锰型超氧化物歧化酶基因转染对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用

目的探讨锰型超氧化物歧化酶(MnSOD)基因转染对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用。方法采用电穿孔方法将反义和正义MnSOD cDNA表达载体稳定转染OS-732骨肉瘤细胞,应用四唑蓝(MTT)比色法、流式细胞技术、DNA梯度实验观察MnSOD转染对OS-732细胞的诱导凋亡作用。结果转染了pHβA-SOD ( )载体的OS-732细胞(MnSOD-732)较对照空载细胞(Vector-732)生长明显受到抑制,生长曲线呈下降趋势(P＜0．05),说明细胞凋亡或死亡。转染了pHβA-SOD(-)载体的OS-732细胞(MnSOD AS-732)生长曲线呈上升趋势(P＜0．05),说明MnSOD低表达可促进骨肉瘤细胞生长。Vector-732和MnSOD AS-732培养24h后未出现Ap峰,MnSOD-732培养24h后G_1峰前出现Ap峰,肿瘤细胞凋亡率为13．26%。细胞周期分析显示, MnSOD-732较Vector-732或MnSOD AS-732的S期比例明显增加,G2～M期比例明显减少。MnSOD-732可见DNA梯度条带,Vector-732和MnSOD AS-732均未见明显梯状条带。结论转染正义MnSOD质粒可诱导OS-732细胞凋亡,MnSOD有望成为新的骨肉瘤细胞抑制剂。     

骨肉瘤VEGF表达及VEGF抗体抑制血管生成的实验研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）表达与骨肉瘤血管生成和预后的关系,以及VEGF抗体抑制骨肉瘤细胞OS-732诱导血管生成的作用和可能机制,为以VEGF为靶点治疗骨肉瘤提供实验依据。方法应用免疫组化和形态计量方法,检测80例骨肉瘤VEGF表达、肿瘤微血管密度（MVD）,以及OS-732血管生成相关因子的表达。进一步应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型观察VEGF抗体对OS-732诱导血管生成及肿瘤细胞生长的抑制作用。结果（1）骨肉瘤VEGF表达与肿瘤微血管密度（MVD）及预后密切相关。（2）OS-732表达VEGF和BFGF,而且VEGF表达强度明显高于BFGF,OS-732具有很强的诱导血管生成能力。（3）VEGF抗体干预实验结果显示VEGF抗体组肿瘤区血管密度明显低于PBS对照组,细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,而增殖指数两组差异无统计学意义。同时,VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期内皮细胞少见。结论VEGF是骨肉瘤重要的血管生成因子,其表达可能是评估骨肉瘤预后的一项有价值的指标。VEGF抗体能够抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,显著抑制骨肉瘤OS-732血管形成,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,达到抑制瘤细胞生长的作用。该结果提示VEGF可以作为骨肉瘤抗血管生成治疗的潜在靶分子。     

人透明软骨抗OS-732细胞系浸润的研究——细胞培养及透射电镜观察

本文研究成骨肉瘤OS-732细胞系浸润软骨的机理,指出经盐酸胍处理后的软骨可被瘤细胞所浸润,这些浸润细胞在电镜下见其有生长、代谢旺盛的特点,提示正常软骨内含有抑制肿瘤细胞浸润的因子存在。     

快中子及混合线照射人成骨肉瘤 OS-732 细胞系的实验观察

目的：观察快中子及光子对人成骨肉瘤细胞系OS-732的杀伤作用。方法：用快中子、光子及混合射线照射OS-732细胞系，检测各组细胞受照射后的集落形成率。结果：单次照射后第10天，混合线组对该细胞系集落形成的抑制作用明显弱于单中子及单光子组。结论：单次照射后第10天，单纯快中子及单纯光子对该细胞系集落形成的抑制作用明显强于混合线组，对临床上应用快中子治疗骨肉瘤有一定指导意义。     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的：制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法：用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测。 结果：3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。3株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。 结论：抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。     

顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究

目的：研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株(OS-732)细胞毒性的影响，探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理。方法：OS-732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h，采用体外细胞毒性试验(MTT法)、流式细胞仪(FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响，以及诱导细胞凋亡的情况。结果：41℃、43℃、45℃热疗对OS-732细胞株有明显的细胞毒性作用。在37℃恒温条件下，细胞株单独与不同浓度的顺铂作用1h，随着顺铂浓度的升高，其细胞毒性作用明显增加。43℃热疗 顺铂共同作用1h，其细胞毒性作用进一步增加，细胞毒性指数最高达72．37％；FCM分析显示对细胞周期有明显的影响，S期细胞比例明显增加，G2与M期细胞比例明显减少。43℃热疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h均出现凋亡细胞峰(亚G1峰)，细胞凋亡比例最高达56．47％；透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化。结论：顺铂热化疗有明显的增强OS-732细胞株的细胞毒性作用。43℃热疗、43℃热疗 顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡。43℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构观察

目的观察人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构特点。方法应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,通过解剖显微镜、光镜及透射电镜观察该细胞系诱导生成微血管的解剖显微结构及超微结构特点。结果OS-732细胞系具有较强的诱导血管生成能力,解剖显微镜下可见血管辐辏现象,透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成,内皮细胞裂隙增宽,基底膜不完整,缺乏平滑肌成分。结论肿瘤诱导的新生血管在病理、生理及形态功能方面都具有特征性,以血管为靶点治疗骨肉瘤对改善预后可能具有重要意义。     

人骨肉瘤细胞系OS—732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构观察

目的 观察人骨肉瘤细胞系OS-732诱导微血管生成的解剖显微结构及超微结构特点。方法 应用鸡胚绒毛尿囊膜模型。通过解剖显微镜，光镜及透射电镜观察该细胞系诱导生成微血管的解剖显微结构及超微结构特点。结果 OS-732细胞系具有较强的诱导血管生成能力，解剖显微镜下可见血管辐辏现象。透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成，内皮细胞裂隙增宽，基底膜不完整，缺乏平滑肌成分。结论 肿瘤诱导的新生血管在病理，生理及形态功能方面都具有特征性，以血管为靶点治疗骨肉瘤对改善预后可能具有重要意义。     

TRAIL协同紫衫醇诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究TRAIL和紫杉醇联合应用对骨肉瘤细胞的抑制作用,寻找骨肉瘤临床治疗的新方案.方法 将TRAIL与紫杉醇单独或联合应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞,采用MTT法测定其对OS-732细胞的抑制率,并于相差显微镜、荧光显微镜下观察细胞形态的改变.结果 50 ng/mL的TRAIL与10μg/mL紫杉醇联合作用于OS-732细胞24 h后,抑制率为47.49％,明显高于单用TRAIL(50 ng/mL)时的9.85％及单用紫杉醇(10μg/mL)时的20.37％(P ＜0.01).细胞形态结构均出现凋亡的特征性变化.结论 TRAIL与紫杉醇联合应用可高效杀伤骨肉瘤细胞,这种杀伤效应是通过促进OS732细胞的凋亡来实现的.     

人骨肉瘤OS-732单克隆抗体的制备及纯化

目的制备、纯化抗人骨肉瘤OS-732单克隆抗体。方法通过杂交瘤细胞腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,ProteinA-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗,SDS-PAGE、免疫组化及ELISA检测该单抗的性质。结果SDS-PAGE鉴定单抗纯度达到93%,ELISA检测抗体免疫活性效价为1×10-7。结论制备、纯化了具有较高纯度及生物活性的的抗骨肉瘤OS-732单克隆抗体,为下一步骨肉瘤靶向治疗打下了基础。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验模型的建立

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株中，为进一步研究野生型ｐ５３蛋白诱导骨肉瘤细胞凋亡提供体外实验模型。方法：用ＤＮＡ转染技术将ＰＭ４７质粒，它是一种含激素诱导启动的鼠乳腺肿瘤病毒启动子和生化选择标志基因Ｅｃｏｇｐｔ的重组野生型ｐ５３ｃＤＮＡ质粒导入人骨肉瘤细胞株ＯＳ－７３２中，用ｇｐｔ选择培养基筛选阳性细胞克隆。结果：成功地将外源性野生型ｐ５３ｃＤＮＡ重组质粒导入人骨肉瘤细胞株ＯＳ－７３２细胞中，在ｇｐｔ选择培养基中培养２周后生长出阳性细胞克隆，命名为ＯＳ－７３２－Ｐ。结论：利用基因转染技术能将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株中，并能在选择培养基中生长     

咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的实验研究

目的探讨咖啡因在骨肉瘤细胞株(OS-732)顺铂化疗中的增效作用.方法骨肉瘤细胞株分别经咖啡因、顺铂、咖啡因 顺铂作用72h,采用MTT法体外细胞毒性试验观察三者的细胞毒性;应用流式细胞仪分析咖啡因、顺铂及两者配伍对骨肉瘤细胞株细胞周期的影响.结果骨肉瘤细胞株与浓度分别为0.2、2.0、5.0、10.0、20.0mmol/L的咖啡因作用时,细胞毒性指数(CI)分别为12.50%、27.88%、30.77%、56.73%、84.62%;与浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的顺铂作用时,CI分别为24.04%、54.80%、65.38%、88.46%;而与低浓度咖啡因与顺铂联合作用,其CI明显增加,随着各自浓度的升高,CI明显增加.流式细胞仪分析显示咖啡因对细胞周期也有明显的影响,使G0与G1期细胞比例明显增加,G2与M期细胞比例明显减少,S期细胞比例无明显改变.结论咖啡因在骨肉瘤细胞株顺铂化疗中有显著的增效作用,并能改变骨肉瘤细胞的细胞周期.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。     

异搏定逆转骨肉瘤多药耐药的体外初步观察

目的：探讨异搏定是否能在体外逆转骨肉瘤多药耐药。方法：应用MTT法测定异搏定与阿霉素共同作用后骨肉瘤细胞的细胞活性。结果：1μg阿霉素单独作用24h，骨肉瘤细胞的细胞活性在90％左右，抑制率为10％，48h抑制率为50％左右，而加入异搏定后，骨肉瘤的细胞活性明显降低，特别是在1μg／ml细胞悬液浓度时，抑制率最高，24h细胞抑制率达50％左右。结论：异搏定体外可逆转骨肉瘤多药耐药。     

一氧化氮对骨肉瘤细胞体外跨膜侵袭能力的影响

OBJECTIVE: To study the effect of nitric oxide on the in vitro invasiveness of human osteosarcoma cell line (OS-732). METHODS: In vitro cultured OS-732 cell suspensions containing different concentrations of sodium nitroprusside (SNP) or PBS (control group) were used to assess the in vitro invasiveness of the tumor cells utilizing Boyden's chamber assay. The tumor cells growing across the filter membrane were counted by means of HE staining and compared between the groups. RESULTS: With the increase of SNP concentration in the cell suspension, the number of tumor cells growing across the membrane tended to decrease. With the exception of the cell suspension containing 500 micromol/L SNP that had a cell number across the membrane significantly different from those of any other groups, significant difference was not observed between any adjacent groups. Between the groups with SNP concentrations that did not come adjacent, however, significant differences were noted. CONCLUSION: Nitric oxide can depress the invasiveness of OS-732 cells across the membrane in vitro.