联合应用厄贝沙坦和依达拉奉对大鼠小体积移植肝的保护作用

目的 探讨联合使用厄贝沙坦和依达拉奉在大鼠小体积供肝移植早期中对移植肝的保护作用及机制.方法 取体重相差20～30g的150对SD大鼠作为肝移植供、受者,其中小体重大鼠作为供者.按随机数字表法将大鼠分为移植对照组(A组)、依达拉奉实验组(B组)、厄贝沙坦实验组(C组)、厄贝沙坦联合依达拉奉实验组(D组)及假手术对照组(E组).采用大鼠30％部分肝移植模型,按二袖套法进行大鼠原位肝移植.术后观察各组受鼠的存活情况,监测门静脉压和肝功能变化,术后6和24 h,检测移植肝组织内SOD活性及MDA含量,采用逆转录实时聚合酶链反应检测移植肝组织Egr-1 mRNA、ET-1 mRNA及Bax mRNA的表达,采用原位末端转移酶标记法检测移植肝细胞的凋亡情况.结果 术后7d,A、B、C、D及E组累积存活率分别为8.33 (1/12),33.3％(4/12),58.7％ (7/12),83.3％ (10/12)和100％(12/12),各组间差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,各实验组门静脉压的变化,术后6和24 h的ALT和AST水平,MDA含量和SOD活性,Egr-1 mRNA、ET-1 mRNA及Bax mRNA的相对表达量,以及肝细胞凋亡指数等指标的检测结果均较优,尤以D组最为显著,各组间上述指标的两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 联合使用厄贝沙坦和依达拉奉可通过降低门静脉压和抗氧化作用(减轻移植肝缺血再灌注损伤)的双重保护作用减轻大鼠小体积肝移植术后早期移植肝的损伤,且联合用药效果好于单用其中一种药物.     

依达拉奉对深低温停循环肺的保护作用

目的 观察深低温停循环(DHCA)肺缺血期间经肺动脉灌注含依达拉奉保护液对术后肺组织及肺功能的影响,并探讨其可能的机制. 方法 24只健康新西兰大耳白兔随机分为3组,对照组:建立DHCA体外循环(CPB)模型;低钾右旋糖酐(LPD)组:在DHCA开始后经肺动脉灌注LPD保护液;依达拉奉组:在DHCA开始后经肺动脉灌注含依达拉奉(5 mg/kg)的LPD保护液.观察3组基础状态、恢复通气时、恢复通气1h、2h的肺氧合指数和肺顺应性变化,比较3组术后肺功能的变化,并检测肺静脉血中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量.3组兔均于术后处死,取肺组织行HE染色、免疫组化检测,观察肺组织结构、炎症反应情况,采用透射电子显微镜观察肺组织超微结构改变. 结果 3组肺氧合指数、肺顺应性、MDA和SOD在基础状态下差异均无统计学意义(P＞0.05),恢复通气后3组氧合指数和肺顺应性均有不同程度恶化,对照组和LPD组氧合指数和肺顺应性于恢复通气时、恢复通气1h、2h均明显低于依达拉奉组[恢复通气时氧合指数对照组与依达拉奉组比较:(198.25±11.02)mm Hg vs.(244.87±13.05) mm Hg;恢复通气1h肺顺应性对照组与依达拉奉组比较:(45.88±1.64) ml/cm H2O vs.(59.75±2.38) ml/cm H2O;P＜0.05].CPB结束后3组MDA浓度均有不同程度上升,对照组和LPD组血MDA浓度于CPB结束、CPB结束1h、2h均明显高于依达拉奉组(P＜0.05).CPB结束后3组SOD活性均有不同程度降低,对照组和LPD组血SOD活性于CPB结束、CPB结束1h、2h均明显低于依达拉奉组(P＜0.05).HE染色显示依达拉奉组肺组织结构清晰、红细胞渗出少、炎症细胞浸润较少、肺泡内液体聚集少;免疫组化检测显示依达拉奉组IL-6的光密度积分(IOD)值与LPD组(14.44±1.75 vs.20.18±2.22,P＜0.05)和对照组比较明显降低.电子显微镜观察依达拉奉组基膜结构完整,血气屏障结构清晰,Ⅱ型上皮细胞数量明显增多,胞质内线粒体及板层小体丰富,未见肿胀;而LPD组和对照组肺组织均有不同程度的破坏. 结论 采用肺动脉灌注低温肺组织保护液可明显减轻DHCA CPB中的肺组织损伤,在低温保护液中加入依达拉奉可进一步减轻肺组织损伤,保护肺氧合功能.     

依达拉奉对心肺复苏后大鼠肾损伤的保护作用及其机制

目的 探讨依达拉奉对心肺复苏后大鼠肾脏的保护作用及其机制.方法 将36只SD人鼠随机分为假手术组、复苏对照组和依达拉奉组,建立大鼠心跳骤停-心肺复苏模型,复苏后24 h检测血清尿素(SU)和肌酐(Scr),观察肾小管上皮细胞凋亡并检测肾组织hax和bcl-2的mRNA表达.结果 依达拉奉组SU[(11.52±2.67)比(17.70±3.36)mmol/L]、Scr[(72.36±6.78)比(92.58±10.47)μmol/L]、凋亡细胞数(7.32±0.97比8.91±1.41)和bax mRNA(4.59±0.73比8.43±0.72)均低于复苏对照组;bcl-2 mRNA(8.35±0.72比5.83±0.61)较复苏对照组增强.结论 依达拉奉可以保护心肺复苏后大鼠肾功能,其机制与调节bcl-2和bax基因表达从而减轻肾小管上皮细胞凋亡有关.     

依达拉奉对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的影响

目的探讨依达拉奉(edaravone)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的影响。方法36只成年SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及依达拉奉组,每组12只,经胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立SAP大鼠模型。依达拉奉组给予依达拉奉,正常对照组和模型组则给予等量生理盐水。术后6h处死大鼠,检测其血清和肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素(IL)-1、IL-6含量,并计算肺干/湿重比(D/W)。结果模型组血清及肺组织中MDA含量以及血清TNF-α、IL-1和IL-6水平均明显高于正常对照组及依达拉奉组(P0.05),依达拉奉组血清及肺组织中MDA含量以及血清TNF-α、IL-1和IL-6水平也明显高于正常对照组(P0.05);而模型组肺D/W、血清及肺组织中SOD活性则明显低于其他2组(P0.05)。结论依达拉奉能减轻大鼠SAP导致的肺损伤。     

依达拉奉对大鼠急性肺损伤的干预作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)和地塞米松(DXM)对脓毒症大鼠肺损伤的干预作用.方法 50只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、手术对照组(CLP组)、依达拉奉治疗组(EDA组)、地塞米松治疗组(DXM组)和依达拉奉联合地塞米松治疗组(E+D组).采用盲肠结扎穿刺法造脓毒血症大鼠肺损伤模型,药物治疗组造模后立即经阴茎背静脉注射EDA(5mg/kg),DXM(5mg/kg)或EDA(5mg/kg)+DXM(5mg/kg);另两组均以等量生理盐水代替.结果 与 sham组相比,CLP组大鼠病理评分,肺干湿重比(W/D),肺泡通透指数(LPI),肺组织中MPO,MDA,IL-6,TNF-α,肺组织中凋亡细胞数量明显增加,而肺组织中T-AOC活性明显减轻.应用地塞米松,依达拉奉药物干预后,上述指标均有不同程度的改善.两种药物联合应用与单个药物应用相比,这些指标有更明显的改善.结论 依达拉奉预处理对脓毒症诱导的肺损伤有明显的防治效果,减轻急性肺损伤的机制可能是通过减少氧自由基产物,减少炎性细胞因子浓度.依达拉奉和地塞米松联合应用对肺损伤有更好的治疗效果.     

附加门体分流术对小体积移植肝保护作用的实验研究

目的 研究附加门体分流术对小体积移植肝的保护效果.方法 建立巴马小型猪小体积肝移植模型,将15只小型猪平均分为3组:(1)A组,小体积肝移植组(对照组);(2)B组,远端脾肾分流术+小体积肝移植组;(3)C组,肠腔H形分流术+小体积肝移植组.手术后观察动物7 d存活率,动态监测肝功能生化指标、自由门静脉压、门静脉血流量(PBF)以及移植肝组织病理学改变.结果 动物7 d存活率分别为:A组1/5,B组3/5,C组5/5.A组动物移植肝复流后自由门静脉压立即升高,高峰达(28.6±2.07)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),复流1 h后单位肝组织PBF达(3.56±0.1 1)ml·min-1·g-1;移植肝组织病理学改变严重,包括肝细胞气球样变或肝细胞坏死、肝窦淤血、肝实质出血.B、c组中动物肝功能酶学指标有所改善.移植肝复流后自由门静脉压显著低于A组水平(P<0.05),PBF保持相对平稳.移植肝组织病理学病变明显减轻.结论 附加门体分流术可能可以避免小体积移植肝的损伤.     

小鼠原位脂肪肝移植模型的建立

目的　建立了ob/ob小鼠脂肪肝移植模型 ,探讨保证建模成功的关键因素。方法　采用小鼠非动脉化肝移植技术 ,5～ 7周肥胖小鼠为供体 ,正常小鼠为受体 ,双袖套法行原位肝移植。受体肝组织行HE染色和油红O染色 ,血清ALT、AST水平检测采用常规生化分析法。结果非脂肪肝移植组 (lean to lean)受体长期存活率 (n =10 )为 70 % ,脂肪肝移植组 (ob/obtoagematchedlean)受体存活率为 0 (n =10 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脂肪肝移植给体积相当的正常小鼠 ,其短期存活率为 3 0 % (n =10 ) ,所有小鼠术后存活并苏醒 ,但均未超过 2 4h。脂肪肝移植受体ALT水平为 (62 85± 2 93 7)U /L ,AST为 (5 812± 2 942 )U /L ;而正常小鼠移植组ALT与AST水平分别为 (5 96± 114 )U /L ,(1796± 870 )U/L ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,组织学检测显示大量胆管中央凝固性坏死伴出血。结论　该模型的成功建立为我们提供了一种新的肝原发性肝无功能移植模型 ,为脂肪肝移植后脂肪肝细胞受损的机制研究奠定了基础。     

激活腺苷2A受体对大鼠小体积移植肝核因子-κB活性和炎性反应的影响

目的 观察激活腺苷2A受体(A2AR)对大鼠小体积移植肝核因子(NF)-κB活性和炎性反应的影响.方法 建立35%～45%大鼠小体积肝移植模型,通过激活/拮抗A2AR,检测NF-κB活性,磷酸化IκpB(pIκB)、p65亚基蛋白表达及其下游炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性因子(MIP)-2、细胞间黏附分子(ICAM)-1表达水平,组织中髓过氧化物酶(MPO)活性变化.结果与对照组比较,激动组大鼠肝脏组织NF-κB活性及pIκB蛋白表达明显下调,再灌注后1、2、6 h MPO活性(U/g)(6.30±0.09比7.30±0.15、7.30±0.20比8.30±0.20、8.80±1.35比9.60±1.20)及炎性因子TNF-α(pg/mg)(700.0±57.1比967.0±145.0、800.0±57.2比1067.0±145.0、283.0±60.5比350.0±76.5)、MIP-2(pg/mg)(90.0±5.7比105.0±2.1、113.0±8.8比120.0±1.2、120.0±2.9比145.0±8.7)、ICAM-1(pg/mg)(393.0±23.3比500.0±28.9、450.0±28.9比767.0±44.1、380.0±23.1比460.0±28.8)的表达均显著下降(P均<0.05);而拮抗组NF-κB活性及pIκB蛋白显著升高,MPO活性及炎性因子TNF-α、MIP-2、ICAM-1的表达也显著升高(P均<0.05);激动、拮抗A2AR组p65差异均无统计学意义(P>0.05).结论 激活A2AR可明显下调大鼠肝组织NF-κB活性,减轻肝移植炎性损伤.     

针对OX40小于扰RNA供体转染抗大鼠肝移植排斥反应

目的 观察RNA干扰阻断OX40-OX40L共刺激通路对大鼠移植肝存活时间的影响.方法 制作DA大鼠到Lewis大鼠的原位肝脏移植模型,移植前取预先制备的5 ml含5×109pfu的pLVTHM-OX40-siRNA重组慢病毒,灌注感染移植供肝30 min,术后观察受者存活时间,移植肝脏进行组织病理学检查;采用ELISA法检测大鼠外周血IL-2,IFN-γ,的水平,并进行受者大鼠脾细胞对供者大鼠脾细胞的混合淋巴细胞反应(MLR).结果 转染组受者肝脏移植物的存活时间为(74.00±3.79)d,明显长于对照组和未转染组;转染组移植肝组织炎细胞侵润、间质水肿、肝组织坏死程度较对照组和未转染组减轻,实验组大鼠脾细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力降低(P<0.01);移植术后的第7天,转染组血清IL-2浓度为(46.0±8.4)ng/L,IFN-γ浓度为(202.7±14.6)ng/L,均显著低于对照组和未转染组(P<0.05).结论 转染靶向OX40的siRNA,在体内可通过阻断OX40-OX40L共刺激通路,抑制大鼠肝脏移植后的排斥反应,延长大鼠移植肝的存活时间.     

胰岛素门静脉灌注促进活体肝移植术后肝再生的临床研究

目的 探讨成人活体肝移植(LDLT)术后胰岛素门静脉灌注对移植肝再生的促进作用.方法 2005年7月至2007年9月间接受右肝LDLT并自愿接受术后门静脉胰岛素灌注、有完整临床资料并存活超过30 d的15例成人受者作为研究对象(胰岛素组),同期未接受门静脉胰岛素灌注治疗、有完整临床资料并存活超过30 d的连续15例成人受者作为对照组研究对象(对照组).胰岛素组受者LDLT术中从胃网膜右静脉插入一根18 G硅胶管至门静脉系统,另一端固定于腹壁,术后以2 U/h速度静脉微泵持续均匀门静脉灌注胰岛素7 d.对照组无门静脉插管及胰岛素灌注.LDLT术前1d、术后7 d及30 d检测肝功能与外周血胰岛素水平,术中、术后7 d及术后30 d测量移植肝体积(GV).以GV比例(术后移植肝体积/术中移植肝体积之百分比)和供肝受者体重比(GRWB)比例(术后GRWR/术中GRWR之百分比例)作为移植肝再生检测指标.结果 LDLT术后7d胰岛素组与对照组受者移植肝GV比例分别为(186.1±35.4)%和(160.6±22.1)%,胰岛素组移植肝再生率高于对照组(P<0.05);胰岛素组与对照组受者GRWR比例分别为(179.0±35.8)%和(156.6±18.5)%,胰岛素组移植肝再生率亦高于对照组(P<0.05).LDLT术后30 d胰岛素组与对照组受者移植肝再生率的差异无统计学意义(P>0.05).LDLT术后7 d胰岛素组患者血清总胆红素、丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平低于对照组.术后两组患者外周血胰岛素水平及外周胰岛素用量的差异均无统计学意义.结论 LDLT术后胰岛素门静脉灌注可能促进术后第1周移植肝再生.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂15-脱氧前列腺素J2对小移植肝再灌注损伤的保护作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARy)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对小移植肝大鼠再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 将108只SD大鼠随机分为3组:(1)15d-PGJ2预处理组;(2)15d-PGJ2+GW9662组;(3)生理盐水对照组(NS组).检测术后6、24、72 h血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测术后24 h肝组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;检测肝组织中髓性过氧化物酶(MPO)活性以反映中性粒细胞的浸润;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;观察术后24h光镜下肝组织病理学变化.结果 与NS组和15d-PGJ2+GW9662组比较,15d-PGJ2预处理组术后6、24、72 h血清ALT和AST水平明显降低(P＜O.01);术后24h SOD活性明显升高而MDA含量降低,差异有统计学意义(P＜0.01);肝组织中TNF-α含量及MPO活性亦明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);苏木素-伊红(HE)染色显示:NS组和15d-PGJ2+GW9662组术后24 h,表现为明显的肝细胞空泡变性,肝窦扩张,炎症细胞浸润;15d-PGJ2组较其他两组肝组织损伤轻微.结论 PPARγ激动剂15d-PGJ2对小移植肝术后再灌注损伤有明显的保护作用,其保护机制可能与提高机体抗氧化能力,抑制脂质过氧化及减轻炎症反应密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) agonist 15d-PGJ2 against reperfusion injury in small-for-size liver grafts and its probable mechanisms. Methods 108 adult male SD rats were randomly divided into three groups: ( 1 ) 15d-PGJ2 group; (2) 15d-PGJ2 + GW9662 group; (3) NS control group. Serum aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) levels at 6, 24 and 72 h after reperfusion and histopathological changes were analyzed, the contents of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in liver grafts after 24 h were determined, myeloperoxidase (MPO) activity was examined to assay neutrophil infiltration into the grafts at 24 h after reperfusion, and transforming growth factor (TGF)-α levels at 24 h after reperfusion were measured by using enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA method). Results As compared with NS control group and 15d-PGJ2 + GW9662 group, serum AST and ALT levels were significantly reduced at 6, 24 and 72 h after reperfusion in 15d-PGJ2 group (P ＜0. 01 ). Histopathological analysis revealed apparent bulb-like degeneration, hepatic sinusoid dilation, and inflammatory cell infiltration in periportal area at 24 h in NS group and 15d-PGJ2 + GW9662 group after transplantation, while in the 15d-PGJ2 group, minimal damage was observed at 24 h after transplantation under the light microscopy, the contents of MDA were lower and SOD levels were higher than in other groups ( P ＜0. 01 ). As compared with NS group and 15d-PGJ2 + GW9662 group, TNF-α levels and MPO activity at 24 h after transplantation were also significantly decreased in 15d-PGJ2 group (P ＜ 0. 01 ). Conclusion PPARγagonist 15d-PGJ2 could ameliorate reperfusion injury in small-for-size liver grafts significantly, which was mediated in part by increasing antioxidant ability, inhibiting lipid peroxidation, and down-regulating inflammatory reaetion.     

大鼠部分肝缺血再灌注损伤后切除对肝再生的影响

目的 观察大鼠部分肝缺血再灌注损伤后切除对残肝再生的影响.方法 将75只健康雄性SD大鼠随机分为5组:肝脏左叶和中叶(约占全肝70%)切除组(Control组)、肝脏左叶和中叶缺血10min再灌注30min后切除组(I10R30组)、类推得到I60R30组、I90R30组、I90R60组.术后6、12、24h等时间点,测定再生肝重量(RLW);自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;通过免疫组织化学法检测残肝增殖细胞核抗原(Ki-67)表达.结果 术后12h,I60R30、I90R30和I90R60组RLW值分别为(1.80±0.03)%、(1.82±0.10)%、(1.87±0.05)%;Ki-67值分别为(58.35±2.18)%、(59.73±3.06)%、(62.65±2.24)%,均明显高于对照组(P<0.05).缺血再灌注干预各组ALT和AST明显高于对照组(P<0.05).术后6h和12h,I60R30、I90R30和I90R60组TNF-α明显高于对照组(P<0.05).结论 大鼠即将被切除的肝脏先缺血再灌注后切除,对残肝再生具有促进作用;诱导产生的TNF-α表达量增多是促进肝再生的原因之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ischemia reperfusion injury before partial hepatectomy on liver regeneration in rats. Methods Seventy-five male healthy SD rats were randomly classified into 5 groups: group control, in which rats were only subjected to 70% hepatectomy; group I10R30, 70% liver hepatectomy after 10 min of ischemia and 30 min of reperfusion in the resected liver; By analogy, group I60R30, group I90R30 and group I90R60 were constructed. At 6th, 12th and 24th h after operation, RLW was determined; serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate transaminase (AST) activities were measured by using autoanalyzer; the levels of serum tumor necrosis factor (TNF)-α were determined by ELISA and the expression level of Ki-67 was detected by using immunohistochemical methods in the residual liver tissues. Results At 12th h after partial hepatectomy, the rate of RLW in group I60R30, group I90R30 and group I90R60 was (1.80±0.03)%, (1.82±0.10)%, (1.87±0.05)% respectively; the rate of Ki-67 was (58.35±2.18)%, (59.73±3.06)%, (62.65±2.24)% respectively, which was significantly higher than that in the group control (P<0.05). The levels of ALT and AST in rats with ischemia reperfusion injury were higher than in the group control (P<0.05). At 6th h and 12th h after operation, the expression levels of TNF-α in groups I60R30, I90R30 and I90R60 were significantly higher than those in the group control (P<0.05). Conclusion Ischemia reperfusion injury in the resected liver before partial hepatectomy could improve liver regeneration of the remnant liver in rats. The high expression of induced TNF-α may be one of the reasons.     

缺血预处理对大鼠减体积肝移植术后Akt生存信号通路的影响及其意义

目的 探讨缺血预处理(IPC)对大鼠减体积肝移植术后Akt生存信号通路的影响及意义.方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为2组:50%减体积肝移植组(Control组)和IPC组,Western blot检测肝组织总Akt和p-Akt及其下游的p-Bad和p-GSK3β蛋白水平,同时结合血清学和组织病理学分析Akt生存信号通路变化的意义.结果 与Control组比较,IPC组术后6、24 h丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著下降(6 h:1064.49±126.53比802.90±82.39;24 h:1401.13±172.73比943.80±116.25,P<0.01);Control组术后24 h,肝细胞明显空泡样变性伴局部坏死,小叶结构破坏,门脉周围水肿、充血,炎症细胞浸润明显,而IPC组损伤减轻;Western blot结果显示:与Control组比较,IPC组术后2、6、24 h肝组织中p-Akt、p-Bad、p-GSK3β蛋白水平上调.结论 IPC明显减轻减体积肝移植术后再灌注损伤,其机制可能与激活Akt生存信号通道密切相关.     

缺血预处理对大鼠小体积供肝的保护作用及机制

目的探讨缺血预处理（IPC）对大鼠小体积供肝的保护作用及其机制。方法120只SD大鼠随机分为3组（每组20对）：无热缺血组（NWI）、缺血再灌注组（WI）和缺血预处理组（IPC）。用双袖套法建立大鼠小体积肝移植模型。各组10只受体大鼠于术前1d、术后1、2、3、5d取血，用自动生化分析仪检测AST和ALT。NWI组于供肝灌注前及植入后0．5、1、2、3h，WI组于热缺血前及植入后0．5、1、2、3h，IPC组于IPC前、IPC后及植入后0．5、1、2、3h取肝组织，用硝酸还原法检测其NO浓度。结果IPC可降低大鼠小体积肝移植术后血清AST和ALT浓度，提高再灌注早期肝脏组织NO的浓度，降低再灌注晚期肝脏组织NO的浓度（P〈0．05）。结论NO在大鼠肝脏的缺血再灌注损伤中可能具有双重作用。IPC对大鼠小体积供肝的缺血再灌注损伤有保护作用。其机制可能是通过促进供肝再灌注后早期NO合成，改善肝脏微循环，同时抑制供肝再灌注后晚期NO合成，减轻过量NO的损伤作用，从而保护移植肝脏功能。     

一氧化氮对大鼠肝缺血-再灌注损伤中肝细胞凋亡的影响

目的探讨一氧化氮对肝缺血-再灌注损伤及肝细胞凋亡的影响。方法在一氧化氮合酶（NOS）增强剂和抑制剂条件下,观察大鼠肝缺血-再灌注后1、3、6、24h肝的血清门冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）变化,同时进行肝细胞胞浆诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及肝细胞凋亡的免疫组织化学分析。结果在再灌注6h点AST、ALT、肝细胞凋亡水平上,L-精氨酸（L-arg）组值分别为（341.88±111.24）IU/L、（311.75±139.41）IU/L和2.80±1.79,显著低于L-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）组（2080.88±241.98）IU/L、（1153.00±110.92）IU/L和5.50±0.71（P值均＜0.05）。而L-arg组的肝细胞内iNOS表达灰度值152.07±3.46显著高于L-NAME组灰度值180.45±4.46（P＜0.05）。结论一氧化氮可减少肝缺血-再灌注损伤后肝酶的释放,抑制肝细胞的凋亡,改善肝缺血-再灌注损伤。     

去铁胺对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(deferoxamine,D组),注射用水对照组(control group,C组)和假手术模型(shsm operation,S组)各32只.分别于术后0.5 h、2 h、6 h、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平和肝组织SOD活性与MDA含量;做病理组织学检查,免疫组化检测HIF-1α、TNF-α及IL-1蛋白的表达.结果 在30 min、2 h、6 h及24 h各个时间点,D组大鼠血清ALT及AST水平、肝组织MDA含量及IL-1、TNF-α蛋白表达量明显低于C组,再灌注后2 h、6 h、24 h,D组大鼠肝组织SOD含量(411±70;384±53;379±46)和各时间点HIF-1α蛋白表达量(0.0413±0.0040;0.0684±0.0032;0.0583±0.0032;0.0491±0.0026)明显高于C组[SOD(341±21;323±25;303±25)和HIF-1α(0.0254±0.0024;0.0312±0.0022;0.0381±0.0022;0.0257±0.0015)](F>59.881;P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与促进HIF-1α表达上调,减轻氧化损伤和降低炎性因子水平有关.     

RNA干扰Caspase-3基因抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰(RNAi)Caspase-3基因对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用.方法 构建针对大鼠Caspase-3基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)或Caspase-3 shRNA,实验随机分为3组,假手术组、PBS组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6,12,24 h,3,5,7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3 mRNA的表达,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组比较,shRNA组再灌注6,12,24 h血清ALT和AST水平显著降低(P<0.05),shRNA组大鼠肝组织的Caspase-3 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(25.21%±3.18%vs 35.24%±2.33%,P<0.05)和肝组织中MDA含量[(96.3±12.8)nmol/mg vs(133.5±12.4)nmol/mg,(P<0.05)]显著降低,SOD活性显著升高[(22.5±3.4)U/mg vs(12.2±3.1)U/mg,(P<0.05)].结论 RNA干扰Caspase-3基因可以抑制细胞凋亡的发生,保护肝脏缺血再灌注损伤.     

抑制Caspase-8基因表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用

目的 观察抑制半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8(Caspase-8)基因的表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用.方法 构建针对大鼠Caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.将Lewis大鼠随机分为3组,每组8只.(1)假手术组:麻醉后,取腹部正中切口,缝合关腹;(2)磷酸盐缓冲液(PBS液)组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射PBS液1 ml,然后行肝脏缺血再灌注;(3)shRNA组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射Caspase-8 shRNA 50 μg(总体积为1 ml),然后行肝脏缺血再灌注.肝脏缺血再灌注的方法为阻断大鼠70%入肝血流40min.于再灌注6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d时检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;检测肝组织中Caspase-8 mRNA的表达、细胞凋亡情况、丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS液组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h,血清中ALT和AST水平显著降低(P<0.05);肝组织中Caspase-8 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(shRNA组和PBS液组分别为22.33%±4.28%和35.24%±2.33%)以及肝组织中MDA含量[shRNA组和PBS液组分别为(94.5±11.2)nmol/mg和(133.5±12.4)nmol/mg]均显著降低(P<0.05),而肝组织中SOD活性显著升高[shRNA组和PBS液组分别为(21.6±3.7)U/mg和(12.2±3.1)U/mg,P<0.05].结论 通过RNA干扰Caspase-8基因的表达可以抑制肝细胞凋亡的发生,减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

蛋白酶抑制剂对大鼠肝缺血再灌注和原位肝移植后肝功能的保护作用

目的 探讨中性粒细胞及蛋白酶抑制剂在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法 建立大鼠热缺血再灌注及原位肝移植模型。检测血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、肝脏髓过氧化物酶（ＭＰＯ）含量,观察肝脏病理组织学改变,定量计数浸润的中性粒细胞等,热缺血组于缺血前用药,缺血４５ｍｉｎ后再灌注４ｈ取样,移植组于受体术前１ｈ用药,移植４ｈ后取样。结果 对照组ＡＬＴ,ＬＤＨ,ＭＰＯ均较实验组显著升高（Ｐ〈０．０１）。组织学观察肝组织损害较重,中性粒细胞浸润明显,与实验组相比有显著差异（Ｐ〈０．０１）。结论 肝脏冷、热缺血再灌注损伤时中性粒细胞参与并起了重要的作用。而应用蛋白酶掏剂抑肽酶（ＡＰ）可以减轻缺血再灌注损伤的程度。并对肝脏功能有保护作用。