Effects of ATP on inositol 1,4,5 trisphosphate formation and intracellular calcium changes in zhuman neutrophils

目的研究ATP对人中性粒细胞内三磷酸肌醇和钙离子的作用.方法使用结合法测定三磷酸肌醇,根据Fura-2AM荧光变化测定钙离子浓度.结果ATP刺激细胞三磷酸肌醇的形成和钙离子的释放.结论ATP促进人中性粒细胞释放elastase酶可能与刺激细胞内三磷酸肌醇的形成和钙离子的释放有关.     

激光共聚焦显微镜观察三磷酸肌醇对大鼠逼尿肌细胞内钙的影响

目的 探讨IP3/Ca2 信号转导过程与逼尿肌细胞内游离Ca2 浓度[Ca2 ]i的关系.方法 建立逼尿肌过度活动大鼠模型,利用激光共聚焦显微镜观察原代培养的逼尿肌稳定及逼尿肌过度活动大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度的变化以及10-5 mol/L IP3及其抑制剂肝素影响逼尿肌稳定大鼠逼尿肌培养细胞后细胞内钙荧光强度在有钙液及无钙液中的变化.结果 逼尿肌过度活动鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较逼尿肌稳定鼠显著增强(P＜0.01),经10-5 mol/LIP3处理后,逼尿肌稳定大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较处理前显著增强(P＜0.01),且有钙液中细胞内钙荧光强度显著高于无钙液中细胞(P＜0.01).肝素能显著抑制由IP3引起的逼尿肌培养细胞内钙荧光强度的增强.结论 由IP3激活引起的逼尿肌细胞内游离钙浓度的升高可能是逼尿肌过度活动发生的重要原因之一.     

Effect of adenosine on intracellular calcium in human neutrophils

目的：研究腺苷对fMLP活化的中性粒细胞内钙离子的作用。方法：根据Fura—2AM荧光变化测定细胞内钙离子浓度。结果：fMLP刺激细胞内钙离子变化，形成两个峰值，腺苷不影响fMLP引起的第一个峰值，却使第二个峰值消失。结论：腺苷抑制中性粒细胞产生过氧化氢可能与其抑制细胞外钙离子进入细胞内有关。     

三磷酸肌醇、钙离子在胃泌素促人结肠癌SW480细胞株增殖中的作用

目的：探讨胃泌素对人结肠癌细胞株ＳＷ４８０内三磷酸肌醇（ＩＰ３）、钙离子（Ｃａ２＋）的影响及其在细胞增殖中的作用,为结肠癌抗信息传导治疗提供实验依据。方法：①３Ｈ－肌醇标记细胞进行ＩＰ３分析。②应用Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２检测细胞内Ｃａ２＋的浓度。③ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（吸光度Ａ值）。结果：５肽胃泌素（Ｐｅｎｔａｇａｓｔｒｉｎ,ＰＧ）可使ＳＷ４８０细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平升高,同时活细胞数Ａ值增加;５肽胃泌素与其受体拮抗剂丙谷胺（Ｐｒｏｇｌｕｍｉｄｅ,ＰＧＬ）合用时,癌细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平和活细胞数Ａ值均无明显变化。结论：提示胃泌素可能通过肌醇脂质信号传导途径促进人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖     

17β—雌二醇对人的类成骨细胞HOS TE85胞内游离钙,IP3及？…

目的 观察１７β－雌二醇（Ｅ２０）对成骨细胞内游离钙（「Ｃａ＾２＋」ｉ）１,４,５,－三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量及钙调蛋白（ＣａＭ）含量的影响。方法 以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ为钙荧光指示剂,采用激光共聚焦显微系统测定细胞内钙荧光值的改变,以反映「Ｃａ＾２＋」ｉ含量的变化。用阳离子交换法测定ＩＰ３含量。以测定钙依赖的磷酸二酯酶活性方法测定ＣａＭ含量。     

ATP对正常及DI大鼠离体逼尿肌肌条自发性收缩的影响

目的初步探讨ATP对正常及DI大鼠离体逼尿肌肌条自发性收缩的影响.方法通过建立大鼠逼尿肌不稳定模型,采用离体逼尿肌肌条实验观察ATP对正常及DI大鼠逼尿肌收缩特性的影响.结果成功建立了稳定的大鼠DI模型,成功率76.67%.DI组离体逼尿肌肌条自发性收缩频率及收缩力明显高于对照组;ATP可以明显加快DI组逼尿肌肌条自发性收缩频率,而对收缩力无明显影响.结论ATP主要调节大鼠逼尿肌兴奋性方面,而在收缩力方面可能不起重要作用.     

脂质体携载ATP对顿抑心肌的保护作用

目的 观察恢复顿抑心肌的能量代谢对其功能的影响。方法 在18只麻醉开胸犬上建立局部心肌顿抑（Myocardium Stunning)模型，在顿抑心肌局部灌注脂质体包裹的三磷酸腺苷（ATP），用高效液相色谱法测量心肌腺苷酸含量。动态监测血流动力学及局部心肌收缩力的变化。结果 冠脉灌注脂质体携载ATP可以明显提高心肌细胞ATP含量，减少顿抑局部血清丙二醛的产生，降低心肌细胞Ca^2 含量，提高局部心肌收缩力，加快心脏收缩功能的恢复。而冠脉灌注游离ATP则无此作用。结论 顿抑心肌能量代谢与心功能之间有着密切联系，提高顿抑心肌ATP含量可以加快心功能的恢复。脂质体作为载体可以将外源性ATP导入心肌细胞内，是一种很有前途的治疗措施。     

膀胱内灌注ATP、PPADS对大鼠逼尿肌不稳定的影响

目的 初步探讨膀胱内给予三磷酸腺苷(ATP)、磷酸吡哆醛(PPADS)对正常及逼尿肌不稳定(detrusor in stability, DI)大鼠膀胱功能的影响.方法 建立雌性SD大鼠DI模型,以正常雌性大鼠作对照,分别膀胱内给予嘌呤能受体激动剂ATP和阻滞剂PPADS,行充盈性膀胱测压,观察正常和DI大鼠膀胱贮尿期和排尿期功能的改变.结果 成功建立了稳定的DI大鼠模型,成功率72%.ATP使两组大鼠膀胱功能容量减小,排尿间隔时间缩短,正常无DI大鼠70%发生逼尿肌不稳定收缩.PPADS使两组大鼠膀胱功能容量增加,排尿间隔时间延长,DI组大鼠不稳定收缩频率显著降低(P<0.05).结论 嘌呤能受体在膀胱排尿反射和逼尿肌不稳定发生中起重要作用.     

Effects of Extracellular ATP and Its Receptors on Peripheral Nerve Regeneration in SD Rats

Peripheral nerve injury is a common disease andthe effectiveness is poor after microsurgery repair.The main factors influencing the effectiveness of theperipheral nerve injury are the axon regeneration af-ter the nerve repair.It is believed that axonal guid-ance is mainly regulated through interactions of theaxons with attractive,repulsive,and trophic cuesduring development of the nervous systems.Similarmechanisms regulate axonal regeneration after pe-ripheral nerve injury[1] .There is evidenc…     

三磷酸肌醇对大鼠逼尿肌细胞内钙影响的激光共聚焦显微镜观察

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)/Ca2 信号转导过程与逼尿肌细胞内游离Ca2 浓度[(Ca2 )I]的关系.方法建立逼尿肌不稳定(DI)大鼠模型,利用激光共聚焦显微镜观察原代培养的逼尿肌稳定(DS)及DI大鼠逼尿肌细胞内钙荧光强度的变化以及10-5mol/L IP3影响DS大鼠逼尿肌培养细胞后细胞内钙荧光强度在有钙液及无钙液中的变化情况.结果DI大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较DS大鼠显著增强(P＜0.01),经10-5 mol/L IP3处理后,DS大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较处理前显著增强(P＜0.01),且有钙液中细胞内钙荧光强度显著高于无钙液中细胞(P＜0.01).结论由IP3激活引起的逼尿肌细胞内游离钙浓度的升高可能是DI发生的重要原因之一.     

苯海索对凝血酶诱导的人血小板聚集和胞浆游离钙浓度的影响

目的:观察苯海索体外对人血小板聚集和胞浆游离钙的影响。方法:用比浊度法及钙离子荧光指示剂Fura2AM测定法,分别体外测定苯海索对凝血酶诱导的人血小板聚集及胞浆游离钙浓度的影响。结果:苯海索0.001～1.000mmol·L-1浓度可明显抑制凝血酶诱导的血小板聚集(P<0.05)和胞浆游离钙的升高(P<0.01),均呈剂量依赖性(r=-0.9230,P<0.01;r=-0.9348,P<0.01),其抑制作用可以被钙减弱,而被依他酸增强。苯海索对凝血酶诱导的钙释放无明显影响(P>0.05)。结论:苯海索可抑制人血小板聚集和[Ca2+]i升高,其主要机制可能是抑制细胞外钙离子的内流。     

Roles of protein kinase C and inositol1,4,5- trisphosphate in the pathogen esis of hypoxic- ischemic brain injury in neonatal rats

Objective To investigate the effect of second messengers protein kinase C (PKC) and inositol(1,4,5)- trisphosphate (IP3) during hypoxic- ischemic brain injury in neonatal rats.Methods The protein concentration was determined by Lowry’s method.PKC activity was measured by the incorporation of ［γ- 32P into a specific substrate peptide in the cytosol and particulate fraction, respectively.IP3 was determined by the radioreceptor binding assay.Results Compared with the control, PKC activities in the particulate fractions in both the cerebral cortex and hippocampus decreased, while increased in the cytosol in cerebral cortex and remained within the normal range in the cytosol in the hippocampus at 0, 4, 12, 24, 48, 72 h, 7, and 14 d after hypoxic- ischemia for 20 min All these changes restored to normal levels at 21 d post hypoxic- ischemia Similarly, a decrease in IP3 in the cerebral cortex and hippocampus and an increase in IP3 in the thalamus after hypoxic- ischemia were noted, respectively Changes in cytosolic PKC activity were not related to those of IP3, as evaluated statistically.Conclusion Hypoxia- ischemia induces disturbance of the second messengers IP3 and PKC, which may play important roles in the pathogenesis of hypoxic- ischemic brain injury.     

Effects of lptakalim on intracellular free calcium concentration of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

Objective：To explore the effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells induced by endothelin-1 （ET-1） in vitro. Methods：A cell culture model, [^3H]-thymidine（[^3H]-TdR） incorporation test and confocal microscope were used to observe proliferation and intracellular free calcium concentration（[Ca^2±]） of rabbit PASMC induced by ET-1 in vitro. Results：The value of [^3H]-TdR incorporation in ET-1 group was increased 1.468 times higher than that in control group. Iptakalim at the concentration of 10^-7mol/L, 10^-6mol/L ,10^-5 mol/L lowered [^3H]-TdR incorporation by （19.8 ± 4.6）%, （41.2 ± 9.5）%, （54.7 ± 10.1）%, respectively, compared with the value of the cells treated with ET-1（P〈 0.01）; The intracellular fluorescence intensity of PASMC in ET-1 group was increased from 73.70 ± 10.12 to 143.84 ± 28.23, significantly higher than that in control group（P 〈 0.01）; whereas with Iptakalim,the fluorescence intensity（FI） was only increased from 74.30 ± 10.20 to 86.03 ± 9.82, significantly lower than that in ET-1 group（P 〈 0.01）. Conclusion：Iptakalim inhibited proliferation of PASMC and decreased intracellular free calcium concentration of cultured rabbit PASMC induced by ET-1.     

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。　方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 ]i变化。　结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。　结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 超载的作用     

甘氨酸对ATP耗竭诱生性细胞自噬的作用及其机制

目的:研究甘氨酸(Gly)在ATP耗竭性细胞自噬中的作用及其可能机制?方法:用脂质体转染法将绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(GFP-LC3)质粒导入犬肾细胞(MDCK)中,在倒置荧光显微镜下观察细胞内自噬体的生成?同时收集细胞总蛋白,用Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达,并检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化活性改变?结果:MDCK细胞经转染GFP-LC3质粒后,可见细胞浆内散布明显的点状荧光颗粒;转染细胞被剥夺ATP后,发现细胞内自噬体数目明显增多,GFP-LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显增高,AMPK的磷酸化水平增强?用甘氨酸处理细胞后,发现自噬体较ATP耗竭组明显减少,GFP-LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显降低,细胞AMPK的磷酸化水平也有所降低?结论:ATP耗竭能诱导细胞的自噬性死亡,Gly可抑制ATP耗竭细胞的自噬,其机制可能与AMPK活性受抑有关?     

逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌组织三磷酸肌醇受体变化的研究

目的探讨逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌组织三磷酸肌醇受体(IP3R)变化与DI的关系.方法建立DI大鼠模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测DI及逼尿肌稳定(DS)大鼠逼尿肌组织IP3R亚型变化.结果DS大鼠及DI大鼠膀胱逼尿肌组织均有IP3RⅠ、Ⅱ、Ⅲ亚型表达,DI大鼠IP3RⅠ、Ⅱ亚型表达显著高于DS大鼠(P＜0.05～0.01),IP3R Ⅲ亚型表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论DI大鼠IP3RⅠ、Ⅱ亚型表达增强可能参与了逼尿肌不稳定的发生.     

4’-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞内Ca2+浓度的影响

目的:探讨4'-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及细胞内Ca2 浓度的影响.方法:应用MTT法、流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜技术,体外观察该化合物对JAR细胞的影响.结果:4'-甲醚-黄芩素对JAR细胞的生长具有抑制作用.随着药物浓度与作用时间的增加,Annexin V-FITC /PI-细胞、细胞内Ca2 浓度逐渐增加,与对照组相比差异有显著性.结论:4'-甲醚-黄芩素能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2 浓度有关.     

MALP-2对多形核中性细胞凋亡及其Bax蛋白表达的影响

目的研究Toll样受体(TLR)激动剂巨噬细胞活化脂肽(MALP-2)影响多形核中性细胞(PMN)凋亡及凋亡相关的Bax蛋白的表达水平。方法分离培养正常受试者的外周血PMN,分别加入实验组、阳性对照组和阴性对照组。用流式细胞术检测不同组PMN的凋亡发生率,通过Western blotting技术检测各组PMN Bax蛋白的表达水平。结果 MALP-2降低PMN自发性凋亡的发生率,与阳性对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);接受MALP-2刺激的PMN表达Bax蛋白低于阳性对照组与阴性对照组(P<0.05)。结论在TLR激动剂诱发的PMN生存效应中,MALP-2可能通过降低PMN胞内Bax蛋白的表达水平来延长PMN的生命期限。     

Relationship between ATP Content and the Developmental Potential of Human Oocytes

Metabolic activity and energy production are es-sential to oocyte cytoplasmic maturation,meiotic re-sumption,normal fertilization,embryo cleavage,hatching and implantation[1] .The ATP in ooplasmwas utilized for nucleic acid and protein synthesis.The ATPcontentofoocyteshasbeen suggested as anindicator for the developmental potentialof mouse[2 ] ,cow[3] and cat[4 ] oocytes.Additionally,the result ofVan Blerkom' sresearch[5] also showed a positive cor-relation between human oocytes competence …     

预防性应用钙拮抗剂对缺血大鼠心肌细胞和红细胞内钙变化的影响

利用大鼠缺血模型观察预防性应用钙桔抗剂尼莫地平对大鼠缺血心肌和红细胞内钙的影响发现，缺血时大鼠心肌细胞、心肌组织和红细胞内均有钙积聚，红细胞膜钙泵活性下降；缺血前30分钟给予尼莫地平可使红细胞内钙恢复至正常水平，红细胞膜钙泵活性升高；心肌细胞和心肌组织内钙虽较缺血鼠降低，但仍高于对照组。提示：（1）缺血时细胞的钙内流可能是全身性的；（2）预防性应用尼莫地平可阻滞或减轻细胞内钙超载，同时还可保护细胞膜膜泵活性。