重组人proEMAPⅡ/p43体外抑制新生血管生成活性方法的建立

目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。     

重组人proEMAP Ⅱ/p43蛋白N端和C端结构域的构建及活性鉴定

目的构建表达重组人proEMAPⅡ蛋白N端（p43N）及C端（p43C）结构域,并进行活性鉴定。方法分别在大肠杆菌中表达p43N及p43C蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用血管内皮细胞管腔形成实验及细胞迁移实验进行活性鉴定,并比较等摩尔浓度下,p43蛋白、p43N、p43C及p43N＋p43C的活性差异。结果 p43N及p43C均具有抑制内皮细胞管腔形成和迁移的活性,在等摩尔浓度条件下,p43蛋白的生物活性高于p43N和p43C,p43N活性最弱,但p43N和p43C共同作用时,抑制活性高于单独作用。结论获得具有生物活性的p43N及p43C蛋白,为进一步确定p43N作用机制及其与p43C相互关系奠定了基础。     

p53在调节细胞周期阻滞和细胞凋亡中的作用及其机制

p53作为抑癌基因,在各种应激情况下(包括电离辐射所致DNA损伤、核苷酸缺失、低氧或癌基因激活)调控细胞周期进程和细胞凋亡过程。本文综述了p53及其下游分子在细胞周期和细胞凋亡中的作用,在此基础上探讨p53在选择细胞周期阻滞和细胞凋亡中的影响因素。     

p53蛋白调节射线所致细胞凋亡

细胞凋亡的形态学特证明确，但具体生化过程尚不很清楚。抑癌基因ｐ５３的蛋白产物在射线所致的凋亡中起重要作用，它的作用机制可能与ｐ５３蛋白的①同特异的ＤＮＡ一致顺序结合，激活或抑制某些基因的表达；②使射线损伤的细胞停滞在Ｇ１期和Ｇ２期；③同其它原癌基因的蛋白相互作用，影响细胞寿命等功能相关。     

p63与细胞凋亡的研究进展

p63基因是与p53基因高度同源的肿瘤抑制基因之一,具有与p53基因相似的结构和功能。本文就p63在细胞周期调控和细胞凋亡中作用的研究进展作一综述。     

转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

CX43在应激性溃疡发生发展过程中的表达与细胞凋亡、增殖的关系

探讨细胞间隙连接蛋白43（CX43）在胃粘膜遭受应激损伤的变化及与细胞凋亡，增殖发生的关系。制作大鼠水浸－束缚应激（WRS）模型，采用原位末端标记（TUNEL）法检测WRS结束前后不同的时间点细胞凋亡的发生；免疫组化ABC法原位检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达，原位杂交检测CS43 mRNA表达变化。结果发现，正常大鼠胃粘膜上皮散在TUNEL－细胞，PCNA蛋白主要在胃腺颈部近胃小凹处呈中等阳性表达，CX43 mRNA在胃腺区呈中等阳性表达，WRS 2h-WRS后5h TUNEL-细胞较对照组明显增多，并逐步达高峰，PCNA蛋白和CX43 mRNA的表达明显低于对照组；WRS后8－12h TUNEL-细胞逐渐减少，而PCNA表达高峰，CX43 mRNA表达恢复并明显增加，WRS后24hTUNEL－细胞仍高于正常水平，PCNA及CX43表达基本恢复至正常水平，相关分析，CX43 mRNA表达与PCNA蛋白表达呈显著正相关，结果提示，CX43 mRNA的表达可能与胃粘膜腺细胞区细胞稳定，增殖和分化有关，并影响上皮细胞凋亡发生。     

涎腺肿瘤中增殖细胞核抗原、p53与细胞凋亡关系的研究

 目的 探讨涎腺肿瘤中增殖细胞核抗原(PCNA),p53和细胞凋亡间的关系。方法 采用脱氧核糖核酸末断转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术,免疫组化染色和HE染色对18例多形性腺瘤和52例恶性涎腺肿瘤中PCNA、p53和细胞凋亡进行观察和比较。结果 恶性涎腺肿瘤的凋亡细胞指数和增殖细胞指数明显高于多形性腺瘤(P＜0.05)。结论 在恶性涎腺肿瘤中,增殖细胞和凋亡细胞明显增多且伴有p53的过度表达;PCNA和p53的表达在涎腺肿瘤的发生及恶性转化中起着重要作用。     

三氧化二砷诱导血管内皮细胞凋亡和抑制血管生成的实验研究

 目的研究三氧化三砷(As2O3)抑制人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)生长、诱导凋亡和抑制血管生成的作用.方法As2O3与HUVECs共同孵育一定时间后,观察细胞形态学变化,并用MTT方法测定细胞生长抑制率、TUNEL方法检测细胞凋亡;观测As2O3对鸡胚血管生成的影响.结果在0.75～6 μmol/L浓度范围内随药物浓度增加或作用时间延长,细胞生长抑制和细胞凋亡效果越显著;As2O3作用鸡胚绒毛尿囊膜后血管生成减少.结论As2O3抑制HUVECs生长、诱导细胞凋亡,对血管生成有抑制作用.     

TDP-43对氧糖剥夺诱导的小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 将体外培养的小鼠HL-1心房肌细胞分为：(1)对照组及不同OGD处理时间(2、4、8、16 h)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,以此确定OGD诱导时间点用于后续研究;(2)对照组与OGD组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)相对含量,微板法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量。将转染慢病毒的小鼠HL-1心房肌细胞分为：(1)阴性对照慢病毒干预组(NC-shRNA)、TDP-43敲低慢病毒干预组(TDP-43-shRNA1、TDP-43-shRNA2、TDP-43-shRNA3),Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,选择慢病毒敲低效率最高的TDP-43-shRNA用于后续试验;(2)NC-shRNA组、TDP-43-shRNA组、OGD+NC-shRNA组、OGD+TDP-43-sh...     

黄芩苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的p38MAPK途径研究

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及其对p38MAPK信号通路的影响。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG2细胞共同培养24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;通过活细胞计数,检测不同浓度黄芩苷处理后细胞活力的变化;采用western blotting方法检测黄芩苷处理72 h后HepG2细胞p38和p-p38蛋白的表达变化。结果黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,并随药物作用时间的延长和药物浓度的增加,其抑制效果越明显;通过对活细胞计数发现黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,随黄芩苷浓度的增加,细胞存活率下降,细胞增殖速度明显减缓;在黄芩苷处理72 h后p38蛋白表达兀明显变化,而p-p38蛋白表达上调且随黄芩苷浓度升高蛋白表达升高。结论黄芩苷可能通过激活p38MAPK信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

DNA损伤修复与细胞凋亡

：细胞ＤＮＡ的损伤修复是影响细胞存活和死亡的主要原因，细胞缺乏修复能力，其辐射敏感性就会增加。近年来，ＤＮＡ损伤修复的机制已被逐步阐明。本文介绍ＤＮＡ损伤修复和细胞凋亡发生的机制及其与细胞周期、细胞增殖关系的研究进展。     

携带凋亡素的重组腺病毒激活AMPK诱导人膀胱癌EJ-1细胞S期阻滞

目的 探讨携带凋亡素(Apoptin)的重组腺病毒Ad-VT对人膀胱癌EJ-1细胞的杀伤作用及其细胞周期调节机制.方法 取对数生长期的EJ-1细胞分别给予不同感染剂量的腺病毒载体对照(Ad-T)或Ad-VT处理,通过CCK-8法和克隆形成实验检测Ad-T和Ad-VT对EJ-1细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测细胞周期分...     

重组人血管内皮抑素诱导大鼠心肌细胞凋亡的体内实验研究

目的探讨重组人血管内皮抑素(rh-ES)对大鼠心肌的毒性作用及其可能机制。方法 24只成年雌性Wistar大鼠随机分为rh-ES低、中、高剂量组[分别予3、6、12mg/(kg·d)rh-ES腹腔注射]及对照组(腹腔注射等体积生理盐水),每组6只。各组在第4周和第8周末次给药后采用脊椎脱臼法分别处死3只大鼠,在光镜及电镜下观察病理形态学及超微结构改变,TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况,CD34标记内皮细胞免疫组化法检测大鼠心肌组织的微血管密度(MVD)改变。结果光镜及电镜下对照组和低、中剂量组无明显心肌损伤的病理形态及超微结构改变。高剂量组光镜下可见心肌损伤的病理形态及超微结构改变。TUNEL法检测显示,给药8周后中剂量组和高剂量组凋亡指数明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.033、P=0.000),其中高剂量组凋亡指数最高。心肌组织微血管计数提示,给药4周及8周后高剂量组(MVD)增加,显著高于对照组(P<0.05)。结论 rh-ES对大鼠心肌细胞具有毒性作用,细胞凋亡机制参与了心肌损伤的病理过程。     

缝隙连接蛋白43在X射线诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及机制研究

目的 研究缝隙连接蛋白43（Cx43）在X射线致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡中的作用并探讨其机制。方法 采用流式细胞术检测10 Gy X射线照射后48~96 h以及不同剂量X射线照射后72 h HUVEC细胞凋亡的变化。Western blot检测0、5、10、20 Gy X射线照射后72 h HUVEC中Cx43和cleaved caspase-3蛋白的表达。采用RNA干扰技术使细胞Cx43表达沉默,或转染Cx43高表达质粒使Cx43过表达。流式细胞术和Western blot分别检测Cx43沉默和过表达对受照HUVEC凋亡的影响以及cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化。结果 X射线照射后48~96 h HUVEC凋亡增加并且呈现剂量依赖性。在0~20 Gy范围内,Cx43表达随剂量增加而降低,cleaved caspase-3表达随剂量增加而增高。Cx43沉默组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显高于无意义序列组（t=3.674、6.375,P<0.05）;Cx43过表达组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显低于空载体组（t=9.399、11.190,P<0.05）;Cx43沉默组较无意义序列组cleaved caspase-3表达增强,而过表达组低于空载体组。结论 Cx43通过调控cleaved caspase-3活化,抑制HUVEC细胞凋亡,从而对X射线照射的HUVEC细胞发挥保护作用。     

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子和p53的表达及其与血管生成的关系

目的:探索血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与微血管密度(MVD)和p53之间的关系。方法:利用免疫组织化学技术对65例非小细胞肺癌组织进行VEGF、p53表达和肿瘤组织微血管密度检测。结果:65例NSCLC患者癌组织平均MYD为31.44±15.79,VEGF蛋白阳性表达率为83.1％,p53蛋白阳性表达率55.4％。10例正常肺组织平均MVD为13.71±4.12,明显低于癌组织,P<0.01。在转移癌组织中MVD显著性高于无转移癌组,P<0.01;ⅢA-B期癌组织中MVD也显著高于Ⅰ期和Ⅱ期,P<0.01。NSCLC中。VEGF、p53蛋白表达显著高于正常肺组织,P<0.05。两者阳性表达都与患者的NSCLC淋巴结转移、TNM分期呈正相关,P<0.01,与年龄、肿瘤大小无关,P>0.05。结论:在组织血管生成过程中,突变的p53可能通过调节VEGF的表达发挥作用。     

p53凋亡刺激蛋白2在HepG2215细胞中通过抑制自噬来发挥抗乙型肝炎病毒的作用

目的 研究p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)对乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）和乙型肝炎E抗原（hepatitis Be antigen,HBeAg）表达的影响。方法 HepG2.215细胞用3-甲基腺嘌呤处理来抑制自噬,或用人ASPP2重组腺病毒感染来诱导ASPP2过表达,或转染GFP-LC3质粒后观察绿色LC3-Ⅱ颗粒（自噬标志物）的变化。酶联免疫吸附测定检测培养上清和胞内HBsAg和HBeAg的水平、免疫荧光检测LC3-Ⅱ颗粒的水平、免疫印记检测自噬相关蛋白的水平、免疫沉淀检测ASPP2与自噬相关蛋白的结合。结果 ASPP2过表达明显下调了绿色LC3-Ⅱ颗粒的水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比例、以及明显上调p62的水平,说明ASPP2过表达可抑制HepG2.215细胞的自噬。但是ASPP2并非通过抑制Atg5、Atg14和Beclin-1等自噬相关基因的表达来抑制自噬,而是通过与Atg14结合来抑制Atg14与Beclin-1的结合,阻断自噬体膜的形成,从而抑制自噬。抑制自噬和ASPP2过表达均导致培养上清和细胞内的HBsAg和HBeAg水平明显下调,表明在Hep2.215中,ASPP2通过抑制自噬来抑制HBsAg和HBeAg的产生。结论 ASPP2通过抑制自噬的作用具有抗乙型肝炎病毒感染的潜力。     

异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的：观察异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞的增殖周期及凋亡的影响。方法噻唑蓝（Mar）法检测异鼠李素对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测异鼠李素对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。结果MTr结果提示异鼠李素对人肝癌细胞的增殖有明显抑制作用,并随着作用浓度的增大,抑制作用逐渐增强,以100mg／L的异鼠李素培养基抑制作用最明显。流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,提示异鼠李素有诱导入肝癌细胞凋亡作用。异鼠李素可通过诱导人肝癌细胞凋亡并将细胞阻滞在G0—G1期,使细胞不能进入s期进行DNA合成,最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论异鼠李素抑制人肝癌细胞的增殖。阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,可能具有一定抗肝癌作用。     

~(60)Coγ射线照射诱导人卵巢癌细胞凋亡及细胞周期的改变

目的　探讨6 0 Coγ射线照射对人卵巢癌细胞株A2 780及其顺铂耐药株A2 780 CP体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法　采用四甲基偶唑蓝 (MTT)比色法分析不同辐照剂量 (1～10Gy)对A2 780及A2 780 CP两种细胞株体外生长的影响 ,用流式细胞术 (FCM)比较两者辐照后凋亡及细胞周期的变化。结果　 (1) 1～ 10Gy6 0 Coγ射线照射引起A2 780细胞株明显的生长抑制和凋亡 ,而A2 780 CP细胞则表现出明显的辐照抗性 .(2 ) 6Gy6 0 Coγ射线照射后 6～ 48hA2 780细胞呈现G1 期细胞阻滞和S期细胞比例下降 ,A2 780 CP细胞则呈G1 期细胞比例减少和S期细胞比例增加。结论卵巢癌耐药细胞具有辐射抗性和特征性的细胞周期变化 ,流式细胞术测定辐照诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化可预测恶性肿瘤细胞的辐射敏感性。     

miR-218-5p抑制NRAS表达调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡

目的 探究miR-218-5p靶向调控NRAS基因表达在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 qRT-PCR和Western blot分别检测组织和细胞中miR-218-5p和NRAS的表达。取NSCLC细胞A549进行分组和转染：Blank组、NC组、miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组、si-NRAS组、oe-NRAS组、miR-218-5pmimic+oe-NC组和miR-218-5pmimic+oe-NRAS组。荧光素酶报告实验验证miR-218-5p与NRAS基因的靶向关系。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-218-5p在NSCLC组织及NSCLC细胞株中呈低表达,而NRAS呈高表达（均P<0.05）。与Blank组、NC组比较,miR-218-5p mimic组NSCLC细胞增殖活力降低,凋亡率上升（均P<0.05）;miR-218-5p inhibitor组NSCLC细胞增殖活力增高,凋亡率下降（均P<0...