针刺任脉、督脉及膀胱经促进新生儿缺血缺氧性脑病鼠模型脑内神经干细胞增殖

目的检测针刺任脉、督脉及膀胱经对新生儿缺血缺氧性脑病（HIE）鼠模型脑内神经干细胞的影响，分析针刺诱导神经干细胞增殖的机制。方法新生7dSD大鼠结扎左侧颈总动脉并缺氧2h制作HIE鼠模型。动物分为针刺组和对照组。针刺组每天针刺任脉、督脉及膀胱经一次。对照组不作处理。各组动物每天两次腹腔注射BrdU用于标记脑内神经干细胞增殖情况，分别于模型建立后3d、7d、14d和28d取脑组织行抗BrdU的免疫组化染色。分别观察各组动物海马及皮层BrdU阳性细胞数目、形态以及分布情况：并比较他们之间的差异。结果抗BrdU的免疫组化染色显示针刺治疗第3天及第7天时针刺组动物皮层及海马的BrdU阳性细胞数目和对照组相比。差别无统计学意义；针刺治疗第14天及第28天时针刺组动物皮层及海马的BrdU阳性细胞数目明显比对照组多．差别有统计学意义。结论针刺任脉、督脉及膀胱经能促进HIE模型鼠皮层及海马神经干细胞的增殖潜能。     

缺血缺氧可促进新生鼠神经干细胞的增殖

目的观察缺血缺氧对新生鼠皮层及海马神经干细胞的影响。方法制作新生鼠缺血缺氧性脑病(hypoxla-ischemic encephalopathy,HIE)模型,实验动物每天两次腹腔注射Brdu,每次剂量50mg/kg,用于标记各组动物的神经干细胞增殖情况。分别于 模型建立后3d、7d、14d和28d取脑组织行抗Brdu的免疫组化染色,分别观察HIE模型组和对照组动物之间海马及皮层Brdu阳性细 胞数目及细胞形态、分布情况;并比较他们之间的差异。结果正常新生SD(Sprague-Dsawley)大鼠脑内Brdu阳性细胞弥散分布于 各脑区,在海马的齿状回、脑室下区等部位有干细胞密集分布。缺血缺氧后新生动物脑内细胞坏死明显的区域见Brdu阳性细胞呈灶 状增生。各个阶段缺血缺氧组动物皮层及海马的Brdu阳性细胞数目均比假手术组明显增多,差别有统计学意义。假手术组动物皮 层及海马的Brdu阳性细胞数目和正常组差别无统计学意义。结论缺血缺氧可促进新生SD大鼠皮层及海马的神经干细胞增殖。     

锂剂抑制新生鼠缺氧缺血后的细胞凋亡及炎症反应研究

目的探讨锂对新生鼠缺氧缺血后的神经保护作用及相关机制。方法 40只9日龄Wistar雄性大鼠建立缺氧缺血动物模型,术后给予相同剂量的氯化锂或生理盐水干预,缺氧缺血后3d灌注取脑,MAP-2免疫组化染色评估脑损伤体积,Caspase-3检测细胞凋亡,Iba-1,Galectin-3检测神经炎症反应。结果缺氧缺血后3d,锂盐治疗组脑组织脑损伤体积较对照组明显减少(P<0.01);生理盐水组动物大脑皮质Caspases-3阳性细胞数目为(32.5±5.37)个,而锂盐治疗组则为(17.3±4.46)个(P<0.01),锂盐治疗后海马DG区Caspase-3阳性细胞数目仅为对照组的约1/4(P<0.001);Iba1染色,生理盐水组动物皮层及海马DG区Iba1阳性细胞数目分别为112.6±10.72和342.5±9.67,均显著高于锂盐治疗组(皮层72.4±7.33,海马DG区224.6±9.34)(P<0.01,P<0.01);Galectin-3染色,锂盐治疗后,实验动物大脑皮质及海马DG区Galectin-3阳性细胞数目均明显少于生理盐水组(P<0.05,P<0.01)。结论锂对新生鼠缺氧缺血具有显著的神经保护作用,其机制可能为减少细胞凋亡或抑制缺氧缺血后的神经炎症。     

当归对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞增殖、分化的影响

背景：实验小组前期研究发现孕鼠宫内缺氧可刺激胎鼠神经干细胞的增殖,缺氧6 h时增殖达高峰,在9 h也表现增殖,但能力开始下降。而缺氧达12 h时即表现为坏死或凋亡,但随缺氧天数的延长及时段的不同,对神经干细胞的影响又如何？ 目的：进一步探讨宫内缺氧对新生大鼠神经干细胞增殖、分化的影响及当归注射液的保护作用。 方法：孕 SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组。孕14 d开始将当归组与缺氧组孕鼠置于三气培养箱中,制作缺氧性脑损伤新生鼠模型,此前1 h分别给于当归注射液和生理盐水尾静脉注射,对照组不缺氧,余同缺氧组。孕鼠分娩后立即取新生鼠大脑组织,经胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色后行图像分析。 结果与结论：①缺氧组新生鼠海马胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学阳性细胞的表达较相应对照组增加;而神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学阳性细胞的表达较对照组减小。②当归治疗组新生鼠海马胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学阳性细胞的表达较相应缺氧组减少;而神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学阳性细胞的表达较对照组增大。结果表明,一定程度的缺氧可刺激神经干细胞增殖,并可刺激神经干细胞向神经胶质细胞分化,以及导致神经元的减少;当归注射液可减弱由于缺氧导致的神经干细胞的增殖和向胶质细胞分化的能力,并可缓解神经元的减少,提示当归可能对缺氧大鼠神经系统有一定的保护作用。     

针刺任脉和督脉对脑缺血大鼠海马星形胶质细胞的影响

目的 研究针刺任脉和督脉经穴对局灶性脑缺血大鼠缺血海马星形胶质细胞的调节作用。方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。通过免疫荧光双标方法研究各组GFAP阳性细胞和GFAP/NSE双标细胞的表达。结果 针刺督脉治疗可以下调脑缺血后海马齿状回的GFAP阳性细胞数,同时使GFAP/NSE双标细胞增多;针刺任脉和督脉治疗的GFAP阳性细胞增长幅度小于针刺督脉组,而GFAP/NSE双标细胞的增长幅度则大于针刺督脉组。结论 针刺任脉和督脉可抑制脑缺血后海马星形胶质细胞的过度增殖并可促进细胞分化     

脑缺血再灌流诱导内源性神经干细胞的增殖、分化

目的 观察脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的分布、增殖和分化.方法 阻塞大鼠大脑中动脉2h不同时间的再灌流制成局灶性脑缺血模型,免疫组化单标、双标观察神经干细胞的增殖、分布、分化.结果 正常组和假手术组,多数脑室室管膜细胞Brdu免疫反应阳性,脑实质内有零星散在Brdu阳性细胞.再灌流1d,室管膜及室管膜下层的Brdu阳性细胞显著增多;再灌流3～10d,视前区梗死区周边区、缺血纹状体和额顶皮质的Brdu阳性细胞显著增加.再灌流3d,Brdu阳性细胞出现于海马齿状回的颗粒下层,并随再灌流时间延长,阳性细胞数量增多.免疫组化双标显示再灌流3d视前区有很少量的Brdu/GFAP双阳性细胞,随后增多.再灌流10d内,未检查到Brdu/NF双标阳性细胞.结论 成年哺乳动物的室管膜、脑实质有少量神经干细胞,脑缺血后室管膜、齿状回颗粒下层出现大量的神经干细胞增殖,这些增殖神经干细胞向缺血区迁移、分化,试图补偿丢失的细胞,重塑受损的神经组织.     

帕金森病大鼠海马区增殖神经干细胞分化情况的研究

目的探讨帕金森病(PD)大鼠海马区增殖神经干细胞(NSCs)的分化情况。方法将6羟基多巴(6OHDA)注入大鼠纹状体内制作PD动物模型。连续注射5嗅脱氧尿核苷(Brdu)14d后处死。分别用Brdu和神经核抗原(Neun)以及Brdu和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫双标组织化学方法检测增殖的NSCs向神经元和神经胶质细胞的分化情况。结果PD模型成功后7d,在海马区Brdu/GFAP、Brdu/Neun阳性细胞开始出现,14d后双标的阳性细胞数逐渐增加,28d后达高峰。在这些双标的细胞中,Brdu/GFAP阳性的细胞数较多,而Brdu/Neun阳性的细胞数较少。结论6OHDA纹状体内注射制作的PD大鼠模型海马区增殖的NSCs大部分分化为神经胶质细胞,少部分分化为神经元。     

人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布★

目的：新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因，至今缺乏有效疗法。将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠，观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化。 方法：实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成。①对象：神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织，孕妇签署知情同意书，符合医院伦理委员会规定。清洁级SD新生鼠80只，随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组，40只/组，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取人胚胎脑组织，机械分散法分离单个核细胞，接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中，获取生长旺盛的人神经干细胞球，制成单细胞悬液，浓度约为5.0×1011 L-1，培养6 d后行PKH标记用于植入后示踪。两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型，造模后3 d，细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5 μL人神经干细胞悬液，模型对照组于相同部位注入等量生理盐水。③实验评估：取未经PKH标记的细胞球， 通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况。分别于细胞移植后1，2，4周及3个月，常规取脑组织，行免疫组织化学和荧光分析，观察植入后细胞存活及分布情况。 结果：在造模及细胞移植过程中，因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只，模型对照组死亡7只，存活率85%~90%。①神经干细胞的鉴定及分化：80％活细胞巢蛋白呈阳性表达，并可分化为神经元、星形胶质细胞。②神经干细胞植入后存活及分布情况：植入后1周，神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处，纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布。植入后2周，海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞，胞体伸出的神经微丝更长，细胞数量与1周时基本相似。植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少。 结论：在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球，具有良好的增殖能力，可分化为神经元，移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移，分布范围广。     

人胚额叶皮层和海马干细胞的自主分化研究

目的 研究人胚胎额叶皮层和海马组织神经干细胞的自主分化特性。观察额叶皮层神经干细胞和海马神经干细胞特性的异同。方法 从人胚胎额叶皮层和海马组织分别分离提出神经干细胞，经无血清体外培养、扩增，形成神经球。神经球贴壁进行不加诱导剂的自主分化。采用细胞生长曲线检测神经干细胞的增殖能力。使用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记分裂增生的细胞，观察细胞的分裂增殖情况。免疫细胞化学法鉴定神经干细胞的自主分化能力，比较额叶皮层和海马神经干细胞的分化特点。结果 从人胚胎额叶皮层和海马分离的神经干细胞具有增殖能力，额叶皮层神经干细胞的细胞倍增时间为3．9d，海马神经干细胞的细胞倍增时间为3．2d。细胞贴壁分化后出现Nestin、GFAP、Tuj-1表达阳性的细胞。皮层和海马神经干细胞分化产生的Tuj-1阳性细胞分别是40．7％和19．3％；皮层和海马神经干细胞分化产生的GFAP阳性细胞分别是59．3％和80．7％。结论 分离培养的额叶皮层和海马神经干细胞具有自我更新和增殖能力，可以向神经元、胶质细胞分化。额叶皮层神经干细胞与海马神经干细胞的倍增时问、自主分化特点和分化为神经细胞和胶质细胞的比率各有不同。     

激光调控内源性神经干细胞的增殖与分化

背景：大量研究表明增强脑内源性神经细胞的自我修复和增殖能力将成为治愈缺血缺氧性脑损伤最有价值的方法之一。 目的：探讨氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤内源性神经干细胞增殖及分化的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-12/2008-05在郑州大学护理学院完成。 材料：7 d龄健康Wistar新生大鼠36只,随机分为假手术组、模型组、激光治疗组,12只/组。氦氖激光多功能治疗仪由桂林电子仪器厂生产。 方法：模型组、激光治疗组新生大鼠通过结扎左颈总动脉后,再吸入低浓度氧(含体积分数为8%的O2、体积分数为92%的N2)建立缺血缺氧性脑损伤模型;假手术组不结扎左颈总动脉,置于正常空气中。造模后第2天开始,激光治疗组给予氦氖激光照射,激光波长632.8 nm,激光功率4 mW,光斑直径3 mm,功率密度56.62 mV,能量密度33.975 J/cm2,10 min/次,1次/d,10 d为1个疗程,共2个疗程,两疗程间隔2 d。穴位选取顶骨正中的“百会”穴,以及第7颈椎与第1胸椎间、背部正中的“大椎”穴。疗程结束后制备脑海马切片,分别进行巢蛋白和微管关联蛋白2免疫组织化学染色。 主要观察指标：大鼠脑内巢蛋白标记的神经干细胞和微管关联蛋白2标记的神经元的表达情况。 结果：36只大鼠全部进入结果分析。①大鼠内源性神经干细胞的表达：与假手术组比较,模型组、激光治疗组齿状回内巢蛋白免疫阳性细胞均明显增多(F=122.36,P < 0.05),且激光治疗组增多幅度大于模型组(P < 0.05)。②神经元特有结构蛋白的表达：激光治疗组大脑皮质微管关联蛋白2表达相当广泛,强阳性染成棕褐色的树突呈条索样、流星样放射状分布,海马各区锥体神经元和齿状回颗粒细胞层神经元排列比较整齐,树突连续阳性染色呈树枝状交叉分布于分子层。假手术组与激光治疗组染色所见无明显差别。模型组微管关联蛋白2表达明显减弱。 结论：激光治疗能够促进缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑内源性神经干细胞增殖,并诱导其向神经元方向分化。     

神经节苷脂GM1对缺血缺氧后脑中HSP70表达的影响

目的 研究神经节苷脂GM1对新生鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用及HSP70表达的影响。方法 建立新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型,应用组织化学和免疫组织化学法观察缺血缺氧后3h、6h、1d、3d、7d、14d脑组织的病理变化及HSP70的表达,以及GM1给药后的变化。结果 单纯缺血缺氧组,在缺血缺氧后3h缺血侧皮层、海马CA3区、纹状体开始有少量HSP70表达,24h达高峰,14d未见HS70表达;GM1给药组,脑组织损伤明显减轻,6h才开始有少量HSP70表达,7d未见有表达。结论 GM1对新生鼠缺血缺氧性脑损伤具有明显的保护作用;HSP70的诱导表达是缺血缺氧性脑损伤敏感而可靠的指标,GM1可抑制这种表达。     

白藜芦醇对缺血再灌注小鼠神经干细胞增殖作用的研究

目的研究白藜芦醇对小鼠缺血再灌注后海马区神经干细胞增殖的影响,探讨其促进缺血再灌注后神经功能恢复的机制。方法 15只雄性BALB/c小鼠随机分为缺血再灌注组、白藜芦醇组及假手术组,采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型,Brdu标记增殖的干细胞,免疫组化法测定增殖细胞数。结果白藜芦醇组与缺血再灌注组相比Brdu阳性细胞数存在差异。结论白藜芦醇可以促进小鼠缺血再灌注后海马区神经干细胞的增殖,可能在其促进缺血后神经功能恢复中发挥作用。     

激光调控内源性神经干细胞的增殖分化及脑功能重建**☆

背景: 大量研究表明增强脑内源性神经细胞的增殖能力和自我修复将成为治愈缺血缺氧性脑损伤有价值的方法之一。 目的：观察氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤内源性神经干细胞增殖分化及脑功能重建的影响。 方法：7 d龄健康Wistar新生大鼠,建立缺血缺氧性脑损伤模型后第2天开始,激光穴位照射组给予氦氖激光照射。穴位选取顶骨正中的“百会”穴,以及第7颈椎与第1胸椎间、背部正中的“大椎”穴。假手术组和模型组不给予激光照射。于第2疗程结束后,用Y-型迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力。随后制备脑海马切片,分别进行巢蛋白和微管关联蛋白2免疫组织化学染色。 结果与结论：①激光穴位照射组大鼠的学习和记忆能力明显高于模型组(P < 0.05),但与假手术组相比,无明显差异(P > 0.05)。②大鼠内源性神经干细胞的表达：与假手术组比较,模型组、激光治疗组齿状回内巢蛋白免疫阳性细胞均明显增多(P < 0.05),且激光治疗组增多幅度大于模型组(P < 0.05)。③神经元特有结构蛋白的表达：激光治疗组大脑皮质微管关联蛋白2表达相当广泛,强阳性染成棕褐色的树突呈条索样、流星样放射状分布,海马各区锥体神经元和齿状回颗粒细胞层神经元排列比较整齐,树突连续阳性染色呈树枝状交叉分布于分子层。假手术组与激光治疗组染色所见无明显差别。模型组微管关联蛋白2表达明显减弱。结果提示激光治疗能够促进缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑内源性神经干细胞增殖,诱导其向神经元方向分化,并达到学习记忆功能的重建。     

孕酮通过PI3K/Akt信号通路减轻新生大鼠缺血缺氧性脑损伤

目的探讨孕酮是否通过PI3K/Akt信号通路减轻新生大鼠缺血缺氧性脑损伤。方法取40只7 d龄新生Wistar大鼠随机分成4组:假手术组:仅做颈部切口,不做缺氧缺血处理;模型组:按动物模型的方法进行缺氧缺血处理;孕酮组:动物进行缺氧缺血处理且在缺氧前30 min按8 mg/kg腹腔注射孕酮溶液;抑制剂组:在建立缺血缺氧性脑损伤模型前30 min,按16μg/kg剂量在大鼠左侧海马区注射Wortmannin。电镜观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经元的变化,采用免疫组织化学法检测海马pAkt及NF-κB的蛋白表达,应用Western blot检测海马pAkt及NF-κB的蛋白含量。结果 24 h后假手术组神经元结构基本正常,模型组神经元由于缺氧缺血损伤呈空化改变,给予孕酮后的缺氧缺血神经元受损情况改善,空化现象减少,应用抑制剂神经元空化改变明显。缺氧缺血后海马神经元pAkt蛋白表达减少,NF-κB表达增加;孕酮预处理可增加pAkt的表达,降低NF-κB表达;使用抑制剂组pAkt蛋白表达减少,NF-κB表达增加。结论孕酮可通过激活PI3K/Akt信号通路,增加pAkt的水平,抑制NF-κB表达,减轻缺血缺氧性脑损伤中的炎症反应,发挥脑保护作用。     

脑缺血再灌注海马齿状回神经干细胞Mash-1的表达

背景：Mash-1在中枢神经系统和周围神经系统发育中都有表达,对神经元和神经胶质细胞的分化都有很重要的作用。 目的：检测Mash-1在大鼠脑缺血再灌注海马组织神经干细胞中的表达及其变化。 方法：建立大脑中动脉栓塞制作大鼠脑缺血再灌注模型。实验分为假手术组、缺血再灌注3,7,14,21,28 d组。 结果与结论：免疫组织化学检测结果,随着脑缺血再灌注第3天海马神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7天达高峰,然后逐渐减少。Mash-1反应产物随脑缺血再灌注时间延长逐渐增多,第21天表达最强,以后表达逐渐减少。提示Mash-1呈时间依赖性表达,与神经干细胞增殖分化进程相吻合,说明其在神经干细胞晚期分化中起重要调控作用。     

白藜芦醇对神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元移植治疗帕金森模型鼠的影响

背景：目前神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病仍面临细胞存活率低的问题,大部分细胞因氧自由基形成及脂质过氧化而发生程序性凋亡。 目的：探讨白藜芦醇对神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后的细胞存活及移植效果的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-10/2008-06在中山大学动物实验中心完成。 材料：成年健康雄性SD大鼠32只,随机分为模型对照组、多巴胺能神经元组、白藜芦醇组、联合组,8只/组;孕十四五天的健康SD大鼠4只,取胎鼠用于神经干细胞的分离培养。白藜芦醇为深圳晶美生物工程有限公司产品。 方法：取体外分离培养的胎鼠中脑神经干细胞,在含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中传代扩增后,在分化液中诱导向多巴胺能神经元方向分化。各组大鼠均应用6-羟基多巴胺制备帕金森病模型。采用两点移植法,多巴胺能神经元组向大鼠毁损同侧纹状体注入多巴胺能神经元细胞悬液3 μL (1×105个/μL);白藜芦醇组注入40 mg/L白藜芦醇3 μL;联合组注入40 mg/L白藜芦醇3 μL+多巴胺能神经元细胞悬液3 μL (1×105个/μL);模型对照组注入DMEM/F12细胞培养液3 μL。 主要观察指标：胎鼠神经干细胞诱导分化的酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率,细胞移植后帕金森模型鼠不对称旋转行为的变化,纹状体移植区酪氨酸羟化酶染色阳性细胞存活情况。 结果：流式细胞仪检测诱导分化6 d的细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率为(17.8±4.2)%。与模型对照组比较,联合组大鼠移植后10 d不对称旋转行为有显著性改善(P < 0.01),移植后20 d不对称旋转圈数开始明显下降(P < 0.01)。移植后10~ 60 d,联合组大鼠的不对称旋转圈数明显低于多巴胺能神经元组(P < 0.01)。白藜芦醇组、模型对照组均未见酪氨酸羟化酶染色阳性细胞,联合组酪氨酸羟化酶染色阳性细胞数明显多于多巴胺能神经元组(P < 0.01)。 结论：胎鼠神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后,白藜芦醇可提高纹状体移植区植入细胞的存活率,改善大鼠不对称旋转行为。     

高压氧对外源性人神经干细胞移植治疗损伤脑组织神经元病理状态的改善效应☆

目的：研究证明高压氧治疗能明显减轻缺氧后宿主脑区深部水肿，减少内源性神经元变性与坏死，并增加围产期鼠新生神经元数量与碱性成纤维生长因子活性。实验拟进一步观察缺氧缺血性脑损伤大鼠移植人神经干细胞后予高压氧治疗对脑组织神经元病理改变的影响。 方法：实验于2007-04在解放军海军总医院完成。①细胞来源及动物：经医院伦理委员会授权，孕妇知情同意下留取孕12周流产的人胎儿脑组织。新生7 d龄SD大鼠20只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取胎儿脑组织，在无菌条件下培养扩增并制备成人神经干细胞单细胞悬液。20只大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型，3只死亡，剩余鼠随机数字表法分为2组，细胞移植+高压氧组9只，单纯细胞移植组8只。造模后3 d，两组大鼠均于左侧侧脑室进行细胞移植，注射位点以前囟为参照点，AP= -1 mm，ML= -1.5 mm，DV= -4.0 mm，缓慢注入2×106 L-1细胞悬液5 μL。移植后1 h，将细胞移植+高压氧组大鼠放入高压氧舱内，给予高压氧通气，升压及降压过程各15 min，最终达压力为1.8个绝对大气压，稳压60 min，1次/d，连续10 d。两组大鼠麻醉后断头取脑，制备组织切片。③实验评估：免疫荧光法检测神经干细胞巢蛋白的表达、人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化情况。尼氏染色检测移植后脑组织皮质、海马神经元形态、结构的变化。 结果：移植过程中细胞移植+高压氧组有1只鼠因麻醉死亡，高压氧通气过程中没有动物死亡。①人神经干细胞的鉴定：人胎儿脑组织体外培养12 d获取生长旺盛的人神经干细胞小集落，即神经球。倒置显微镜下观察可见每个小集落为数十个细胞构成，细胞折光性强，周边有清晰的光晕。免疫荧光标记大部分活细胞表达巢蛋白。②人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化：植入后10 d，两组在皮质及海马区均可见神经丝蛋白阳性细胞，即植入细胞分化形成的神经元，其细胞形态与宿主内源性细胞相似。③神经元尼氏染色：两组大鼠均没有发现肿瘤形成。移植后10 d与单纯细胞移植组相比，细胞移植+高压氧组海马及皮质区组织细胞水肿程度明显减轻，且海马CA1区、CA3区、齿状回神经元排列更整齐，组织结构更完整。 结论：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠移植人神经干细胞后，高压氧治疗可减轻损伤易感区组织细胞水肿程度，并使海马区神经元结构更加完整，推测有可能促进细胞的成活、迁移及分化。     

神经干细胞移植治疗暂时性脑缺血的实验研究

目的:探讨神经干细胞移植治疗暂时性脑缺血的价值。方法:从孕14 d SD胎鼠海马组织中分离培养出神经干细胞,将BrdU标记的神经干细胞经立体定向移植到SD大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)纹状体缺血半暗区。移植后2～12周以神经损害严重程度评分(NSS)评价各组动物神经功能状况。移植后12周,免疫荧光染色观察移植后神经干细胞的分化、迁徙和整合情况。结果:分离和纯化出大鼠胚胎神经干细胞,呈nestin阳性,并具有自我更新及多向分化潜能。移植后的神经干细胞在宿主脑内迁徙,部分分化并表达神经元特异性标记Neurofilament。移植后8周起,神经干细胞移植组大鼠NSS评分明显低于其他2组。结论:神经干细胞移植能改善缺血后大鼠的神经功能状况。     

脑缺血后内源性激活神经干细胞的机制研究

1 脑缺血后内源性神经干细胞的自身激活 近年来研究表明,脑缺血后自身的神经干细胞有大量的增殖分化[1,2],说明神经干细胞可能参与脑缺血的病理生理过程.Zhang等通过建立沙鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,观察缺血再灌注后不同时期的室管膜下层(SVZ)、海马颗粒细胞层(DG)、嗅球以及梗死灶周边皮质的神经干细胞增殖、分化情况,发现7 d后在梗死同侧脑SVZ出现神经干细胞增殖高峰,14 d达最高,而DG区则无增殖,且14 d后远离梗死区的嗅球有大量的神经干细胞增殖,但28 d后,标记Brdu阳性细胞大量减少,说明脑缺血只引起短暂的神经干细胞的增殖,Zhang认为是脑缺血损伤的应急保护反应[3].     

行为学训练对局灶性脑缺血大鼠内源性神经干细胞增殖及PS1蛋白表达的影响

目的检测早老素(Presenilinl,PS1)在局灶性脑缺血大鼠海马组织神经干细胞中的表达及穿梭箱训练的干预作用,探讨影响神经干细胞增殖分化的分子调控机制。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作局灶性脑缺血大鼠模型,用免疫组织化学方法检测海马神经干细胞Brd U、PS1的表达及穿梭箱训练的干预作用。结果随着脑缺血再灌注3 d缺血海马神经元Brd U阳性细胞明显增多,7 d达高峰。PS1反应产物脑缺血再灌注7 d较正常组增多,随缺血再灌注时间的进一步延长逐渐减少,14 d后持续低水平表达。穿梭箱训练后Brd U、PS1蛋白的表达明显增加。结论穿梭箱训练促进神经干细胞的增殖及缺血脑组织PS1的表达,提示穿梭箱训练促进神经干细胞增殖作用可能由PS1信号介导。