氢化可的松减停给药致小鼠药源性阴虚证及其对肾上腺皮质功能的影响

目的:研究小剂量氢化可的松长期给药及减停后对小鼠证候和肾上腺皮质功能的影响。方法:96只雄性ICR小鼠随机分为对照组和氢化可的松低、中、高剂量(0.33、0.66、1.32mg·kg~(-1)·d~(-1))组,每组24只。氢化可的松组小鼠实验第1～28天灌胃给予相应剂量的氢化可的松溶液,实验第29～35天灌胃给予原剂量减半的氢化可的松溶液,实验第36～49天停药。对照组小鼠实验第1～35天灌胃给予等体积灭菌水。实验期间,每周定期测定每只小鼠的体质量。分别于实验第27、41、48天,采用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠腋温、四肢抓力和旷场活动度。分别于实验第28、42、49天,取每组8只小鼠,分离胸腺、脾脏、肾上腺组织,采集血清。计算胸腺与脾脏的脏器指数;ELISA检测血清皮质酮含量;PCR检测肾上腺类固醇激素合成急性调节蛋白(Star/StAR)、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达;Western blot检测StAR、B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)、低密度脂蛋白受体(LDLR)的蛋白表达。结果:(1)药物干预期间,氢化可的松各剂量组小鼠体质量增长缓慢,显著低于同期对照组(P0.05,P0.01);停药后各剂量组小鼠体质量快速增长,与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。实验第28天,氢化可的松高剂量组小鼠的腋温较对照组显著下降(P0.01),停药后恢复正常水平。在各观察时间点,各组小鼠四肢抓力和旷场活动度比较,差异均无统计学意义(P0.05)。(2)与对照组同期相比,实验第28天,氢化可的松各剂量组小鼠的脾脏指数和胸腺指数均显著下降(P0.05,P0.01);实验第42天,中、高剂量组小鼠的脾脏指数显著降低(P0.05);实验第49天,高剂量组小鼠的脾脏指数仍显著降低(P0.05)。(3)在各观察时间点,氢化可的松各剂量组小鼠的血清皮质酮含量较对照组均显著降低(P0.01)。(4)与对照组同期相比,实验第28天,氢化可的松中剂量组小鼠肾上腺组织Cyp21a1 mRNA表达显著下降(P0.05),高剂量组Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达显著下降(P0.05,P0.01);实验第42天,中剂量组Star mRNA表达恢复性上调(P0.05);实验第49天,低剂量组Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达恢复性上调(P0.01),中剂量组Star、Cyp11a1的mRNA表达恢复性上调(P0.01),高剂量组Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达恢复性上调(P0.01)。(5)与对照组同期相比,实验第28天,氢化可的松低剂量组小鼠肾上腺StAR蛋白表达量显著降低(P0.01),中剂量组StAR、SRBⅠ蛋白表达量显著降低(P0.01),高剂量组LDLR、StAR、SRBⅠ蛋白表达量均显著降低(P0.01);实验第42天,低剂量组LDLR蛋白表达量显著升高(P0.05);实验第49天,低剂量组LDLR、SRBⅠ、StAR蛋白表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05),中剂量组StAR以及高剂量组LDLR和StAR蛋白表达水平仍显著下降(P0.05,P0.01)。结论:小剂量氢化可的松长期给药可诱发小鼠阴虚证表象,抑制其肾上腺皮质功能;药物减停后,小鼠外观表征恢复较快,而肾上腺皮质酮分泌功能恢复较慢。     

糖皮质激素诱发小鼠药源性证候模型规范化研究及其评价标准

目的:对糖皮质激素诱发的小鼠药源性证候模型建立规范化的造模方法及评价标准。方法:对模型动物、糖皮质激素类药物及其干预的剂量、时间等进行考察,采用小鼠辨证论治实验方法学以及反映肾上腺皮质功能的实验指标综合评价小鼠证候属性。结果:对糖皮质激素诱发的小鼠药源性证候模型,建议首选ICR小鼠,常规造模采用3.3 g·kg~(-1)·d~(-1)氢化可的松连续灌胃14 d;大剂量短期造模采用25 g·kg~(-1)·d~(-1)氢化可的松连续灌胃5 d;小剂量长期造模采用0.33 g·kg~(-1)·d~(-1)氢化可的松连续灌胃28 d;小剂量减停干预造模采用0.66 g·kg~(-1)·d~(-1)氢化可的松连续灌胃给药28 d、再剂量减半7 d、停药14 d。较理想的评价指标包括:体质量、脾脏指数、胸腺指数、腋温、体表红外温度、自主行为活跃度、四肢抓力、血液皮质酮、肾上腺类固醇激素合成酶特异性分子(StAR、CYP11A1、CYP11B1、CYP21A1、SRBI、LDLR)、肾上腺皮质形态及超微结构。结论:对糖皮质激素诱发的小鼠药源性证候模型建立了规范化的造模方法及可量化的疗效评价标准,为中药及其复方的药效研究提供理想的小鼠证候模型。     

顺铂短期给药诱发小鼠药源性虚证模型的评价研究

目的:研究顺铂短期给药诱发小鼠药源性证候的属性及对类固醇激素合成功能的影响。方法:40只雄性ICR小鼠随机分为对照组及顺铂不同剂量(3、5、10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组,每组10只。各药物干预组小鼠腹腔注射相应剂量的顺铂,连续5 d。分别于干预5 d后和停药5 d后,观察小鼠体征(体质量、摄食量、腋温、爪色泽),并进行行为学测试(抓力、旷场试验和转棒试验)。观察期后,取血清;分离肾脏、心脏、胸腺和脾脏,计算脏器指数;收集肾上腺和睾丸。ELISA检测血清皮质酮和睾酮含量;HE染色后光镜下观察肾上腺与睾丸组织形态学变化;PCR、Western blot分别检测肾上腺皮质类固醇激素合成酶和睾丸睾酮合成酶相关的mRNA、蛋白表达。结果:(1)干预5 d后,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠体质量、摄食量、腋温、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P0.05,P0.01);顺铂3、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠腋温明显低于对照组,而爪色r值高于对照组(P0.05,P0.01)。停药5 d后,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠体质量、摄食量、在棒时间、抓力、腋温、爪色r值、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P0.05,P0.01);顺铂3、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠垂直运动较对照组亦明显减少(P0.01)。(2)与对照组相比,10 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用显著抑制小鼠脾脏、胸腺、心脏,脏器指数明显降低(P0.05,P0.01),而肾脏指数显著升高(P0.01);5 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用亦抑制心脏(P0.05)。(3)形态学观察显示,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠肾上腺皮质球状带细胞肿胀明显,顺铂5、10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠可见各级生精细胞排列略紊乱,睾丸间质细胞收缩明显。(4)与对照组相比,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P0.01),血清睾酮含量无明显变化。(5)与对照组相比,顺铂3 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠肾上腺Star、Cyp21a1的mRNA表达受到抑制(P0.05),而顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠肾上腺Star、Cyp11b1、Cyp21a1的mRNA表达及StAR、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达显著上调(P0.05,P0.01)。(6)与对照组相比,10 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用显著抑制睾丸StAR、CYP11A1、CYP17A1、HSD3B2的mRNA与蛋白表达(P0.05,P0.01);5 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂干预显著抑制Star和Hsd3b2的mRNA表达(P0.05,P0.01);3 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用亦显著抑制Cyp17a1和Hsd3b2的mRNA表达(P0.01)。结论:顺铂短期给药可诱发小鼠虚证表现,以精气亏虚为主,其物质基础与类固醇激素合成及储备下降有关。     

甲状腺激素对免疫抑制药物作用的影响

甲状腺激素(THY 150mg·kg~(-1)·d~(-1),ig×10d和200mg·kg~(-1)·d~(-1),ig×10d)能够显著促进正常昆明种成年小鼠对二硝基氯苯(DNCB)所致的迟发型皮肤超敏反应(DCH).在连续应用甲状腺激素(200mg·kg~(-1)·d~(-1).ip×10d)的小鼠,不同剂量的环磷酰胺(25mg·kg~(-1)·d~(-1),ip×10d)以及氢化可的松(25mg·kg~(-1)·d~(-1),im×10d)抑制小鼠的DNCB所致DCH的作用减弱甚至消失.     

氢化可的松诱发虚证状态对H22肝癌小鼠肿瘤增长的影响

目的?研究氢化可的松诱发的虚证状态对肝癌小鼠肿瘤增长的影响。方法?将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、肿瘤模型组、氢化可的松组,氢化可的松肿瘤组,采用氢化可的松给药小鼠14?d造成虚证状态,给药第1天同步接种H22肝癌细胞至腋下复制荷瘤小鼠模型。动态观测小鼠体质量与肿瘤大小变化;处死小鼠后,取脾脏、胸腺称质量并计算脏器指数;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成酶以及肿瘤增殖相关的mRNA表达;运用Western blot方法检测肿瘤Akt、p-Akt蛋白表达。结果?与正常对照组比较,肿瘤模型组脾脏显著增大（P＜0.05）,肾上腺Cyp11a1、Cyp11b1、Cyp11b2的基因表达显著下调（P＜0.05）;使用氢化可的松的小鼠脾脏和胸腺明显萎缩（P＜0.01）,肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因均下调（P＜0.05）。与肿瘤模型组比较,氢化可的松肿瘤组小鼠接种肿瘤第7天肿瘤体积减小（P＜0.05）,同时氢化可的松显著抑制肿瘤组织Akt1基因表达（P＜0.05）,促使Foxo3基因表达上调（P＜0.05）、抑制Akt、p-Akt蛋白表达。与氢化可的松组比较,氢化可的松肿瘤组小鼠脾脏、胸腺萎缩减轻,肾上腺类固醇合成酶基因表达均上调（P＜0.05）。结论?氢化可的松通过抑制内分泌免疫功能诱发小鼠虚证,短期使用小鼠肿瘤增殖减缓,而持续性虚损状态下促进肿瘤生长。      

温补肾阳中药对虚证模型小鼠肾上腺皮质激素合成的调节作用

  目的：研究温补肾阳中药及其配伍对虚证模型小鼠肾上腺皮质激素合成的影响。  方法：120只雄性ICR小鼠随机分成10组,即对照组、模型组、淫羊藿(5.3 mg·kg-1·d-1)组、仙茅(4.3 mg·kg-1·d-1)组、巴戟天(4.3 mg·kg-1·d-1)组、杜仲(5.3 mg·kg-1·d-1)组、补骨脂(5.3 mg·kg-1·d-1)组、菟丝子(6.0 mg·kg-1·d-1)组、肉苁蓉(5.3 mg·kg-1·d-1)组以及配伍(各单味中药等比例混合,4.7 mg·kg-1·d-1)组,每组12只。除对照组外,其他各组小鼠灌胃给予0.66 mg·kg-1·d-1氢化可的松溶液,连续14 d,以复制药源性虚证模型。造模同时,各中药干预组及配伍组小鼠灌胃给予相应药液,连续14 d。末次给药后,称量小鼠体质量;采集血清和双侧肾上腺组织。ELISA检测血清皮质酮含量;PCR检测肾上腺相关基因的表达,包括类固醇激素合成酶(Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Hsd3b1)、胆固醇转运分子(Star、StarD3、Npc1、Npc2)、胆固醇摄取分子(Ldlr、Scarb1)、胆固醇合成限速酶(Hmgcr)、胆固醇储存分子(Lipe、Acat1)、胆固醇流出分子(Abca1、Abcg1)、胆固醇稳态分子(Srebf2、Nr1h3);Western blot检测肾上腺CYP11A1、CYP21A2、HSD11B1、StAR、NPC1、NPC2、LDLR、SRBI、HSL、ACAT1的蛋白表达。  结果：①与模型组相比,各中药干预组及配伍组小鼠的体质量和血清皮质酮含量无明显变化(P>0.05)。②与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Cyp21a1 mRNA表达和CYP11A1蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组相比,淫羊藿组和仙茅组Cyp21a1 mRNA表达明显上调(P<0.05),各中药组及配伍组CYP11A1蛋白表达呈上调趋势。③与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Star和Npc1的mRNA表达及StAR和NPC1蛋白表达显著降低(P<0.05,P＜0.01),NPC2蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比,淫羊藿组、仙茅组、杜仲组、菟丝子组及配伍组StAR蛋白表达明显升高(P<0.05,P＜0.01),各中药组NPC1蛋白表达量增多,以补骨脂作用最为显著(P<0.05),除杜仲组外其他中药干预组及配伍组NPC2蛋白表达明显下调(P＜0.01)。④与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Ldlr、Scarb1的mRNA表达以及LDLR、SRBI的蛋白表达均显著降低(P<0.05,P＜0.01);与模型组相比,仙茅组、补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组Ldlr mRNA表达明显下调(P＜0.01),杜仲组、菟丝子组及配伍组SRBI蛋白表达显著升高(P<0.05,P＜0.01)。⑤模型组小鼠肾上腺Hmgcr mRNA表达及HSL蛋白表达较对照组显著降低(P＜0.01);与模型组相比,仙茅组、巴戟天组、杜仲组、补骨脂组、肉苁蓉组Hmgcr mRNA表达明显降低(P<0.05,P＜0.01),淫羊藿组、补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组HSL蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。⑥模型组小鼠肾上腺Abcg1 mRNA表达较对照组显著升高(P＜0.01);与模型组比较,除肉苁蓉组外,其他各中药干预组及配伍组的Abcg1 mRNA表达均显著降低(P<0.05,P＜0.01)。⑦模型组小鼠肾上腺Srebf2 mRNA表达较对照组显著降低(P＜0.01);与模型组相比,补骨脂组、肉苁蓉组及配伍组Srebf2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P＜0.01),且补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组Nr1h3 mRNA表达显著降低(P<0.05)。  结论：温补肾阳中药可调节氢化可的松诱导的虚证模型小鼠肾上腺皮质激素的合成能力,其中以淫羊藿、仙茅、杜仲、菟丝子的作用较为显著。     

榄香烯乳联合化疗对小鼠Lewis肺癌组织S100A4及MMP-9蛋白表达的影响

【目的】观察榄香烯乳联合化疗对Lewis肺癌的抑瘤作用及其对S100A4及MMP-9表达的影响,探讨其作用机制。【方法】将24只接种Lewis肺癌瘤株的C57BL/6小鼠随机分为肺癌模型组、化疗组、榄香烯乳组、榄香烯乳联合化疗组,每组6只。接种后第11天开始给药治疗,化疗组给予小鼠腹腔注射足叶乙甙(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))、顺铂(3 mg·kg~(-1)·d~(-1)),榄香烯乳组给予小鼠腹腔注射榄香烯乳(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),榄香烯乳联合化疗组小鼠腹腔注给予射榄香烯乳(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))、足叶乙甙(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))、顺铂(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))。连续给药7 d后,观察各组小鼠瘤体质量,脾脏、胸腺指数变化,计算抑瘤率及抑制转移率,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测瘤组织中S100A4蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量,采用免疫组化法检测瘤组织中S100A4和MMP-9蛋白表达。【结果】与化疗组比较,榄香烯乳联合化疗组抑瘤率及抑制转移率均明显升高,肺癌小鼠脾脏指数、胸腺指数显著增加,瘤组织中S100A4和MMP-9含量明显降低,S100A4和MMP-9蛋白阳性表达率降低明显(P0.05或P0.01)。【结论】榄香烯乳联合化疗可抑制小鼠Lewis肺癌的生长转移,其机制可能与降低癌组织中S100A4、MMP-9蛋白的表达有关。     

邓老冠心方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块NOX4的影响

【目的】探讨邓老冠心方防治动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块发生发展的可能作用机制。【方法】以高脂饲料喂养雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))鼠12周,复制AS小鼠模型。将AS小鼠随机分成模型组,中药高剂量组、低剂量组,辛伐他汀组,每组10只。另设C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。中药高剂量组、低剂量组给予邓老冠心方(剂量分别为3 500、700mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀(剂量为0.005 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,共给药12周。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉组织病理学变化,采用实时定量PCR(qPCR)法检测各组小鼠胸主动脉组织尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)mRNA的表达。【结果】与模型组比较,中药高、低剂量组及辛伐他汀组的斑块面积/管腔面积比值呈不同程度降低(P 0.05或P 0.01)。与正常对照组比较,模型组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平明显升高(P 0.001);各药物处理组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平较模型组均显著降低(P 0.01),其中中药高剂量组下降最明显,与辛伐他汀组、中药低剂量组比较,差异均有统计学意义(P 0.05)。【结论】邓老冠心方可增加斑块的稳定性,并具有剂量依赖性,其机制可能与降低AS小鼠胸主动脉组织中NOX4 mRNA的表达有关。     

左乙拉西坦治疗难治性癫痫效果及其对细胞免疫水平的影响

目的观察左乙拉西坦治疗难治性癫痫效果及其对细胞免疫水平的影响。方法将2013年2月—2015年2月延安大学附属医院神经内科二病区收治难治性癫痫患者84例,随机数字表法分为观察组和对照组各42例。对照组予卡马西平片,初始剂量5 mg·kg~(-1)·d~(-1),以后每周增加10 mg·kg~(-1)·d~(-1),直至增至20 mg·kg~(-1)·d~(-1);托吡酯片初始剂量0.5 mg·kg~(-1)·d~(-1),以后每周增加2 mg·kg~(-1)·d~(-1),逐步增至8 mg·kg~(-1)·d~(-1)。观察组应用左乙拉西坦,初始剂量10 mg·kg~(-1)·d~(-1),2次/d,每隔1周增加10 mg·kg~(-1)·d~(-1),4周后增至35 mg·kg~(-1)·d~(-1)并维持治疗。2组患者均连续治疗6个月。比较2组患者临床效果,治疗前后癫痫发作次数、CD3~+、CD4~+、CD8~+、DR~+水平变化情况,并记录不良反应发生情况。结果治疗后观察组总有效率95.2%显著高于对照组81.0%(x~2=4.086,P=0.044);治疗后,观察组癫痫发作次数、CDg~+、DR~+明显低于对照组,CD3~+、CD4~+、IgA、IgG、IgM显著高于对照组(t=3.021、8.793、7.761、3.924、5.962、1.845、4.427、2.113,P<0.05,P<0.01);2组患者未发生药物中毒,治疗过程中发生恶心、头晕、嗜睡、食欲减退、记忆力减退、白细胞降低、皮疹、情绪异常等不良反应,减缓加量速度后缓解,2组各不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论左乙拉西坦治疗难治性癫痫患者疗效确切,减少发作次数,有效改善细胞免疫水平,安全可靠,值得临床推广应用。     

蛹虫草中虫草素及腺苷对糖尿病小鼠肾脏氧化应激的影响

目的研究蛹虫草中虫草素、腺苷提取物及纯化物对糖尿病小鼠肾脏氧化应激的影响。方法昆明种小鼠56只,随机分为正常对照组、糖尿病对照组、阳性药物对照组(30mg·kg~(-1))、虫草素和腺苷提取物低(30mg·kg~(-1))、高(60mg·kg~(-1))剂量组,虫草素和腺苷纯化物低(30mg·kg~(-1))、高(60mg·kg~(-1))剂量组共7组,每组8只小鼠,使用链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病小鼠模型。造模成功后分别灌胃给药6周,测定肾脏组织中丙二醛(MDA)、NO含量,血清中BUN、Cr和UA的含量和肾脏组织中的抗氧化酶活性。结果虫草素和腺苷纯化物高剂量组可降低高血糖引起的肾脏肥大(13.59±1.75)g·kg~(-1),显著提高糖尿病小鼠肾脏的T-SOD(86.22±9.06)U·mg~(-1)prot及CAT(32.27±3.26)U·mg~(-1)prot的活性(P0.01),使BUN(10.63±1.25)mmol·L-1、Cr(43.27±8.45)μmol·L-1、UA(108.72±15.26)μmol·L~(-1)、MDA(0.95±0.31)nmol·mg~(-1)prot及NO(1.26±0.21)μmol·g~(-1)prot的含量降低(P0.01)。结论虫草素、腺苷纯化物高剂量组可以增强肾脏抗氧化酶的活力,改善肾小球滤过性,减少高血糖对肾脏造成的氧化损伤,对糖尿病小鼠肾脏具有一定的保护作用,可以为治疗糖尿病肾病的中药新药提供新的思路。