广泛耐药鲍曼不动杆菌 OXA 酶基因检测及 OXA-23基因分析

目的：研究台州学院医学院附属市立医院广泛耐药的鲍曼不动杆菌（Ab）苯唑西林酶（OXA酶）基因的分布特性及O X A‐23基因特点。方法对60株A b采用肉汤稀释法检测其最低抑菌浓度（M IC ）;聚合酶链反应（PCR）检测OXA酶的基因型,阳性产物进行DNA测序;对OXA‐23阳性的菌株通过BamHⅠ酶切分析OXA‐23以及周围基因的特性。结果60株Ab对15种抗菌药物同时存在13种以上耐药;全部菌株检出OXA‐2、OXA‐10、OXA‐24和OXA‐58,为普遍流行;27株检测到OXA‐51,为次要流行。普遍流行的OXA‐2以OXA‐2基因型（61．7％）和OXA‐53基因型（21．7％）为主;OXA‐10以OXA‐10基因型（53．3％）和OXA‐56基因型（23．3％）为主;OXA‐24以OXA‐24基因型（38．3％）和OXA‐33基因型（36．7％）为主;OXA‐58只有OXA‐58（100％）为唯一基因型;次要流行的27株Ab OXA‐51中有18株为OXA‐51基因型（30．0％）。另外3株Ab属于OXA‐23,都是OXA‐23基因型,有关的基因结构包含转座子 Tn2008和基因结构ISAba1‐blaOXA‐23。结论该院的OXA型β‐内酰胺酶基因型以OXA‐58与OXA‐2为主要流行,而对于3株OXA‐23及其周围基因检测表明,ISAba1与转座子 Tn2008复合基因以及ISAba1与blaOXA‐23的复合基因是其与众不同的特点。     

鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的 了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。 方法 收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。 结果 温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。 结论 温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。     

多重耐药鲍曼不动杆菌OXA-23基因与qacE△1基因检测的研究

目的对本院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌(MRAB)OXA-23和qacE△1耐药基因进行检测分析。方法收集2009年1月至2010年12月分离的85株多重耐药鲍曼不动杆菌,用聚合酶链反应(PCR)方法检测OXA-23和qacE△1耐药基因并测序,序列与基因库比对。结果 85株耐药菌中OXA-23、qacE△1基因的阳性率依次为55.3%、81.2%。其中58株耐亚胺培南MRAB OXA-23、qacE△1基因的阳性率为75.86%、84.48%;而其余27株亚胺培南敏感MRAB两个基因的阳性率分别为11.11%、74.07%。结论 OXA-23基因存在与鲍曼不动杆菌耐亚胺培南密切相关,qacE△1基因检测结果提示这些菌株81.2%携带Ⅰ类整合子,是本组细菌多重耐药表型的主要原因之一。     

LAMP法检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA-23基因的研究

目的建立一种简便、快速、特异、灵敏的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)OXA-23基因分子检测方法,并用于临床标本检测,以便了解产OXA-23酶CRAB的耐药分布状况。方法运用环介导等温扩增技术(LAMP),利用PrimerExplorer 4.0软件设计一套特异引物检测CRAB的OXA-23基因。通过优化LAMP检测方法的实验条件,应用SYBR Green I作为LAMP反应荧光显色物质,然后通过肉眼目测或电泳检测比较结果。同时,应用LAMP检测该院自2013年12月至2014年3月收集分离的41株多重耐药鲍曼不动杆菌。结果 CRAB的OXA-23基因菌株LAMP反应电泳产生了阶梯状条带,而其他不同菌株和阴性对照没有条带;向扩增产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,CRAB的OXA-23基因菌株LAMP扩增产物的颜色由橙色变为绿色,而其他不同菌株和阴性对照仍为橙色;并检测出CRAB的OXA-23基因菌株纯培养物的灵敏度达到了5cfu/μL。对41株我院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌进行LAMP检测,检出OXA-23基因32株,检出率为78.04%。结论该院分离的CRAB OXA-23基因的携带率较高,对常用抗菌药物有非常高的耐药率;本研究建立的LAMP技术检测CRAB OXA-23基因是一种简便、快速、特异、灵敏的耐药鲍曼不动杆菌检测方法,适于基层单位推广使用,对临床医生合理选择抗生素具有重要意义。     

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的了解临床分离12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌12株，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其同源性，并用聚合酶链反应(PCR)检测分析其耐药基因。结果12株细菌均为多重耐药株，有9株对亚胺培南耐药，6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲噁唑均耐药，对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2)2型，以A型为主要流行株(9株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。PCR检出12株菌株均携带OXA-23基因，未能检出OXA-24基因。结论本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，12株菌株均产OXA-23型碳青霉烯酶。     

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的　了解临床分离 12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法　收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌 12株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC) ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分析其同源性 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测分析其耐药基因。结果　 12株细菌均为多重耐药株 ,有 9株对亚胺培南耐药 ,6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲唑均耐药 ,对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。 12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2 ) 2型 ,以A型为主要流行株 (9株 ) ,主要集中在重症监护病房 (ICU)。PCR检出 12株菌株均携带OXA 2 3基因 ,未能检出OXA 2 4基因。结论　本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致 ,该流行株呈多重耐药 ,12株菌株均产OXA 2 3型碳青霉烯酶。     

90株鲍曼不动杆菌OXA基因及ISAba1对OXA-23基因表达的影响

目的研究该院鲍曼不动杆菌(Ab)OXA基因流行趋势及ISAba1对OXA-23基因表达的影响。方法采用VITEK 2Compact全自动微生物鉴定仪检测90株非重复Ab,多重聚合酶链式反应(PCR)检测Ab的OXA基因和插入序列(ISAba1)。TA克隆耐药基因全序列blaOXA-23、插入序列ISAba1和ISAba1-blaOXA-23,并分别用大肠杆菌进行转化,肉汤稀释法测定阳性菌株和转化子对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)。结果多重PCR检测90株Ab,blaOXA-23阳性73株,blaOXA-51阳性90株,ISAba-1阳性86株,未检测到blaOXA-24、blaOXA-58阳性菌株。17株未检测到blaOXA-23阳性的菌株中有11株对亚胺培南敏感,其中11株中有4株未检测到ISAba1。转化阳性菌株pET28b(+)-blaOXA-23、pET28b(+)-ISAba1、pET28b(+)-ISAba1-blaOXA-23和转化子[pET28b(+)]对亚胺培南MIC值分别为4.00、1.00、64.00和0.12μg/mL;对美罗培南MIC值分别为4.00、0.50、16.00和0.03μg/mL。结果显示ISAba1对blaOXA-23基因的表达有影响。结论该院Ab流行以blaOXA-23和blaOXA-51为主。ISAba1对blaOXA-23的高表达可能是Ab对碳青霉烯类抗菌药物高度耐药的主要原因。     

DNA电化学传感器在白血病基因诊断中的应用

DNA电化学传感器技术是20世纪末发展起来的一种新型生物传感器技术,为基因识别和疾病基NN断提供了一种快速、简便、廉价的方法,现已成为一个非常活跃的研究领域。目前DNA电化学传感器的研究已经取得很大的进展,但同时也面临很多困难和挑战。本文就DNA电化学传感器的设计、研究现状和近几年来该领域的一些重要进展作一总结,并对研制用于白血病融合基因检测和诊断的DNA电化学传感器作了展望。     

DNA电化学传感器在白血病基因诊断中的应用

DNA电化学传感器技术是20世纪末发展起来的一种新型生物传感器技术,为基因识别和疾病基因诊断提供了一种快速、简便、廉价的方法,现已成为一个非常活跃的研究领域.目前DNA电化学传感器的研究已经取得很大的进展,但同时也面临很多困难和挑战.本文就DNA电化学传感器的设计、研究现状和近几年来该领域的一些重要进展作一总结,并对研制用于白血病融合基因检测和诊断的DNA电化学传感器作了展望.     

基于石墨烯和壳聚糖复合膜构建的电化学传感器检测尿酸研究

目的构建基于石墨烯(GR)和壳聚糖(CHI)复合膜的电化学传感器对尿酸进行检测和研究。方法通过扫描电子显微镜对石墨烯进行形貌分析;采用循环伏安法、差分脉冲伏安法和交流阻抗法等来研究尿酸在石墨烯/壳聚糖修饰的玻碳电极上的电化学行为,并评估其检测性能。采集2017年9月24日三名实验人员的晨尿,用构建的传感器来对生物样本进行检测。结果扫描电子显微镜下石墨烯呈片层结构。GR/CHI复合膜构建的电化学传感器测定6～600μmol/L尿酸时具有良好的线性关系(R~2=0.993 4),检测限为0.33μmol/L(S/N=3);同时讨论了扫描速度、修饰量、pH及干扰物对尿酸测定的电化学行为的影响。尿酸的加标回收率在97.5%～101.3%之间。结论该传感器生产简单,特异度好,稳定性高,可用于实际尿酸样品的检测,为临床尿酸测定提供了新的应用前景。     

压电基因传感器液相稳定平台构建及检测HCMV的实验研究

目的 建立石英谐振压电基因传感器检测系统液相稳定平台并应用该检测系统实时检测链置换扩增(SDA)反应。方法 ①观察以金属夹具式和粘胶式两种检测池连接方式构成的传感器在液相中的频率稳定性；②以巨细胞病毒(HCMV)为检测对象，建立链置换扩增(SDA)反应系统；③传感器检测系统对HCMV SDA反应进行实时检测。结果 ①新型金属夹具式可调节及可换式传感器检测池可实现传感器在液相中的频率稳定性；②链置换扩增(SDA)反应可引起压电基因传感器的频率持续下降；③在一定范围内核酸杂交所引起的频率下降幅度与加入的靶序列浓度呈正相关；结论 成功构建压电基因传感器液相检测平台并实现对链置换扩增(SDA)反应的实时检测；该系统可直接检测基因组DNA并可广泛应用于病源微生物的临床检测。     

HCV核心区DNA疫苗的构建及初步鉴定

目的 构建HCV核心蛋白DNA疫苗,观察其诱导BALB/C小鼠产生体液免疫应答的效果,为研制应用于人类的HCVDNA疫苗提供实验依据.方法 将HCVC基因片段插入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建真核表达载体pCDNA3.1HCVcore,并用酶切分析鉴定;肌注BALB/C小鼠,以ELISA法检测小鼠血清HCV抗体.结果 经酶切分析证实重组质粒pCDNA3.1HCVcore构建正确;9只小鼠经3次DNA免疫后均出现抗HCV抗体.结论 成功地构建出HCVC区DNA疫苗,并可诱导BAIB/C小鼠体液免疫应答.     

电化学DNA生物传感器设计及在医学检验中的应用进展

电化学DNA生物传感器将电化学方法的高灵敏度和DNA生物传感器的高度序列特异性结合起来,是一种全新的基因检测手段.本文在介绍电化学DNA生物传感器原理的基础上,重点阐述其设计及在医学检验中的应用进展.     

肽核酸基因传感器检测条件的摸索及优化

目的：摸索及优化肽核酸（PNA）石英谐振式基因传感器（QOGS）阵列的检测条件。方法：设计针对HBV的bis-PNA探针，将其固定在QOGS阵列表面，具体摸索了bis-PNA探针与HBV基因组DNA杂交时的最佳pH值、最佳离子浓度、最佳探针固定量。结果：杂交缓冲液pH值为6.8、离子浓度为20mmol/L、探针浓度为1.5μmol/L时杂交条件最为适宜。结论：摸索出了PNA-QOGS阵列反应时的最佳条件，为成功地构建PNA-QOGS阵列检测系统奠定了坚实的基础。     

电化学生物传感器在microRNA检测中的应用

MicroRNA (miRNA)是一种内源性的单链非编码RNA,参与细胞的增殖凋亡分化和代谢等重要生理过程.近年来发现循环miRNA能够耐受RNA酶消化、强酸强碱、煮沸等极端条件,是一种潜在的疾病标志物.因此,miRNA的检测对疾病的早期诊断具有重要的生物学意义.电化学生物传感器由于其简易、便携、灵敏、反应快速以及价格低廉等特点而被研究者广泛应用于miRNA检测的研究.本文综述了miRNA的电化学传感器的研究进展,评述了各类方法的优缺点,并对miRNA电化学检测的发展趋势进行了展望.     

电化学适配体传感器检测生物标志物研究进展

适配体可特异性识别疾病的生物标志物,利用适配体这一特性建立的检测方法在临床应用中越来越受到关注。随着适配体生物传感器的开发,其应用前景也随之展现。适配体与功能纳米材料结合可提高检测灵敏度,降低检出限。文章对采用适配体纳米技术构建电化学生物传感器的方法,如何改进生物传感器的性能,以及生物传感器在疾病生物标志物检测方面的应用进行介绍,并分析电化学适配体生物传感器的应用前景和面临的挑战。     

产OXA-23鲍曼不动杆菌的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测研究

目的应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产OXA-23鲍曼不动杆菌。方法 125株泛耐药鲍曼不动杆菌及110株碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌为研究对象,用PCR和测序方法检测OXA基因。美罗培南与鲍曼不动杆菌37℃孵育2h后,上清液进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测,统计学分析各质谱峰的ROC曲线。结果 125株泛耐药鲍曼不动杆菌均携带OXA-23基因。碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌的质谱峰质荷比（m/z）为384m/z,406m/z,428m/z,而泛耐药鲍曼不动杆菌的质谱峰为358m/z,380m/z,402m/z,406m/z,424m/z,428m/z,446m/z,468m/z。质谱峰358m/z与380m/z的ROC曲线下面积（AUC）均为0.99。通过质谱峰的变化鉴定产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌,灵敏度与特异度均为100%。结论基质辅助激光解析电离飞行时间质谱可以快速、准确检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,指导临床合理使用抗菌药物。     

子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台的构建及初步应用

目的 构建子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台,为临床分析PTEN基因968delA突变与子宫内膜癌的相关性提供技术支持。方法 设计PTEN基因968delA位点的特异性硫化修饰引物,以本实验室前期构建的包含PTEN基因968delA位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,采用正交设计进行PCR条件优化,再将其优化后采用突变敏感性分子开关技术检测从南华大学附属第一医院收集的62例临床患者子宫内膜组织样本PTEN基因968delA位点突变。结果 突变敏感性分子开关技术检测PTEN基因968delA位点最佳PCR反应条件为：30个循环、模板DNA(10 ng/μL)0.3μL、引物(10μmol/L)0.5μL、退火温度61℃,灵敏度达10^-3 ng/μL。62例子宫内膜癌组织与21例正常子宫内膜组织标本均未发现PTEN基因968delA突变。结论 成功构建了子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台,为该技术在PTEN基因968delA的突变筛查中的应用提供了依据。