姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡影响

目的 观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别用0、10、20、30和40 μmol/L姜黄素作用PC-3细胞48 h后,Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞存活率;选用0、5、10、20 μmol/L姜黄素作用PC-3细胞48 h后, Hoechst染色观察PC-3细胞形态的变化,Annexin V/PI检测细胞凋亡率.结果 姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖(F=36.82,q=4.88～15.36,P<0.01);除0与5 μmol/L姜黄素组细胞凋亡率比较差异无显著性外,不同浓度姜黄素组之间细胞凋亡率比较差异有显著性(F=7.88,q=4.15～6.54,P<0.05).20 μmol/L 姜黄素作用PC-3细胞48 h后,倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变.结论 姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为其应用于临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据.     

IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨人白细胞介素24（IL-24）基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响，为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础。方法：检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组；检测IL-24目的基因的表达分为对照组（0.01 mol•L^-1PBS）、空载体组［pcDNA3.1(+)载体］和IL-24基因组；检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组（6 Gy）、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组。碱裂解法提取纯化质粒DNA，用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中，目的基因表达的检测采用RT-PCR法。Annexin V-FITC和PI双染后，采用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果：与假照组比较，2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化，6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高（P<0.01），且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加，约是假照组的1.6～3.0 倍。PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达，而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达；以上3组均有GAPDH基因的表达。IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较，早期凋亡细胞数均有上升趋势，除单纯照射组外，与其他组比较差异均有显著性（P<0.05）；晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势，其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高（P<0.05或P<0.001）；凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势，除IL-24基因组外，与其他组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡。      

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞作用的研究

目的观察姜黄素对前列腺癌PC-3细胞的体外作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用光镜形态学、MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察10、20和30μmol/L浓度的姜黄素在体外对前列腺癌PC-3细胞的作用,与其对细胞DNA含量和对bcl-2表达的影响。结果20μmol/L以上浓度的姜黄素对前列腺癌PC-3细胞具有明显的生长抑制作用(抑制率>54.5%,P<0.05),诱导凋亡(凋亡率>26.6%,P<0.05),下调bcl-2的表达,(表达率<9.5%),与阳性对照组bcl-2表达率30.7%相比,差异有显著性(P<0.05)。结论姜黄素对前列腺癌PC-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用,为姜黄素应用于临床激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。     

辛伐他汀对前列腺癌PC-3细胞影响的实验研究

目的:观察辛伐他汀对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡的影响,探讨辛伐他汀对前列腺癌的作用。方法:MTT比色法检测PC-3细胞的增殖;Hoechst 33258染色后荧光显微镜法观察PC-3细胞凋亡的形态学改变,并计算凋亡核百分率;Annexin V-FITC/PI双染色,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:(1)辛伐他汀可显著抑制PC-3细胞的体外增殖,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。(2)Hoechst 33258染色显示PC-3细胞经辛伐他汀(20?mol/L)分别处理24h和48h后,细胞出现凋亡,形态学变化表现为凋亡细胞体积缩小,核固缩,镜下细胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染。FACS检测结果显示,20?mol/L辛伐他汀处理12h、24h、48h后的凋亡细胞数分别为14.81±1.08%、23.42±2.33%、40.77±4.06%。PC-3细胞分别经10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L辛伐他汀处理48h后,凋亡细胞数逐渐增多,凋亡核百分率计数分别为(11.20±3.33)%,(31.20±3.08)%,(56.24±4.50)%。FACS检测结果显示,10μmol/L、20μmol/L、40?mol/L辛伐他汀处理PC-3细胞48h后的凋亡细胞数分别为17.26±1.44%、32.45±2.56%、60.47±3.98%。结论:(1)辛伐他汀能明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外增殖。(2)辛伐他汀可诱导人前列腺癌PC-3细胞发生凋亡。     

锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响

目的:探讨锌对前列腺癌细胞PC-3M凋亡的影响。方法:分别选用不同浓度ZnSO₄•7H₂O（终浓度分别为6.25、15、25、50、100、150、200、250及300 μmol•L^-1）作用于PC-3M细胞24 h,用MTT法筛选对PC-3M细胞增殖抑制的有效浓度,利用吖啶橙/溴化乙锭染色、DNA ladder及流式细胞术检测PC-3M细胞凋亡情况。结果:MTT显示,锌的浓度在250 μmol•L^-1时, PC-3M细胞存活率显著低于对照组（P<0.01）。Zn²⁺浓度达250 μmol•L^-1时,相差显微镜下细胞形态变化明显,细胞变长,并伸出较长的突起,细胞分裂相明显减少,细胞数量较对照组明显减少。吖啶橙/溴化乙锭染色显示,对照组细胞形态为规则的圆形,细胞膜光滑无皱缩和发泡,呈现均匀的绿色,偶可见橙色细胞(自然凋亡细胞);Zn²⁺（250 μmol•L^-1）作用后,相差显微镜下可观察到较多早期凋亡细胞,细胞多为圆形,但细胞膜较对照组粗糙,细胞呈绿色,细胞核中有鲜绿色的斑点;也可观察到较多的晚期凋亡细胞,细胞形状不规则,细胞膜粗糙,有较多突起,被吖啶橙染成橙色,细胞中有鲜亮的橙色斑点。DNA ladder可见梯形条带出现;流式细胞术显示亚二倍体峰的出现,细胞凋亡率为13.3%。上述各项指标均显示PC-3M细胞的凋亡水平明显高于对照组（P<0.05）。结论：高Zn²⁺可以抑制前列腺癌细胞生长并诱导前列腺癌细胞凋亡。     

冬凌草甲素诱导前列腺癌PC-3细胞自噬作用的实验观察

目的 观察冬凌草甲素(ORI)诱导前列腺癌PC-3细胞自噬,探讨ORI抗前列腺癌的可能机制.方法 实验应用MTT检测细胞存活率、扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构变化、AO染色法观察细胞胞质中酸性泡囊(acidic vesicular organells,AVO)、Western印迹检测MAPI-LC3蛋白水平、RT-PCR技术检测自噬基因beclin 1 mRNA水平.结果 MTT结果显示ORI能有效抑制PC-3细胞增殖,并呈现显著的剂量和时间依赖效应,15 μmol/LORI作用细胞24 h,增殖抑制率达(39.95±3.05)%,48 h后达(51.28±2.91)%.浓度增加至25 μmol/L,抑制率达到(67.94±4.78)%.ORI处理细胞24 h,扫描电镜下观察到细胞缩小变圆,表面微绒毛消失.透射电镜发现细胞核固缩,染色质边集,且胞质中出现大量双层膜包裹形成的自噬体,内含细胞器或胞质.AO染色可见胞质中AVO的形成.Western印迹结果显示ORI促进LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,ORI处理后LC-Ⅱ蛋白水平升高,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值下降.RT-PCR结果显示自噬抑制剂3-MA能阻止ORI引起的beclin 1 mRNA水平上调.结论 冬凌草甲素能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,并通过上调beclin 1的mRNA水平诱导细胞发生自噬.本课题为冬凌草甲素抗肿瘤机制研究提供了新思路.     

多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的体外作用

目的探讨多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的作用及其可能机制。方法将体外培养的PC-3细胞随机分为恩度组、多西他赛组、恩度与多西他赛联合组、无药物干预对照组,分别采用MTT法、流式细胞术、RT-PCR和Western-Blot方法,检测各组细胞的增殖、凋亡及MMP-9、MRP、Bcl-2、Bax mRNA和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果多西他赛与恩度对PC-3细胞增殖有呈时间依赖性的抑制作用,两药联合的抑制率高于单独用药(F=8.38～16.39,P<0.05),G2/M期细胞比例较对照组增加(F=210.60,q=4.08,P<0.05)。与恩度组、多西他赛组比较,恩度与多西他赛联合组的MMP-9、MRP、Bcl-2mRNA表达明显降低(F=48.32～201.27,q=8.47～16.87,P<0.05),Bax mRNA表达明显升高(F=101.60,q=4.46～11.29,P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(F=121.80,q=2.95～26.92,P<0.05),Bax蛋白表达明显升高(F=342.80,q=3.23～5.26,P<0.05)。结论多西他赛与恩度对PC-3细胞的生长均有一定的抑制作用,两药联合应用的效果优于单独用药,其机制与降低MMP-9、MRP、Bcl-2表达、增高Bax表达有关。     

化癥胶囊方剂诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的：明确化癥胶囊方剂对前列腺癌细胞PC-3的诱导凋亡作用。方法：PC-3细胞与适宜浓度化癥胶囊方剂共同孵育于1640培养液中,采用一系列细胞凋亡定性、定量检测方法研究化癥胶囊方剂诱导的PC-3细胞凋亡,如行DNA凝胶电泳、流式细胞仪DNA含量分析以检测凋亡。结果：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞发生凋亡特征性的生化改变,如DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析显示,化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞染色体DNA片段化,形成凋亡特征性的“DNA梯状(DNA ladder)”电泳图谱;流式细胞仪检测可见有低G1期细胞出现。在试验范围内凋亡比率与药物浓度呈一定相关。结论：化癥胶囊方剂可诱导PC-3细胞凋亡,其作用与药物浓度呈一定相关性。     

番茄红素对前列腺癌细胞PC-3增殖的影响

目的:观察番茄红素对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的的存活率、细胞周期及凋亡的影响。方法:采用MTT法观察番茄红素对癌细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化。结果:番茄红素抑制PC-3细胞的增殖,1、2、4、8μmol/L最大抑制率分别为26.4%、40.7%、50.9%、60.7%,且诱导其凋亡,最大凋亡率达39.5%,并改变细胞周期分布。上述作用呈剂量效应关系。结论:番茄红素可诱导PC-3细胞凋亡、改变细胞周期分布,从而达到抑制肿瘤细胞增殖。     

键合多西紫杉醇的聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用

目的研究键合多西紫杉醇(TSD)的聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物(PLA-PEG/TSD)对人前列腺癌细胞PC-3的增殖抑制作用。方法 TSD、PLA-PEG/TSD和聚乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)作用于PC-3细胞,应用MTT法检测各组药物在不同浓度下作用24、48、72 h后PC-3细胞的抑制率,应用流式细胞仪检测PC-3细胞周期变化,应用电镜观察PC-3细胞凋亡的形态学特征。结果 PLA-PEG/TSD和TSD比较,对PC-3细胞的增殖抑制作用相似(P>0.05),并且两组均具有浓度和时间依赖性,随药物浓度和作用时间的增加,抑制率逐渐增高。PLA-PEG和对照组比较,对PC-3细胞的增殖没有影响(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示:PLA-PEG/TSD和TSD两组PC-3细胞明显阻滞于G2/M期,两组相比较差异无统计学意义(P>0.05),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察:PLA-PEG/TSD和TSD两组PC-3细胞凋亡的形态学特征一致。结论 PLA-PEG/TSD与TSD相比较,抑制PC-3细胞增殖的特点和机制相似,PLA-PEG/TSD在治疗前列腺癌方面有研究价值。     

慢病毒介导的绿色荧光蛋白报告基因对人前列腺癌PC-3细胞的标记

目的探讨慢病毒介导的绿色荧光蛋白(GFP)标记人前列腺癌PC-3细胞是否影响其细胞生物学特性,以及GFP基因能否持久稳定表达,为下一步实验奠定基础。方法常规肿瘤细胞培养、传代,在细胞状态最佳时以不同病毒感染复数(MOI)实行GFP慢病毒对PC-3的感染,7天后在荧光显微镜下观察GFP在PC-3的表达情况。选取感染GFP阳性表达率最高的孔继续培养传代至第三代后,分别用镜下形态观、MTT测生长曲线、划痕实验来对比两种细胞的形态、活性、生长速度和生长状态,以评价GFP基因在PC-3细胞表达的稳定性。结果置荧光显微镜下,转染72h后,部分PC-3细胞可见绿色荧光,转染一周,绿色荧光表达最强。其中以MOI=20感染率最高,GFP阳性表达率为(92.3±1.2)%,GFP/PC-3在体外持续培养2、4、8周GFP阳性率没有明显变化。镜下形态观、MTT测生长曲线、划痕实验等结果显示,与转染前相比,慢病毒感染PC-3后,对细胞活力、增殖、凋亡和周期均没有影响(P>0.05)。结论 GFP慢病毒能够高效标记PC-3,并且不影响其生物学特性,GFP基因在PC-3能够持久稳定表达,可以用于下一步的细胞示踪研究。     

CD147通过Beclin-1抑制前列腺癌PC-3细胞自噬

目的: 通过建立饥饿诱导的自噬模型,探讨CD147对前列腺癌PC-3细胞自噬作用的影响,并阐明其作用机制。 方法: 通过饥饿诱导方式建立自噬细胞模型。实验分为阴性对照组和RNAi干扰CD147组(PC-3/shCD147组)。GFP-LC3质粒转染观察细胞自噬斑点形成情况,免疫印迹技术检测自噬蛋白LC3和Beclin-1表达,台盼蓝排斥实验检测细胞死亡率。 结果: 与阴性对照组比较,PC-3/shCD147组GFP-LC3斑点细胞数增加(P<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ(P<0.01)和Beclin-1(P<0.05)表达水平升高;与阴性对照组(22.3%±3.5%)比较,PC-3/shCD147组细胞死亡率(38.4%±3.1%)明显升高(P<0.05)。 结论: 在前列腺癌PC-3细胞中,CD147通过Beclin-1抑制饥饿诱导的自噬过程,减少细胞自噬的发生。     

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡的影响

目的探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果应用MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P<0.05）。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P<0.05）。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量均明显降低（P<0.05）。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P<0.05）,透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征,表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体能显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供了实验依据。     

人视网膜母细胞瘤蛋白真核表达载体的构建及其在前列腺癌细胞中的表达与定位

目的构建人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma 1,RB-1)基因真核表达载体,并在前列腺癌细胞株PC-3中表达,为进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础。方法采用PCR方法扩增RB-1基因编码区的全长序列,并加上FLAG标签,利用分子克隆技术将其重组于CMV载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转染PC-3细胞,用Western Blot检测其表达,用免疫荧光检测其在细胞中的定位。结果克隆的RB-1真核表达载体完全正确,Western Blot检测到RB-1有表达,免疫荧光检测其主要定位于细胞核内。结论成功地构建了RB-1真核表达载体,其能够在PC-3中高效表达,并主要定位于细胞核内。     

野生型p53基因转染前列腺癌细胞系PC-3m对细胞凋亡的不同影响

目的：观察野生型p53基因转染对前列腺癌细胞PC-3m增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体Lipofectamine将真核表达载体pCMV—p53和pCMV—p53mt135分别转染PC-3m细胞，MTT法检测转染前后细胞生长情况，转染48h后采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率。结果：pCMV—p53转染后的PC-3m细胞生长明显受到抑制，FCM显示，转染48h后，细胞凋亡率为15％。结论：野生型p53基因瞬间转染PC-3m细胞可抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

辐射诱导性自杀基因在胰腺癌细胞中的表达

目的 利用辐射敏感的早期生长反应基因1(Egr-1)启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK),观察其在胰腺癌细胞中的表达效果.方法 以细菌内同源重组法构建含绿色荧光蛋白(GFP)做标志基因的TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK,转染人胰腺癌细胞系PC-3 60Co-γ射线照射后,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析各不同照射剂量组TK基因的mRNA表达.Western印迹法分析60Co-γ射线照射后转染pAdEgr-1-TK细胞中TK蛋白质的表达量.结果 重组腺病毒载体pAdEgr-1-TK转染胰腺癌细胞系PC-3,不同剂量60Co-γ射线照射后,经RT-PCR半定量分析,TK mRNA表达结果分别为0 Gy(67.3±2.1)%、5 Gy为(89.3±1.0)%、7.5 Gy为(114.7±5.7)%、10 Gy为(140.5±3.1)%、15 Gy为(134.5±4.0)%、20 Gy为(117.4±3.4)%,各照射组TKmRNA表达均明显高于对照组0 Gy(均P<0.01),尤以剂量为10.0 Gy时最为显著.Western印迹分析结果分别为0 Gy为(5.4±0.7)%,5 Gy为(7.6±0.9)%,7.5 Gy为(21.5±1.5)%,10 Gy为(35.7±1.4)%,15 Gy为(32.1±1.2)%,20 Gy为(28.8±1.5)%,60Co-γ射线照射可明显提高转染pAdEgr-1-TK细胞中TK的蛋白质表达量,且蛋白质表达量与辐射剂量呈正相关性.结论 放射敏感性启动子Egr-1基因可驱动TK自杀基因在胰腺癌细胞中高效表达.