肺炎克雷伯菌携带碳青霉烯酶KPC-2基因环境多态性研究

目的研究复旦大学附属华山医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌广泛播散初期携帯bla_(KPC-2)的完整基因结构,获得其播散的基因背景。方法收集2006年8月-2009年12月连续不重复的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌42株,进行质粒抽提、bla_(KPC-2)筛选、多位点序列分型(MLST);随后设计一系列PCR引物,基因结构进行完整测序。结果MLST分型显示:34株属于ST11型,5株属于ST423,2株属于ST65,1株属于ST977。主要发现两种携带bla_(KPC-2)基因结构,A型(8/42):Tn1721-bla_(KPC-2)-Tn3;B型(34/42):Tn1721-bla_(KPC-2)-Tn3,且B型结构的两端序列存在差异。结论该组中肺炎克雷伯菌携带bla_(KPC-2)的基因结构存在多态性,Tn1721-bla_(KPC-2)-△Tn3-IS26样结构占优势。研究获得的携带bla_(KPC-2)基因结构及侧翼的完整序列,为进一歩正确认识和理解bla_(KPC-2)的播散模式和机制提供了完整的基因背景。     

耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌耐药基因研究

目的了解对碳青霉烯类药物耐药的肺炎克雷伯菌(CRKP)碳青霉烯酶基因的携带情况。方法收集本院2013年1月至2016年6月临床标本中分离的630株肺炎克雷伯菌,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定和药敏检测以及改良Hodge试验筛选CRKP,采用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,采用多位点序列分型(MLST)技术对CRPK进行分子遗传学分析。结果 630株肺炎克雷伯菌中,61株对亚胺培南耐药,为CRKP,占9.7%,CRKP对多种临床常用抗菌药物均显著耐药,对替加环素具有良好的敏感性。PCR结果显示59株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中53株携带bla KPC-2型基因(89.8%),4株携带bla NDM-1型基因(6.8%),2株携带bla OXA-48型基因(3.4%)。MLST分型主要以ST11为主(49株,80.3%)。结论我院CRKP基因型主要为KPC-2型,另外有散在NDM-1和OXA-48型,MLST分型主要为ST11型。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌药物敏感性及bla_(KPC)基因检出率

目的了解复旦大学附属华山医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)对常用抗菌药物的敏感性及bla_(KPC)基因的检出率。方法收集2014年1-12月临床分离的CRKP,微量肉汤稀释法测定CRKP对常用抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)扩增bla_(KPC)基因。结果共收集CRKP 205株,主要分离自呼吸道标本(76.1%,156/205)和尿标本(18.5%,38/205)。药敏试验结果显示,CRKP对大多数抗菌药物高度耐药,除对多黏菌素E、替加环素、甲氧苄啶-磺胺甲唑和阿米卡星的耐药率分别为1.5%、0.5%、51.0%和74.9%外,对其他抗菌药物的耐药率在85%~100%;87.8%(180/205)菌株为blaKPC基因阳性株。结论 CRKP对多黏菌素和替加环素之外的多数临床常用抗菌药物呈高度耐药;产KPC型碳青霉烯酶是CRKP对碳青霉烯类耐药最主要的耐药机制。     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药基因检测及分析

目的 分析耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)耐药情况与耐药相关基因的关系,了解其耐药机制. 方法 采用PCR技术检测29株碳青霉烯类耐药KPN与产碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,β-ESBLs)、ampC酶及喹诺酮类耐药相关基因blaKPC-2、blaIMP-4、blaCTX-M、blaCTX-M-15、blaVIM-1、blaTEM、blaSHV、ampC、gyrA、parC,并对KPC-2、ampC、gyrA基因进行序列分析. 结果 用PCR技术证实了29株为产KPC、IMP型碳青霉烯酶的KPN,并且携带TEM、SHV型β-ESBLs,其中18株同时编码ampC基因;29株待测菌均检出喹诺酮类耐药相关gyrA、parC基因.KPC基因片段同源性分析显示,待测菌株之间核苷酸同源性为98％～100％,氨基酸同源性为97％～100％;与肺炎克雷伯氏菌Kpn-1504株之间的核苷酸同源性最高,为99％～100％.gyrA 、parC基因突变率分别为58.6％、62.1％.结论产KPC-2、IMP-4型碳青霉烯酶同时携带多种β-ESBLs、ampC基因及突变的喹诺酮类耐药相关gyrA、parC基因的KPN耐药情况更加严重,同时存在克隆性流行可能.     

肺炎克雷伯菌中携带碳青霉烯酶KPC-2基因的质粒分型

目的：观察华山医院临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中携带bla_KPC-2质粒的分型情况, 以了解其流行变迁。方法：共收集华山医院临床连续不重复的bla_KPC-2阳性碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌38株, 对其进行多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST）分型, 并用松弛酶对质粒进行分型。结果：8株肺炎克雷伯菌所携带的bla_KPC-2阳性质粒属于MOBP3亚型, 另30株均为MOB_F12亚型。同时, 进化树显示, 本批菌株所含有的MOB_F12亚型质粒位于2个不同分支上, 提示该批菌株的MOB_F12亚型质粒具有不同的生物来源。结论：首次运用松弛酶对肺炎克雷伯菌所携带的bla_KPC-2阳性质粒进行分型, 发现其中8株属于MOB_P3亚型, 30株为MOB_F12亚型, 且MOB_F12亚型菌株具有不同的生物来源, 反映了华山医院临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中携带bla_KPC-2质粒的多样性。     

同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒bla_(KPC-2)基因

目的建立敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的耐药基因的方法。方法聚合酶链反应(PCR)分别扩增试验菌株待敲除目的基因blaKPC-2的上下游片段及质粒pMQ300的潮霉素耐药基因片段,采用重叠延伸基因扩增(SOE-PCR)技术构建融合片段,以耐阿普霉素的λred质粒pKOBEG-Apr为介导,同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因。用含潮霉素和阿普霉素的LB培养基筛选重组子,用PCR和逆转录PCR扩增检测blaKPC-2基因、潮霉素耐药基因及药物敏感性验证重组子。结果不同多位点序列分析(MLST)型别的2株临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因得以敲除。结论λred同源重组法可以可靠敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的基因。     

河南发现产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌

KPC酶是一种新的碳青霉烯酶，属于A类酶，水解所有的β内酰胺类抗生素，能被克拉维酸抑制[1]。它不仅存在于肠杆菌科的细菌中[2]，也存在于铜绿假单胞菌等非发酵菌中[3]。自2001年Yigit等[1]在美国报道KPC-1之后，法国、希腊、中国等国家[4-8]也发现了KPC酶。我国浙江地区曾报道了KPC酶[7-8]。我们在临床分离到1株亚胺培南中敏的肺炎克雷伯菌，研究发现其产生KPC-2型碳青霉烯酶。     

发现一株产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌

目的 研究1株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的耐药机理。方法 采用浓度梯度法（Etest）测定细菌对各抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）。通过等电点分析（IEF）、质粒抽提、接合试验、转化试验、聚合酶链反应（PCR）扩增及耐药基因克隆测序分析细菌编码的B内酰胺酶。结果临床分离的肺炎克雷伯菌等电点显示3条β内酰胺酶条带，分别为5．4、6．7和8．2。PCR扩增测序临床分离菌含TEM-1（pI，5．4）、SHV-12（pI，8．2）和KPC-2（pI，6．7）β内酰胺酶编码基因。转化菌只有一条β内酰胺酶条带，为6．7。从转化菌质粒（60000bp）上获得1500bp的克隆片段，测序证实其为KPC-2编码基因。结论 亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的质粒上携带水解碳青霉烯类抗生素的A类2f组KPC-2酶的编码基因。     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌临床分布及耐药基因检测

目的了解中国人民解放军联勤保障部队第901医院2017年全院住院患者碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)检出情况,并对CRKP的耐药基因携带情况进行分析。方法收集中国人民解放军联勤保障部队901医院2017年1月1日至2017年12月31日住院患者临床分离的CRKP,采用PHNX10分析其临床常用抗菌药物的耐药情况,用琼脂稀释法确定每株待测菌的最低抑菌浓度(MIC),用WHONET5.6软件统计分析CRKP的临床分布,并用PCR法扩增碳青霉烯酶基因及其他β-内酰胺酶基因。结果该院2017年住院患者共检出23株CRKP,其中神经外科检出12株,重症监护病房(ICU)检出3株,普外科检出2株,干部病房检出2株,骨科、五官科、眼科、泌尿外科各检出1株;标本类型主要为痰(16例),其次为创面;23株CRKP中21株携带blaKPC-2基因;19株同时携带blaKPC-2、blashv-1基因,2株同时携带blaKPC-2、blashv-1、blactx-m-15基因。结论产blaKPC-2是该院CRKP主要原因,应引起临床重视。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药表型检测的研究

目的 研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药表型检测的价值。方法 对2018-2021年该院分离的450株肺炎克雷伯菌(KP)进行分析,统计分离情况,分析KP的耐碳青霉烯类表型,同时选取替加环素、美罗培南、亚胺培南等药物进行药敏试验;并对CRKP进行耐药表型分析,进而对比常见耐药表型的耐药及分布情况。结果 450株KP对亚胺培南、美罗培南、厄他培南的耐药率分别为6.00%、6.00%、7.78%,其中CRKP共36株。同源性分析显示,36株CRKP中出现3种主要克隆型,有11株为ST11型,7株为ST2305型,5株为ST2390型,总体以≥15岁人群感染为主,住院时间较长,痰液标本培养获得居多,主要分布于ICU、肺病科、老年病科。其中ST11型、ST2305型、ST2390型3种优势菌株对替加环素的耐药率均低于20%,对磺胺类药物的耐药率均低于65%,但ST11型菌株对喹诺酮类药物的耐药率高于90%,ST2305型对氨基糖苷类药物的耐药率高于85%。结论 耐药表型检测适合CRKP流行病学调查,结合常规药敏试验,能有效预防和控制CRKP的播散。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及同源性分析

目的了解急诊重症监护病房(ICU)分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因携带情况和菌株同源性。方法收集2015年7月至2016年8月分离自徐州医科大学附属医院急诊ICU的CRKP 19株,PCR检测碳青霉烯类耐药基因、超广谱β内酰胺类相关基因及头孢菌素类耐药基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)进行菌株分子分型。结果 19株CRKP菌株中18株检出碳青霉烯类耐药基因,包括blaKPC-2型17株和blaNDM-5型1株;18株菌均携带ESBLs基因,其中blaSHV-12型8株、blaSHV-11型3株、blaSHV-2a型5株,blaTEM-1型15株、blaCTX-M-65型10株,blaCTX-M-15型3株,blaCTX-M-14及blaCTX-M-27型各1株;13株检出头孢菌素类耐药基因,且均为blaDHA-1型。PFGE分型显示19株CRKP可以分为4个型和4个亚型,包括A1型12株,A2型、A3型、A4型各1株,B型2株,C型及D型各1株。MLST显示ST11型15株,ST48型2株以及ST37型1株,1株菌未能分型。其中15株blaKPC-2阳性ST11型菌株PFGE分型为型别A。结论我院急诊ICU存在携带blaKPC-2基因ST11型CRKP菌株克隆传播,应加强急诊ICU的耐药性监测以及病房的隔离和消毒。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的探讨2014年该院收集的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法采用纸片扩散法或者Vitek 2Compact全自动药敏分析系统初筛亚胺培南非敏感菌株,琼脂稀释法确证亚胺培南非敏感肺炎克雷伯菌;通过Carba NP确证试验检测碳青霉烯酶表型;通过PCR扩增及测序检测碳青霉烯酶基因、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、质粒携带的AmpC基因在菌株中携带情况;外膜蛋白SDS-PAGE分析菌株外膜蛋白的改变;外排泵抑制剂羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌中是否存在针对碳青霉烯类抗菌药物的外排泵。结果琼脂稀释法验证30株为碳青霉烯非敏感菌株,其中19株为Carba NP表型试验阳性,其中18株产KPC-2,1株产NDM-1。11株Carba NP表型试验阴性的不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌的ESBLs、AmpC酶的携带率为blaCTX-M 72.7%,blaSHV 27.3%,blaTEM 72.7%,blaDHA 27.3%。SDS-PAGE结果显示编号2368、2875、3050的菌株OmpK36缺失,其余菌株未发现外膜蛋白缺失。CCCP存在时,11株不产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最小抑菌浓度值均明显降低。结论碳青霉烯酶产生,尤其是产KPC-2是该院CRKP的主要耐药机制,外排泵的高表达,外膜蛋白的缺失合并产AmpC酶也发挥了重要作用。     

有关肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯酶的研究进展

1KPC型酶的简介1996年,产KPC型酶的肺炎克雷伯菌首次在北卡罗来纳州发现[1]。属于分子分类的A类,功能分类的2f组。命名为KPC－1,可以被克拉维酸和他唑巴坦所抑制,但不能被EDTA所抑制。目前有11种亚型,分别命名为KPC－1／2－KPC－12[1]。     

新生儿耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因研究

目的研究临床分离自新生儿的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药性及碳青霉烯酶耐药基因类型。方法收集2013年12月至2015年12月南宁市2家妇幼保健院住院新生儿临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌8株。使用生物梅里埃公司的VITEK-2Compact全自动细菌鉴定仪对细菌进行鉴定以及菌株最低抑菌浓度(MIC)检测。改良Hodge试验筛选碳青霉烯酶阳性菌株,乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效试验筛选产金属酶菌株。PCR扩增碳青霉烯酶基因(KPC、GES、SME、NMC、IMI、IMP、NDM-1、VIM、SIM),并对PCR阳性产物测序鉴定,测序结果与GenBank数据库进行比对。结果药敏结果显示,8株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验显示,6株改良Hodge试验阳性,7株EDTA协同试验阳性。8株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌均携带IMP-4碳青霉烯酶基因,未检出KPC、GES、SME、NMC、IMI、NDM-1、VIM、SIM型碳青霉烯酶基因。结论本地区新生儿碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率较高,新生儿临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌主要耐药机制是产B类碳青霉烯酶,IMP-4是其主要酶型。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药分子学研究

目的研究该院临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药分子学机制。方法分析该院临床微生物实验室分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌株(CRKP),采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和全自动微生物分析仪(VITEK-2compact)鉴定细菌并进行药物敏感试验分析,采用改良Hodge试验(MHT)和碳青霉烯酶灭活试验(CIM)进行表型确证;聚合酶链式反应(PCR)法检测碳青霉烯酶基因型,并进行基因测序BLAST比对和多位点序列分析(MLST)。结果 46株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物均表现出高耐药性;耐碳青霉烯表型确证均呈阳性,PCR检测结果显示其中包括A类碳青霉烯酶(KPC-2型)和B类金属酶(NDM-1和IMP-4),MLST分型以ST11型为主。结论该院分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药分子学机制主要以产KPC-2型碳青霉烯酶的ST11型为主,同时有少量其他型别的检出,加强院内感染监测强度和力度,以及进一步规范抗菌药的合理使用显得尤为重要。     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学研究进展

肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要包括产碳青霉烯酶、外膜蛋白缺失或突变、外排泵过度表达以及青霉素结合蛋白变异等,其中最主要的是产碳青霉烯酶。虽然各种肠杆菌科细菌的耐药机制大体相同,但是各种耐药基因在不同种属细菌中的分布和流行情况并不相同。肺炎克雷伯菌是临床上最常见的条件致病菌之一,也是检出率最高的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌。由于临床上治疗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染的药物非常有限,此类患者的病死率较高［1］。自1997年在美国北卡罗莱纳州发现第1株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌以来［2］,对碳青霉烯类耐药或敏感性降低的肺炎克雷伯菌检出率呈持续上升趋势,在肺炎克雷伯菌中发现的耐药基因突变类型也越来越多,这些基因大多存在细菌质粒上,往往通过细菌间的传播导致医院感染的流行。     

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶研究进展

摘要:肺炎克雷伯茵碳青霉烯酶( Kebsella pneumoniae carbapenemases, KPC)能 水解几乎所有的β-内酰胺类抗生素,是临床上最重要的碳青霉烯酶,常见于以肺炎克雷伯菌为代表的肠杆菌科细菌。自首次分离以来,KPC酶已产生多种亚型,其编码基因位于质粒和转座子等可移动元件上,并迅速传播至世界各地。产KPC酶的细菌所引起的感染非常棘手，给患者带来巨大危害。该文就KPC酶的结构和流行特点、耐药特征、传播机制、感染人群分布及检测技术等方面进行综述,以期为临床合理用药及阻止产KPC酶细菌的传播提供依据。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性分析

目的了解我院临床分离碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药机制及流行病学特点。方法收集2015-2017年佳木斯大学附属第一医院临床分离CRKP 31株,采用Vitek 2 Compact检测常用抗菌药物的敏感性;PCR法扩增碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP-4、blaIMP-8、blaVIM-1、blaVIM-2、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51、blaOXA-58)及其他β内酰胺酶基因(blaDHA、blaACC、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-1、blaCTX-M-9);多位点序列分型(MLST)分析肺炎克雷伯菌ST分型。结果 31株CRKP中28株携带blaKPC-2基因,2株携带blaIMP-4,同时携带blaKPC-2和blaNDM-5基因1株;其中26株菌同时携带blaCTX-M-15、blaSHV和blaTEM基因。25株同时携带blaKPC-2、blaCTX-M-15、blaSHV和blaTEM基因。28株菌为ST76型,其余3株分别为ST323、ST896和ST2964型。结论产blaKPC-2是我院CRKP主要耐药机制,并存在ST76型克隆流行。     

多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析

目的研究多重耐药肺炎克雷伯菌临床分离株的碳青霉烯酶的流行情况。方法收集该院从2007年1月至2012年12月临床分离的151株多重耐药肺炎克雷伯菌,并对其药敏结果进行归纳整理,用碳青霉烯酶表型试验进行检测,再用聚合酶链反应(PCR)检测已知的碳青霉烯酶基因,并对扩增产物进行DNA测序,确定其基因型。结果在151株多重耐药肺炎克雷伯菌中,通过改良Hodge试验筛选出12株可能产碳青霉烯酶的菌株,其中有1株的金属酶试验为阳性,该12株菌经PCR扩增及测序确定产碳青霉烯酶菌株有5株,金属酶阳性株为IMP-4型金属酶,另外4株产碳青霉烯酶菌株为KPC-2型。结论近年来该院多重耐药肺炎克雷伯菌出现了产碳青霉烯酶菌株,临床应根据药敏结果合理选用碳青霉烯类药物,以减少耐药菌株的产生。     

耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测及其同源性分析

目的 了解南京市鼓楼医院碳青霉烯酶在耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌中的分布情况,并进行其同源性分析.方法 收集耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌34株,K-B纸片法测定菌株对药物的敏感性;采用改良Hodge试验及EDTA协同试验进行A,B类碳青霉烯酶初筛试验;PCR法扩增碳青霉烯酶基因并进行序列分析,ERIC-PCR后进行同源性分析.结果 34株肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素呈现泛耐药现象,耐药率达100％,仅对丁胺卡那、复方新诺明、左氧氟沙星敏感性相对较高,分别为17.6％,50％和23.5％.ERIC分析结果显示34株菌株主要分为两型,其中A型27株,B1型2株,B2型5株.结论 南京市鼓楼医院的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的首要原因是产KPC-2酶.