小檗碱对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的观察高糖对体外培养小鼠足细胞活力、凋亡的影响以及小檗碱的保护效果。方法通过温度条件培养方法诱导永生代小鼠足细胞株分化成熟,分为正常糖对照组(NG,5 mmol/L)、甘露醇高渗对照组(MA,30 mmol/L)、高糖模型组(HG,30 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)+小檗碱治疗组(BBR,1.25μmol/L),干预24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用MTT法检测足细胞活力,用流式细胞仪分析细胞凋亡率,并用Q-PCR法检测podocin和nephrin的mRNA表达水平。结果 NG对照组和MA对照组之间的细胞活力、凋亡率和凋亡相关分子的mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05);与NG对照组比较,HG模型组足细胞活力和足细胞凋亡率差异有统计学意义(P0.01),对podocin和nephrin的mRNA表达有明显的抑制作用(P0.01),并且这种高糖刺激作用可随着作用时间的延长而增强;与HG模型组比较,BBR治疗组足细胞活力和凋亡率差异有统计学意义(P0.01),podocin和nephrin的mRNA表达水平明显增加(P0.01)。结论高糖环境可诱导小鼠足细胞凋亡,且这种诱导凋亡作用与高渗环境无关;小檗碱对高糖诱导的足细胞凋亡有保护作用。     

高糖对小鼠足细胞黏附功能的影响及黄芪多糖的干预作用

目的观察高糖对体外培养足细胞的黏附功能及黏附分子的影响,以及中药组分黄芪多糖改善这种损伤的效果。方法采用永生化小鼠足细胞株,通过温度选择的培养方法诱导足细胞分化,分为正常糖对照组（NG）（5mmol/L）、甘露醇高渗对照组（MA）、高糖组（HG）（30μmol/L）、高糖＋黄芪多糖组（APS）（0.2g/L）,干预3、6、12、24h后收集细胞,分别用荧光定量法和物理离心法检测足细胞黏附功能;干预6、12h后,应用实时定量PCR法及Western印迹法分别检测足细胞α3、β1整合素mRNA和蛋白表达水平。结果作用6、12h后,HG组α3、β1整合素mRNA及蛋白表达水平较NG组下降,差异有统计学意义,而给予黄芪多糖后,其下降不明显。结论高糖可明显抑制足细胞的黏附功能,黄芪多糖对高糖诱导的足细胞损伤有改善作用。     

小檗碱对波动性高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞凋亡的影响

目的研究小檗碱对波动性高糖所致人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)凋亡的影响。方法分离、鉴定并培养HCAECs,将HCAECs分为5组:正常葡萄糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)、持续性高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、波动性高糖组(5.5、25 mmol/L葡萄糖每24小时波动1次)、波动性高渗环境(不加入葡萄糖,加入与波动性高糖组相同浓度的甘露醇,保持与波动性高糖组相同的波动性高渗环境)、波动性高糖+小檗碱干预组(5.5、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L小檗碱每24小时波动1次),各组细胞每24小时换液1次,共培养7 d后进行后期实验。检测各组HCAECs的细胞活力及凋亡情况,利用实时荧光定量(q RT-PCR)及Western blotting技术检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达量。结果与持续性高糖组相比,波动性高糖组HCAECs凋亡更显著(P0.05),波动性高糖组Caspase-3蛋白及m RNA表达水平明显增加(P0.05);但波动性高糖+小檗碱干预组较波动性高糖组HCAECs凋亡明显减弱(P0.05),小檗碱可以明显下调波动性高糖诱导的Caspase-3表达(P0.05)。结论波动性高糖较持续性高糖更易降低HCAECs活力,促进HCAECs凋亡,但小檗碱显著减弱波动性高糖环境下HCAECs凋亡,对HCAECs具有明显的保护作用。     

小檗碱通过下调miR-1290缓解高糖诱导的足细胞损伤研究

目的探究小檗碱对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其对miR-1290的调控作用。方法采用高糖诱导小鼠肾足细胞MPC5建立细胞损伤模型,给予不同浓度(1.0、2.5、5.0μmol/L)小檗碱进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-1290 mRNA表达情况。将阴性对照(mi R-NC)和mi R-1290模拟物(miR-1290mimics)分别转染至MPC5细胞,给予5μmol/L小檗碱进行干预,考察miR-1290对小檗碱抑制高糖诱导的细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与小檗碱+miR-NC组比较,小檗碱+miR-1290 mimics组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05)。结论小檗碱能够通过下调mi R-1290表达抑制高糖诱导的足细胞凋亡及炎性反应,从而减轻细胞损伤。     

糖肾清2号提取物调控AMPK信号通路对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响

目的:观察糖肾清2号提取物对高糖环境下的小鼠肾小球系膜细胞株AMPK-α1、IκBα、TLR-4mRNA转录和蛋白表达的影响,探讨该方抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株免疫炎性病理损伤的分子机制。方法:采用小鼠肾小球系膜细胞株SV40 MES 13,在5%CO_2、37℃恒温培养箱常规培养。实验分组:空白对照组(D-葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(D-葡萄糖30 mmol/L)、中药低浓度组(高糖+糖肾清2号提取物5μmol/L)、中药中浓度组(高糖+糖肾清2号提取物10μmol/L)、中药高浓度组(高糖+糖肾清2号提取物20μmol/L),共同孵育12、24、36 h进行指标检测。采用RT-PCR技术检测肾小球系膜细胞AMPKα1、IκBα、TLR4 mRNA转录水平;Western-blot技术检测肾小球系膜细胞AMPKα1、IκBα、TLR4的蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,高糖组AMPKα1、IκBαmRNA转录水平及蛋白表达下调(P0.05),TLR4 mRNA转录水平及蛋白表达水平上调(P0.01),差异有统计学意义。与高糖组比较,中药各浓度组AMPKα1、IκBα蛋白表达水平上调(P0.05),中药高、低浓度组AMPKα1、IκBαmRNA转录水平上调(P0.05)。中药各浓度组TLR4mRNA转录水平下调(P0.01),中、高浓度组TLR4蛋白表达水平下调(P0.01)。结论:糖肾清2号抑制高糖环境下肾小球系膜细胞免疫炎性代谢性损伤,此分子机制可能与调节AMPK信号通路相关。     

低剂量雷公藤甲素抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性改善高剂量D-葡萄糖诱导的足细胞转分化

探讨雷公藤甲素（triptolide,TP）改善高剂量D-葡萄糖（高糖）诱导的足细胞上皮-间充质转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用和分子机制。将体外培养的小鼠永生化足细胞分为正常组（normal group,N）、高剂量D-葡萄糖组（high dose of D-glucose group,H-TP）、低剂量TP组（low dose of TP group,L-TP）、高剂量TP组（high dose of TP group,H-TP）以及甘露醇组（mannitol group,MNT）,分别进行不同的干预：N组加入D-葡萄糖（D-glucose,DG,5 mmol·L^-1）;HG组加入HG（25mmol·L^-1）;L-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（3μg·L^-1）;H-TP组加入HG（25 mmol·L^-1）＋TP（10μg·L^-1）;MNT组加入DG（5 mmol·L^-1）＋MNT（24.5 mmol·L^-1）。在干预后的各时间点（24,48,72 h）,首先,观察TP对足细胞增殖活性的影响;其次,检测足细胞上皮细胞标志性分子（nephrin和podocin）、间充质细胞标志性分子（desmin和Ⅰ型胶原）以及EMT相关介质snail的蛋白表达水平;最后,检测足细胞Wnt3α/β-catenin信号通路关键信号分子Wnt3α和β-catenin蛋白表达水平。结果表明,HG不仅能引起足细胞nephrin和podocin蛋白低表达,desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白高表达,诱导足细胞EMT,而且,能促使足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,激活Wnt3α/β-catenin信号通路。此外,L-TP对足细胞增殖能力没有影响,与HG联合干预不仅能明显恢复足细胞nephrin和podocin蛋白表达水平,抑制其desmin,Ⅰ型胶原和snail蛋白表达水平,改善足细胞EMT,而且,能明显降低HG诱导的足细胞Wnt3α和β-catenin蛋白高表达,抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性。总之,HG在体外能激活Wnt3α/β-catenin信号通路而诱导足细胞发生EMT;L-TP在体外能明显抑制Wnt3α/β-catenin信号通路活性而改善足细胞EMT,这可能是其干预足细胞EMT的作用和分子机制之一。     

姜黄素对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响

目的:通过研究姜黄素(curcumin)对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响,探讨姜黄素对糖尿病肾病足细胞保护作用的可能机制。方法:将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、雷帕霉素组(10 nmol/L)。Western blot分别检测LC3B、Beclin-1、Synaptopodin及Nephrin蛋白表达。将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平。结果:高糖组自噬相关蛋白LC3II/I比值及Beclin-1蛋白表达明显低于正常对照组(P0.05);姜黄素组LC3B、Beclin-1等自噬标志性蛋白表达均高于高糖组(P0.05);姜黄素组足细胞功能性标志蛋白表达水平明显高于高糖组(P0.05);姜黄素组p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平均低于高糖组(P0.05)。结论:姜黄素能明显改善高糖刺激对小鼠肾足细胞的自噬抑制作用,并且通过抑制P13K/Akt/mTOR信号途径减轻足细胞损伤。     

金丝桃苷对高糖诱导视网膜周细胞损伤的保护作用

目的 探讨金丝桃苷对高糖诱导视网膜周细胞（RPCs）损伤的保护作用，并对其可能机制做出初步探索。方法 将RPCs正常培养传代后接种至细胞培养板，按不同处理分为5组：正常葡萄糖（NG）组（葡萄糖5 mmol/L）、高糖（HG）组（葡萄糖20 mmol/L）、甘露醇（MT）组（葡萄糖5 mmol/L、渗透压20 mmol/L）、高糖+低浓度金丝桃苷（HG+L-HY）组（葡萄糖20 mmol/L、金丝桃苷100μg/mL）、高糖+高浓度金丝桃苷（HG+H-HY）组（葡萄糖20 mmol/L、金丝桃苷400μg/mL）。培育相应时间后，CCK-8法检测各组RPCs活性，Annexin V/PI及TUNEL法检测RPCs凋亡率，Real-time PCR及Western Blot法检测RPCs中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、Gasdermin-D蛋白-N(GSDMD-N)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-18(IL-18)mRNA及蛋白表达水平。结果 与NG组比较，HG组RPCs活性降低，凋亡率升高（P<0.01）,NLRP3、c...     

桃红四物汤对糖尿病视网膜病变引起的细胞损伤及HIF-1α表达的影响

目的 探究桃红四物汤对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)的保护作用及潜在的分子机制。方法 (1)取hRMECs,设置5组：空白对照组加5 mmol/L葡萄糖培养,高糖模型组加30 mmol/L葡萄糖培养,桃红四物汤低、中、高剂量组分别加30 mmol/L葡萄糖和相应浓度桃红四物汤含药血清培养,通过Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力,血管生成实验检测细胞的成管能力,ELISA试剂盒检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)水平,Western blot法检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达情况。(2)另外设置4组：空白对照组加5 mmol/L葡萄糖培养,高糖模型组加30 mmol/L葡萄糖培养,桃红四物汤组加30 mmol/L葡萄糖和高剂量桃红四物汤含药血清培养,桃红四物汤+HIF-1α过表达组采用HIF-1α过表达的hRMECs细胞加30 mmol/L葡萄糖和高剂量桃红四物汤含药血清培养,考察HIF-1α过表达对桃红四物汤的功能回复作用。结果 (1)与空白对照组比较,高糖模型组细胞侵袭和迁移能力均明显增强(P均<0.05),成管数量明显...     

小檗碱抑制IKKβ Ser 181磷酸化改善高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的 研究小檗碱对高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制.方法 以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时以阿司匹林作为阳性对照,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄人法观察葡萄糖的转运率,用Western blotting 检测IKKβ蛋白,IKKβSer 181磷酸化,IRS-1蛋白,IRS-1 Ser 307磷酸化,PI-3K p85蛋白,GLUT4蛋白的表达.结果 25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h使3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制60%,IKKβ Ser 181磷酸化、IRS-1 Ser 307磷酸化的表达增加,IRS-1和PI-3K p85蛋白的表达减少;同时加入小檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应.但高糖、小檗碱、阿司匹林对3T3-L1脂肪细胞IKKl3蛋白、GLUT4蛋白的表达无明显影响.结论 小檗碱可以明显改善高糖诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能是小檗碱通过抑制IKKβ Ser 181磷酸化,使IRS-1丝氨酸残基磷酸化减少而酪氨酸残基磷酸化增加,调节胰岛素信号蛋白的表达来实现的.     

miR-29a调控心肌肥大的分子机制研究

目的探讨miR-29a调控心肌肥大的分子机制。方法利用荧光素酶报告基因实验验证miR-29a与其潜在靶基因PPARδ/β的靶向关系。体外分离培养新生SD大鼠心肌细胞,分别以5 mmol/L葡萄糖(正常组)、25 mmol/L葡萄糖(高糖诱导组)和转染miR-29a抑制剂+25 mmol/L葡萄糖(实验组)培养48 h,应用Image J软件测量单细胞表面积,用qRT-PCR法检测各组miR-29a以及心肌肥大标志基因β-MHC和BNP mRNA的表达,采用Western blot法检测各组心肌细胞PPARδ/β蛋白表达情况。结果荧光素酶报告基因实验显示调控能量代谢的基因PPARδ/β是miR-29a的潜在靶点。高糖诱导组单细胞表面积,β-MHC、BNP mRNA表达水平和miR-29a表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),而PPARδ/β蛋白表达水平显著低于正常组(P<0.05);实验组单细胞表面积,β-MHC、BNP mRNA表达水平和miR-29a表达水平均明显低于高糖诱导组(P均<0.05),PPARδ/β蛋白表达水平显著高于高糖诱导组(P<0.05),各指标与正常组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 miR-29a通过影响心肌细胞的能量代谢而调控心肌肥大。     

芪卫颗粒调控miRNA-155减轻高糖诱导小鼠足细胞转分化的研究

目的 观察中药芪卫颗粒对体外高糖诱导的小鼠肾小球足细胞转分化的作用及对细胞miRNA-155表达的影响,探讨其保护足细胞的可能机制.方法 以小鼠肾足细胞株作为研究对象,采用高糖刺激构建细胞转分化模型,分为正常组(空白血清培养)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖+空白血清培养)、芪卫颗粒组(30 mmol/L葡萄糖+含药...     

黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的影响及作用机制。方法实验分为5组:对照组足细胞采用5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养,模型组足细胞采用30 mmol/L葡萄糖培养液培养,黄芪汤30μg/mL组、黄芪汤100μg/mL组、黄芪汤300μg/mL组分别采用30 mmol/L葡萄糖培养液和相应浓度黄芪汤进行培养。细胞培养48 h后,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测各组细胞标记蛋白podocin表达情况,采用Western blot检测各组细胞内质网应激通路蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、真核起始因子2α(eIF2α)]及其介导的凋亡相关蛋白[增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)]表达情况。结果模型组细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率明显高于对照组(P均<0.05);黄芪汤各组细胞存活率均明显高于模型组(P均<0.05),细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),且呈浓度依赖性。模型组podocin表达荧光强度明显弱于对照组,黄芪汤各组随着药物浓度升高podocin表达荧光强度明显增强。模型组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP表达水平均明显高于对照组(P均<0.05);黄芪汤各组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),且黄芪汤各组随药物浓度的升高GRP78、p-PERK、p-eIF2α表达水平均逐渐降低(P均<0.05)。模型组Bcl-2表达水平明显低于对照组(P<0.05);黄芪汤100μg/mL组、黄芪汤300μg/mL组Bcl-2表达水平均明显高于模型组(P均<0.05);黄芪汤100μg/mL组与黄芪汤300μg/mL组Bcl-2和CHOP表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论黄芪汤可呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞损伤,其作用可能与抑制PERK介导的内质网应激途径有关。     

淫羊藿苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导人脐静脉内皮细胞的损伤及其机制。方法人脐静脉内皮细胞株分别培养在含5.5mmol/L葡萄糖(正常对照组)、5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇(高渗对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖损伤组)、30mmol/L葡萄糖+10μmol/L淫羊藿苷(低剂量淫羊藿苷组)和30mmol/L葡萄糖+100μmol/L淫羊藿苷(高剂量淫羊藿苷组)的培养基中培养48h,分别进行细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶及一氧化氮含量、细胞丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力的测定。结果:高糖损伤组及低、高剂量淫羊藿苷组的细胞活力、乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力与正常对照组比差异均有统计学意义(P<0.01);低、高剂量淫羊藿苷组的细胞活力、乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力与高糖损伤组比差异均有统计学意义(P<0.01)。高渗对照组各项指标与正常对照组相比无显著性差异。结论淫羊藿苷对体外高糖损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高内皮细胞抗氧化酶活力,维持NO正常水平;减少细胞膜脂质过氧化损伤,维持膜完整性而实现的。     

三七总皂苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的研究

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及机制.方法 体外培养人HK-2细胞并分为3组:正常对照组(含5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(含25 mmol/L D-葡萄糖)和高糖+PNS组;48h后细胞免疫化学方法测定各组HK-2细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),用ELISA法检测细胞培养上清中纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达.结果 对照组HK-2细胞形态为立方形铺路石样,未见α-SMA阳性表达;高糖组细胞变为梭形长条样,α-SMA的表达也明显增多(P＜0.05);治疗组细胞大部分仍呈立方形铺路石样,α-SMA的表达明显下降(P＜0.05).高糖组TGF-β1与FN浓度显著高于对照组(均P＜0.01),治疗组TGF-β11与FN的表达明显低于高糖组(均P＜0.01).α-SMA的表达与TGF-β1、FN的表达呈正相关.结论 PNS可能通过抑制肾小管上皮细胞α-SMA的表达和细胞外基质分泌,从而抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化,对糖尿病肾病有一定防治作用.     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

目的探讨波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECS）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法以HUVECS为研究对象,实验分为3组：正常对照组（5.5mmol/L）、持续高糖组（25mmol/L）、波动高糖组（5.5/25mmol/L,白天3h高糖2h正常浓度葡萄糖波动3次,高糖过夜）。通过双抗体夹心酶联免疫吸附法（ABC-ELISA）检测细胞在各种糖浓度条件下24h、48h、72hICAM-1及TNF-α的表达。结果ICAM-1的浓度各个时间段波动组与高糖组和正常对照组相比均升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。TNF-α的浓度3个时间段波动组与高糖组、正常对照组相比显著升高（P〈0.05）,呈时间-效应关系。结论波动性高糖较持续性高糖更增强HUVECSICAM-1和TNF-α的表达。     

洋参二醇皂苷对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护效应研究

目的探讨洋参二醇皂苷对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护效应及其机制。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,通过每24 h间替更换高糖型DMEM全培养基(葡萄糖浓度25 mmol/L)与低糖型DMEM全培养基(葡萄糖浓度5.56 mmol/L)构建人脐静脉内皮细胞血糖波动模型。实验分为5组,包括正常低糖组、稳定高糖组、波动高糖组(间替高糖/低糖)、洋参二醇皂苷低剂量组(0.04 mg/m L)、洋参二醇皂苷高剂量组(0.08 mg/m L)。细胞培养8 d,观察细胞形态学表现,MTT测定细胞成活率,取细胞培养上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,细胞裂解液检测胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果洋参二醇皂苷低、高剂量组细胞形态均较波动高糖组明显好转,细胞活性和细胞中SOD活性均明显高于波动高糖组(P均<0.05),LDH漏出率和细胞中TNF-α、s ICAM-1、ET-1、NO、MDA含量均明显低于波动高糖组(P均<0.05)。结论洋参二醇皂苷对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞具有显著保护效应,其保护效应与其能够显著减轻葡萄糖波动诱导的氧化应激、炎症反应及细胞黏附分子的过度表达密切相关。     

黄芪多糖通过失活Wnt信号通路抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡

目的:研究黄芪多糖对高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:建立高糖诱导下肾小管上皮细胞损伤;运用MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Caspase-3、Axin-1、β-catenin蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中Axin-1、β-catenin mRNA表达。结果:与空白对照组比较,高糖(25、30、40 mmol/L)处理组细胞活力均显著降低(P0.05),且最适浓度为40 mmol/L,在该浓度下细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、β-catenin蛋白表达显著升高、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著降低,β-catenin mRNA显著升高(P0.05)。与模型组比较,黄芪多糖300、400 mg/L组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Caspase-3、β-catenin蛋白表达及β-catenin mRNA表达显著降低、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:黄芪多糖可抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与失活Wnt信号通路有关。     

糖络宁通过调控miR-146a减轻高糖诱导的大鼠背根神经节细胞炎症反应机制研究

目的 探讨糖络宁通过调控miR-146a减轻高糖诱导下的大鼠背根神经节细胞炎症反应的机制。方法 清洁级SD大鼠20只随机均分为两组,以糖络宁生药及等体积蒸馏水灌胃以制备糖络宁含药血清及正常血清。以新生胎鼠背根神经节细胞作为研究对象,采用高糖刺激构建细胞损伤模型,分为正常组(空白血清培养)、高糖组(150 mmol/L葡萄糖+空白血清培养)、糖络宁组(150 mmol/L葡萄糖+糖络宁含药血清培养)、miR-146a基因过表达组(150 mmol/L葡萄糖+miR-146a激动剂)4个组,48小时后,收集各组细胞并进行相关检测。细胞增殖毒性检测法检测各组细胞24、48及72小时活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中炎症因子(白介素-6、白介素-1β、肿瘤坏死因子-α)的蛋白表达情况。逆转录聚合酶链反应法检测各组细胞miR-146a和炎症因子的表达情况。结果 (1)与正常组相比,高糖组、糖络宁组及miR-146a基因过表达组光密度值均明显下降(P<0.05),炎症因子蛋白及基因表达水平均明显升高(P<0.05),高糖组、糖络宁组miR-146a基因表达水平明显下降(P<...     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。