纤维蛋白胶释放血管内皮生长因子加速损伤动脉血管内皮化

背景：血管去内皮化，血栓形成和内膜增生极大的限制了血管治疗方法的临床效果。目的：利用含血管内皮细胞生长因子的纤维蛋白胶作用于球囊损伤血管内膜来评估其对血管内皮化、细胞增殖和内膜增生的影响。设计：随机对照、重复测量设计。单位：解放军第四军医大学西京医院血管外科及神经外科研究所。材料：实验于2002-10／2004-06在解放军第四军医大学西京医院神经外科研究所完成。15只健康杂种犬（雌雄不限，体质量12．5～18．9kg）由西京医院动物实验外科提供。方法：损伤犬双侧颈动脉，一侧为纤维蛋白胶／血管内皮细胞生长因子／肝素处理组，另一侧为生理盐水对照组。损伤后10，30和90d观察对比内膜损伤和处理的结果。切片应用BioquantBQ0S／2计算机形态测量仪测量血管内膜和中层厚度。5-溴脱氧尿苷掺人免疫组化切片用于计算细胞增殖率，40倍光镜下计算5-溴脱氧尿苷阳性细胞数。电镜检查血管腔内表面内皮细胞覆盖率。主要观察指标：内皮细胞覆盖情况、新生内膜和中层厚度及细胞增殖率。结果：所有犬均存活至标本收集时，无脱失值。①内皮细胞覆盖率：在10d和30d时，处理侧颈动脉的内皮细胞覆盖率明显高于对照侧[（66．73&;#177;30．783l％，（40．8&;#177;27．74）％，P=0.04；（96．67&;#177;10.29）％，（82．07&;#177;22．82）％，P=0．0481。②增殖率：10d时，血管各层细胞增殖达到高峰，90d恢复正常。和对照组相比，处理组在30d对新生内膜和血管中层内侧半中层及血管中层的细胞增殖率明显增强[（7．41&;#177;6．75）％．（3．56&;#177;2．72）％；（2．81&;#177;2．65）％，（0．83&;#177;059）％；（2．06&;#177;1．81）％，（0．62&;#177;0．31）％．P〈0．051。③新生内膜厚度：和对照组相比，处理组在30d和90d时双侧近端和中段的内膜厚度／中层厚度比值明显增加（0．18&;#177;0．22。0．10&;#177;0．06；0．21&;#177;0．23，0．14&;#177;0．14；0．12&;#177;0．08，0．09&;#177;0．08；0．29&;#177;0．40，0．12&;#177;0．12，P〈0．05，P〈0．01），但远端没有变化。结论：纤维蛋白胶能将细胞因子释放入动脉血管壁并保持生物学活性。纤维蛋白胶释放血管内皮细胞生长因子加肝素能有效加速损伤血管内皮化但伴有平滑肌细胞增殖和内膜增生。     

初诊2型糖尿病患者动脉内膜中层厚度和血管内皮功能的超声研究

目的应用高分辨率超声检测和评估初诊2型糖尿病患者的动脉内膜中层厚度(IMT)和血管内皮功能的变化。方法测定164例初诊2型糖尿病患者及20例正常人的颈动脉、髂动脉、股动脉的内膜中层厚度,肱动脉反应性充血前后及舌下含服硝酸甘油前后内径的变化,并进行统计学分析。结果糖尿病组IMT较正常对照组增厚(P<0.05);反应性充血时肱动脉内径变化百分率(13.11±6.02)%比正常对照组(16.91±5.97)%明显减弱(P<0.01)。硝酸甘油介导的肱动脉内径变化百分率(16.05±6.98)%与正常对照组(18.12±6.79)%比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用高分辨率超声检查可较早发现糖尿病患者IMT和血管内皮功能受损情况,对于糖尿病大血管并发症的早期发现及治疗效果的评价具有重要的应用价值。     

衰老对离体大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张反应的影响

目的研究增龄对离体大鼠主动脉内皮依赖性舒张的影响. 方法成年及老年大鼠各 20只,利用组织器官水浴系统,通过乙酰胆碱、 N 硝基左旋精氨酸,测量离体主动脉环的舒张反应变化(%).同时利用免疫组织化学方法观察诱导型一氧化氮合酶( inducible nitricoxide synthase, iNOS )和内皮型一氧化氮合酶( endothelial nitricoxide synthase , eNOS)在不同年龄大鼠主动脉中的表达. 结果 ①老年组大鼠主动脉环对 1× 10- 8, 1× 10- 7, 1× 10- 6, 1× 10- 5, 1× 10- 4 mol/L乙酰胆碱诱发的内皮依赖舒张反应 [(3.13± 0.85)% ,(12.60± 2.18)% ,(25.23± 4.63)% ,(37.73± 6.95)% ,(50.78± 3.58)% ]均较成年组明显减弱,两组之间有显著差异( P< 0.01).②离体大鼠主动脉环环经 1× 10- 4 mol/L NNLA预处理 20 min,阻断一氧化氮合酶( nitricoxide synthase , NOS)后,同样剂量的乙酰胆碱不再诱发上述内皮依赖性舒血管反应.③ eNOS组在老年组血管内膜层可见棕褐色的阳性反应颗粒 120.524± 2.037,但较成年组相比,可发现阳性反应明显减弱. iNOS组成年组内膜及中膜层可见较弱的棕褐色阳性反应颗粒沉在老年组 (112.371± 1.64),阳性反应明显增强. 结论 随增龄,血管内皮分泌的一氧化氮逐渐减少,导致血管内皮依赖性舒张减弱 ;NOS的异常表达对一氧化氮减少起着重要的作用, eNOS随增龄表达减弱,而 iNOS 随增龄表达则明显增强.     

兔血管内膜增生过程中核因子κB活性与氯沙坦的影响

背景核因子κB可参与细胞增殖反应,其复杂的机制需深入研究.目的研究氯沙坦对血管内膜增生及核因子κB活性的影响.设计以实验动物为研究对象,完全随机分组设计,探索性实验研究.单位一所大学医院心内科.对象本实验于2001-11/2002-06在武汉大学人民医院实验室及实验动物中心完成.实验选用雄性日本大耳白兔24只,随机取8只作为正常组,始终饲以普通饲料;另外16只造成腹主动脉内皮损伤并以高脂饮食饲养8周后再随机分为对照组、氯沙坦组,每组8只.方法术后氯沙坦组给予氯沙坦10 mg/(kg·d)口服,对照组喂生理盐水.4周后取腹主动脉行组织形态学观察及用免疫组织化学方法分析核因子κB、α-平滑肌肌动蛋白、巨噬细胞、细胞间黏附分子1.主要观察指标3组动物经不同干预措施后血管内膜厚度、内膜面积、内膜核因子κB,细胞间黏附分子1的表达和平滑肌细胞、巨噬细胞数量比较.结果对照组兔血管氯沙坦组血管内膜厚度、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积、内膜面积/中膜面积明显大于正常组(P＜0.01).氯沙坦组兔血管内膜厚度、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积、内膜面积/中膜面积[(0.42±0.08)mm,0.43±0.10,(3.18±0 83)mm2,0.54±0.11]均明显小于对照组[(1.35±0.35)mm,0.67±0.15,(5.30±1.71)mm2,0.77±0.14](P均＜0.01).氯沙坦组新生内膜中巨噬细胞、平滑肌细胞数均明显少于对照组(P＜0.01,0.05).氯沙坦组兔血管核因子κB及其靶基因产物细胞间黏附分子1的水平也明显低于对照组(P＜0.01,0.05).结论氯沙坦可阻断血管紧张素Ⅱ受体,进而抑制核因子κB,从而抑制平滑肌细胞迁移、增殖和新生内膜形成.     

联合检测血管内皮损伤标志物在急性胰腺炎诊治中的价值

目的 探讨急性胰腺炎不同阶段血管内皮细胞损伤标志物内皮素(ET-1)、血栓调节蛋白(TM)、血管性假血友病因子(vWF)水平变化及其临床意义.方法 采用放射免疫吸附法和酶联免疫吸附测定法,分别测定轻症急性胰腺炎患者(50例)、重症急性胰腺炎患者(21例)、健康对照组(15例)的血管内皮细胞损伤标志物ET-1、,TM、vWF浓度.结果 重症急性胰腺炎患者血管内皮细胞损伤标志物ET-1[(116.8±16.70)ng/L]、TM[(65.7±12.27)μg/L]、vWF[(176±38)%]含量升高,与轻症组[分别为:(95.6±21.8)ng/L、(9.8±6.98)μg/L、(131±30)%]和健康对照组[分别为:(51.2±8.12)ng/L、(4.26±O.92)μg/L、(106±21)%]比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 急性胰腺炎患者均存在不同程度的血管内皮细胞损伤及凝血和纤溶系统的激活,联合检测血管内皮损伤标志物ET-1、TM、vWF含量可作为急性胰腺炎病情进展、预后判定的指标之一.     

联合检测血管内皮损伤标志物在急性胰腺炎诊治中的价值

目的 探讨急性胰腺炎不同阶段血管内皮细胞损伤标志物内皮素(ET-1)、血栓调节蛋白(TM)、血管性假血友病因子(vWF)水平变化及其临床意义.方法 采用放射免疫吸附法和酶联免疫吸附测定法,分别测定轻症急性胰腺炎患者(50例)、重症急性胰腺炎患者(21例)、健康对照组(15例)的血管内皮细胞损伤标志物ET-1、,TM、vWF浓度.结果 重症急性胰腺炎患者血管内皮细胞损伤标志物ET-1[(116.8±16.70)ng/L]、TM[(65.7±12.27)μg/L]、vWF[(176±38)%]含量升高,与轻症组[分别为:(95.6±21.8)ng/L、(9.8±6.98)μg/L、(131±30)%]和健康对照组[分别为:(51.2±8.12)ng/L、(4.26±O.92)μg/L、(106±21)%]比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 急性胰腺炎患者均存在不同程度的血管内皮细胞损伤及凝血和纤溶系统的激活,联合检测血管内皮损伤标志物ET-1、TM、vWF含量可作为急性胰腺炎病情进展、预后判定的指标之一.     

复方丹参滴丸对血管内皮功能的保护作用

目的:探讨复方丹参滴丸对血管内皮依赖性舒张功能的保护作用。方法:血管内皮功能障碍患者35例(具有冠心病危险因素)口服复方丹参滴丸(20粒/次,2次/d,)3个月后,利用高分辨力超声检测血管内皮功能的改变。结果:经过3个月的治疗,肱动脉的血管内皮依赖性舒张功能明显改善犤(10.38±3.04)%和(3.50±1.28)%,t=6.826,P<0.01犦。血流介导的肱动脉血流量增长百分率亦明显升高犤(370±247)%和(203.2±134)%,t=15.31,P<0.05犦。结论:具有冠心病危险因素患者血管内皮依赖性舒张功能损伤是可逆性的,中药复方丹参滴丸可以明显改善损伤的血管内皮功能。     

不同浓度川芎嗪含药血清对血管内皮细胞增殖的影响

背景有研究显示川芎嗪160 mg/L抑制体外培养的内皮细胞生长,但其是否能抑制血管内皮生长因子诱导的血管内皮细胞的增殖报道较少. 目的探讨川芎嗪含药血清对血管内皮细胞和对血管内皮生长因子诱导的血管内皮细胞增殖的影响. 设计随机对照实验. 单位重庆医科大学中医药学院. 材料实验于2002-03/2003-03在重庆医科大学儿科研究所完成.选用人脐静脉内皮细胞系ECV304;Wistar雌性大鼠30只. 方法30只大鼠随机分为3组,每组10只,川芎嗪143.0mg/kg组,川芎嗪71.5 mg/kg组,分别于腹腔注射相应剂量川芎嗪,每组分别设血清浓度20%,10%,5%3组,各组均设重复孔3个.空白对照组10只予腹腔注射0.8 mL生理盐水.均1次/d,连续7 d后从腹主动脉取血.川芎嗪含药血清对细胞增殖的作用观察采用体外培养技术以及3H胸腺嘧啶核苷掺入法和四氮唑蓝法检测. 主要观察指标①川芎嗪含药血清对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞增殖的影响.②川芎嗪动物血清对血管内皮生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞增殖的影响. 结果进入结果分析的大鼠为30只,无缺失值.①川芎嗪含药血清对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞增殖的影响血清浓度分别为5%,10%,20%的川芎嗪143.0 mg/kg组,其吸光度(A)值、放射性核素闪烁计数(min-1)较对照组显著减少[5%0.720±0.024,0.816±0.068;3 340.45±567.7,5 120.84±301.49;10%0.630±0.017,0.798±0.015;2 430.06±265.98,5 225.83±100.10,20%0.765±0.027,0.823±0.031;3 570.45±130.52.5 256.82±183.18].血清浓度分别为10%,20%的川芎嗪71.5 mg/kg组,其吸光度(A)值、放射性核素闪烁计数(min-1)较对照组显著减少[10%0.775±0.023,0.798±0.015;4 571.14±275.39,5 225.83±100.10,20%0.749±0.012,0.823±0.031;3 287.25±144.82,5 256.82±183.18].②川芎嗪动物血清对血管内皮生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞增殖的影响血清浓度分别为5%,10%,20%的川芎嗪143.0 mg/kg组,其吸光度(A)值、放射性核素闪烁计数(min-1)较对照组显著减少[5%0.726±0.004,0.964±0.004;5 760.46±49.64,9 821.82±128.05;10%0.712±0.004,0.933±0.014;5 024.48±100.57,9 052.76±65.19;20%0.717±0.003,0.924±0.004;5 405.45±140.90,9 197.07±169.92].血清浓度分别为10%,20%的川芎嗪71.5 mg/kg组,其吸光度(A)值、放射性核素闪烁计数(min-1)较对照组显著减少[10%0.703±0.005,0.933±0.014;7 526.47±169.21,9 052.76±65.1920%0.693±0.006,0.924±0.004;5 720.09±279.03,9 197.07±169.92]. 结论川芎k143 mg/kg动物血清浓度5%,10%,20%;71.5 mg/kg动物血清高浓度对ECV304细胞增殖有显著的抑制作用.川芎嗪143 mg/kg动物血清3种浓度;川芎嗪71.5mg/kg动物血清20%,10%对血管内皮生长因子诱导的ECV304细胞增殖有显著的抑制作用.     

循环内皮细胞参与人工血管体内内皮化过程的动物实验

背景:已有实验表明,通过自体血管内皮细胞种植于人工血管腔面提高了血管移植的通畅率。骨髓内皮细胞衬里人工血管是否有利于人工血管体内的内皮化过程?目的:通过骨髓内皮细胞衬里人工血管间置移植的动物实验观察人工血管内皮化效果。设计:观察对比动物实验。单位:上海市第六人民医院。材料:实验于2000-09/2001-10在上海市第六人民医院完成。选用20只上海地区杂种犬,犬龄1.0～2.0岁,雌雄不拘,体质量(18.7±2.3)kg方法:分离犬骨髓单核细胞,ePTFE人工血管以2种规格(4 mm×4cm和8mm×5cm)完成内皮化。颈总动脉移植:选用10只实验犬切除颈总动脉主干4cm,将直径4mm长4cm的ePTFE人工血管间置移植于双侧颈总动脉,内皮化人工血管为实验组,未经内皮化人工血管为对照组,每组5只。术后2周及2个月采用彩色超声检查移植血管通畅率及血流速率。下腔静脉移植:选用剩余10只实验犬,6只为实验组,实验犬麻醉下将下腔静脉游离约8～10 cm,阻断两端,切除约5 cm,取直径8 mm长5 cm内皮化ePTFE人工血管,以5-0 Prolene作端端吻合,4只为对照组,以相同规格ePTFE人工血管为移植血管。术后2个月测定血管通畅率。同时与上述时间点计算各组移植血管内皮细胞覆盖率及内膜厚度。主要观察指标:①各组实验犬不同时间点移植血管通畅率及血流速率。②各组移植血管内皮细胞覆盖率及内膜厚度。结果:①颈总动脉移植术后2周和2月实验侧通畅率分别为100% (5/5)和60%(3/5).同期对照侧通畅率分别为40%(2/5)和0%(0/5)。术后2个月实验组平均血流速率明显小于对照组(P<0.05)。下腔静脉移植实验组和对照组2月移植血管通畅率为83%(5/6)和50%(2/4)。②颈总动脉及下腔静脉移植术后2周实验组血管腔面内皮细胞覆盖率大于对照组,差异有显著性意义(P<0 05),术后2个月实验组血管内膜厚度小于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:骨髓内皮细胞衬里的ePTFE人工血管在体内能较快完成内皮化过程,能抑制内膜增生;循环内皮细胞作为内皮细胞的潜在来源,具有一定临床应用价值。     

血管内皮生长因子165与动脉粥样硬化兔血清C反应蛋白水平的相关性

目的:观察内皮细胞生长因子165对兔血清C反应蛋白的影响,探讨其对动脉粥样硬化形成与发展的影响。方法:实验于2002-04/2004-06在郧阳医学院实验动物中心和生命科学研究所完成。15只日本大耳白兔随机分为3组:对照组给普通饲料喂养,高脂组及血管内皮生长因子组给高胆固醇饲料喂养,喂养21d后对照组及高脂组肌注白蛋白(2μg/kg),血管内皮细胞生长因子组肌注内皮细胞生成因子165(2μg/kg),继续以前方式饲养3周(喂养42d)处死动物,测定各组血清C反应蛋白和血脂水平,用计量组织学的方法(CD34的阳性面积)测定动脉粥样斑块内新生血管的密度。结果:实验兔3组15只均进入结果分析。①血清C反应蛋白浓度:喂养21d及42d时,高脂组和血管内皮细胞生长因子组分别高于对照组[21d:(1.57±0.3),(1.48±0.2),(0.38±0.1)mg/L,P<0.05;42d:(1.49±0.2),(2.81±0.9),(0.37±0.1)mg/L,P<0.05],血管内皮细胞生长因子组42d高于21d(P<0.01)。②喂养42d时新生血管的密度:CD34阳性细胞数血管内皮细胞生长因子组高于高脂组,且两组均高于对照组[(61.15±7.55),(12.35±2.02),0个/mm2,P<0.05]。③血清C反应蛋白浓度与CD34的阳性细胞数之间关系:呈正相关(r=0.944)。④斑块面积,斑块周径及斑块的最大厚度:血管内皮细胞生长因子组高于高脂组,且两组均高于对照组[斑块面积:(24.12±3.58),(1.81±0.61)%,0;斑块周径:(25.71±1.97),(6.05±1.62)%,0;斑块的最大厚度:(0.16±0.007),(0.06±0.002),0mm,P<0.05]。⑤电镜观察新生血管:新生血管与动脉粥样斑块相邻,新生管腔内可见淋巴细胞。结论:内皮细胞生成因子165促进斑块内血管生成的过程中,其促进C反应蛋白合成可能是其促进动脉粥样斑块形成与发展的作用之一。     

In vivo transfer of human hepatocyte growth factor gene accelerates re-endothelialization and inhibits neointimal formation after balloon injury in rat model

Although most therapeutic strategies to prevent restenosis are designed to inhibit vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation directly, VSMC proliferation might be indirectly inhibited by re-endothelialization, as endothelial cells secrete antiproliferative and antithrombotic substances. We hypothesized that application of an endothelium-specific growth factor to balloon-injured arteries could accelerate re-endothelialization, thereby attenuating intimal hyperplasia. In this study, we investigated in vivo gene transfer of human HGF that exclusively stimulated endothelial cells without replication of VSMC growth into injured vessels. Transfection of human HGF gene into rat balloon-injured carotid artery resulted in significant inhibition of neointimal formation up to at least 8 weeks after transfection, accompanied by detection of human immunoreactive HGF. Induction of re-endothelialization induced by overexpression of human HGF gene transfer into balloon-injured vessels is supported by several lines of evidence: (1) Administration of HGF vector. but not control vector, markedly inhibited neointimal formation, accompanied by a significant increase in vascular human and rat HGF concentrations. (2) Planimetric analysis demonstrated a significant increase in re-endothelialized area in arteries transfected with human HGF vector. (3) Induction of NO content in balloon-injured vessels transfected with human HGF vector was observed in accordance with the recovery of endothelial vasodilator properties in response to acetylcholine. As endogenous HGF expression in balloon-injured vessels was significantly decreased as compared with normal vessels, the present study demonstrated the successful inhibition of neointimal formation by transfection of human HGF gene as 'cytokine supplement therapy' in a rat balloon injury model.     

VEGF-A, VEGF-D and VEGF-D(DeltaNDeltaC) induced intimal hyperplasia in carotid arteries

BACKGROUND: The role of vascular endothelial growth factors (VEGFs) in intimal hyperplasia and atherogenesis remains unknown. Several studies have suggested that some members of the VEGF family reduce intimal hyperplasia, but others have proposed that VEGFs accelerate restenosis and atherosclerosis. This investigation conducted a comparative study with adenoviruses encoding different VEGFs in a rabbit carotid artery collar model of intimal hyperplasia in order to analyze the role of VEGFs in the formation of intimal hyperplasia. MATERIALS AND METHODS: Intimal hyperplasia was induced in the carotid arteries of cholesterol fed New Zealand White rabbits using a silastic collar. Adenoviral vectors encoding VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-C(DeltaNDeltaC), VEGF-D and VEGF-D(DeltaNDeltaC) were delivered to the adventitia using the collar as a gene delivery device. Adeno-LacZ was used as a control. RESULTS: A significant (P < 0.01) increase in the intima/media ratio was observed in the arteries transduced with VEGF-A, VEGF-D and VEGF-D(DeltaNDeltaC). There was a significant increase in the number of proliferating cells in the adventitia, media and intima of the VEGF-A, VEGF-D and the VEGF-D(DeltaNDeltaC) transduced arteries. The majority of medial smooth muscle cells in these arteries had a synthetic phenotype. The presence of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and MMP-9 in the VEGF-A, VEGF-D and the VEGF-D(DeltaNDeltaC) transduced arteries was significantly increased. A significant positive correlation was observed between adventitial angiogenesis and intimal hyperplasia. CONCLUSIONS: Adventitial delivery of adenoviruses encoding VEGF-A, VEGF-D and VEGF-D(DeltaNDeltaC) increased intimal hyperplasia in the rabbit collar model. Adventitial angiogenesis correlated positively with the intimal hyperplasia. These results indicated that efficient adventitial production of VEGF-A, VEGF-D and VEGF-D(DeltaNDeltaC) can cause thickening of the inner layer of the artery in rabbits.     

纳米微囊包裹血管内皮细胞生长因子对创伤组织中细胞因子表达的调控

背景:近年研究表明,生长因子作为一种分子信号调控细胞的增殖、分化、迁移与代谢,其表达与调控在慢性创面愈合中起着很重要的作用。目的:观察血管内皮生长因子对创伤组织血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子mRNA表达的影响,分析其促进损伤组织修复的作用途径。设计:对照动物实验。单位:解放军第四军医大学西京医院整形科。材料:实验用新西兰白兔6只,兔龄48～60个月。纳米微囊包裹的重组质粒DNA真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-血管内皮生长因子165(VEGF165)由第四军医大学西京医院整形外科贾宁硕士惠赠。方法:实验于2004-10/2005-06在西京医院整形外科实验室完成。①以血管内皮生长因子165为目的基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-VEGF165,利用纳米微囊包裹制成纳米微囊-血管内皮生长因子165复合体。兔经麻醉后,在其耳腹侧制成直径为6mm的3个圆形创面,暴露软骨。以明胶海棉薄片蘸取纳米微囊-血管内皮生长因子165复合体100μL覆于每只兔一侧耳创面,外层覆盖无菌密封薄膜,作为血管内皮生长因子组;对侧每一创面以明胶海棉薄片蘸取100μL纳米微囊-空载质粒覆于创面作为对照组;在环切部位近端的兔耳皮肤作为正常皮肤组。②利用反转录聚合酶链反应方法观察术后14d损伤组织血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子mRNA的表达变化。③术后14d,以创面为中心,切取1cm×1cm正方形组织块(含兔耳全层),制成标本,苏木精-伊红染色,光镜下观察新生肉芽组织的生长情况。主要观察指标:创伤组织血管内皮生长因子受体、碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子表达。结果:①苏木精-伊红染色显示,血管内皮生长因子组创面肉芽生长及上皮爬行速度明显快于对照组。②反转录聚合酶链反应显示,血管内皮生长因子组损伤组织内血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05)及正常组(P<0.01)。结论:外源性血管内皮生长因子可以上调创伤组织中血管内皮生长因子受体,碱性成纤维细胞生长因子和血小板源性生长因子的表达,血管内皮生长因子可能作用于其受体,通过与其他细胞因子的协同作用来实现其对伤口愈合的促进作用。     

血管内皮生长因子及环氧合酶-2在子宫内膜腺癌中表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）在子宫内膜腺癌中表达及临床意义。方法萎缩性正常子宫内膜患者12例（对照组）,子宫内膜增生症患者14例（子宫内膜增生组）,子宫内膜腺癌患者30例（子宫内膜腺癌组）,3组均手术切除子宫内膜组织标本,采用RT-PCR法检测子宫内膜组织COX-2及VEGF mRNA相对表达量。结果子宫内膜腺癌组、子宫内膜增生组、对照组中COX-2mRNA相对表达量分别为（133.58±56.96）%、（56.68±41.75）%、（8.33±5.21）%,VEGF mRNA相对表达量分别为（143.28±59.86）%、（57.33±46.78）%、（15.31±10.86）%,各组间COX-2mRNA及VEGF mRNA相对表达量比较差异有统计学意义（P〈0.01）;子宫内膜腺癌组COX-2表达与VEGF表达呈正相关（r=0.289,P=0.014）。结论COX-2及VEGF在子宫内膜腺癌中均呈高表达,其作为肿瘤恶化程度标记物可为临床诊疗工作提供参考依据。     

内皮生长因子对低温冻存内皮生长晕细胞增殖及黏附能力的影响

目的:探讨不同浓度血管内皮生长因子(vessel endothelial growth factor,VEGF)对内皮生长晕细胞(endothelial outgrowth cell,EOC)低温冻存过程中细胞生物学功能的保护作用.方法:采用密度梯度离心法分离脐血中的单个核细胞,培养扩增EOC,免疫组化、荧光染色及流式细胞仪检测其内皮细胞特性.第2代细胞用含0、10、25、50ng/mLVEGF的冻存液冻存,24 h后复苏,CCK-8法检测增殖能力;差速贴壁法检测黏附能力.结果:CD34+、KDR+、VE-Cadherin+细胞分别为(61.17±0.44)％、(34.79±6.31)％、(74.64±6.96)％.10ng/mLVEGF组与空白对照组相比,其增殖能力无统计学差异,而黏附能力得到一定程度的保护.25 ng/mLVEGF和50ng/mL VEGF组细胞复苏后的细胞增殖能力与黏附能力均较空白对照组增强.结论:VEGF能够不同程度地保护EOC在低温冻存中的生物学功能.     

Clinical protocol. A phase IIb, randomized, multicenter, double-blind study of the efficacy and safety of Trinam (EG004) in stenosis prevention at the graft-vein anastomosis site in dialysis patients.

Hemodialysis access complications remain a major cause of morbidity for patients with end-stage renal disease who are undergoing chronic hemodialysis. Vascular access complications occur in approximately 40% of patients with polytetrafluorethylene (PTFE) grafts within the first 6 months, primarily due to stenosis and thrombosis. Thrombosis at the site of vascular access increases the risk of infection and the need for hospitalization, and may lead to loss of potential new sites for vascular access. To a large extent, the failure of hemodialysis access is due to the rapid development of an intimal hyperplastic lesion in the region of anastomosis between the PTFE graft and the vein. The hospital costs related to hemodialysis access procedures are estimated to be around $1.3 billion per year and the total cost of hemodialysis complications to the US healthcare system is thought to be in excess of $2 billion per year. Ark Therapeutics Ltd. are developing a vascular endothelial growth factor D (VEGF-D) gene in an adenoviral vector which is delivered locally to the adventitial surface of a graft-vein anastomosis by means of a collagen collar device. The proposed indication for this product (Trinam) is the prevention of intimal hyperplasia at the graft-vein anastomosis site in patients who require vascular access to facilitate hemodialysis for end-stage renal disease. The rationale for Trinam to prevent intimal hyperplasia at the graft-vein anastomosis follows the discovery that VEGF has a 'vasculoprotective' action, resulting in inhibition of smooth muscle cell migration and proliferation. The fundamental mechanism for this vasculoprotective effect of VEGF, as distinct from its more widely appreciated 'angiogenic' role, is that VEGF acts on surface receptors on endothelial cells resulting in increased production of nitric oxide and prostacyclin. These entities diffuse into the media of the blood vessel wall and counter the tendency for intimal hyperplasia to develop. In an in vivo rabbit model of intimal thickening in carotid arteries, adventitial delivery of VEGF using a silastic collar as a gene delivery reservoir prevented smooth muscle cell proliferation without evidence of new blood vessel formation, indicating that the mechanism by which VEGF inhibited intimal hyperplasia did not involve angiogenesis. The objective of the proposed study is to assess the efficacy and safety of local delivery of Trinam when applied to the graft-vein anastomosis site in patients with end-stage renal disease who require vascular access for hemodialysis. At the time of surgical placement of a PTFE arm graft, patients will be randomized to either a single administration of Trinam or to 'no treatment' (i.e., control group). It is hypothesised that Trinam administration will result in less stenosis at the graft-vein anastomosis site (as measured by fistulography) compared with controls and therefore will reduce the need for interventions in dialysis patients. Approximately 210 patients will be enrolled from 10-15 centers and patients will be evaluated for efficacy and safety over 6 months. The total dose of Trinam will be 1 x 10(11) viral particles (replication-deficient adenoviral vector). This dose of Trinam was not associated with any significant toxicology findings in a preclinical study of pigs in which a PTFE loop-graft was anastomosed from the carotid artery to the internal jugular vein to mimic hemodialysis vascular access surgery.     

hVEGF165对下肢股浅静脉非体外循环下行冠状动脉旁路移植静脉术血管吻合口再狭窄的影响

目的：观察应用血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因治疗狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄的疗效。方法构建 pcDNA3/VEGF165重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞 Kl 亚株（CHO-K1）,检测其基因、蛋白表达并转导冠状动脉架桥静脉移植术吻合口局部血管平滑肌细胞,观察其对吻合口内膜厚度、面积、狭窄率、新生内膜心肌血管内皮细胞（MEC）增殖及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。结果质粒构建及转染成功,pcDNA3/VEGF165能显著促进MEC增殖,并减少狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄模型再狭窄血管的内膜厚度、面积、狭窄率。结论 VEGF165重组质粒可有效改善狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄,为临床应用提供了前期研究基础。     

New strategies in the prevention of restenosis

Restenosis is a common and serious complication following angioplasty and stent implantation in patients with arterial vascular disease. Restenosis is a form of intimal hyperplasia. Endothelin-1 (ET-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) stimulate intimal hyperplasia and may play a role in restenosis. ET-1 and VEGF may act in concert in promoting restenosis following mechanical injury to the vessel wall in angioplasty and stent implantation. An understanding of their mechanism of action may lead to more effective methods for preventing restenosis. ET-1 receptor antagonists may play a prominent role in prophylaxis.     

球囊导管转导血管内皮生长因子对局部血管内皮细胞生长的影响

背景：血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）能促进实验性动脉成形及支架置入后血管内皮迅速再生，使血栓形成减少，新生内膜厚度和管腔狭窄程度减轻。 目的：在建立动脉粥样硬化兔模型基础上，观察局部转染VEGF基因对被扩张动脉内皮形成的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004—11／2006—11在华中科技科技大学同济医学院微生物实验室完成。 材料：高脂饲养建立动脉粥样硬化兔模型，20只模型兔随机分为对照和基因治疗组两组，每组10只。 方法：基因治疗缌利用球囊导管扩张左肾动脉开口上段腹主动脉并导入pcDNA3．0载体介导的hVEGF165，对照组导入空载体。 主要观察指标：术后1，2，4周MRI观察左肾动脉开口处上段被扩张腹主动脉的管腔面积。术后2，4周处死家兔取材，采用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统观察内膜面积，中膜面积比值，采用Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学染色观察血管内皮细胞再生情况。 结果：利用球囊导管能成功转导pcDNA3．0／hVEGF165。基因治疗组术后2，4周管腔面积大于对照组（P〈0．05），内膜面积，中膜面积比值小于对照组（P〈0．05）；基因治疗组扩张血管内皮细胞再生在术后2周即完成，而对照组到4周才完成。 结论：转导pcDNA3．0／hVEGF165基因能够促进局部血管内皮化，明显减轻再狭窄程度及内膜增厚。     

人脐带血内皮祖细胞与血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子共培养及其增殖和迁移能力

背景：目前组织工程心脏瓣膜再内皮化种子细胞主要来源于成熟内皮细胞,内皮祖细胞作为内皮细胞的前体细胞越来越受到人们的关注。目的：分离和扩增人脐带血内皮祖细胞,观测其体外生物学特性。方法：密度梯度离心法分离新鲜的脐血中单个核细胞,在含血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的培养液中培养扩增,通过形态学、免疫荧光和流式细胞仪等对贴壁细胞进行鉴定;并与脐静脉内皮细胞进行增殖和迁移能力比较。结果与结论：随着培养和诱导时间延长,贴壁细胞形态发生明显的改变,从小圆形变成梭形,逐渐分化成典型成熟内皮细胞的鹅卵石样形态,并可形成特征性的克隆;体外诱导7d后90%以上贴壁细胞呈Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双阳性;贴壁细胞流式细胞仪分析显示：培养7d的细胞VEGFR-2、CD34和CD133表达分别占（77.4±4.9）%、（52.4±6.6）%和（19.4±2.1）%,培养28d的细胞VEGFR-2和CD34表达分别占（81.1±7.4）%和（7.6±3.1）%,而未检测到CD133表达;人内皮祖细胞增殖和迁移能力明显高于人脐静脉内皮细胞（P〈0.05）,并且细胞数量可扩增达109L-1。结果显示用密度梯度离心法和贴壁筛选法,可从人脐带血分离、纯化内皮祖细胞;内皮祖细胞可诱导分化为内皮细胞,增殖和迁移能力都很强。