转化生长因子β1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。方法：以丝裂霉素处理的Balb／C（H-2^d）小鼠脾细胞为刺激细胞，羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）标记的C57BL／6（H-2^b）小鼠T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养（MLC）。分别设立对照组（TGF—β10ne／ml）、低浓度组（TGF—β1ng／ml）、中浓度组（TGF—β15ng／ml）和高浓度组（TGF-β1 20ng／ml）。MLC结束后利用Alamar Blue检测T细胞增殖活性，流式细胞仪检测CD3、CD25表达水平。同时设立白细胞介素．2（IL-2）组（TGF—β15ng／ml＋IL-2100U／ml），以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。结果：TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度，而且随着TGF-β1剂量加大，免疫抑制能力增强。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时，也可使CD25^＋T细胞比例上调，但并无明显的剂量依赖性。加入外源性IL-2后，T细胞增殖活性增强，同时CD25^＋T细胞比例降低。结论：TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖，并使CD25^＋T细胞比例增加，而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能，下调CD25^＋T细胞比例，说明外源性IL-2可以影响TGF-β1的生物学效应。     

水杨酸钠抑制大鼠螺旋神经节神经元电压门控钠通道的研究

目的：研究大鼠螺旋神经节神经元电压门控钠通道在水杨酸钠致听力下降过程中所起的作用。方法：采用全细胞记录膜片钳技术研究水杨酸钠对急性分离大鼠螺旋神经节神经元电压门控钠通道的影响。结果：水杨酸钠（10～1000μmol／L）作用于大鼠螺旋神经节神经元电压门控钠通道后,钠电流（Ina）的电流幅度随着浓度的增加而减小,该作用具有可逆性。水杨酸钠不改变INa的电压门控特性和稳态激活曲线。结论：水杨酸钠对大鼠螺旋神经节神经元INa具有可逆性抑制作用,但不改变钠通道激活的电压依赖特性,这可能与水杨酸钠致听力下降有关。     

促炎细胞因子对成人胰岛细胞的损伤作用

目的：考察促炎细胞因子对成人胰岛细胞的损伤作用。方法：将分离、纯化成人胰腺所得的胰岛细胞分为4组：对照组、IL-1β组（添加5ng／ml IL-1β）、IFN-γ组（添加100ng／ml IFN-γ）、联合组（同时添加5ng／ml IL-1β和100ng／ml IFN-γ），予相应细胞因子刺激5d后，分别用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）、     

东亚钳蝎毒素多肽对河豚毒素敏感型钠电流的作用

目的:蝎毒素是一种神经毒素,其对周围神经系统钠通道的作用尚不十分清楚,仍有许多疑题待研究.文中研究东亚钳蝎毒素多肽224(BmK224)对大鼠背根神经节(DRG)神经元电压依赖性河豚毒素敏感型钠电流(TTX-S INa)的影响.方法:分离单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术观察BmK224对TTX-S INa的影响.结果:BmK224浓度依赖性地抑制TTX-S INa,40μg/ml BmK224使TTX-S INa稳态激活和失活曲线都向超极化方向移动,复活时间延长.可激活通道数增加. 结论:BmK224影响钠通道激活失活过程的作用机制可能是所含的α-蝎毒素使钠通道构象发生改变.     

辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.     

大鼠NSCs向多巴胺能神经元分化研究

目的：探讨IL-1β对神经干细胞（NSCs）分化为多巴胺能神经元作用：方法：体外培养和鉴定中脑来源NSCs，用免疫学方法检测分化细胞酪氨酸羟化酶（TH）表达.结果：血清组、IL-1β10pg／ml组、IL-1β120pg／ml组、IL-1β150pg／ml组、IL-1β200pg／ml组诱导7d后TH细胞分别平均为0,45％、0．6％、7.2％、12．5％、8．75％：结果显示IL-1β诱导NSCs明显提高TH细胞表达率，与血清组比较有显著性差异（P〈0，05），在IL-1β150pg／ml剂量范同内TH细胞表达率与剂量呈正相关。结论：IL-1β有诱导NSC向多巴胺能神经元分化的显著作用：     

2-花生四烯酸甘油对海人酸诱导损伤的大鼠尾状核神经元电压门控钠电流的调制作用

目的 探讨内源性大麻素2-花生四烯酸甘油（2-AG）对海人酸（KA）损伤的大鼠尾状核神经元电压门控钠通道电流（INa）的调制作用及其分子机制。方法 原代培养大鼠尾状核神经元,分为空白对照组、KA组、2-AG+KA组、RIM（CB1受体拮抗剂）+2-AG+KA组。培养7 d后,各组细胞于培养基中处理12 h;其中,2-AG+KA组和RIM+2-AG+KA组在添加2-AG、RIM 30 min后添加KA。应用全细胞膜片钳技术检测大鼠尾状核神经元电压门控钠通道电流：包括各组电流密度的变化、通道的电流-电压特性、通道的激活动力学特性和失活动力学特性。结果 在培养的大鼠尾状核神经元中,与对照组相比,KA显著增加神经元电压门控钠通道电流密度（P=0.009）;并使VGSCs的激活电压曲线向超极化方向偏移,半激活电压绝对值明显增大（P=0.008）。与KA组相比,直接给与2-AG提高2-AG水平可阻止KA诱导的钠电流密度增加（P=0.009）和钠电流激活曲线超极化方向移动（P=0.009）,且2-AG的这种作用是通过CB1受体依赖性途径介导的。2-AG本身对尾状核神经元电压门控钠通道电流密度、激活及失活等电流特性均不产生效应。结论 2-AG可通过CB1受体途径调控尾状核神经元VGSCs电流朋而起到神经保护作用。     

脑心清及其黄酮成分对海马神经元L型钙通道电流的影响

目的研究脑心清及其黄酮成分对海马神经元细胞L-型Ca^2＋通道活性的影响。方法采用全细胞记录式（whole—cell model）的膜片钳技术记录海马神经细胞L-型Ca^2＋通道电流变化。结果槲皮素、柿叶黄酮、脑心清在5．0～25．0μg／mL浓度下,均能增加海马锥体神经元全细胞L-型钙通道电流（ICa,L）峰值（P〈0．01）,增加最大值分别为61．6％,55．3％,52．0％,可使ICa,L的Ⅰ-Ⅴ相关曲线下移,但没有电压依赖性特征,也不改变钙通道的电学特征。结论脑心清及其黄酮成分对海马神经细胞L-型Ca^2＋通道活性有激活增强作用,有利于神经元细胞内钙稳定,发挥抗缺血再灌注损伤的作用。     

BMP2在SVZa神经干细胞向TH+神经元分化中的作用

目的 研究BMP2对室管膜前下区（anterior subventricular zone，SVZa）神经干细胞分化为TH^＋（酷氨酸羟化酶）神经元的作用。方法 体外培养SVZa神经干细胞，以0、0．1、1、10、20、100（ng／m1）浓度的BMP2分别诱导SVZa神经干细胞分化，通过免疫组化和流式细胞仪技术检测不同浓度下SVZa神经干细胞分化为TH^＋神经元的比例。结果0．1—100（ng／ml）组的TH^＋细胞比例均明显高于0ng／ml组，10ng／ml组达最高峰，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向TH^＋神经元分化，可以明显提高分化比例。     

白细胞介素-1β增强子宫内膜基质细胞表达RANTES的研究

目的：探讨白细胞介素-1β（IL-1β）与正常T细胞表达和分泌的调节活化蛋白（RANTES）的相互关系及其在子宫内膜异位症（EMs）发病中的作用。方法：培养EMs在位内膜基质细胞作为体外实验模型,分别加入浓度为0．1、1．0、10．0ng／ml的IL-1β后采用RT-PCR、ELISA法从转录及转录后水平观察趋化因子RANTES的表达。结果：RT-PCR结果显示,基础状态下EMs在位内膜基质细胞有RANTESmRNA的表达。0．1ng／ml的IL-1β作用4h即可明显增加细胞RANTES mRNA的表达（P〈0．05）,1．0ng／ml的IL-1β作用8h时作用达高峰,随着时间的递增,mRNA水平呈递减趋势,且各浓度组之间差异无显著性。ELISA结果显示,基础状态下细胞培养上清液内有微量RANTES蛋白的表达。0．1ng／ml浓度的IL-1β作用4h即可显著诱导细胞分泌RANTES,1．0ng／ml浓度的IL-1β作用12h培养上清液中RANTES含量达高峰。结论：IL-1β可增强EMs在位内膜基质细胞对RANTES的基因表达,二者在EMs的发病过程起重要作用。     

异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元GABSAA受体的作用

目的：研究异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元γ－氨基丁酸A型（GABAA）受体的作用。方法：采用膜片钳全细胞记录技术。结果：临床血药浓度异丙娄（3－12μg/ml）对海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性钠、钾、钙离子通道的开放、失活、最大电流幅值没有影响。海马脑片CA1区锥体神经元自发抑制性突触后电位（sIPSC）可被GABAA受体特异性阻断剂荷包牡丹碱（Bic）所阻断。异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元sIPSC濉有增频作用，但对其幅度没有影响，且其增频作用可被Bic阻断。结论：临床浓度的异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元的sIPSC具有增频作用，说明海马可能是异丙酚作用的靶器官。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

壳寡糖促神经元生长的作用

目的研究壳寡糖（COSs）对大鼠神经元生长的影响。方法以体外培养的背根神经节（DRG）和DRG神经元为研究模型,通过神经丝蛋白-H（NF—H）免疫荧光细胞化学染色和LeicaQWin软件检测不同浓度壳寡糖（0．0、0．1、0．2mg／m1）作用5d对DRG和DRG神经元突起生长的影响;通过Westernblot检测不同浓度壳寡糖（0．05、0．1、0．2mg／m1）作用DRG神经元12h后,对DRG神经元中NF—H和生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。结果与对照组相比,中、高剂量壳寡糖（0．1、0．2mg／m1）显著促进DRG突起的生长（均P〈0．01）;0．2mg／ml剂量的壳寡糖明显促进DRG神经元突起的生长（P〈0．05）。与对照组相比,体外培养的DRG神经元加入壳寡糖作用12h后,0．2mg／ml剂量壳寡糖组的NF—H和GAP43表达量明显增加（分别P〈0．05和〈0．01）。结论壳寡糖可有促进体外培养的DRG和DRG神经元突起的生长,并可促进NF—H、GAP43的表达。     

电压门控性钠离子通道β1 亚基条件性过表达转基因小鼠的制备

目的制备电压门控性钠离子通道β1亚基基因（SCN1b）条件性过表达转基因小鼠。方法将电压门控性钠离子通道p,亚基的编码序列片段插入表达载体pCMV—loxp—lacZ-stop—loxp—IRES—eGFP中;应用显微注射法将构建好的目的载体注入供卵小鼠受精卵核中,移植受精卵入假孕雌鼠输卵管;经PCR检测阳性的后代小鼠即为原代小鼠,通过后代小鼠X—gal染色鉴定目的基因在原代小鼠的整合部位。结果共获得13只仔鼠,其中3只为目的基因表达阳性的原代小鼠,其中1只原代小鼠的背根神经节（DRG）细胞X-gal染色呈阳性。结论成功制备在DRG条件性过表达SCN1b的转基因小鼠模型,为深入研究电压门控性钠离子通道β1亚基在痛觉调控中的功能提供了工具鼠。     

硫化氢对小鼠背根神经节河豚毒素敏感型钠电流的影响

研究硫化氢(H₂S)对小鼠背根神经节(DRG)细胞河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流的影响。急性分离小鼠DRG细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察H₂S供体NaHS对TTX-S钠电流的影响。结果显示,NaHS浓度依赖性地增加TTX-S钠电流,其半数最大激活浓度(EC₅₀)为119 μmol/L,Hill系数为1.105;100 μmol/L NaHS可使TTX-S钠电流激活曲线向去极化移动约9.8 mV,稳态失活曲线向去级化方向移动约10.4 mV,但对恢复曲线无明显影响。因此,H₂S能增加TTX-S钠通道电流,并改变TTX-S钠通道稳态激活和失活动力学特征,这可能是H₂S参与疼痛发生发展的机制之一。     

IL-1β对大鼠下丘脑室旁核神经元放电活动的影响

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）对室旁核神经元自发电活动的影响，并探讨其机制。方法采用细胞外记录单位放电技术，在大鼠下丘脑脑片上观察IL-1β对室旁核神经元自发电活动的影响，以及氯沙坦对IL-1β诱发电活动的影响。结果在59个PVN神经元放电单位给予IL-1β（1×10^-7mol／L）后，有46个（78％）放电单位放电频率明显增加（P〈0．01）；在对IL-1β（1×10^-7 mol／L）呈兴奋反应的12个神经元放电单位中，用氯沙坦（1×10^-6mol／L）灌流后，除2个放电频率无明显变化外，其余10个单位放电频率显著低于灌流氯沙坦前的放电频率（P〈0．05）。结论IL-1β能兴奋下丘脑室旁核神经元自发放电，可能与血管紧张素1型受体（AT1R）有关。     

白细胞介素-10对肾小管上皮细胞转分化的影响

目的研究白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）转分化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）的影响。方法将培养的HK-2细胞通过完全随机设计分为5组：①对照组：5．5mmol／L的D-葡萄糖组;②高糖组：30mmol／L的D-葡萄糖组;③30mmol／L的D-葡萄糖＋1ng／ml IL-10组;④30mmol／L的D-葡萄糖＋5ng／ml IL-10组;⑤30mmol/L的D-葡萄糖＋25ng／ml IL-10组。培养48h后,RT-PCR法检测各组细胞CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法和Western blot法检测各组细胞α-SMA的表达;ELISA法检测各组细胞FN的分泌。结果在高糖中加入1、5、25ng／ml的IL-10作用后,与高糖组相比HK-2细胞CTGF、α-SMA和FN表达减少,且均有统计学差异（P〈0．05）。结论IL—10可以抑制高糖环境下的。肾小管EMT。     

人参皂苷Rb1对胎鼠背根神经节损伤的保护作用

目的观察不同浓度人参皂苷Rb1对损伤胎鼠背根神经节（DRG）神经元形态学改变的影响,探讨人参皂苷Rb1对谷氨酸引起的兴奋性神经毒损伤的保护作用,为Rb1的进一步研究和临床应用提供理论依据。方法选择胎龄为15 d的SD大鼠,获取DRG神经元并进行体外分散培养48 h后,随机分为对照组、谷氨酸损伤组、谷氨酸损伤＋低浓度Rb1（10μg/ml）保护组和谷氨酸损伤＋高浓度Rb1（100μg/ml）保护组,继续培养12 h。终止培养后,倒置相差显微镜观察各组神经元的生长状态,MTT检测不同浓度人参皂苷Rb1孵育的背根神经节神经元的凋亡增殖情况。结果对照组DRG神经元细胞贴壁呈单层散在分布,少部分出现细胞聚集现象,突起较长且互相交织形成网状;谷氨酸损伤组DRG神经元细胞聚集现象明显,神经元突起变短、断裂甚至消失;谷氨酸损伤＋Rb1保护组DRG神经元细胞部分呈簇状聚集,部分呈单个散在分布,突起仍然相互交织。MTT结果显示谷氨酸损伤＋Rb1保护组细胞存活率均高于谷氨酸损伤组,但高浓度Rb1保护组与低浓度Rb1保护组之间差异无统计学意义。结论人参皂苷Rb1可以影响损伤胎鼠DRG神经元的形态学改变和凋亡增殖情况,对胎鼠背根神经节神经元具有一定的保护作用。     

黄连素抑制促炎症因子生成保护多巴胺能神经元

目的探讨黄连素对炎症介导的多巴胺能神经元损伤的影响。方法于中脑原代神经元-胶质细胞培养体系中,应用脂多糖建立多巴胺能神经元损伤的炎症机制模型,黄连素（10、20μg/ml和40μg/ml）与脂多糖（1-100 ng/ml）同时处理该培养体系。免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶阳性神经元的数目,液闪测定法测定多巴胺摄取力,并检测促炎症因子,包括肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）（ELISA法）、一氧化氮（NO）（Griess反应）和超氧化物（细胞色素c还原法）的变化。结果黄连素（10、20μg/ml和40μg/ml）对脂多糖（1-100 ng/ml）诱导的中脑多巴胺能神经元损伤具显著的保护作用,且呈剂量依赖性;黄连素也显著降低促炎症因子TNF-α、IL-1β、NO和超氧化物的生成。结论黄连素抑制促炎症因子生成,保护多巴胺能神经元。     

黄芪多糖对糖尿病鼠T细胞亚群的免疫调节作用

目的 探讨黄芪多糖（APS）对NOD小鼠T细胞亚群的免疫调节机制。方法 观察APS组和对照组NOD鼠胰岛浸润淋巴细胞免疫组化、脾T淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋亚群比值，RT—PCR法检测两组胰岛中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-12、TNF—α和INF-γ Th1型细胞因子的mRNA表达。结果 APS可以降低NOD小鼠1型糖尿病的发病率，下降胰岛浸润炎症细胞及脾脏中的CD4^＋／CD8^＋亚群比值。与对照组相比，APS组胰岛IL-1β、IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α和INF-1的mRNA表达水平明显下调。结论 APS能纠正NOD小鼠Th1型细胞／细胞因子的免疫失衡状态，预防1型糖尿病的发生。