甲状腺乳头状癌中肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47表达的意义

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47蛋白表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征间的关系及意义.方法 收集大连市友谊医院2015—2019年间甲状腺乳头状癌手术切除标本65例,应用免疫组织化学方法检测所有标本中CD68+和CD163+肿瘤相关巨噬细胞浸润和CD47蛋白表达情况,分析肿瘤相关巨噬细胞浸润、CD47蛋白表达...     

生理状态下大鼠大网膜I型与II型乳斑内CD68、CD163阳性巨噬细胞数量对比研究

目的 对比研究生理状态下大鼠大网膜I型与II型乳斑内CD68、CD163阳性巨噬细胞的数量.方法 SD大鼠大网膜铺片,CD68、CD163双重标记,免疫荧光显微镜下观察计数CD68、CD163阳性巨噬细胞,对比分析I型与II型乳斑内CD68、CD163阳性巨噬细胞的数量.结果 I型与II型乳斑内均可见CD68阳性、CD163阳性巨噬细胞;I型乳斑内CD68阳性巨噬细胞与CD163阳性巨噬细胞数量比较差异无统计学意义（P﹥0.05）;II型乳斑内CD68阳性巨噬细胞与CD163阳性巨噬细胞数量对比差异无统计学意义（P﹥0.05）;I型与II型乳斑内CD68阳性巨噬细胞与CD163阳性巨噬细胞的数量基本相同.结论 生理状态下大鼠大网膜I型与II型乳斑内均存在CD68、CD163阳性巨噬细胞;均存在巨噬细胞的极化分型,主要以M2型巨噬细胞的形式存在,推断乳斑具有发挥降低炎症反应,发挥组织修复的功能.     

肿瘤相关巨噬细胞的研究进展及靶向免疫治疗

肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤细胞的发生、生长、侵袭和转移方面起到了重要作用,其功能特性类似M2型巨噬细胞.目前多项研究表明TAM与血液系统恶性肿瘤的临床表现及预后相关.基于TAM的促肿瘤作用,目前针对TAM的活化、招募、促血管生成活性、存活及基质重塑等方面设计的靶向治疗药物也进入了基础或临床试验.     

肿瘤微环境中不同部位CD68~+巨噬细胞对鼻咽癌进展和预后的影响

目的研究免疫微环境对不同部位巨噬细胞对鼻咽癌(NPC)进展和预后的影响。方法收集在中山大学肿瘤防治中心经病理证实为鼻咽癌的石蜡标本557例。采用免疫组化染色法检测巨噬细胞分子标志物CD68,观察并计数CD68在癌巢和间质不同部位的表达,统计分析其阳性细胞数与临床病理特征及鼻咽癌患者预后的关系。结果 CD68+巨噬细胞在间质中浸润比癌巢中活跃(中位数:4.47/HPF相比1.87/HPF)。KaplanMeier生存曲线和log-rank统计分析结果表明,癌巢中的CD68~+巨噬细胞数量与NPC患者的无瘤生存时间及总体生存时间均显著正相关。间质中的CD68~+巨噬细胞数量与NPC患者的无瘤生存时间及总体生存时间亦显著正相关。单因素Cox比例风险模型显示,癌巢中的CD68~+巨噬细胞浸润较多的患者相比于数量较少的患者发生治疗后转移复发(HR=0.667,P=0.002)及死亡(HR=0.626,P=0.002)的风险较低。间质中的CD68~+巨噬细胞数量较多的患者较数量较少的患者发生治疗后转移复发(HR=0.664,P=0.005)及死亡(HR=0.66,P=0.008)的风险较低。结论免疫微环境中癌巢和间质中CD68~+巨噬细胞浸润数量增多与鼻咽癌患者预后呈正相关,CD68~+巨噬细胞浸润数量增多可降低局部复发和远处转移风险。     

肿瘤相关巨噬细胞PKM2表达对食管癌细胞恶性表型的影响

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages, TAMs)中M2型丙酮酸激酶(Pyruvate kinase M2,PKM2)表达对食管癌细胞迁移、侵袭恶性表型的影响。方法 慢病毒转染PKM2敲低/过表达质粒至THP-1细胞并诱导分化为TAMs,随机分为PKM2敲低组(PKM2 KD组)、PKM2敲低对照组(PKM2 KD NC组)、PKM2过表达组(PKM2 OE组)和PKM2过表达对照组(PKM2 OE NC组)。qRT-PCR检测PKM2及巨噬细胞表型标志物的表达;进一步与食管癌KYSE150细胞共培养后,Transwell实验检测食管癌细胞迁移和侵袭能力变化。将共培养细胞混合接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,免疫组化检测PKM2和CD163的表达,ELISA检测葡萄糖和乳酸水平。结果 与PKM2 KD NC组相比,PKM2 KD组TAMs细胞内PKM2表达水平显著降低,NOS2表达上调(P均<0.05),CD163轻微下调(P>0.05),CCL5表达下调(P<0.05);与PKM2 OE NC组相比,PKM2 OE组TAM...     

肿瘤微环境中不同部位CD68+巨噬细胞对鼻咽癌进展和预后的影响

目的 研究免疫微环境对不同部位巨噬细胞对鼻咽癌(NPC)进展和预后的影响。方法收集在中山大学肿瘤防治中心经病理证实为鼻咽癌的石蜡标本557例。采用免疫组化染色法检测巨噬细胞分子标志物CD68,观察并计数CD68在癌巢和间质不同部位的表达,统计分析其阳性细胞数与临床病理特征及鼻咽癌患者预后的关系。结果CD68⁺巨噬细胞在间质中浸润比癌巢中活跃(中位数:4.47/HPF相比1.87/HPF)。Kaplan-Meier生存曲线和log-rank统计分析结果表明,癌巢中的CD68⁺巨噬细胞数量与NPC患者的无瘤生存时间及总体生存时间均显著正相关。间质中的CD68⁺巨噬细胞数量与NPC患者的无瘤生存时间及总体生存时间亦显著正相关。单因素Cox比例风险模型显示,癌巢中的CD68⁺巨噬细胞浸润较多的患者相比于数量较少的患者发生治疗后转移复发(HR=0.667,P=0.002)及死亡(HR=0.626,P=0.002)的风险较低。间质中的CD68⁺巨噬细胞数量较多的患者较数量较少的患者发生治疗后转移复发(HR=0.664,P=0.005)及死亡(HR=0.66,P=0.008)的风险较低。结论免疫微环境中癌巢和间质中CD68⁺巨噬细胞浸润数量增多与鼻咽癌患者预后呈正相关,CD68⁺巨噬细胞浸润数量增多可降低局部复发和远处转移风险。     

CD68、CD163阳性巨噬细胞在食管癌组织浸润及对预后的影响

目的 探讨CD68+/CD163+巨噬细胞在食管癌组织浸润及其对预后的影响.方法 应用免疫组化方法检测CD68+、CD163+巨噬细胞在食管癌组织的浸润,比较CD68、CD163阳性巨噬细胞浸润密度及对食管癌患者预后的影响.结果 食管癌组织CD68、CD163阳性巨噬细胞浸润密度较癌旁正常组织明显增多(t=21.379...     

肿瘤相关巨噬细胞CD163在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的分析CD163巨噬细胞在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法收集2010年1月—2012年12月南京大学医学院附属鼓楼医院普外科收治的160例经病理学证实为乳腺癌患者的组织标本及其癌旁(距癌组织≥5 cm)正常组织标本,比较乳腺癌组织和癌旁正常组织CD163巨噬细胞表达情况,依据染色结果将CD163巨噬细胞分为高、低表达组,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系,采用小分子干扰技术下调巨噬细胞MH-S中CD163的表达,与乳腺癌细胞MCF-7共培养,平板克隆实验观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期。结果乳腺癌组织中CD163~+巨噬细胞浸润数量明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(t=134.273,P<0.01);CD163~+巨噬细胞在不同年龄及肿瘤直径中的浸润数量差异无统计学意义(P均>0.05),而在不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移间差异有统计学意义(χ~2=23.498、13.965、9.753,P<0.01)。正常表达CD163的MH-S共培养MCF-7细胞的增殖能力和侵袭能力均明显高于低表达CD163的MH-S共培养的MCF-7细胞(t=11.960、18.397,P<0.01);与siRNA-NC组相比,siRNA-FAM组的G1期MCF-7细胞所占的比例明显增高,差异具有统计学意义(t=6.398,P<0.01),而G2期细胞所占的比例明显降低,差异亦具有统计学意义(t=9.542,P<0.01)。结论乳腺癌组织中CD163~+巨噬细胞数量明显升高,与临床分期、淋巴结转移、分化程度密切相关,且CD163能够增强乳腺癌细胞增殖、侵袭能力。     

结直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞及基因表型的分析研究

目的结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)CD68~+及CD163~+的检测及与基因表型的关系。方法免疫组化方法检测41例CRC肿物,癌旁5 cm(M5)、10 cm(M10)。不典型增生(Atypical hyperplasia,AH)组织CD68~+及CD163~+的表达,采用病理切片扫描仪细胞计数。对41例CRC肿物进行基因检测。结果CRC患者CD68~+及CD163~+检测肿物组织高于癌旁5 cm、10 cm(P0.01);肿物与不典型组织比较差异无统计学意义(P0.05);癌旁组织M5与M10比较差异无统计学意义(P0.05);回归分析提示CD163~+表达与K-ras基因突变有显著性关系(P0.05)。CD68~+及CD163~+的表达与B-raf基因突变、MSS(微卫星稳定型)、淋巴结转移、脉管癌栓、神经侵犯无相关性(P0.05)。结论 CD68~+及CD163~+在结直肠癌肿物间质中高表达,并高于癌旁组织,与AH表达无相关性。CD163~+在肿物的表达与K-ras基因突变有相关性。     

M2型巨噬细胞标志物CD163与结直肠癌预后的关系

目的：以CD163蛋白为标志物探讨人结直肠癌组织中M2型巨噬细胞与患者预后的关系。方法：收集海军军医大学附属长海医院肛肠外科于2010年1月至2011年12月期间接受外科手术的648例初治结直肠癌患者的临床资料及其术后肿瘤组织石蜡标本,患者诊断均经术后病理证实。对照组分别为：上述标本中38例患者的癌旁组织,37例痔上黏膜环切钉合术(PPH)术后正常直肠黏膜组织和33例内镜治疗后的结直肠腺瘤组织。所有组织标本制作成组织芯片,免疫组化检测CD163蛋白表达水平,分析不同表达水平与结直肠癌临床病理参数和预后的关系。结果：CD163的表达水平与肿瘤分化程度、血清CA19-9、肿瘤复发转移有关（均P＜0.05）。生存分析发现CD163高表达组较低表达组无病生存率和总生存率低、预后差（P<0.001）。Cox多因素分析显示,血清CEA、CD163表达水平也是结直肠癌预后的独立影响因素（均P＜0.05）。结论：M2型巨噬细胞标志物CD163对于结直肠癌患者的预后有较好的参考价值。     

三氧化二砷对结肠癌小鼠移植瘤淋巴管形成与MMP-9表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As：O,）对结肠癌淋巴管形成与MMP-9表达的影响。方法建立结肠癌小鼠移植瘤模型,分为1mg／（kg·d）As2O3,组、2mg／（kg·d）As：0,组和生理盐水组（注射等体积生理盐水）。应用免疫组织化学方法检测肾小球足突细胞黏蛋白（podoplanin）、血管内皮生长因子C（VEGF—C）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达并计数微淋巴管密度（MLD）。结果As2O3处理组VEGF—C和MMP-9的表达均较生理盐水组明显减弱,2mg／（kg·d）As2O3组VEGF—C和MMP-9的表达明显弱于1mg／（kg·d）As2O3组;As2O3处理组MLD较生理盐水组明显减少,2ms／（kg·d）As2O3组MLD明显少于1mg／（kg·d）As2O3组;以上差异均具有统计学意义。结论As2O3对小鼠结肠癌移植瘤的淋巴管形成与MMP-9表达均有抑制作用。     

四君子汤联合肠内营养对胃癌手术患者T细胞亚群及营养状况影响的随机对照研究

目的：观察胃癌患者围手术期使用中药四君子汤联合肠内营养对T细胞亚群及营养状况的影响。方法：采用前瞻性、随机、单盲、对照研究，将59例胃癌手术患者随机分为对照组（n=20）、研究A组（n=21）和研究B组（n=18）。研究B组术后2～9d经鼻饲管给予中药四君子汤100ml，研究A、B组患者手术后第2天开始给予等热量、等氮肠内营养支持8d，对照组术后给予等热量、等氮肠外营养支持9d。术前1d，术后第1天和第10天分别检测T细胞亚群及血清白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白等营养指标。结果：3组患者血清白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白和CD3^＋、CD4^＋、CD4^-／CD8^-水平术后均较术前显著降低。术后第10天，应用肠内营养的A、B两研究组T细胞亚群及营养指标水平较使用肠外营养支持的对照组有不同程度的提高，且四君子汤辅助肠内营养的研究B组血清白蛋白、转铁蛋白和T细胞亚群水平均较单纯肠内营养的研究A组显著提高（P〈0.05）。结论：健脾益气中药四君子汤辅助的肠内营养能进一步改善和优化胃癌术后机体的细胞免疫功能及营养状况。     

CpG寡核苷酸联合Texo对小鼠结肠癌的治疗作用

目的肿瘤细胞分泌的外泌体(tumor-derived exosomes,Texo)是目前肿瘤免疫治疗领域的一个热点。文中主要观察小鼠结肠癌细胞CT-26分泌的Texo联合包含有未甲基化的CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对小鼠结肠癌细胞CT-26移植瘤的治疗作用。方法使用差速离心法分离和提取CT-26细胞分泌的Texo,紫外分光光度计进行蛋白定量,透射电镜观察Texo的形态。用Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo(联合组)和等渗盐水(对照组)免疫BALB/c小鼠,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定T细胞对CT-26细胞的体外杀伤活性。建立CT-26小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,1周后皮下注射Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo以及等渗盐水,观察它们对皮下移植瘤生长的抑制作用。结果CT-26细胞分泌的Texo为直径30～100 nm的膜囊泡。CpG ODN1826+Texo联合免疫小鼠的T细胞体外对CT-26细胞的杀伤作用与单药组和对照组相比均明显增强(P<0.05)。动物实验表明,Texo和C...     

黄芪、莪术配伍联合奥沙利铂对CT26.WT原位移植瘤小鼠中CXCR3、CCR6表达影响

目的探讨中药扶正祛邪药对——黄芪、莪术粗提物与奥沙利铂(L-OHP)联合应用抑制鼠结肠癌CT26 wild-type(CT26.WT)细胞的转移,调控CXCR3、CCR6 mRNA及蛋白表达的作用。方法首先构建BALB/c结肠癌原位移植瘤小鼠模型,之后运用L-OHP(0.1 mg/次,隔日1次)单独以及联合黄芪、莪术粗提物高、中、低剂量(6、3、1.5 g/kg)作用于结肠癌模型小鼠,观察模型小鼠肝转移情况及运用RT-PCR测定CXCR3、CCR6 mRNA表达,Western Blot检测CXCR3、CCR6蛋白表达。结果 L-OHP单独应用和联合中药应用均能抑制原位移植瘤体的增大,阳性药抑制原位移植瘤生长的效果最好(P0.01)。联合用药能降低肝转移灶的发生(P0.05)。与空白对照组相比,阳性组及联合用药低剂量组CXCR3及CCR6 mRNA的表达显著下调(P0.01),联合用药能不同程度下调CXCR3、CCR6蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论黄芪、莪术联合化疗药抗肿瘤转移机制可能与下调CXCR3、CCR6 mRNA及蛋白相关。     

Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用及微环境中细胞因子活性的影响

目的评价重组腺病毒介导的Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌Balb/c小鼠移植瘤的治疗作用及其引起的相关细胞因子的变化。方法Balb/c小鼠皮下接种CT26细胞,成瘤后给予双自杀基因系统治疗,计算肿瘤体积抑瘤率的动态变化,治疗结束后检测IL-2、IL-10、TNFα、IFNγ这4种细胞因子的表达水平。结果CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用明显;治疗后小鼠4种细胞因子水平均有升高,与对照组有显著差异(P<0.05)。结论重组腺病毒介导的CD/TK双自杀基因系统对荷大肠癌Balb/c小鼠的移植瘤有明显的抑瘤作用,其所导致的细胞因子的变化可能有助于加强其抗肿瘤效应。     

富氢水对结直肠癌荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制作用及其机制

目的 初步探讨富氢水(hydrogen-rich water,[H]H2O)对结直肠癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及其机制.方法小鼠右腋皮下接种人结直肠癌SW480细胞(4×106/只),建立移植瘤小鼠模型,造模的同时给予小鼠自由饮用富氢水(0.8mg/kg),每日早、中、晚3次更换新鲜富氢水.对照组给予普通水.荷瘤28 d后处死小鼠,取肿瘤组织,通过检测肿瘤体积和质量判断肿瘤的生长情况.用免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况,比色法检测谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,基因芯片和qRT-PCR方法筛选并验证差异表达基因.结果 与对照组相比,富氢水干预后可抑制小鼠肿瘤的形成,减小肿瘤体积和质量(P＜0.01,P＜0.05),降低Ki-67蛋白的表达(P＜0.05),促进细胞凋亡(P＜0.05),增高GSSG/GSH比值(P＜0.05);富氢水干预可调节γ干扰素(IFN-γ)相关基因的表达.结论 在结直肠癌中,富氢水可通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、调节细胞内氧化还原环境及IFN-γ相关基因的表达而发挥抗肿瘤活性作用.     

加味四君子汤对脾气虚肺癌转移小鼠Fas和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:探讨脾气虚对肺癌转移的影响机制以及加味四君子汤的作用机制。方法:采用苦寒泻下、劳倦、饮食节制复合因素法建立脾气虚小鼠模型,连续16 d。造模第17天眼球取血测血清胃泌素浓度,综合验证脾气虚模型。脾气虚模型成功后C57小鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞,制备肺癌小鼠模型。小鼠随机分为正常组、脾气虚模型组、肺癌组、脾气虚肺癌组、脾气虚肺癌健脾组,肺癌组及脾气虚肺癌组生理盐水灌胃,脾气虚肺癌健脾组加味四君子汤灌胃。14 d后观测肺转移结节数,采用Real-time PCR方法检测Fas、Bcl-2基因的mRNA表达。结果:与脾气虚肺癌组比较,肺癌组、脾气虚肺癌健脾组肺转移结节均较少;与肺癌组比较,脾气虚肺癌组Fas mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA表达上调;与脾气虚肺癌组比较,脾气虚肺癌健脾组Fas mRNA表达上调,Bcl-2 mRNA表达下调。结论:脾气虚可通过抑制Fas mRNA表达及促进Bcl-2 mRNA表达,促进肺癌转移;加味四君子汤可通过促进Fas mRNA表达及抑制Bcl-2 mRNA表达,抑制肺癌转移。