尖锐湿疣挖空细胞的原位末端标记观察

目的 进一步证实尖锐湿疣挖空细胞的凋亡实质。方法 选自广州市东山区人民医院病理科常规活检经免疫组化和原位杂交组化确诊为尖锐湿疣20例共28个标本。每例分别重新切片，采用原位末端标记技术(TUNEL法)进行染色，光镜下观察，结合上次报告中的电镜照片，进行仔细分析。结果 在电镜下呈核膜皱缩，染色质边集、胞质空泡化的挖空细胞均显示原位末端标记阳性信号。结论 尖锐湿疣挖空细胞为人类乳头状瘤病毒(HPV)感染表皮细胞后所发生的一种特异的凋亡变化，可能与人体防御系统有关。     

原位末端标记检测技术在石蜡切片中的应用

目的介绍原位末端标记检测技术应用于石蜡切片中的原理、检出阳性信号的定位及实验步骤中应注意的问题。方法运用原位末端标记法（TUNEL）对62例人乳腺癌石蜡切片作凋亡细胞检测。结果乳腺癌ISEL检测中凋亡细胞以弥散性散在分布为特征，阳性信号位于核内；在同例组织切片上滴加dUTP而不加TDT，无阳性信号检出。结论作者认为良好的标记切片应具有：1．检出的阳性信号有良好的组织内定位和细胞内定位；2正常组织、非肿瘤性病变组织和肿瘤组织间，同一切片上的阳性信号率和阳性强度应有一定差异；3．标记切片背景清晰和适度的复染效果。     

脑缺血再灌流后p53基因表达与细胞凋亡间的关系

用原位杂交、免疫组化及原位末端标记(TUNEL)的方法观察大鼠大脑中动脉闭塞2h后再通0～72h脑组织p53基因的表达与凋亡细胞的分布.结果发现缺血2h及再灌流1h即可见p53mRNA及其蛋白的表达和凋亡细胞,p53mRNA及其蛋白的表达高峰在缺血再灌流后24h,凋亡细胞数高峰在再灌流24h～48h.提示脑缺血再灌流后诱导p53mRNA及其蛋白的表达和细胞凋亡.     

原位检测细胞凋亡率及增殖率在骨髓增生异常综合征诊断中应用

细胞凋亡与增殖对机体的发育、存活及保持正常生理功能都有重要意义,并参予疾病的发生和发展。造血细胞凋亡与增殖紊乱在不同血液疾病中表现不一。因此测定有核细胞凋亡率及增殖率为骨髓增生异常综合征(MDS)等血液疾病的临床诊断、鉴别诊断提供了可能性。我们采用原位末端转酶标(TUNEL)法原位测定骨髓有核细胞凋亡率,采用免疫组化方法测定增殖率,并结合苏木精复染首次在骨髓涂片上区别粒、红两系有核细胞凋亡率和增殖率,具有简单、灵敏、经济、特异性高的特点。     

脑缺血再灌流后p53基因表达与细胞凋亡间的关系

用原位杂交，免疫组化及原位末端标记（TUNEL）的方法观察大鼠大脑中动脉闭塞2h后再通0－72h脑组织p53基因的表达与调亡细胞的分布，结果发现，缺血2h及再灌流1h即可见p53mRNA及其蛋白的表达和,凋亡细胞，p53mPNA及其蛋白的表达高峰在缺血再灌流后24h，凋亡细胞数高峰在再灌流24h-48h，提示：脑缺血再藻流后诱导p53mPNA及其蛋白的表达和细胞凋亡。     

DNA片段原位末端标记法分析X刀治疗大鼠C6胶质瘤诱发的细胞…

探讨用ＤＮＡ片段原位末端标记技术研究Ｘ刀治疗大鼠Ｃ６胶质瘤诱发的细胞凋亡。对Ｘ刀治疗的各组动物肿瘤组织发生的细胞凋亡采用经典的ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳和ＤＮＡ原位末端标记法进行了研究。经ＤＮＡ片段原位末端标记法研究发现，Ｘ刀１５Ｇｙ、２０及３０Ｇｙ治疗后在１周内诱发出明显的细胞凋亡，此时的细胞凋亡数与对照组及４０Ｇｙ组相比差异有极显著意义（Ｐ〈０．０１）。这一结果与ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳所得结果完全吻合     

鱼金抑制乙型流感病毒诱导细胞凋亡研究

目的探讨鱼金注射液阻断乙型流感病毒诱导狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney，MDCK）凋亡。方法采用瑞氏染色法光镜下观察细胞形态变化、原位末端标记术测定细胞凋亡率。结果病毒感染组MDCK细胞凋亡百分率显著高于其他组（P〈0.001）；试验组、药物对照和细胞对照组比较无差异（P〉0．05）；原位末端标记组细胞凋亡显著高于瑞氏组（P〈0．01）。结论该研究提示乙型流感病毒可诱导MDCK细胞凋亡，而鱼金能阻断乙型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

原位凋亡（Apoptosis）细胞末端标记测定TUNEL法

凋亡是单个细胞受其内在基因编程的调节，通过主动的生化过程而自杀死亡的现象。我们应用非放射性原位末端标记技术，进行凋亡细胞的原位检测。这一方法具有操作简单，结果特异性强、重复性好，特别对于低水平凋亡检测更敏感。     

TUNEL技术在检测胃粘膜组织细胞凋亡中的应用

原位凋亡检测是近些年发展起来的细胞凋亡检测技术 ,包括 DNA聚合酶 I、KL enow酶催化的原位末端标记技术和末端脱氧核苷酸转移酶 (Td T)介导的 d U TP缺口末端标记(TU NEL )技术 ,后者目前被广泛采用。但因福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片进行 TU NEL染色还存在一些问题 ,笔者对组织切片进行染色前的处理 ,介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　胃粘膜组织 ,常规石蜡包埋 ,4μm切片 ,原位末端标记试剂盒 (德国宝灵曼公司 )。1.2　方法 　 (1)常规脱蜡水化 ,蒸馏水洗 5 m in。 (2 )加入蛋白酶 K(2 0 μg/ m l,溶于 p H7.4～ 8.0…     

细胞凋亡与腭裂发生关系的实验研究

「目的」探讨由地塞米松（ｄｅａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）诱导的腭断裂胎模型的腭裂形成中细胞凋亡的意义与作用。「方法」给１２孕期日（ｇｅｓｔａｔｉｏｎ ｄａｙ，ＧＤ）的昆明小白鼠腹腔注射１０￣５０ｍｇ／ｋｇ剂量的ＤＥＸ，获取腭裂胚胎模型。对标本标准颅颌冠状切片进行辣根过氧化物酶标亲核素－生物素－ｄＵＴＰ原位末端标记法９ＩＳＥＬ），在光镜及电镜下做形态学定性观察及腭突凋亡细胞计数分析。「结果」实验组     

过表达Bcl-2肾小管上皮细胞株的建立及Bcl-2逆转录病毒对抗肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 建立稳定过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞,探讨Bcl-2过表达对抗大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 Bcl-2逆转录病毒感染培养肾小管上皮细胞株HK-2,经G418抗性筛选,PCR鉴定并命名为HK-2Bcl-2;原位杂交检测细胞Bcl-2 mRNA表达水平;甘油诱导大鼠急性肾功能衰竭模型,采用含重组Bcl-2浓缩逆转录病毒液,感染大鼠肾小管上皮细胞,采用免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡变化.结果 PCR和原位杂交显示G418抗性细胞克隆过表达Bcl-2;甘油注射后大鼠出现急性肾功能衰竭,Bcl-2逆转录病毒感染肾小管上皮细胞后,Bcl-2蛋白表达上调,并能显著对抗肾小管上皮细胞凋亡.结论 成功建立过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞株HK-2Bcl-2;Bcl-2逆转录病毒显著抑制大鼠肾小管上皮细胞凋亡.     

蜂胶体外诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的:探讨蜂胶对喉癌细胞珠Hep-2凋亡的影响及作用机制。方法:应用MTT、透射电镜、原位末端标记法观察药物对细胞的抑制率及凋亡形态、凋亡率变化。结果:MTT测得细胞抑制率随时间、剂量而增大,透射电镜下见到凋亡细胞及凋亡小体形成,原位末端标记检测出细胞凋亡率亦有时间、剂量依赖性。结论:蜂胶能够抑制喉癌细胞生长,其抑制作用是通过诱导喉癌细胞凋亡而起作用的。     

卵巢浆液性肿瘤的细胞凋亡研究

目的：通过对25例卵巢浆液性肿瘤的细胞凋亡研究,分析其性质与凋亡的关系。方法：用原位末端标记法检测细胞,凋亡,结果：浆液性囊腺瘤凋亡率为10％以下,浆液性囊腺癌凋亡率为38％,凋亡细胞呈灶状分布,无规律性,结论：卵巢浆液性良,恶性肿瘤都存在细胞凋亡,但恶性肿瘤凋亡率相对较高。     

胶质瘤bcl-2基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

据《中华病理学杂志》2000年2月29卷第1期报道 天津医科大学于士柱等,为探讨胶质瘤细胞bcl-2基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性及凋亡程度的关系,以69例不同级别的人胶质瘤组织为研究对象,用原位杂交及免疫组化染色ABC法分别检测bcl-2mRNA、bcl-2蛋白和增殖细胞核抗原(细胞增殖活性标记物)的表达,并用3’末端标记法做原位细胞凋亡检测。     

辛伐他汀选择性抑制慢性髓性白血病细胞增殖并诱导凋亡

目的:探讨胆固醇合成限速酶3-羟3-甲基戊二酰辅酶A (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A , HMG-CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对慢性髓性白血病（chronic myelogenous leukemia , CML）细胞增殖和凋亡的影响。方法:正常骨髓和CML骨髓单个核细胞用10 mg*L－1辛伐他汀处理24 h后,接种于甲基纤维素培养体系中,分析粒单细胞集落刺激因子(colong forming unit-granulocyte macrophage, CFU-GM)集落形成能力。同时,用流式细胞仪测定辛伐他汀处理72 h后正常骨髓和CML骨髓单个核细胞中亚二倍体细胞以及DNA末端标记阳性细胞作为细胞凋亡的指标。结果:辛伐他汀可选择性抑制CML细胞增殖并诱导CML细胞凋亡,而对正常骨髓细胞无明显作用。结论:CML骨髓细胞较正常骨髓细胞对辛伐他汀敏感,表明该制剂作为CML化疗或体外净化进行自体骨髓移植具有潜在的应用价值。     

三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制。方法 采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法，对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究。结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用，MTT显示生长抑制率为76.3%。DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡。流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

DNA片段原位末端标记法分析X刀治疗大鼠C6胶质瘤诱发的细胞凋亡

探讨用ＤＮＡ片段原位末端标记技术研究Ｘ刀治疗大鼠Ｃ６胶质瘤诱发的细胞凋亡。对Ｘ刀治疗的各组动物肿瘤组织发生的细胞凋亡采用经典的ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳和ＤＮＡ原位末端标记法进行了研究。经ＤＮＡ片段原位末端标记法研究发现，Ｘ刀１５Ｇｙ、２０及３０Ｇｙ治疗后在１周内诱发出明显的细胞凋亡，此时的细胞凋亡数与对照组及４０Ｇｙ组相比差异有极显著意义（Ｐ＜０．０１）。这一结果与ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳所得结果完全吻合。另外在４０Ｇｙ组及其它剂量治疗各组均发现有坏死成份，尤以前者明显。利用该法证实Ｘ刀治疗大鼠Ｃ６胶质瘤后诱发出明显细胞凋亡的同时还致细胞坏死，这种致坏死效应随剂量增加渐趋明显。     

姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨姜黄素对人肺腺癌细胞（SPC－A1）抗癌作用机理。方法 采用细胞培养、荧光显微镜、原位末端标记、荧光探测等技术，探讨姜黄素抗癌作用及其机理。结果 ①姜黄素作用于癌细胞后，光镜下可见有细胞脱壁；荧光镜下可见细胞核破碎，细胞裂解成大小不等的凋亡小体；原位末端标记法进一步证实20μM姜黄素作用24h细胞凋亡率达42.67%。②姜黄素作用于癌细胞后，使细胞内Ca^2 、cAMP浓度升高。结论 姜黄素可诱导人肺癌细胞凋亡，其作用机制可能与细胞内Ca^2 、cAMP浓度升高有关。     

实验性变态反应性神经炎周围神经浸润CD4(+)T细胞的凋亡

为探讨实验性变态反应性神经炎(EAN) 中周围神经浸润CD4( + ) T细胞的凋亡,应用免疫组织化学和原位末端标记法动态检测不同发病阶段EAN 大鼠坐骨神经浸润CD4( + ) T 细胞的形态学改变及断裂的DNA 片段。结果发现具有凋亡形态学特征的浸润CD4( + ) T 细胞于免疫后第18 d 出现,在第22 d 达高峰后下降,第30 d 基本消失。原位末端标记法证实凋亡CD4( + ) T 细胞中存在断裂的DNA 片段。提示CD4( + ) T细胞凋亡是EAN 浸润CD4( + ) T细胞的重要清除机制     

大鼠肾切除术后留存肾代偿早期细胞凋亡状态的研究

探讨调控脏器形态稳定的重要因素－细胞凋亡在肾代偿性生长中的作用。方法用荧光染色、ＤＮＡ梯度电泳分析、原位ＤＮＡ片段末端标记等凋亡检测的最新手段，系统研究青、老年大鼠正常肾及代偿肾内细胞凋亡情况的差异。结果青年正常肾无细胞凋亡表现，而老年正常肾皮、髓质小管均有细胞凋亡存在，且皮质凋亡水平高于髓质；青年肾代偿３天时细胞凋亡明显增加，且髓质高于皮质，老年肾代偿３天时，留存肾细胞凋亡水平明显降低，且以皮质降低更为明显。结论凋亡是肾代偿性生长形态学改变的重要组成部分，肾代偿性生长的年龄差异与细胞凋亡有关。