苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性

目的 探讨苦参碱提高ABCG_2~(High)[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制.方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG_2~(High)CNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG_2~(High)CNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性.结果 ABCG_2~(High)CNE2/DDP细胞分离后ABCG_2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3~-CD16~+CD56~+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%.在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%.处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000).结论 苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism underlying the effects of matrine in enhancing the cytotoxic sensitivity of CNE2/DDP cells highly expressing ATP-binding cassette superfamily G member 2(ABCG_2~(High) to allogenic natural killer (Allo-NK、cells.Methods ABCGr2~(High) CNE2/DDP cells and Allo-NK cells were isolated by magnetic activated eell sorting (MACS).Flow cytometry was used to evaluffte the purity of the isolated cells and the expression of NKG2D ligands on thetarget cells before and after incubation with matrine.The cytotoxic sensitivity of the treated and non.treated ABCG_2~(High)CNE2/DDP cells to Allo-NK cells was measured by LDH releasing assay. Resuits The expression rate of ABCG2 was (9 1.40±.-321%in ABCG_2~(High),CNE2/DDP cells. More than 90% of the isolated NK cells were identified to be CD3~-cD16~+CD56~+ cells.The expression rates of MICA,MICB,ULBP1,ULBP2,and ULBP3 on the target cells incubated with matrine increased from(2.92±0.33)%,(4.27±0.33)%,(5.80±0.62)%,(11.10±3.15)%,and(7.75±1.14)% to(11.30±0.89)%,(14.29±2.61)%,(12.56±1.06)%,(43.24±4.43)%,and(12.77±1.06)%,respectively.At the E:T ratio of 10:1 and 20:1,the cytotoxic sensitivity of ABCG2High cells to Allo-NK cells increased from(15.32±1.34)% and (27.26±6.81)% in un-treated cells to(28.53±1.37)% and(42.72±2.80)%in matrine-treated cells,respectively,showing significant differences in the cytotoxic sensitivity of the target cells in both groups produced by matrine treatment(F=29.05,P=0.000).Conclusion Matrine can up-regulate the expressions of NKG2D ligands (MICA/B and ULBP 1-3)in ABCG_2~(high) nasopharyngeal carcinoma cells,which results in increased cytotoxic sensitivity of the cells to Allo-NK cells.     

ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的检测肿瘤干细胞标记物ALDH1和ABCG2在人肾透明细胞癌中的表达情况,探讨二者相关性及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化法检测78例肾透明细胞癌及30例癌旁正常肾组织中ALDH1和ABCG2的表达,结合临床病理资料进行关性联分析。结果 ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌组织中的表达明显高于正常肾组织(P<0.05);ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的阳性表达与肿瘤的病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者性别、年龄及肿瘤直径无关(P>0.05)。结论 ALDH1、ABCG2的表达可能在肾透明细胞癌的发生、发展中起着重要的作用。     

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporer G2,ABCG2)基因在食管癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测44例原发性食管癌患者的癌组织、癌旁组织(距离癌2cm)及食管切缘正常黏膜(距离癌5cm以上)ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在食管癌原发灶组织中有较高程度的表达,其表达量为0.77±0.11,而正常食管黏膜中的表达量为0.66±0.12;其在食管癌中的表达显著高于正常黏膜(P<0.01)。ABCG2在低分化鳞癌中的表达显著高于中-高分化鳞癌(P<0.05)。食管癌中ABCG2在年龄和性别间表达无显著性差异(P>0.05)。结论ABCG2在食管癌组织中高表达可能在某种程度上参与了食管癌原发性耐药及化疗中多药耐药的形成。其可作为一种新的引起多药耐药的分子,指导临床上食管癌的化疗。     

青蒿琥酯与阿霉素联用对人食管癌细胞生长及凋亡的影响

目的 探讨青蒿琥酯(AS)与阿霉素(ADM)联合应用对人食管癌细胞Ec9706生长及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 应用流式细胞仪检测AS与ADM联合应用前后人食管癌细胞Ec9706凋亡率及细胞内ADM的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测AS作用前后细胞三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)mRNA的表达.结果 ADM单独作用24 h后,Ec9706细胞的凋亡率同对照组比较显著性增高(P<0.05).AS与不同浓度的ADM联合作用后,Ec9706细胞的凋亡率及细胞内ADM的含量同单独应用ADM组比较显著增高(P<0.01).RT-PCR检测发现AS作用24 h后Ec9706细胞ABCG2 mRNA表达显著降低(P<0.05).结论 ADM对人食管癌细胞Ec9706具有生长抑制和诱导凋亡的作用,AS可以使其作用明显增强,其发生机制可能是通过AS下调ABCG2 mRNA表达,增加细胞内ADM的含量而实现的.     

HIF-2α及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体裸鼠移植瘤组织中的表达及其意义

目的： 研究缺氧诱导因子2α（HIF-2α）及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在原代无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体（MSs）裸鼠移植瘤组织中的表达,并探讨MSs具有高动物成瘤性的可能机制。方法： 原代乳腺癌组织无血清悬浮培养法获得MSs,将其植入裸鼠体内观察成瘤情况,同时采用人乳腺癌MCF-7细胞悬液种植于同一裸鼠的右侧背部作为实验对照。免疫组织化学法观察移植瘤组织中HIF-2α及ABCG2的表达,Western blotting及RT-PCR技术检测HIF-2α及ABCG2蛋白及mRNA在移植瘤组织中的表达水平。结果： 原代MSs具有较强的动物成瘤性。免疫组织化学法,在移植瘤组织中HIF-2α与ABCG2均有表达。Western blotting及RT-PCR,HIF-2α及ABCG2蛋白在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤及瘤旁组织中的表达量（P<0.05）;HIF-2α mRNA及ABCG2 mRNA在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤组织及瘤旁组织中的表达量（P<0.05）。结论： HIF-2α与ABCG2在MSs裸鼠移植瘤中高表达,推测其为导致MSs具有高动物成瘤性的可能机制。     

ABCG2过表达对乳腺癌细胞上皮间质化能力的影响

目的 探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)过表达对乳腺癌细胞上皮间质转化(EMT)能力的影响.方法 构建ABCG2稳定过表达乳腺癌细胞株,检测ABCG2稳定过表达前后MCF-7乳腺癌细胞中E-cadherin蛋白和N-cadherin蛋白的表达情况.结果 E-cadherin蛋白表达在ABCG2过表达MCF-7乳腺癌细胞中明显低于常规MCF-7细胞(P＜0.05),而N-cadherin蛋白表这在ABCG2过表达MCF-7乳腺癌细胞中明显高于常规MCF-7细胞(P＜0.05).结论 ABCG2过表达可以通过调控EMT相关蛋白的表达进而增强乳腺癌细胞的EMT能力,可能与乳腺癌的转移密切相关.     

ATP结合盒蛋白G超家族成员2在肺癌中的表达及意义

肺癌细胞的干性及耐药性是重要的恶性指标.ATP结合盒蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)是细胞表面的ATP结合盒蛋白家族的成员之一,依赖ATP可将药物排到细胞外.ABCG2定位于人多种肿瘤细胞的膜上,它的表达与肿瘤化学治疗多药耐药性紧密...     

ABCG2在白血病细胞中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在白血病细胞膜上的表达规律及其意义.方法应用CD45SSC参数设门多色流式细胞术分析61例白血病患者白血病细胞膜ABCG2及其他白血病细胞相关抗原的表达情况.结果61例急慢性白血病患者的白血病细胞ABCG2表达阳性率为36.07%.ABCG2表达阳性率,急性白血病(AL)患者[34.48%(20/58)]与慢性白血病(CL)患者[66.67%(2/3)];儿童患者[26.09%(6/23)]与成人患者[42.11%(16/38)]差别均无显著性意义(均P＞0.05);急性髓细胞性白血病(AML)患者[46.67%(14/30)]高于急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者[16.67%(4/24)(P＜0.05)];AML患儿[55.56%(5/9)]也高于ALL患儿[7.14%(1/14)(P＜0.05)].ABCG2与另一耐药蛋白P糖蛋白(P-gp)及其他细胞表面抗原的表达均无关(r=0.152、-0.075、-0.063、0.026、-0.149,均P＞0.05),与髓系标志CD13的表达有关(r=0.307,P＜0.05).结论ABCG2在AML患儿中的表达较高,其高表达可能导致AML患儿临床耐药.ABCG2和P-gp可能参与了不同的白血病耐药机制.     

海绵来源的smenospongine通过抑制非小细胞肺癌细胞中的EGFR-Akt-ABCG2信号通路抑制顺铂耐药

目的·研究海绵来源的倍半萜胺醌类化合物smenospongine (SME)对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞A549及其顺铂耐药株A549/DDP的抗肿瘤活性及作用机制。方法·利用2种细胞（母本细胞A549和顺铂耐药细胞A549/DDP）作为研究模型,采用CCK-8实验检测2株细胞对一线化学治疗药物的半抑制浓度（half maximum inhibitory concentration,IC50）以验证A549/DDP多药耐药的情况;通过克隆形成实验检测SME对母本及耐药细胞增殖的影响,同时采用Transwell侵袭实验以及蛋白质印迹法（Western blotting）检测SME对A549/DDP上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）的影响;应用Western blotting和实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测2株细胞中受到SME调节的多药耐药基因的蛋白和mRNA表达水平,探讨其耐药分子机制;进一步采用West...     

ABCG2在人舌癌的表达及意义

目的 以人舌癌细胞株Tca8113为研究对象,探讨ABCG2在Tca8113的表达情况及意义,探索在人舌癌细胞株Tca8113中是否存在具有干细胞特性的SP细胞,为今后分离舌癌的SP细胞提供一定的实验依据及理论数据.方法 用细胞免疫荧光,激光共聚焦和流式细胞仪检测Tca8113中的ABCG2表达情况.结果 用细胞免疫荧光,激光共聚焦检测出绿色的荧光为ABCG2蛋白,流式检测显示ABCG2的表达为5%左右.结论 人舌癌细胞株Tca8113中存在少量具有干细胞特性的SP细胞.在后续的研究中,可考虑利用SP细胞的特异性表型标记"ABCG2",将SP细胞从肿瘤中分离出来,进一步探讨肿瘤干细胞的生物学特性.     

Immunohistochemical Expression of ABCG2 in Lung Cancer

ABCG2 （ATP-binding cassette superfamily G member 2） is a member of the adenosine triphosphate （ATP）-binding cassette （ABC） transporter superfamily and confers high resistance to chemotherapeutic agents in tumor treatment. The aim of this study is to investigate the expression of ABCG2 in lung cancer tissues. Eighty three lung cancer specimens （64 NSCLC, 19 SCLC） were analyzed for ABCG2 protein expression using immunohistochemistry. ABCG2 expression was found in 71.88% （46/64） of NSCLC and 10.53% （2/19） of SCLC. The level of ABCG2 expression was significantly greater in NSCLC than in SCLC （P〈0.05）. Additionally, there were significant correlations between expression of ABCG2 and lymph node metastasis, ABCG2 and differentiation in NSCLC.     

肝细胞癌组织中三磷酸腺苷结合盒转运体G2和CD133蛋白的表达

目的:检测人肝细胞癌(HCC)组织中干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和CD133蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学法检测48例HCC及癌旁正常肝组织中ABCG2和CD133蛋白的表达,并分析其表达情况与临床病理特征的关系.结果:ABCG2蛋白阳性表达率在HCC和癌旁肝组织中分别为47.9%(23/4...     

人胆囊癌GBC-SD细胞系中干细胞样SP细胞群的分离及其ABCG2的表达

目的 探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞(side population cells)群.方法 采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分选出人胆囊癌SP细胞、非SP细胞.培养3～5周后再次进行FACS,用以检测SP细胞的分化情况.利用流式细胞术检测ABCG2蛋白在SP细胞的表达.结果 SP细胞群在人胆囊癌GBC-SD细胞中占(0.64±0.08)%,分离出的SP细胞在培养3～5周后会产生SP细胞和非SP细胞,而非SP细胞则不具备此特性;并且ABCG2在胆囊癌SP细胞群中呈现出高表达状态[(89.56±3.86)%],在非SP细胞中几乎不表达[(1.32±0.49)%],两者之间的差异具有统计学意义(P<0.01).结论 人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着很少量的干细胞样SP细胞群,并且高表达ABCG2.     

人胆固醇酯水解酶对泡沫细胞的影响及相关机制的研究

目的 探讨人胆固醇酯水解酶(hCEH)表达对泡沫细胞的影响及相关机制.方法 利用含hCEH的慢病毒转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,转染成功后巨噬细胞泡沫化.油红O染色和高效液相色谱分析hCEH对细胞内脂滴堆积情况及游离胆固醇含量变化的影响;Western blot检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达情况.结果 转染72 h后,荧光细胞数量最多,接近50％,hCEH在细胞内大量表达;随着时间的延长,油红O染色阳性细胞数逐渐减少,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量逐渐下降;Western blot显示在0～8 h,ABCA1和ABCG1表达逐渐增加,8h达高峰,以后逐渐减少.结论 hCEH表达可以促进巨噬细胞表面ABCA1、ABCG1的表达,并且ABCA1、ABCG1之间存在一定的协同性,从而有效增加了游离胆固醇外流、减少胆固醇酯在细胞内聚积,抑制泡沫细胞形成.     

ABCG1在胆固醇转运中作用研究新进展

胆固醇是细胞生命活动不可或缺的重要物质,但体内过量时常导致动脉粥样硬化等疾病。三磷酸结合盒转运体G1（ATP-binding cassette G1, ABCG1）是三磷酸结合盒（ATP-binding cassette, ABC）转运体超家族重要成员之一,在胆固醇逆向转运过程中发挥重要作用。文中对近年来ABCG1在胆固醇转运过程中的作用研究新进展作一综述。     

临床乳腺癌细胞周期蛋白非时相性表达的初步探讨

目的 初步探讨临床乳腺癌细胞的细胞周期蛋白(Cyclin)表达规律并予以归类，为进一步研究肿瘤的细胞周期机制提供依据。方法 采用Cyclin／DNA双参数流式细胞术对临床上获取的乳腺癌细胞的Cyclin(Cyclin D1、E、A和B1)和DNA表达进行检测。结果 在16例乳腺癌标本中，细胞周期蛋白的非时相性表达可以归类如下：①Ⅰ型Cyclin D1、E、A和B1均呈非时相性过表达(5例)。②Ⅱ型Cyclins D1、E、A和B1均呈低表达或不表达(3例)。②Ⅲ型Cyclin D1呈过表达并贯穿于整个细胞周期，而Cyclins E、A和B1呈低表达成不表达(3例)．④Ⅳ型Cyclins E、A和B1呈不同程度的非时相性过表达，而Cyclin D1呈低表达成不表达(5例)。结论 Cyclins在乳腺癌细胞中的非时相性表达存在着一定的规律，而每一种表达类型则显示了某一特定的细胞周期破坏机制。     

食管癌相关基因2原核表达质粒的构建与诱导表达

目的：构建食管癌相关基因2（ECRG2）原核表达质粒，在大肠杆菌（E．coli）中诱导表达重组蛋白。方法：用聚合酶链反应法扩增ECRG2基因开放阅读框（ORF），构建表达载体pGDX-4T-1-ECRG2，测序鉴定后转化E．coli（BL21）进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达，目的蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、Western免疫印迹鉴定。结果：SDS-PAGE测定GSr／ECRG2蛋白分子质量约34ku，Western blot验证出目的蛋白特异表达。结论：ECRG2ORF插入pGEX-4T-1质粒并在E．coli中成功表达。     

DMSO和As2O3对人食管癌细胞增殖的抑制作用

目的 抑制肿瘤细胞生长是治疗肿瘤的重要基础。本文比较二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）和维甲酸对人食管癌细胞生长抑制的影响。方法 用生长曲线、剂量－效应曲线、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、ＭＴＴ比色分析、细胞周期的流式术检测、ＰＣＮＡ及Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１免疫组化等多项指标反映细胞增殖改变。结果 二甲基亚砜和三氧化二砷对食管癌细胞株生长的抑制作用较传统的维甲酸效果更强。结论 本文强烈提示二甲基亚     

炎性细胞模型中姜黄素对胆固醇逆转运蛋白ABCA1和ABCG1基因的影响

目的 探讨炎性反应模型中,姜黄素对胆固醇逆转运蛋白基因表达的影响。 方法 将RAW264.7细胞分为6组:空白对照组,姜黄素10 μmol/L组,姜黄素20 μmol/L组,脂多糖(LPS)组,姜黄素10 μmol/L+LPS组和姜黄素20 μmol/L+LPS组。应用荧光定量PCR检测各组中RAW264.7细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、腺苷三磷酸结合盒转运体G1(ABCG1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达情况。 结果 LPS刺激可显著上调RAW264.7细胞ABCA1和TNF-α基因的表达(P<0.05),下调ABCG1基因的表达(P<0.05);姜黄素处理后可进一步上调ABCA1基因的表达(P<0.05),但是对ABCG1和TNF-α基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 在炎性反应条件下,姜黄素可进一步上调胆固醇逆转运关键基因ABCA1的表达,这可能是其抗动脉硬化的分子机制之一。