平目汤抑制Graves眼病小鼠眼眶脂肪积聚的研究

目的 建立Graves眼病动物模型,观察平目汤对造模雌性BALB/c小鼠眼眶脂肪积聚的影响,并探讨其作用的分子机制和发挥作用可能的靶点.方法 通过使用重组h-TSHR质粒基因免疫结合电穿孔的方法,建立Graves眼病动物模型.使用平目汤不同剂量及地塞米松灌胃4周,观察小鼠眼球后脂肪组织占眼球重量百分比、血清TRAb、甲...     

平目汤对Graves眼病造模小鼠球后脂肪组织及眼球后脂肪细胞Bax、Bcl-2、Fas、FasL mRNA表达量的影响

目的 研究平目汤对Graves眼病模型小鼠球后脂肪组织及甲状腺的形态学影响.方法 选用180只6周龄BALB/c雌性小鼠,随机分为6组,30只留为空白组,150只造模.通过平目汤不同剂量及地塞米松灌胃28 d,观察各组小鼠眼球后脂肪组织占眼球重量百分比、甲状腺与眼球组织病理及眼球后脂肪细胞Bax、Bcl-2、Fas、F...     

平目汤用药大鼠血清介导Graves眼病眼眶脂肪细胞凋亡途径的研究

目的:通过原代培养人眼眶前脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞,研究平目汤促进眼眶脂肪细胞凋亡的作用及分子机制,探讨平目汤治疗非活动期Graves眼病发挥药效的可能作用靶点。方法:收集非活动期Graves眼病患者眼眶球后脂肪组织,共4例4只眼。通过组织块法对人眼眶前脂肪细胞进行分离和培养,观察细胞的形态,采用间接免疫荧光染色鉴定。诱导前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定。制备平目汤含药血清,配成终浓度分别为5%、10%、20%的平目汤低、中、高剂量组。油红O染色观察平目汤对前脂肪细胞诱导分化的影响;MTT法检测平目汤对眼眶前脂肪细胞活力的影响;流式细胞术测定平目汤对眼眶成熟脂肪细胞凋亡率的影响;检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞fas、fas L基因和蛋白表达的影响。结果:(1)采用组织块法培养的细胞呈梭形,增殖旺盛,间接免疫荧光检测证实为前脂肪细胞,可诱导分化为成熟脂肪细胞。(2)MTT结果显示,平目汤各组均可降低前脂肪细胞活力,其中作用显著的是平目汤中剂量组,呈时间依赖性地降低细胞活力。(3)流式细胞术结果表明,与空白对照组比较,平目汤各组细胞凋亡率均升高(P0.05),其中平目汤中剂量组早期凋亡率和总凋亡率最高,其次为平目汤低剂量组。(4)与空白对照组相比,除地塞米松组外,平目汤各组对眼眶脂肪细胞的fas、fas L基因和蛋白的相对表达量较空白对照组均有一定程度的升高,其中平目汤中剂量组fas、fas L mRNA表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),Fas蛋白表达以平目汤中剂量组最高,其次为平目汤低剂量组,Fas L蛋白表达以平目汤高剂量组最高,其次为平目汤中剂量组,但二者比较差异无统计学意义。结论:平目汤降低眼眶前脂肪细胞的活力,抑制前脂肪细胞向脂肪细胞的分化能力,可能通过死亡受体信号途径诱导fas、fas L活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚而发挥疗效。     

李红运用平目汤治疗非活动期Graves眼病的经验

从学术思想、临床研究及基础研究成果3方面总结李红教授运用平目汤的经验,指出李红教授组方平目汤主治阳气亏虚、痰瘀阻滞证非活动期Graves眼病,效果显著。     

平目汤含药血清对非活动期Graves眼病眼眶脂肪细胞fas/fas L表达的影响

目的:通过观察平目汤含药血清对Graves眼病眼眶脂肪细胞fas/fas L表达的影响,探讨平目汤治疗非活动期Graves眼病的可能作用机制。方法:SD大鼠给予平目汤灌胃,2次/d,连续给药3 d后制备平目汤含药血清。体外常规培养眼眶脂肪细胞,实验分为空白对照组,地塞米松组(30μg/mL),平目汤低剂量组(5%)、平目汤中剂量组(10%)、平目汤高剂量组(20%)。干预12 h后采用RT-qPCR检测各组细胞的fas/fasL mRNA表达,干预48 h后Western Blot法检测各组细胞的fas/fasL蛋白表达。结果:与空白对照组比较,平目汤中剂量组fas mRNA的表达量升高(P0.05),平目汤各组fas L mRNA的表达量均升高(P0.05),地塞米松组无统计学差异(P0.05);与空白对照组相比,平目汤各组fas、fas L蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.05),地塞米松组则无统计学差异(P0.05)。结论:平目汤治疗非活动期Graves眼病的作用可能与上调眼眶脂肪细胞fas/fas L的mRNA和蛋白表达有关。     

平目汤2号对非活动期Graves眼病相关指标的影响

[目的]观察平目汤2号对非活动期Graves病浸润性突眼治疗前后相关检查指标的影响。[方法]将65例非活动期Graves眼病的患者随机分为试验组34例和对照组31例,采取双盲双模拟的方法,试验组服用平目汤2号及西药泼尼松模拟剂,对照组服用泼尼松及平目汤2号模拟剂。疗程均为12周。观察血液流变学指标、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+等治疗前后的变化,并观察任何可能出现的不良反应。[结果]试验组可有效改善非活动期Graves眼病患者的血液流变学指标(P0.01)。CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+治疗前后无明显变化。试验组不良反应发生率低于对照组(P0.05)。[结论]平目汤2号可有效改善非活动期Graves眼病患者的血液流变学指标,安全性高,不良反应少。     

平目汤含药血清对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4蛋白表达的影响

目的研究平目汤对Graves眼病眼眶脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4蛋白表达的影响,探讨眼眶成熟脂肪细胞凋亡的机制。方法体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,传代并诱导其分化为成熟脂肪细胞。平目汤含药血清,配成终浓度分别为5%、10%、20%的平目汤低、中、高剂量组。采用MTT法检测前脂肪细胞增殖情况。Western blotting法检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞FAS、FAS L、CHOP及CASPASE-4蛋白表达的影响。结果 (1)MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,平目汤低、中、高剂量组的生长曲线显著下移,其中平目汤中剂量组活性下降趋势最明显。地塞米松组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。相同的时间点与空白对照组比较,平目汤各组OD值均减小,其中以平目汤中剂量组降低最为明显,差异有统计学意义(P0.05)。(2)Western blotting结果显示:与空白对照组比较,除地塞米松组外,各组FAS、FAS L蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.05),其中FAS蛋白表达以平目汤中剂量组最高,其次为低剂量组,FAS L蛋白表达以平目汤高剂量组最高,其次为中剂量组,但二者比较差异无统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,除地塞米松组外,平目汤各组CHOP、CASPASE-4蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.05),其中平目汤各组组间比较CHOP蛋白表达以高剂量组最高,其次为中剂量组;CASPASE-4蛋白表达以平目汤中剂量组最高,其次为低剂量组。结论平目汤通过死亡受体途径和内质网途径诱导FAS、FAS L、CHOP、CASPASE-4活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗效果。     

平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响

目的:研究平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代。诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞。将平目方拆方为益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组含药血清。MTT法观察平目方及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖活性的影响。Western blot检测平目方及其拆方对Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响。结果:1原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞。2MTT结果显示,平目方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中平目方(全方)组最为显著,益气+温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义。平目方(全方)组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P0.05),作用16 d后更为显著(P0.01),地塞米松组差异无统计学意义。3Western blot结果显示,与空白对照组相比,各治疗组除化痰祛瘀组外Caspase-3蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.01),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-8蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.05),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-9蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.01)。其中平目汤(全方)组最为显著,益气+化痰祛瘀组其次。结论:平目方可能通过抑制前脂肪细胞增殖,诱导Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用。     

润肤止痒汤对小鼠慢性湿疹角质形成细胞凋亡及组织病理的影响

目的:探讨"润肤止痒汤"对小鼠慢性湿疹模型角质形成细胞凋亡及组织病理的影响。方法:将80只实验小鼠随机分为4组,每组20只,设为不造模组:正常对照组;造模组:空白对照组、中药治疗组、西药治疗组。造模组60只小鼠耳部应用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液小剂量反复刺激制备接触性湿疹模型,中药治疗组:润肤止痒汤汤剂浓煎液,每次灌胃剂量为每只0.75 mg·d-1,日2次,疗程5 d。西药治疗组:盐酸西替利嗪片剂配成水溶液,灌胃剂量为每只0.025 mg·d-1,日1次,疗程5 d。空白对照组给予同等剂量生理盐水灌胃。用免疫组化方法观察各组Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果:小鼠耳部经2,4-二硝基氯苯丙酮溶液最后一次激发后24 h HE病理可见:表皮角化过度,颗粒层细胞轻度增生,棘层细胞增生,上皮角下延,基底层散在液化变性,真皮浅层轻度水肿,间质及血管周围见炎细胞浸润提示造模成功。Bcl-2及Bax蛋白空白对照组表达最明显,中药组与西药组表达低于空白对照组(P0.05),正常对照组表达低(P0.05)。结论:在慢性湿疹模型部位促凋亡蛋白大量表达,经中药灌胃治疗后,可降低凋亡通路中促凋亡蛋白表达,调节局部皮损免疫平衡,使局部皮损改善。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究芪棱汤对脑缺血再灌注后,"缺血半暗带"神经元细胞凋亡的影响.方法:采用线栓加环扎法模型,运用TUNEL法,在脑缺血再灌注后不同时间点检测凋亡细胞数目的变化.结果:在再灌注各时间段,补阳还五汤及芪棱汤均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡(P＜0.05),而芪棱汤的效果优于补阳还五汤(P＜0.05).结论:芪棱汤可以减少脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡,从而达到脑保护的作用.     

健胃汤对地塞米松诱导的脾淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨健胃汤对地塞米松诱导的脾淋巴细胞凋亡的影响.方法:采用体外细胞培养的方法,以流式细胞仪分析技术进行观测.结果:健胃汤组与地塞米松组相比,小鼠脾淋巴细胞凋亡率显著减少.结论:健胃汤对地塞米松诱导的脾淋巴细胞凋亡具有一定的抑制作用.     

加味涤痰汤对记忆障碍小鼠神经细胞凋亡和行为学影响

目的：观察加味涤痰汤对造模小鼠学习记忆障碍行为学影响并探讨其作用机制。方法：昆明种雄性小鼠72只,分为3组即正常对照组,模型对照组,加味涤痰汤组,每组24只,采用东莨菪碱制备记忆获得障碍模型,应用跳台实验对各组小鼠进行行为学检测,应用流式细胞仪对各组小鼠进行大脑神经细胞凋亡检测。结果：加味涤痰汤能明显减少行为学检测中的错误次数,延长潜伏期,并能明显降低大脑神经细胞凋亡率。结论：加味涤痰汤对学习记忆障碍有明显改善作用,其作用机制可能是通过凋亡基因的表达从而达到改善记忆功能的作用。     

破格救心汤对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察破格救心汤对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将Wistar大鼠手术建立心力衰竭模型后随机分成破格救心汤组(12只)、卡托普利组(12只)、模型组(12只),另选未经手术的Wistar大鼠12只作为对照组。破格救心汤组每日2次灌胃破格救心汤10 mL/kg;卡托普利组每日2次灌胃卡托普利液10 mL/kg,模型组和对照组每日2次灌胃饮用水10 mL/kg。每周称体质量1次,据此调整用药量。在实验第3周、第6周分别将大鼠心脏制成石蜡切片。采用原位末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡调控基因bax及bcl-2蛋白表达。结果破格救心汤组、卡托普利组动物心肌梗死边缘区凋亡阳性细胞较模型组明显减少,给药6周后,凋亡率更低。破格救心汤组中,bax蛋白表达平均光强度显著升高,bcl-2蛋白表达平均光强度明显降低。结论破格救心汤对心肌梗死后心力衰竭心肌细胞凋亡有改善作用,这可能与其对细胞凋亡调控基因的改变有关。     

球后注射治疗Graves眼病并发症的预防对策

通过认真细致的分析245例患者发生并发症的原因,认为做好操作前准备,规范球后注射方法,加强重点环节的管理,强化患者风险教育,加强护士业务培训等,均可有效预防并发症.     

盆炎汤对感染解脲脲原体小鼠生殖细胞凋亡的影响

目的:利用小鼠生殖道感染支原体的模型,研究盆炎汤对小鼠生殖细胞凋亡的影响。方法:昆明雌小鼠63只,随机分7组,采用注射外源性雌激素、阴道接种血清8型Uu菌株的方法建立模型。西药采用阿奇霉素、中药用朱南孙教授的经验方盆炎汤。结果:1)白介素-1β模型组与正常组相比较有统计学意义(P<0.05),其余各组之间相比较无统计学意义(P>0.05);白介素-6各组间相比较无统计学意义(P>0.05);2)子宫组织细胞凋亡率各组之间无统计学意义(P>0.05);阴道组织细胞凋亡各组与模型组相比较均有统计学意义(P<0.05);但各干预组之间无统计学意义(P>0.05)。结论:盆炎汤对Uu的生长有一定的抑制作用;盆炎汤可以减轻支原体对机体的病理损伤,抑制炎症因子的产生及生殖细胞的凋亡。     

泽漆汤对肺癌原位模型小鼠的抑制作用

目的:建立小鼠肺癌原位模型,用泽漆汤干预模型小鼠以观其抑瘤功效,并探索潜在作用机制。方法:通过肺内注射1×10~5个LLC-luc细胞建立非小细胞肺癌原位小鼠模型,用泽漆汤(0. 171 g·m L~(-1))或生理盐水对模型小鼠进行每日灌胃,连续35 d,观察小鼠的外观表现(精神、毛发、食欲等),生存期及泽漆汤抑瘤效果;每周活体成像检测小鼠肺内荧光信号强弱。流式细胞术检测模型小鼠脾脏中NK细胞数量,CD107α实验检测泽漆汤用药后小鼠脾脏中NK细胞脱颗粒情况。采用Kromasil 1005 C_(18)色谱柱,以0. 025%磷酸-乙腈梯度洗脱,流速1. 0 m L·min~(-1),柱温35℃,检测波长265 nm,建立泽漆汤指纹图谱并采用中国药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)对10批样品指纹图谱进行评价以完成对泽漆汤的质量控制。结果:泽漆汤能够明显抑制肺癌原位模型小鼠肺部荧光信号(P 0. 05,P 0. 01),延长小鼠生存期(P 0. 01);泽漆汤干预后小鼠体内肿瘤中NK细胞显著增多(P 0. 01),CD107α脱颗粒也显著增加(P 0. 01)。并且,对泽漆汤指纹图谱的相似度评价结果显示,10批泽漆汤水提液的指纹图谱相似度均≥0. 9,表明不同批次间差异较小。结论:泽漆汤可能通过上调小鼠体内NK细胞数量,增强其脱颗粒能力,从而达到抑制小鼠体内肿瘤生长,延长其生存期的作用。泽漆汤HPLC指纹图谱相似度评价可反映泽漆汤质量的稳定性,为后续研究提供用药基础。     

葛根散等3首解酒方对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的影响

目的:比较葛根散等3首方剂对急性酒精性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的干预效果,探讨3首方剂防治酒伤的部分作用机制。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、各给药大、中、小剂量组,制备急性酒精性肝损伤模型,给药组以中药水煎剂灌胃,对照组代以蒸馏水,检测肝组织病理学改变、肝细胞凋亡指数、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠肝组织脂肪变性、肝细胞凋亡指数及肝细胞Bax阳性表达均明显升高(P<0.01),肝细胞Bcl-2阳性表达明显降低(P<0.01)。与模型对照组比较,葛根散和葛花解酲汤在一定剂量下都能显著减少小鼠肝组织脂肪变性、肝脏凋亡指数和Bax蛋白的表达(P<0.01),显著增加小鼠肝细胞Bcl-2蛋白的表达(P<0.01);石膏汤在一定剂量下能显著减轻小鼠肝组织脂肪变性(P<0.01),但对小鼠肝脏凋亡指数及Bcl-2、Bax的表达无影响,与葛根散比较具有显著差异(P<0.05)。结论:葛根散和葛花解酲汤能减轻肝细胞的变性、坏死,减少细胞凋亡,可能与其解酒机制有关。     

健脾益肾汤对地塞米松诱导的脾淋巴细胞凋亡的影响

目的：研究中药复方健脾肾汤对地塞米松诱导的脾淋巴细胞凋亡的影响。方法：采用体外细胞培养的方法,以荧光显微镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析等技术进行观测。结果：荧光显微镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳显示,地塞米松（10^-6mol/L)组出现典型的细胞凋亡表现,健脾益肾汤组较地塞米松组有一定程度的恢复,流式细胞仪分析显示：健脾益肾汤组与地塞米松组相比,脾淋巴细胞凋亡率减少（P＞0．05）。结论：健脾益肾汤对地塞米松诱导的脾淋巴细胞凋亡具有一定的抑制作用。     

六味地黄汤对糖尿病肾病大鼠肾功能及细胞凋亡的影响

目的探讨六味地黄汤对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏功能保护作用的量效关系及对细胞凋亡的影响。方法采用单侧肾脏结扎术+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立DN模型,2周实验结束时测定大鼠血糖、肌酐清除率、尿蛋白定量;2、4、8周实验结束时分析大鼠肾皮质细胞DNA降解的琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法观察大鼠肾皮质细胞凋亡发生的部位,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 2周实验结束时,3个剂量给药组均可不同程度降低DN大鼠血糖,减少尿蛋白的排泄,有效降低肌酐清除率;中、低剂量间显示出一定的量效关系,中剂量24.96 g/kg作用最佳;模型组大鼠8周时肾皮质细胞DNA琼脂糖凝胶电泳可出现100~300 bp的条带。TUNEL法检测模型组肾皮质细胞凋亡提示,2周时凋亡极少发生,4周时凋亡明显增多,多数在远端肾小管,8周时除远端肾小管外,近端肾小管亦可见散在的凋亡细胞,但肾小球未见凋亡细胞。流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,4周及8周时DN模型大鼠存在肾脏皮质细胞凋亡率增加,给药组与之相比细胞凋亡率显著下降。结论六味地黄汤干预DN大鼠2周后,可以显著降低血糖、减少尿蛋白排泄量、改善肌酐清除率,从而起到保护DN大鼠肾功能的作用,24.96 g/kg为最佳剂量,六味地黄汤可以通过抑制DN大鼠肾皮质细胞凋亡来改善DN肾脏病理变化。     

调气消积汤对Lewis肺肿瘤小鼠抑瘤作用及细胞凋亡影响的实验研究

[目的]探讨调气消积汤对Lewis肺肿瘤的抑瘤作用及细胞凋亡的影响。[方法]C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺肿瘤,随机分为:荷瘤对照组(MG)、调气消积汤组(TG)、顺铂组(DG)、综合组(ZG),每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4 mL灌胃,共12 d;隔日1次腹腔注射生理盐水、顺铂0.13 mL共3 d。观察其日常生活状况和肿瘤生长情况,应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测调气消积汤对Lewis肺肿瘤细胞凋亡的影响。[结果]调气消积汤能改善Lewis肺肿瘤小鼠一般状况,与荷瘤对照组比差异有统计学意义(P<0.01)。各治疗组的瘤质量均低于荷瘤对照组,差异显著(P<0.01)。光镜下观察,各治疗组与荷瘤对照组比较,异型细胞较少,染色质浓缩边集,病理性核分裂较少。TUNEL法结果显示,各治疗组与荷瘤对照组相比凋亡细胞明显增多,绿色荧光强度高;尤以综合组增多最为明显[。结论]调气消积汤可以改善荷瘤小鼠的一般生活状况,对Lewis肺肿瘤有抑制作用,能促进肿瘤细胞凋亡。