育的机制,从而为补肾调冲法治疗肾虚排卵障碍型不孕提供科学依据。方法选取9日龄SD大鼠,通过给予颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)模型,根据大鼠阴道脱落细胞涂片的表现,筛选出造模成功的大鼠,随机分为6个组,分别为模型组、通脉大生片高剂量组(简称通高组)、通脉大生片中剂量组(简称通中组)、通脉大生片低剂量组(简称通低组)、来曲唑组(LE)、右归丸组,另设正常组,于大鼠第80日龄,分别给予相应药物进行干预,连续干预5周后股动脉取血并处死动物,迅速剥离大鼠卵巢,每组选取三只大鼠的卵巢组织,立即置于Eppendorf管中,储存于液氮中以备检测。采用免疫印迹法,检测各组大鼠卵巢P-Smad3的表达水平。结果与模型组相比,正常组、通高组、来曲唑组、右归丸组大鼠卵巢P-Smad3的表达水平较高,差异有显著意义(P0.01),通低组、通中组的P-Smad3水平亦有所升高,差异有统计学意义(P0.05);通脉大生片各剂量组中,通高组升高P-Smad3水平的效果明显高于通中组、通低组。结论通脉大生片可以提高肾虚排卵障碍性不孕大鼠P-smad3的表达水平,进而改善卵巢局部的微环境,以促进卵泡的生长、发育和促进成熟卵泡破裂及卵子的排出,从而达到治疗肾虚排卵障碍性不孕的作用。     

通脉大生片对排卵障碍型不孕大鼠FSH、LH、TGF-β1的影响研究

目的研究通脉大生片对排卵障碍型不孕大鼠的促卵泡激素(FSH),促黄体生成素(LH),转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,以探讨通脉大生片治疗排卵障碍不孕症的作用机理。方法建立雄激素致排卵障碍型大鼠模型,随机分为空白对照组,模型组,通脉大生片高剂量组,通脉大生片中剂量组,通脉大生片低剂量组,氯米芬片组。第80日龄开始给药,5周后股动脉取血,用酶联免疫法检测血清中FSH、LH和TGF-β1的含量。取出新鲜的卵巢组织,病理切片HE染色后观察卵巢组织的形态学。结果通脉大生片高剂量组FSH水平高于模型组P0.05,差异有显著性。通脉大生片高、中、低剂量组LH水平均高于模型组,P0.01,差异有显著性。通脉大生片高剂量组TGF-β1水平高于模型组,P0.01,差异有显著性。结论通脉大生片可能通过提高垂体的内分泌功能提高FSH、LH水平;通脉大生片可以升高大鼠血清内TGF-β1水平,其导致该效应的机理,尚需进一步探讨。     

TGF-β1R在通脉大生片作用下的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的 探索TGF-β1R在通脉大生片作用下的离体大鼠卵巢颗粒细胞中的表达.方法 将培养的原代大鼠卵巢颗粒细胞,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组、通脉大生片中剂量组、通脉大生片低剂量组、FSH组,分别在细胞生长对数期给药,取给药后的细胞培养上清液,用酶联免疫法检测上清液中TGF-β1R的表达量.结果 自然生长组各时间点的TGF-β1R的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组于给药12 h时TGF-β1R的表达量达高峰,48 h降到最低,FSH组于给药2h后TGF-β1R的表达量达高峰,48 h降到最低.结论 通脉大生片可增加TGF-β1R的表达量,进而揭示通脉大生片通过可能通过TGF-β/smad信号通路来调节卵泡的发育和排卵.     

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠IGF-1及其受体影响的研究

目的:研究通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠血清中的胰岛素生长因子-1(IGF-1),卵巢中胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)表达的影响,以探讨通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠的卵巢局部因子的调控影响。方法:建立雄激素致排卵障碍型大鼠模型,随机分为空白对照组,模型组,通脉大生片高剂量组,通脉大生片中剂量组,通脉大生片低剂量组,克罗米芬组。第80日龄开始给药,5周后股动脉取血,采用酶联免疫法检测血清中IGF-1的含量。取出新鲜的卵巢组织,用免疫组化法检测卵巢局部IGF-1R的表达以及病理切片,HE染色后观察卵巢组织形态。结果:通脉大生片高剂量组降低血清中IGF-1(P<0.05)和卵巢局部IGF-1R表达(P<0.01),有统计学意义。通脉大生片低剂量降低卵巢局部IGF-1R表达(P<0.01),有统计学意义。结论:通脉大生片可通过调节卵巢局部因子IGF-1及其受体途径,促进卵泡生长发育及排出。     

Smad3在通脉大生片作用后的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的 研究Smad3在通脉大生片作用后的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达.方法 将培养的原代大鼠卵巢颗粒细胞爬片后,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组、通脉大生片中剂量组、通脉大生片低剂量组、FSH组,分别在细胞生长对数期给药,取给药后的细胞爬片,用免疫组化法检测细胞爬片中Smad3的表达量.结果 自然生长对照组各时间点的Smad3的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组给药12h时Smad3核阳性率明显高于给药6h和24h(P＜0.05);通中组给药12h时Smad3核阳性率明显高于通高组和通低组12h时Smad3核阳性率,有统计学意义(P＜0.05);FSH组给药后1h、2h时Smad3核阳性率明显高于正常组,有统计学意义(P＜0.05),FSH组给药后2h时Smad3核阳性率明显高于给药后lh时Smad3核阳性率,有统计学意义(P＜0.05).结论 通脉大生片可能是通过增加Smad3的表达量来促进卵泡发育,以达到治疗排卵障碍性不孕的目的.     

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢Smad4表达的影响

目的观察通脉大生片对大鼠卵巢形态学改变及信号蛋白Smad4在TGF-β/smads通路中的表达变化及意义。方法建立大鼠肾虚排卵障碍不孕(ASR)模型,通过阴道涂片筛选造模成功大鼠后分组用药5周后,处死大鼠,HE染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测大鼠卵巢中Smad4蛋白的表达量。结果 1各用药组从卵巢形态学上明显恢复的趋势,镜下可见成熟卵泡和黄体。2与模型组相比,通脉大生片高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠卵巢Smad4的表达水平升高(P0.05),以高剂量组及来曲唑组最明显。结论通脉大生片可用于治疗肾虚排卵障碍型不孕,而其促排卵作用可能部分是通过调节Smad4的表达,进而调控卵巢TGF-β/smads信号通路的激活来实现的。     

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的影响

目的在前期实验的基础上探讨通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)卵巢颗粒细胞超微结构的影响。方法选取9日龄SD大鼠,通过颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)模型,根据大鼠阴道脱落细胞涂片表现,筛选出造模成功的大鼠并进行分组。于大鼠第80日龄,分别给予相应药物干预,连续5周后股动脉取血处死动物,迅速剥离大鼠两侧卵巢,制成电镜标本,应用透射电镜观察卵巢颗粒细胞的超微结构。结果 (1)正常组卵巢颗粒细胞超微结构表现为:多层卵巢颗粒细胞分布,核圆形,线粒体丰富,可见大量粗面内质网;(2)模型组与正常组、给药各组大鼠卵巢颗粒细胞超微结构有明显差异,表现为细胞核团块状,核糖体丢失,可见凋亡小体,线粒体肿胀,且嵴肿胀。(3)通脉大生片各剂量组中,通高组、通中组与正常组大鼠卵巢颗粒细胞结构较相近,主要表现为成熟卵泡颗粒细胞丰富,多层分布,细胞核呈圆形,核内染色质分布均匀,胞浆内可见丰富的线粒体、粗面内质网,且结构正常,可见丰富的脂滴,细胞膜表面有微绒毛突起;通低组可见卵巢颗粒细胞结构尚可,胞浆内线粒体轻度肿胀,可见少量粗面内质网及少量脂滴。(4)左归丸及来曲唑组卵巢颗粒细胞超微结构表现相似且与正常组结构相近,可见卵巢颗粒细胞,核染色质均匀,胞浆内可见大量线粒体、高尔基复合体,结构良好。结论 (1)通脉大生片能恢复肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢颗粒细胞的超微结构。(2)通脉大生片可通过对卵巢颗粒细胞细胞器结构及数目的影响,从而影响卵泡的发育和成熟,发挥促排卵作用。(3)中医补肾调冲法治疗肾虚排卵障碍型不孕有其现实意义。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

山楂叶总黄酮对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1/Smad4信号转导通路的影响

目的探讨山楂叶总黄酮对链脲佐菌素(Streptozotocin)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad4信号转导通路的影响。方法用链脲佐菌素加高脂高糖饲养建立糖尿病肾病模型。60只Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、厄贝沙坦组、山楂叶总黄酮组。结果山楂叶总黄酮显著降低糖尿病肾病大鼠的血糖,减少肾小球细胞外基质的相对面积,改善肾功能;下调肾组织中TGF-β1、Smad4 mRNA的表达。结论山楂叶总黄酮可通过干预TGF-β1/Smad信号转导通路,减少肾小球细胞外基质的沉积,改善糖尿病肾病大鼠肾功能。     

消渴平合剂对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠TGF-β_1/Smad7信号转导通路的影响研究

目的:观察消渴平合剂对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠TGF-β1/Smad7信号转导通路的影响,探讨其对DN的防治作用及机制。方法:复制DN大鼠模型,随机分为正常组10只,模型组10只、厄贝沙坦组10只和消渴平合剂组10只。12周时处死大鼠,观察各组大鼠24 h尿蛋白变化情况,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO),大鼠肾组织行HE染色,免疫组化检测肾组织TGF-β1及Smad7蛋白。结果:消渴平合剂可以改善DN大鼠的一般状况,明显降低24 h尿蛋白定量(P0.01),减轻肾组织病理性损害。与模型组比较,消渴平合剂组BUN、Scr、TG含量显著降低(P0.01),NO含量明显升高(P0.01);肾组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:消渴平合剂可用于治疗糖尿病肾病,其机制可能与抑制DN大鼠肾脏TGF-β1/Smad7信号转导通路的激活有关。     

沙参麦冬汤联合顺铂对肺癌细胞A549增殖及对Smad7、TGF-β1蛋白表达的影响

目的研究沙参麦冬汤含药血清联合顺铂(DDP)对肺癌细胞A549增长的影响,深入探讨其影响机制。方法制备沙参麦冬汤含药血清,体外培养肺癌A549细胞。先给与浓度为3、6、12、24、48μg/mL化疗药物顺铂单独作用12、24、48 h,MTT法检测细胞增殖情况,筛选适用浓度及作用时间。将肺癌A549细胞分为空白血清组、沙参麦冬汤含药血清组、联合组(沙参麦冬汤含药血清联合顺铂),分别采用相应药物进行相应处理48 h,后采用MTT法检测不同药物对细胞的抑制率,免疫组化法检测细胞中Smad7和TGF-β1的表达,Western Blot法检测各组细胞对蛋白表达的影响。结果①随顺铂浓度的增高和时间的推移,细胞抑制率不断增长,明显呈浓度和时间依赖关系(P0.05);选定6μg/mL顺铂和10%中剂量沙参麦冬汤含药血清作用48 h;②与沙参麦冬含药血清组和顺铂组单独用药相比较,联合组明显优于二者,抑制率显著提高(P0.05);③与空白血清组相比,沙参麦冬汤含药血清组和顺铂组Smad7蛋白表达升高(P0.05),联合组蛋白表达升高最为显著(P0.05),TGF-β1蛋白表达趋势与之相反,联合组表达最高单独用药组次之,空白血清组表达最低(P0.05)。结论沙参麦冬含药血清和顺铂联合用药明显促进A549细胞的凋亡,优于单独用药,具有相加或协同作用,其作用机制可能与上调Smad7蛋白表达,下调TGF-β1的蛋白表达有关。     

宣肺化瘀方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad表达的影响

目的观察宣肺化瘀方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad2表达的影响。方法将健康雄性Wistar大鼠(SPF级)60只,随机分成6组,对照组、模型组、醋酸泼尼松(0.167 mg/kg)组及宣肺化瘀方高、中、低剂量(14.38、7.19、3.60 g/kg)组,每组10只。经鼻滴入博莱霉素7μg/g(150μL)建立肺纤维化动物模型。各给药组于造模8 h后开始分别ig醋酸泼尼松或宣肺化瘀方,每日1次。各组大鼠在造模28 d后取材。对肺组织行HE染色和天狼星红染色,光镜下观察肺泡炎和肺纤维化改变;采用碱性水解法测定肺组织中羟脯氨酸(Hyp)的量;应用免疫组织化学法测定大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad4、Smad7表达;应用Western blotting方法检测转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、Smad2、p-Smad2、Smad7的蛋白表达水平。结果模型组肺泡结构严重破坏,肺间质增生,炎细胞浸润和胶原纤维增生。与对照组比较,模型组Hyp水平、胶原阳性染色面积比值明显升高;与模型组相比,宣肺化瘀方3个剂量组和醋酸泼尼松组肺泡间隔胶原纤维表达明显减少,Hyp的量显著下降,其中,宣肺化瘀方高剂量组比低、中剂量组胶原纤维表达更少,Hyp的量更低。宣肺化瘀方组与模型组相比,TGF-βRⅡ、Smad2、p-Smad2、Smad4、α-SMA蛋白含量显著降低,而Smad7蛋白表达明显升高。结论宣肺化瘀方能有效地防治肺纤维化,其作用机制可能是通过调控TGF-β/Smad信号通路,抑制α-SMA的过度表达,进而减少胶原纤维的形成。     

胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠TGF-β1及Smad7表达的影响

目的 探讨中药胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad7表达的影响.方法 采用13.3%L-精氨酸左下腹腔注射制备大鼠慢性胰腺炎模型,分别予胰泰复方、清胰利胆颗粒及生理盐水灌胃治疗,持续2个月免疫组织化学法检测各组大鼠胰腺组织TGF-β1,及smad7蛋白的表达.结果 中药治疗组(胰泰复方)中TGF-β1表达低于模型组(生理盐水)、中药对照组(清胰利胆颗粒);Smad7蛋白表达高于模型组、中药对照组.结论 胰泰复方通过促进Smad7蛋白的表达抑制TGF-β1,的表达,进而阻断和逆转慢性胰腺炎胰腺纤维化.     

黄芪葛根汤对糖尿病大鼠心肌TGF-β_1/Smad3通路的影响

目的:研究黄芪葛根汤对实验性糖尿病心肌病变的干预作用及机制。方法:采用高脂饲料喂养和链脲佐菌素腹腔注射的方法建立2型糖尿病大鼠心肌病变模型,观察黄芪葛根汤对血糖、胰岛素、心肌纤维化、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其信号蛋白Smad3表达的影响;mRNA表达采用RT-PCR方法检测,蛋白表达采用免疫组化方法。结果:黄芪葛根汤可显著降低糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素,改善胰岛素抵抗,减少心肌羟脯氨酸含量抑制胶原增生,降低心脏指数,并显著抑制心肌TGF-β1/Smad3 mRNA和蛋白的强表达。结论:黄芪葛根汤可以通过调控TGF-β1/Smad3通路显著干预实验性糖尿病心肌纤维化病变。     

TGF-β／Smad信号通路中TGF—β1和Smad7基因在结肠癌中的表达

目的通过检测TGF—β／Smad信号通路中的TGF—β1及Smad7基因在结肠癌癌组织中的表达,探讨的关系研究它们与结肠癌发生、发展的关系。方法本研究以人结肠癌病例标本作为研究对象,采用免疫组化S-P二步法对40例不同时期结肠癌组织检测。结果TGF—β1在结肠癌阳性率为70％（26／40）,smad7在结肠癌阳性率为75％（28/40）,不同性别、年龄中二者表达无统计学意义（P〉0．05）,在淋巴结转移、分化程度、Dukes分期相关差异有统计学意义（P〈0．05）,两者有相关性。结论TGF—β1和Smad7在结肠癌发生、发展中具有重要协同作用。可作为结肠癌诊断的辅助指标。     

山楂叶总黄酮对STZ-DN大鼠肾组织TGF-β_1,BMP-7表达的影响

目的:本实验以山楂叶总黄酮干预STZ-DN模型大鼠,观察山楂叶总黄酮对STZ-DN模型大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1),骨形成蛋白-7(BMP-7)mRNA表达的影响。方法:采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)加高脂高糖喂养制作2型糖尿病大鼠模型。将Wistar大鼠48只随机分为正常对照组、STZ-DN模型对照组、山楂叶总黄酮组(FHL组)。结果:STZ-DN组大鼠血糖、BUN、BCr和尿蛋白明显增高;山楂叶总黄酮能够显著降低STZ-DN大鼠的血糖、尿蛋白并改善肾脏功能;STZ-DN组大鼠肾组织TGF-β1mRNA表达显著高于正常组,而FHL组则显著低于STZ-DN对照组;STZ-DN组大鼠肾组织BMP-7的mRNA表达较正常对照组显著减少,FHL组较STZ-DN组显著增多。结论:山楂叶总黄酮可通过上调BMP-7的表达,下调TGF-β1的表达从而对STZ-DN起治疗作用。     

通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕大鼠子宫组织形态学的影响

目的观察以"通补法"立法的通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕大鼠子宫组织形态学的变化,探讨通补法治疗肾虚排卵障碍不孕的机制。方法建立肾虚排卵障碍不孕大鼠模型,根据大鼠阴道涂片的结果,筛选造模成功大鼠,随机分为6组,分别为模型组,通脉大生片高剂量组(简称通高组),通脉大生片中剂量组(简称通中组),通脉大生片低剂量组(简称通低组),右归丸组,来曲唑组,另设正常组,于大鼠第80日龄,对各组大鼠分别进行相应药物干预,灌胃5周后处死动物,取子宫组织制成病理切片,在光镜和电镜下观察。结果光镜和电镜下,通脉大生片各组大鼠与模型组大鼠比较,子宫有不同程度的恢复(P0.05),通高组效果最好,与正常组比较,结果无差异(P0.05)。结论通脉大生片对促进肾虚排卵障碍不孕大鼠子宫的发育作用是肯定的,其组织形态学变化为通脉大生片治疗肾虚排卵障碍不孕症提供了客观基础和理论支持。