表达内皮抑素基因的内皮祖细胞治疗肝癌的初步研究

目的:观察内皮抑素(endostatin,ES)基因转染的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对小鼠肝癌细胞H22增殖的影响,探讨联合自体EPCs和ES基因治疗肝癌的可行性和有效性?方法:构建表达ES基因的慢病毒载体,培养小鼠骨髓源EPCs,运用qPCR检测培养内皮细胞表面标记CD31?血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)?血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)表达,电镜观察内皮细胞特征小体?实验分EPCs组?EPCs+LV空病毒载体组?EPCs+ES组?CCK-8法检测各组细胞增殖的情况?同时构建原位肝癌小鼠模型,尾静脉注射3组细胞后不同时间点处死小鼠,测量肿瘤大小并进行统计分析?结果:①酶切和测序?PCR鉴定证实成功构建慢病毒载体pLenti6.3-ES-Monomer-DsRed;②qPCR显示培养细胞表达内皮细胞标志CD31?VEGFR?vWF,透射电镜下在细胞质内可见多个散在内皮细胞特征性Weibel-Palade小体(WP小体);③慢病毒载体Lenti6.3-ES-Monomer-DsRed转染小鼠骨髓源性EPCs后荧光显微镜下可见细胞呈红色荧光;EPCs+ES组细胞上清较对照组上清液对小鼠肝癌细胞H22体外增殖具有明显抑制作用,体内实验显示EPCs+ ES组肝癌生长速度慢于对照组?结论:小鼠骨髓源单个核细胞体外可以诱导培养为内皮祖细胞,负载ES基因的EPCs体外可以抑制小鼠肝癌细胞H22的增殖,体内可以抑制小鼠肝癌生长?     

新型复方制剂斑晓胶囊对内皮祖细胞刺激活化的影响

目的：观察新型复方制剂斑晓胶囊对小鼠骨髓源性内皮祖细胞（ endothelial progentor cells, EPCs）的刺激活化作用。方法以不同浓度的斑晓胶囊制剂处理小鼠骨髓源性EPCs细胞后,用CCK－8法检测细胞增殖,采用流式细胞术的方法鉴定内皮祖细胞表面抗原CD－34、VEGFR－2的表达,采用Transwell法检测EPCs迁移功能,采用Western blot法检测Bcl－2／Bax蛋白水平的变化。结果在所设加样量范围内,斑晓胶囊低剂量组和高剂量组与对照组相比,鼠源性EPCs的生长增殖能力增强（P＜0．05）,CD－34及VEGFR－2双阳性表达逐渐增多（P＜0．05）,Bcl－2蛋白水平上升,Bax蛋白水平下降,并呈浓度依赖性。结论斑晓胶囊可促进小鼠骨髓源性EPCs的增殖,其机制可能与通过提高Bcl－2／Bax比值,抑制细胞凋亡有关。     

CD/5-FC自杀基因治疗系统体外杀伤恶性人脑胶质瘤细胞作用的研究

目的：探讨胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶（CD/5-FC）自杀基因治疗系统对恶性人脑胶质瘤细胞的杀伤作用。方法：采用Lipofectamine2000脂质体介导法将CD基因转染U251恶性人脑胶质瘤细胞,G418筛选获得抗性克隆（取名为U251/CD细胞）,使用不同浓度的5-FC作用于U251/CD细胞,MTT法测定活性细胞比率。采用高效液相色谱法（HPLC）检测5-FC培养液内5-FU的浓度。结果：U251细胞获得了质粒的成功转染。基因转染使G418抗性细胞（U251/CD细胞）对5-FC高度敏感。未转染的U251细胞对5-FC不敏感,IC50 约为6 500 μmol/L,而转染基因后 IC50 约为10 μmol/L。并且加入不同浓度的5-FC后,U251/CD细胞培养液内均能检测到5-FU。结论：5-FC对CD基因修饰U251细胞具有杀伤作用;为胶质瘤基因治疗的在体研究提供依据。     

Fe3O4磁性纳米颗粒/CD/5-FC系统对U251细胞化疗作用

目的：建立以Fe3O4磁性纳米颗粒（Fe3O4,MNP）/胞嘧啶脱氨酶（CD）/5-氟胞嘧啶（5-FC）系统为基础的神经系统胶质瘤治疗方法.方法：利用高温分解铁有机物法以2-吡咯烷酮和乙酰丙酮铁为原料制备出Fe3O4 MNP,用γ-氨丙基三乙氧基硅烷对磁性材料进行表面修饰.以Fe3O4 MNP为载体将CD基因转染U251胶质瘤细胞,检测Fe3O4 MNP对质粒pCMVCD的结合与保护能力.通过RT-PCR,Western Blot法和免疫荧光等方法检测CD基因在U251细胞的表达.噻唑蓝（MTT）法检测5-FC化疗后U251-CD细胞生长曲线的变化.结果：制备出粒径为（10±2）nm的Fe3O4 MNP;使用Fe3O4 MNP作为载体将CD基因成功转染U251细胞;脂质体转染组转染率为（39.23±12.12）%,而示Fe3O4 MNP转染组转染率为（67.35±11.19）%,2组相比较差异显著（P〈0.01）.Fe3O4 MNP作为载体转染的U251-CD细胞CD基因稳定表达,并呈时间相关性增强表达模式;U251-CD细胞加入5-FC后能显著抑制U251细胞生长.结论：Fe3O4 MNP可作为胶质瘤基因治疗的理想载体;Fe3O4 MNP/CD/5-FC系统可作为脑胶质瘤辅助治疗手段之一.     

人VEGF166基因转染兔骨髓内皮祖细胞及对其增殖的影响

目的探讨人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染兔骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对EPCs增殖的影响。方法体外分离、培养、扩增并鉴定EPCs,脂质体介导转染携带增强型绿色荧光蛋白标记的VEGF166质粒、空白质粒,同时经ELISA法检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,并采用CCK-8法检测对其增殖的影响。结果FITC标记剂豆凝集素I和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白荧光双染证实正在分化的EPCs,同时经免疫组化法证实VEGF受体2FLk-1和VIII因子的表达;VEGF165质粒转染组EPCs上清液中表达VEGF166,VEGF165转染EPCs的转染率约22．5％;hVEGF165基因转染促进EPCs增殖。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,且可促进EPCs的增殖,为基因治疗血管性疾病提供了动物实验基础。     

含CD基因的腺病毒载体制备及体外抑瘤效果观察

目的：制备含胞嘧啶转氨酶（CD）基因的重组腺病毒（Ad-CD)并进行体外肿瘤的自杀基因治疗。方法：构建含CD或LacZ基因的重组腺病毒载体。在293细胞内重组包装后,体外感染小鼠结肠癌细胞株C26,并给予不同浓度的前药氟胞嘧啶（5-FC）进行肿瘤杀伤效果观察。结果：重组腺病毒载体构建成功。用制备的Ad-CD液感染C26细胞,并予以不同浓度5-FC后,肿瘤细胞生长受不同程度抑制,而对照组细胞和原位转LacZ基因的C26细胞的生长未出现明显的变化。结论：应用腺病毒载体转CD基因进行体外肿瘤治疗效果明显,为自杀基因应用于体内结肠癌的基因治疗研究奠定基础。     

靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达 对HepG2 肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG2 肝癌细胞体外增殖与凋亡的影响。 方法 利用基因重组技术构建PDCD5-Caspase-3 融合基因,克隆到带有EGFP 基因的GV358 慢病毒表达载 体,与辅助质粒共同转染293T 细胞,通过同源重组,获得融合基因重组慢病毒PDCD5-Caspase-3。体外 转染人肝癌HepG-2 细胞72 h 后,Western bolt 检测肝癌HepG-2 细胞中PDCD5 蛋白和Caspase-3 蛋白表 达,CCK-8 法检测PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG-2 肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术观察其 对细胞凋亡的影响。结果 PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达可增加HepG-2 肝癌细胞中PDCD5 蛋白和 Caspase-3 蛋白合成（P <0.05）;与对照组或空白组相比,转染72 h 后实验组细胞增殖能力下降（P <0.05）; 与对照组或空白组比较,转染72 h 后实验组细胞凋亡率增加（P <0.05）。结论 促凋亡基因PDCD5 和 Caspase-3 联合表达可抑制HepG2 肝癌细胞增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌治疗潜在靶点。     

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶对小鼠肝癌H22细胞株的抑制作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）对小鼠肝癌H22细胞株的抑制作用,为提高治疗肝癌的临床效果、降低毒性和克服耐药提供实验依据.方法：采用MTT法检测不同浓度（终浓度为0.5、1.0、2.0 μg/mL）的As203、5-FU（终浓度为20 mg/L）和以上各浓度As203联合5-FU体外作用于小鼠肝癌H22细胞24、48、72 h后对细胞增殖的影响,并计算细胞生长抑制率和两药物相互作用系数（CDI）;采用TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡,观察各组细胞凋亡情况并计算凋亡率.结果：体外As2O3或5-FU单药对小鼠肝癌H22细胞有显著抑制增殖及诱导凋亡的作用,并呈一定的时间、浓度依赖性.As203联合5-FU对小鼠肝癌H22细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用较同时间内相应单药组效果明显提高.计算两药CDI值,各浓度As2O3与5-Fu联合作用H22细胞24和48 h时,均为CDI＜1,作用72 h时,均为CDI=1,说明两者在48 h内具有协同作用,72 h时为相加作用.结论：体外As203和5-FU对小鼠肝癌H22细胞有明显地抑制增殖和诱导凋亡作用,并且呈时间和剂量依赖性;联合应用较单药效果明显增强,在48 h内两药具有协同作用,72 h时两药作用相加.     

融合型自杀基因系统Fcy：：Fur／5-FC对人肝癌细胞株HepG2体外杀伤作用的初步研究

目的研究融合型自杀基因Fcy：：Fur联合5-氟胞嘧啶（5-Fc）对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。方法应用脂质体介导法将Fcy：：Fur基因转染人人肝癌细胞株HepG2,经G418筛选2周后行有限稀释法获得稳定表达Fcy：：Fur基因的单克隆细胞。5-Fc处理后,通过MTF法和AnnexinV—FITC＋PI双标记染色法,检测Fcy：：Fur／5～FC自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的细胞增殖及凋亡的影响。结果MqT法检测显示稳定表达Fcy：：Fur基因的HepG2单克隆细胞经5-Fc处理后,在1、2、3、4、5天时对细胞的增殖有明显抑制作用。AnnexinV—FITC＋PI双标记染色法检测细胞凋亡率：1天为5．74％,2天为11．04％,3天为17．56％;PBS处理的细胞凋亡率：1天为3．67％,2天为3．68％,3天为4．42％,凋亡率无明显改变。结论Fcy：：Fur／5-FC自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的增殖有明显的抑制作用,并可促进肿瘤细胞凋亡。     

转染肿瘤细胞总RNA的树突状细胞联合CIK细胞抗小鼠肝癌作用的实验研究

目的探讨转染小鼠肝癌H22细胞总RNA的树突状细胞(DC)疫苗体外抗小鼠肝癌的免疫作用。方法提取小鼠四肢长骨骨髓,在rmGM-CSF和rmIL-4体外刺激下增殖分化为DC。制备小鼠脾淋巴细胞,在体外经rmIFN-γ、anti-CD3、rmIL-2和rmIL-1b诱导成为细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK细胞)。制备肝癌H22细胞总RNA,体外转染DC,流式细胞仪检测转染前后的DC表面分子的表达情况。将转染H22细胞总RNA的DC和CIK细胞混合培养制备成为效应细胞,LDH释放法测定效应细胞对小鼠H22细胞、S180细胞的杀伤活性。结果经H22细胞总RNA转染后的DC,其MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子及CD83、CD86表达率明显增高,CD14表达率降低(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其对S180细胞的杀伤率(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其他各组效应细胞对H22细胞的杀伤率(P<0.05)。结论转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞具有高效而特异性的体外抗小鼠肝癌免疫作用。     

CD69分子在肿瘤抗原体外活化H22肝癌腹水瘤小鼠脾淋巴细胞的表达

目的：探讨H22肝癌腹水瘤小鼠淋巴细胞在多克隆激活剂刀豆蛋白A（ConA）、H22肝癌细胞肿瘤抗原刺激下,体外活化细胞表面分子CD69的表达,判定肿瘤进行性生长时和后期机体的免疫状态。方法：将H22肝癌细胞接种于BALB/C小鼠腹腔,建立H22肝癌腹水瘤模型。观测成瘤率、平均体重;利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期活化标志-活化细胞表面分子CD69,在分别加入10%FBS的RPMI-1640完全培养液、ConA（终浓度为10ug/mL）、H22肿瘤抗原（2×106cells/mL）刺激物刺激下的表达情况。结果：接种H22肝癌腹水瘤的成瘤率100%,H22肝癌腹水瘤组平均体重为（32.03±3.44）g,生理盐水对照组无肿瘤生成,平均体重为（19.15±1.14）g,两组差异有显著性（t=7.12,p=0.00）。荷瘤鼠体重变化随时间推移呈对数增长,而对照组呈平缓增长,两因素方差分析,荷瘤鼠与非荷瘤对照组之间差异有显著性（F=5.71,p=0.05）,不同天数的体重差异有高度显著性（F=63.15,p=0.00）。荷瘤鼠脾T细胞的CD69分子体外活化率分别为（7.59±8.68,19.42±12.57,5.38±8.24）%,对照组脾T细胞的CD69分子体外活化率分别为（15.81±9.92,44.96±13.84,15.18±9.15）%,荷瘤鼠CD69分子体外活化率无论RPMI-1640组、ConA组,还是H22肿瘤抗原组,均比对照组的RPMI-1640组、ConA组、H22肿瘤抗原组明显降低,经多因素方差分析,差异有显著性（F=9.20,p=0.01）。结论：在肝癌感染后期,荷瘤鼠T细胞的CD69分子体外活化明显降低,机体免疫功能受到抑制。     

pAdKDR/CD/TK自杀基因系统对大肠癌SW480细胞体外杀伤作用的实验研究

目的研究腺病毒介导的KDR/CD/TK双自杀基因系统对大肠癌SW480细胞的杀伤作用。方法构建pAdKDR/CD/TK重组腺病毒,采用不同感染复数（MOI）的重组腺病毒感染大肠癌SW480细胞、ECV304细胞及LS174T细胞,再加入不同浓度前药（GCV、5-FC）培养后,以MTT法检测细胞生长抑制率,观察重组腺病毒联合GCV和5-FC对大肠癌SW480细胞、ECV304细胞和LS174T细胞的杀伤作用,了解前药GCV、5-FC、GCV/5-FC对3种细胞的杀伤作用及KDR启动子的靶向杀伤作用。结果 pAdKDR/CD/TK重组腺病毒对3种细胞具有相似的感染率,感染腺病毒的3种细胞中除LS174T细胞外,均检测到目的基因的表达。当转基因细胞的比率为50%时,SW480和ECV304细胞分别有（31.3±5.64）%、（33.5±5.4）%的存活,而LS174T细胞存活率仍为（98.1±0.95）%（P均〈0.01）。单用GCV浓度为80μg/ml时,SW480细胞、ECV304细胞、LS174T细胞的生存率分别为（45.6±6.5）%、（45.9±5.4）%、（99.5±4.7）%,单用5-FC浓度为1000μg/ml时,三者生存率分别为（40.4±5.8）%、（45.3±4.7）%、（97.0±6.2）%,联合用药（80μg/ml＋1000μg/ml）时,三者生存率分别为（20.5±0.46）%、（25.6±1.33）%、（97.3±3.96）%。联合用药分别与GCV及5-FC单独用药生存率比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。提示单独应用GCV及5-FC对SW480细胞、ECV304细胞有较强的杀伤作用,联合用药效果更佳。结论含KDR启动子的融合基因,具有选择性杀伤作用。前药GCV、5-FC对转染融合基因的大肠癌SW480细胞具有体外抑制作用,且有较强的旁观者效应。     

CD4^＋ iNKT细胞在实验性变应性鼻炎发病中的作用

目的探讨实验性变应性鼻炎发病过程中CD4^＋iNKT细胞浸润情况。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为变应性鼻炎组（A组）和对照组（B组）。比较2组小鼠变应性鼻炎症状评分、鼻黏膜嗜酸粒细胞（EOS）计数、鼻黏膜组织形态,免疫酶标技术检测各组鼻黏膜CD4^＋ iNKT细胞的浸润,流式细胞技术（FCM）检测鼻腔黏膜中的CD4^＋ iNKT细胞。并进行比较分析。结果（1）A组症状评分（7.3±1.0）分较B组（0.7±0.6）分明显增高（P〈0.01）。（2）A组EOS计数（7.5±1.2）个/HP较B组（0.4±0.5）个/HP明显增高（P〈0.01）。（3）HE染色见A组纤毛结构大量脱落,组织水肿,小血管增生,黏膜上皮下固有层EOS、淋巴细胞浸润;B组纤毛结构完整,无明显EOS浸润。（4）A组鼻黏膜下有多量的CD_4和NK1.1双阳性染色细胞,即CD4^＋ iNKT细胞;B组仅见少量的CD4^＋细胞。（5）A组鼻黏膜CD4^＋ iNKT细胞阳性率（72.6%±7.9%）明显高于B组（0.49%±0.01%）（P〈0.01）。结论变应性鼻炎小鼠鼻腔黏膜有大量的CD4^＋ iNKT细胞浸润,其数量远远超过CD4^＋T细胞。     

5-杂氮-2＇-脱氧胞苷对肺癌细胞小分子RNA let-7a-2表达的影响

目的：观察去甲基化药物对人肺癌A549和H1299细胞增殖、凋亡以及小分子RNA let-7a-2表达的影响.方法：以不同浓度的5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（DAC）对肺癌细胞进行处理后,CCK-8检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-PI双染法检测对细胞凋亡的影响,qRT-PCR对let-7a-2的表达进行检测.结果：A549和H1299细胞经不同浓度DAC处理后细胞增殖受到明显抑制,以60μM浓度DAC处理后d5抑制率分别为（40.80±6.50）％和（47.24±4.95）％（均P＜0.05）,同时细胞呈现显著性早期凋亡,凋亡百分比分别达（64.58±4.21）和（59.61±5.69）（均P＜0.05）.20μM、40μM、60μM DAC处理后let-7a-2的表达量在A549中分别为（10.86±0.30）、（5.02±2.83）、（17.79±1.95）,比对照组（1.12±0.24）显著上调;在H1299中分别为（55.13±5.69）、（35.67±4.13）、（14.94±2.46）,比对照组（1.31±0.56）显著上调.结论：DAC处理可抑制肺癌A549和H1299细胞增殖、促进细胞凋亡,上调let-7a-2的表达,let-7a-2基因调控区域超甲基化可能是其在肺癌细胞中表达异常的机制之一.     

系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的研究

目的：测定系统性硬皮病患者外周血中的内皮祖细胞（endothelial progenitors cells,EPCs）数量和增殖、迁移、黏附功能,探讨EPCs在其发病中的作用。方法：系统性硬皮病患者和健康者各20例。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并培养,流式细胞仪检测CD133^＋、CD34^＋或CD133^＋、VEGFR2^＋双荧光标记的EPCs数。MTT比色法、Millicell小室和黏附能力测定实验分别检测EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果：系统性硬皮病患者外周血EPCs数为（0．10±0．09）％,健康对照组为（0．49±0．09）％,P〈0．01,系统性硬皮病患者外周血EPCs数较健康者减少。实验组外周血EPCs增殖、迁移和黏附能力分别为（13．01±4．33）％、（7．20±3．67）个／视野和（15．20±4．40）个／视野,健康对照组分别为（23．28±4．34）％、（14．15±2．98）个／视野和（24．80±3．58）个／视野,两组比较,P值均〈0．01,实验组EPCs增殖、迁移和黏附能力均较对照组有所下降。结论：系统性硬皮病患者外周血EPCs数量减少,增殖、迁移和黏附功能降低,可能参与了系统性硬皮病的发病。     

吡格列酮对外周血内皮祖细胞数量与增殖能力的影响

目的观察吡格列酮对外周血内皮祖细胞（EPCs）数量与增殖能力的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种于包被人纤维连接蛋白的培养板上,培养14d后收集贴壁细胞,加入不同浓度（10^-6、10^5、10^-4、10^-3mmol／L）UE格列酮分别培养24、48、72h,同时采用激光共聚焦显微镜鉴定,FITC—UEA—I和Dil—acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,并在倒置荧光显微镜下计数;后采用MTT比色法观察EPCs的增殖能力。结果在作用48h后,不同浓度的吡格列酮均增加了外周血EPCs数量和增殖能力;10^-5mmol／L毗格列酮作用48h时影响最为显著,EPCs数量和增殖能力（分别为54．0±2．9和0．593±0．033）明显高于对照组（分别为30．0±31和0．178±0.018）,差异均有统计学意义（均P〈0．01）.结论吡格列酮可增加EPCs数量并改善EPCs的增殖能力。     

脂质体介导的CD/5-FC自杀基因体系协同干扰素体内抑瘤及旁观者效应的观察

OBJECTIVE: To study the antitumor and distant bystander effects of cationic liposome-mediated cytosine deaminase (CD)/5-fluorocytosine (5-FC) suicide gene system combined with interferon-gamma (IFN-gamma) in vivo. METHODS: Murine hepatoma 22 (H22) cells transfected by CD gene were inoculated subcutaneous in Kunming mice in the left axillary region, and the H22 cells without CD gene transfection were inoculated in the right axillary region. The mice were randomly divided into 4 groups and treated with normal saline , 5-FC, IFN-gamma, and 5-FC+ IFN-gamma on a daily basis. The tumor inhibition and distant bystander effects were observed in the mice. RESULTS: Exposure of CD gene-transfected tumor to 5-Fc resulted in obvious tumor growth inhibition with an inhibition rate of 78.38%, which was significantly increased to 93.21% (P<0.01) with 5-Fc +IFN-gamma treatment. A notable distant bystander effect in the CD/5-FC suicide gene system was observed in vivo, with a tumor inhibition rate of was 54.42%; when combined with IFN-gamma, the inhibition rate increased significantly to 87.57% (P<0.05). CONCLUSION: When combined with IFN-gamma, CD/5-FC suicide system has stronger anti-tumor and distant bystander effects. CD/5-FC suicide gene system combined with IFN-gamma may provide a potential therapy for malignant tumors.     

3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响

目的：研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对耐5-氟尿嘧啶（5-Fu）结肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响,探讨自噬抑制剂在逆转结直肠癌耐药中的作用。方法：浓度递增筛选法诱导耐5-Fu（100kig／L）的SW480细胞株,用10umol／L浓度的3一MA处理后,再用5-Fu（浓度200μg／L）作用24h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,丹酰戊二胺（MDC）染色和电镜检测细胞自噬活性变化。结果：3-MA对耐药细胞自噬活性的抑制率达89．7％,增殖抑制率为9．6％,凋亡率为5．7％,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。经3-MA处理后,5-Fu对耐药SW480细胞增殖抑制率达71．6％±2．9％,凋亡率达36．6％土2．9％,而单用5-Fu细胞增殖抑制率仅为23．6％±2．9％,凋亡率仅为10．3％±2．5％,3-MA预处理后5-Fu对耐药细胞的增殖抑制率及凋亡率均明显增强（P〈0．05）,自噬泡数量显著减少,自噬活性明显降低（P〈0．05）。结论：3-MA单用时仅有较弱的抗肿瘤作用,与5-Fu联用时耐药细胞的增殖及自噬活性被显著抑制,增强了SW480耐药细胞对5-Fu的敏感性,提高了化疗效果。     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞,同时设无义对照组(转染无义siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用MTT法检测...     

人腺病毒介导白细胞介素24对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能影响的研究

目的研究腺病毒介导白细胞介素24（Ad—hIL-24）基因对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对免疫功能的影响。方法取16只BALB／C小鼠，其中4只未致瘤，12只BALB／C小鼠致瘤后随机分为3组：PBS组、5-氟脲嘧啶（5-Fu）组和Ad—hIL-24组。PBS组和Ad—hIL-24组（×10^7pfu）隔日用药，共注射5次；5-Fu组注射5-Fu，20μg／kg，连续注射5d，停药2d后，再连续注射5d。2周后，称质量，眼眶取血，处死后取瘤体、脾脏、胸腺，检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、白细胞总数及淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞数。结果Ad-hIL-24组与5-Fu组的抑瘤率分别为45．08％和52．11％，两者抑瘤效果差异无统计学意义（P〉0．05），而与PBS组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与5-Fu组相比，Ad—hIL-24组的胸腺指数、脾脏指数、外周血白细胞总数、淋巴细胞及单核细胞数均增加，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与正常未致瘤组比较，Ad—hIL-24组中性粒细胞显著增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad-hIL-24可以抑制小鼠H22肝癌的生长，并对机体免疫功能无抑制作用。