bcl—2蛋白对T淋巴细胞白血病细胞株CEM程序性死亡的调控作用

为探讨ｂｃｌ－２蛋白对足叶乙甙触发Ｔ淋巴细胞白血病细胞株ＣＥＭ程序性死亡的调控作用，采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ法，将ｂｃｌ－２基因逆转录病毒载体转入人Ｔ淋巴细胞白血病细胞株ＣＥＭ中，并使其稳定、高效地表达。结果，经足叶乙甙处理后，高表达ｂｃｌ－２蛋白的ＣＥＭ产生梯状ＤＮＡ的量低于对照（Ｐ〈０．０５）。这表明高水平ｂｃｌ－２蛋白对白血病细胞程序性死亡过程可能具有较强的抑制效应。     

抗凋亡基因bcl—2在急性白血病骨髓与细胞株中的转录水平表达

采用原位杂交方法检测了急性白血病骨髓活检标本及细胞株中ｂｃｌ－２基因表达水平。结果２２例白血病患骨髓中２１例存在ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ高表达；６种白血病细胞株中５种ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ阳性（Ｍｏｌｔ－４例外），它们分别为ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２。表明造血系统肿瘤中广泛存在ｂｃｌ－２基因转录水平激活，其基因产物可能通过抑制细胞凋亡过程而影响急性白血病细胞的生物学特性。     

抗凋亡基因bcl－2在急性白血病骨髓与细胞株中的转录水平表达

采用原位杂交方法检测了急性白血病骨髓活检标本及细胞株中ｂｃｌ－２基因表达水平。结果２２例白血病患者骨髓中２１例（包括髓系和淋巴系）存在ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ高表达；６种白血病细胞株中５种ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ阳性（Ｍｏｌｔ－４例外），它们分别为ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２。表明造血系统肿瘤中广泛存在ｂｃｌ－２基因转录水平激活，其基因产物可能通过抑制细胞凋亡过程而影响急性白血病细胞的生物学特性。     

逆转录病毒介导的反义bcl-2序列促进足叶乙甙诱导的白血病细胞凋亡

目的：探讨逆转录病毒介导的反义ｂｃｌ２序列对细胞凋亡的诱导作用。方法：ＰＡ３１７细胞包装逆转录病毒，病毒转导Ｊｕｒｋａｔ细胞后用ＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ及蛋白表达水平；用流式细胞仪计数及ＤＮＡ电泳检测细胞凋亡。结果：转染反义ｂｃｌ２序列可使内源性ＢＣＬ２蛋白表达下降，提高白血病细胞株对足叶乙甙（Ｖｐ１６）的敏感性，促进细胞凋亡。结论：反义ｂｃｌ２序列能促进Ｖｐ１６诱导的白血病细胞凋亡，为ｂｃｌ２反义技术治疗白血病的临床应用提供了实验依据。     

急性白血病中 bcl-2 表达与分化抗原和化疗反应的关系

急性白血病中ｂｃｌ－２表达与分化抗原和化疗反应的关系冯文莉黄宗干潘健ｂｃｌ－２蛋白是由ｂｃｌ－２原癌基因编码的一种位于线粒体膜上的分子量为２．６万的蛋白，它的过度表达与细胞程序性死亡（ＰＣＤ）的调节和细胞对各种细胞毒性药物的敏感性有关［１］。对化疗药...     

小儿急性淋巴细胞白血病bcl-2蛋白表达与化疗敏感性的关系

采用免疫组化方法。检测了３８例小儿急性淋巴细胞白血病在诱导化疗前的ｂｃｌ－２蛋白表达水平，结合诱导化疗四疗程后的治疗反应分析。结果表明：化疗未缓解病例ｂｃｌ－２蛋白表达水平明显高于化疗缓解病例，提示ｂｃｌ－２蛋白表达水平与小儿急性淋巴细胞白血病对诱导化疗的敏感性关系密切，鉴于ｂｃｌ－２蛋白可阻止白血病细胞凋亡，促进其增殖，增加白血病的恶性程度，从而影响化疗效果。作者认为将ｂｃｌ－２蛋白表达水平作为体内判断小儿急性淋巴细胞白血病化疗敏感性的指标，有利于临床合理选用恰当的化疗方案。     

抗bcl－2核酶在HL－60细胞中的表达及促进其凋亡的研究

为消除白血病细胞中ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡的抑制作用，开辟白血病基因治疗的途径。将合成的针对ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的“锤头型”核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＲＺ）基因定向克隆于真核表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ，构成ｐＤＯＲ－ＲＺ重组体。通过脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法，把ｐＤＯＲ－ＲＺ导入ＨＬ－６０细胞。用Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ印迹，ＲＮＡ斑点杂交法观察ＲＺ基因在ＨＬ－６０细胞内表达，并通过电镜、流式细胞仪（ＦＣＭ），光镜和ＤＮＡ电泳观察ＲＺ对ＨＬ－６０细胞的影响。结果：①ＲＺ在转染ＨＬ－６０后７２小时得以表达，细胞内ｂｃｌ－２蛋白合成受到抑制。②在ＦＣＭ图谱上可见到明显的凋亡峰，形态观察ＲＺ处理的ＨＬ－６０细胞呈典型的凋亡形态。③足叶乙甙（促凋亡）敏感性试验表明，与未转染的细胞和转染空载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的细胞相比，转染ｐＤＯＲ－ＲＺ的细胞ＤＮＡ电泳易出现梯状条带。结果说明ＲＺ基因通过逆转录病毒表达载体导入ＨＬ－６０细胞后可成功地表达并抑制ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２蛋白的合成，并促进ＨＬ－６０细胞凋亡     

bcl—2基因表达在慢性粒细胞白血病急变中的意义

目的探讨ｂｃｌ２基因表达在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）急变中的生物学意义。方法采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶免疫复合物方法和地高辛标记探针原位杂交技术检测各期ＣＭＬ患者６０例新鲜骨髓标本中ＢＣＬ２蛋白和ｂｃｌ２ｍＲＮＡ的表达,并对其中１９例标本进行流式细胞术分析骨髓细胞凋亡率及细胞周期。结果初诊和治疗后ＣＭＬ中ｂｃｌ２基因表达相近,但明显低于急变时。ｂｃｌ２ｍＲＮＡ表达与蛋白表达基本一致。ｂｃｌ２基因高表达与ＣＭＬ患者外周血血红蛋白、血小板、幼稚细胞及骨髓不成熟细胞比例相关。加速／急变期ＣＭＬ细胞凋亡率明显低于慢性期,但细胞周期无明显变化。结论ＣＭＬ急变时ｂｃｌ２基因表达增高,骨髓细胞凋亡率降低,这些现象部分地阐明了ＣＭＬ急变预后不良的机制,也为ＣＭＬ急变的早期诊断和治疗提供了实验依据。     

bcl—XL在急性髓系白血病细胞的表达及化疗敏感性的关系

目的：探讨急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞凋亡径路的特征及调控模式。方法：运用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）、ＤＮＡ电泳、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｏｌｔ分析技术，观察了化疗药物足叶乙甙（Ｖｐ１６）作用于原代ＡＭＬ细胞前后，ｂｃｌ－Ｘ１表达与凋亡的敏感性、临床特征、预后的关系。结果：绝大部分ＡＭＬ高表达ｂｃｌ－Ｘ１ｍＲＮＡ病例经Ｖｐ１６处理后，其ｂｃｌ－Ｘ１虽然下调，但仍维持较高水平，并对凋亡诱导不敏感，与高白细胞     

bcl-X_L在急性髓系白血病细胞的表达及与化疗敏感性的关系

目的：探讨急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞凋亡径路的特征及调控模式。方法：运用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）、ＤＮＡ电泳、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析技术，观察了化疗药物足叶乙甙（Ｖｐ１６）作用于原代ＡＭＬ细胞前后，ｂｃｌ－ＸＬ表达与凋亡的敏感性、临床特征、预后的关系。结果：绝大部分ＡＭＬ高表达ｂｃｌ－ＸＬｍＲＮＡ病例经Ｖｐ１６处理后，其ｂｃｌ－ＸＬ虽然下调，但仍维持较高水平，并对凋亡诱导不敏感，与高白细胞数、髓外浸润等不良预后特征相关，化疗后不易缓解，处于长期缓解中的病例经Ｖｐ１６处理后，ｂｃｌ－ＸＬ亦表达下调，但凋亡率远低于ＡＭＬ细胞。结论：ｂｃｌ－ＸＬ高表达与ＡＭＬ的发生、维持和化疗耐药性相关，ｂｃｌ－ＸＬ高表达下调是凋亡启动的基础，但本身不足以引致凋亡。     

基因bcl-2对神经元生物活性的保护作用

目的研究基因bcl-2对神经元的生物活性作用,为神经系统疾病的保护治疗提供有效的途径。方法构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞,WesternBlot检测外源基因表达;10,50和100μmol/L顺铂处理转染重组质粒的实验A组细胞,同样条件处理转染空质粒的对照B组细胞,72h后比较两者存活的细胞数;流式细胞仪检测分析两者的细胞周期指数。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3-bcl-2,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达Bcl-2的细胞克隆;10,50和100μmol/L顺铂处理后,实验A组存活的细胞数分别为276±13,185±11和108±10,而对照B组中存活的细胞数分别为100±9,12±3和2±2,两者相比差异有显著性意义;流式细胞仪检测显示,实验A组S期细胞所占百分比为8.81%比对照B组25.79%明显减少(χ2=22.53,P<0.01)。结论bcl-2能够拮抗顺铂对神经元的损害作用,促进神经细胞存活,其神经保护作用机制可能通过调控细胞周期来完成。     

bcl-2基因转染阻断Fas介导的Jurkat细胞凋亡

目的：通过ｂｃｌ２阻断Ｆａｓ介导的细胞凋亡了解ｂｃｌ２基因在淋巴瘤癌变过程中逃避机体免疫监控的作用机制。方法：应用基因重组技术重组ｐＬＸＳＮｂｃｌ２，采用电穿孔法将其与空载体分别转染包装细胞系ＰＡ３１７，将阳性克隆病毒上清感染人Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ，用Ｇ４１８筛选，其阳性克隆进行免疫组化检测，应用抗Ｆａｓ抗体诱导细胞凋亡来模拟细胞毒Ｔ细胞的杀伤机制，观察ｂｃｌ２在淋巴瘤逃避免疫机制中的作用。结果：转染人ｂｃｌ２基因的Ｊｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔｂｃｌ２）细胞较对照Ｊｕｒｋａｔ及转染空载体Ｊｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔｎｅｏ）细胞，ｂｃｌ２表达量明显增加，而Ｆａｓ基因表达量无明显变化。其Ｊｕｒｋａｔｂｃｌ２能明显耐受抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡。结论：人ｂｃｌ２基因在淋巴瘤中过量表达，能部分阻断抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡，ｂｃｌ２基因过量表达可能是淋巴瘤癌变过程中逃脱机体免疫监控的机制之一。     

MK基因特异性siRNA对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术抑制Midkine对人乳腺癌癌细胞株MCF-7细胞凋亡的影响。方法人工合成抑制Midkine基因的siRNA片段,通过脂质体转染到MCF-7细胞内,应用RT-PCR检测bcl-2mRNA表达,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化,通过测定光密度值检测Caspase-3活性。结果转染siRNA后的MCF-7细胞,bcl-2mRNA表达显著下降、细胞线粒体膜电位明显下降和Caspase-3酶活性升高。结论MK-siRNA通过下调hcl-2基因,而改变细胞线粒体膜电位使Caspase-3酶活性升高诱导细胞的凋亡。     

Bcl-2 siRNA对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的影响

本研究探讨bcl-2 siRNA对淋巴瘤细胞系CA46凋亡及bcl-2基因表达的影响。设计并合成1条siRNA,用阳离子脂质体法转染CA46细胞。转染后48小时收集CAd6细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡及凋亡过程中线粒体跨膜电位改变,用RT—PCR方法和流式细胞仪分别检测CA46细胞bcl-2 mRNA和BCL-2蛋白的表达。结果表明：bcl-2 siRNA转染CAd6细胞48小时后,CA46细胞出现凋亡且线粒体跨膜电位发生变化;bcl-2 mRNA和BCL-2蛋白表达均显著降低。结论：bcl-2 siRNA可特异性抑制淋巴瘤细胞CA46 bcl-2基因的表达,改变CA46细胞线粒体跨膜电位诱导其凋亡。     

bcl-2、bax在NHE-1核酶基因转染所致缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的　探讨 bcl 2、bax表达在 Na / H 交换器 1(NHE 1)抑制而诱导缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)凋亡中的作用。方法　将转染 NHE 1特异性核酶基因大鼠的 PASMCs置于缺氧条件下(O2 的体积分数 <1% )培养 ,分别在缺氧 0、2、6、12、2 4和 4 8h采用原位细胞凋亡检测法观察细胞凋亡情况 ,荧光指示剂 Fura 2 / AM测定法检测细胞内 Ca2 浓度 (〔 Ca2 〕i)变化 ,半定量逆转录聚合酶链反应方法检测细胞内 bcl 2 m RNA和 bax m RNA表达变化 ,免疫组化法检测细胞内 Bcl 2蛋白和 Bax蛋白表达的变化。结果　转染 NHE 1特异性核酶基因大鼠的 PASMCs在缺氧培养时 ,其细胞凋亡率随缺氧时间的延长而逐渐升高 ,但是〔 Ca2 〕i升高的幅度较小 ,从缺氧 6 h起就显著低于同时间点的对照组和转染逆转录病毒真核表达载体空载体组 (P均 <0 .0 1) ,bcl 2 m RNA及蛋白表达显著降低 ,bax m RNA和蛋白表达显著增加(P均 <0 .0 1)。结论　 NHE 1抑制可能通过阻止 PASMCs的〔 Ca2 〕i增加 ,并引起 bcl 2表达降低及 bax表达增加而诱导和促进缺氧培养的 PASMCs凋亡     

稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株增殖影响

目的探讨稳定转染靶向bcl-2的小发夹RNA（shRNA）对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建针对bcl-2的shRNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选稳定转染的细胞克隆继续压力培养。RT-PCR方法检测稳定转染后SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果稳定转染shRNA后,SGC-7901细胞的bcl-2 mRNA表达明显下降;细胞增殖能力及凋亡率无明显变化。结论稳定转染shRNA能长效抑制SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达,为后续基因治疗研究提供了实验依据。     

bcl-2小干扰RNA对HL-60/VCR细胞耐药性逆转的研究

为了探讨以bcl-2基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性,构建bcl-2基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,在G418筛选后应用Western blot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化;Western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bax和耐药相关蛋白ZNRD1的表达变化.结果表明：成功构建了bcl-2的小干扰RNA载体并转染HL-60/VCR;经蛋白质水平检测证实成功建立了bcl-2低表达的白血病细胞模型;转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强,且低表达耐药相关蛋白ZNRD1.结论：bcl-2小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性.     

nm23-H1基因转染对人舌癌Tca8113细胞株生物学行为的影响

目的研究nm23-H1基因转染对人舌癌Tca8113细胞株生物学行为的影响。方法采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1转染Tca8113细胞,分为Tca8113-Ad-nm23-H1组(转染pAdEasy-nm23-H1)、Tca8113-Ad组(转染空载体pAdEasy)和Tca8113组(未转染)。采用RT-PCR检测nm23-H1基因在细胞中的表达,噻唑蓝比色法检测转染前、后细胞体外增殖能力的变化,流式细胞术分析转染前、后细胞周期及凋亡的改变,采用Transwell小室和冲刷实验观察细胞侵袭、黏附、趋化运动能力的变化,克隆形成实验观察转染前、后细胞克隆形成能力。结果与Tca8113-Ad组和Tca8113组比较,Tca8113-Ad-nm23-H1组细胞体外增殖能力、细胞侵袭、黏附、趋化运动能力、克隆形成率及细胞S期比例下降(P<0.05);细胞G2/M期比例及凋亡率明显增高(P<0.05)。结论 nm23-H1基因转染后对人舌癌Tca8113细胞的增殖能力、侵袭转移能力均有明显抑制作用;nm23-H1基因可明显抑制人舌癌Tca8113细胞G2期向M期过渡,同时促进癌细胞凋亡。     

SCL基因反义寡核苷酸对K562和CEM细胞系的作用

干细胞白血病(SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因。为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用，本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS—PS—ODN)分别与K562和CEM白血病细胞系作用，观察细胞生长、分化、凋亡和SCL　mRNA变化。结果显示：(1)AS—PS—ODN对K562和CEM细胞的生长有不同程度的抑制作用，并呈量效和时效关系；(2)AS—PS—ODN作用后K562细胞联苯胺染色阳性率明显增加；(3)AS—PS—ODN作用后K562细胞发生凋亡现象，但未观察到CEM细胞凋亡；(4)AS—PS—ODN作用后K562细胞和CEM细胞SCL　mRNA表达水平减低，同时CEM细胞SIL－SCL　mRNA表达水平也减低。结论：AS—PS—ODN能特异性抑制K562和CEM细胞的增殖，减低SCL　mRNA和SIL—SCL　mRNA表达水平，同时促进红系分化，诱导K562细胞过早凋亡。