EB病毒LMP2A在鼻咽癌患者肿瘤组织中的表达及意义

目的:观察EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)在鼻咽癌(NPC)患者肿瘤组织中的表达,探讨采用LMP2A作为靶抗原进行NPC免疫治疗的可行性。方法:采用SP免疫组织化学方法,检测40例NPC组织及38例鼻咽黏膜慢性炎症组织标本LMP2A的表达。结果:40例NPC 标本中36例LMP2A表达阳性(90．0％);LMP2A的表达与NPC病理分化程度无明显相关性。38例鼻咽黏膜慢性炎症组织标本中33例 LMP2A阴性反应,5例阳性反应。鼻咽黏膜慢性炎组织与NPC组织中LMP2A阳性表达率间差异存在统计学意义。结论:在不同病理分化程度的NPC肿瘤组织中LMP2A均可广泛表达,在正常鼻咽组织细胞中基本不表达。采用LMP2A作为靶抗原诱导机体特异性细胞免疫反应杀伤NPC肿瘤细胞具一定可行性。图2表1参15     

EB病毒LMP2A在鼻咽癌患者肿瘤组织中的表达及意义

目的：观察EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)在鼻咽癌(NPC)患者肿瘤组织中的表达,探讨采用LMP2A作为靶抗原进行NPC免疫治疗的可行性。方法：采用SP免疫组织化学方法,检测40例NPC组织及38例鼻咽黏膜慢性炎症组织标本LMP2A的表达。结果：40例NPC标本中36例LMP2A表达阳性(90．0％);LMP2A的表达与NPC病理分化程度无明显相关性。38例鼻咽黏膜慢性炎症组织标本中33例LMP2A阴性反应,5例阳性反应。鼻咽黏膜慢性炎组织与NPC组织中LMP2A阳性表达率间差异存在统计学意义。结论：在不同病理分化程度的NPC肿瘤组织中LMP2A均可广泛表达,在正常鼻咽组织细胞中基本不表达。采用LMP2A作为靶抗原诱导机体特异性细胞免疫反应杀伤NPC肿瘤细胞具一定可行性。     

EB病毒在鼻咽癌发生中的作用

目的 :探讨鼻咽癌 (NPC)组织及患者外周血白细胞和血清中EB病毒DNA的分布及其与NPC的关系。方法 :采用多聚酶链反应 (PCR)检测 39例NPC组织 (NPC组 1)中EB病毒DNA ,2 4例NPC患者 (NPC组 2 )外周血白细胞及血清中EB病毒DNA ,2 0例慢性鼻咽炎组织 (对照组 1)中EB病毒DNA ,10例头颈部其他部位肿瘤患者 (对照组 2 )和 10例慢性鼻咽炎患者 (对照组 3)外周血白细胞及血清中EB病毒DNA ;同时采用免疫酶法检测NPC组 2、对照组 2和对照组 3血清中EB病毒VCA IgA抗体效价。 结果 :NPC组 1EB病毒DNA阳性率为 71.8% (2 8/ 39) ,对照组 1阳性率为 15 .0 % (3/ 2 0 ) ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;NPC组 2外周血白细胞中EB病毒DNA阳性率为 4 1.6 7% (10 / 2 4 ) ,对照组 2阳性率为 10 .0 0 % (1/ 10 ) ,对照组 3外周血白细胞中EB病毒DNA为阴性 ,NPC组 2分别与对照组 2和对照组 3比较 ,差异均有统计学意义 (均P <0 .0 5 ) ;NPC组 2、对照组 2和对照组 3血清中EB病毒DNA均为阴性 ;NPC组 2血清中EB病毒VCA IgA抗体效价分别与对照组 2和对照组 3比较 ;差异均有统计学意义 (均P <0 .0 1)。结论 :NPC组织中检测出EB病毒DNA的阳性率较高 ,外周血白细胞中阳性率较低 ,血清中未能检测出EB病毒DNA ,说明EB病毒从癌组织—→外     

SGK1在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞生物学特性的影响

DOI:10.11798/j.issn.·鼻咽癌专栏·基金项目：第目的探讨SGK1在鼻咽癌（NPC）中的表达及其对肿瘤细胞存活、增殖和迁移的影响。方法采用免疫组织检测NPC组织和慢性鼻咽炎组织中SGK1的表达。使用lipofectamine 2000瞬时转染NPC细胞系HNE 1，Western blot检测siRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中的SGK1表达，筛选SGK1沉默效果最佳的NPC细胞。CCK8法检测转染细胞的增殖能力，Transwell细胞迁移实验检测SGK1沉默对细胞迁移能力的影响，流式细胞术检测其凋亡水平。结果NPC组织中SGK1的表达明显高于慢性鼻咽炎组织。Western blot结果显示转染SGK1 siRNA后HNE 1细胞中SGK1蛋白水平明显下降。SGK1基因沉默后，HNE 1细胞表现出较强的细胞增殖和迁移抑制作用。此外，沉默SGK1后，HNE 1细胞的凋亡率增加。结论SGK1在NPC组织中呈高表达。沉默SGK1基因可抑制NPC细胞系HNE 1的增殖、迁移和存活能力。     

LMP2A、E-Cadherin和fibronectin在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的:探讨EBV编码的潜伏膜蛋白2A(LMP2A)与上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙粘素(E-Cadherin)和纤维连接蛋白在鼻咽癌(NPC)中的表达及与临床病理学参数的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测LMP2A、E-Cadherin和fibronectin蛋白在32例鼻咽黏膜慢性炎、56例NPC和18例NPC淋巴结转移灶中的表达。结果:1LMP2A在NPC及其淋巴结转移灶中的阳性表达率分别为89.3%(50/56)和77.8%(14/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(37.5%,12/32)(均P<0.01);E-Cadherin在NPC及其淋巴结转移灶中的正常表达率分别为33.9%(19/56)和5.6%(1/18),均明显低于鼻咽黏膜慢性炎(90.6%,29/32)(均P<0.01);fibronectin在NPC及其淋巴结转移灶中的阳性表达率分别为83.9%(47/56)和72.2%(13/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(28.1%,9/32)(均P<0.01)。2NPC中LMP2A与E-Cadherin正常表达呈负相关(r=-0.387,P<0.01)、与fibronectin表达呈正相关(r=0.421,P<0.01)。3LMP2A、E-Cadherin和fibronectin表达与NPC患者N分期和临床分期密切相关(均P<0.05),与M分期无相关性(P>0.05);LMP2A、E-Cadherin表达与T分期也密切相关(均P<0.01)。结论:LMP2A、fibronectin在NPC中表达升高,而E-Cadherin正常表达则降低;LMP2A可能通过下调E-Cadherin和上调fibronectin表达来介导EMT促进NPC淋巴结转移和恶性进展。     

血清EB病毒特异性DNA酶抗体的检测

目的建立一种新的鼻咽癌(NPC)血清学诊断方法.方法以纯化的EBV-DNase为抗原,采用WesternBlot法对NPC、头颈部其它肿瘤(OT)及健康成人(HA)血清中的EBV-DNase抗体进行检测.与同时进行的EBVCA～IgA抗体检测比较.结果①用West-ernBlot法检测NPC组、OT组、HA组血清中EBV-DNase抗体阳性率分别为83.71%,0.00%,000%,NPC组抗体阳性率与其它两组差异显著(均为P＜0.01),后两组之间无显著差异(P＞0.05).而同时检测的EBVCA-IgA阳性率分别为85.98%,9.38%,7.50%.两种方法阳性率比较,在NPC组无差异(P＞0.05),而在其它两组的差异显著(P＜0.05);②以病检结果为"金标准”,EBV-DNase抗体WesternBlot法检测的特异性明显高于EBVCA-IgA检测(P＜0.01),而两者的灵敏度相当(P＞0.05).结论①NPC血清中存在高滴度的EBV-DNase抗体;②用WesternBlot法检测血清中的EBV-DNase抗体,具有较高的灵敏度及特异性,可以减少NPC的漏诊和误诊,不失为一种NPC血清学诊断方法.     

鼻咽癌患者血清血管生长素水平的临床意义初探

目的:分析血管形成素(ANG)在鼻咽癌(NPC)患者血循环中的含量及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定42例NPC患者(NPC组)和30例健康者(对照组)血清ANG水平。结果:NPC组治疗前血清ANG水平为(371.4±123.5)μg/L,显著高于对照组的(292.5±74.2)μg/L(P<0.01),且血清ANG水平随着NPC临床分期的增加而升高(P<0.05);治疗后血清ANG水平为(340.6±112.4)μg/L,比治疗前明显降低(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论:NPC患者血清ANG水平升高,且其升高的程度与肿瘤的进展有关。     

胰岛素样生长因子-1受体蛋白在鼻咽癌细胞中的表达及其临床意义

目的:探讨鼻咽癌(NPC)组织中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)蛋白的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测63例NPC组织和鼻咽部炎性黏膜组织中IGF-1R的表达,对其中45例NPC患者进行5年随访观察,以及采用免疫印迹法检测3种体外培养的NPC细胞系中IGF-1R蛋白的表达情况。结果:63例NPC和21例鼻咽黏膜(伴慢性炎症)组织中的IGF-1R阳性表达率分别为82.5%和14.3%,在NPC中的表达阳性率明显高于鼻咽炎性组织(P<0.01)。NPC组织中IGF-IR的表达与TNM分期和颈淋巴结转移有关,有颈淋巴结转移者其表达阳性率较高(P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期表达阳性率较Ⅲ~Ⅳ期低(P<0.01);NPC局部复发者IGF-lR阳性表达率(89.5%)明显高于无局部复发者(53.9%),P<0.05;NPC放疗后生存期小于5年者的阳性表达率(88.9%)明显高于5年以上生存期者的阳性表达率(51.9%),P<0.01;病理分化程度越高IGF-lR阳性表达率越低,但NPC病理类型间比较差异无统计学意义(P>0.05)。在3种NPC细胞系中IGF-1R的表达明显高于鼻咽炎症黏膜组织,其中TW03表达最强,CNE2其次,CNEl表达稍弱。结论:NPC组织中存在IGF-1R的过表达现象,IGF-1R的异常表达与NPC的发生、发展存在一定的关系。IGF-1R可能是复发或转移性NPC治疗中一个潜在的靶分子。     

血清细胞角蛋白19片段和恶性肿瘤特异性生长因子联合检测对鼻咽癌的诊断价值

目的探讨血清细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)联合检测对鼻咽癌(NPC)的临床诊断价值.方法采用电化学发光免疫分析等技术,检测正常对照组50例、良性疾病组25例、NPC组82例血清中的CYFRA21-1及TSGF表达水平.结果NPC组CYFRA21-1、TSGF敏感性分别为48.8%、57.3%,其测定值均明显高于正常对照组和良性疾病组(均P<0.01).CYFRA21-1、TSGF两项联合检测可使敏感性提高到74.3%,且特异性没有明显下降.结论CYFRA21-1、TSGF可作为NPC临床诊断的血清肿瘤标志物,两项联合检测结果更理想.     

鼻咽癌组织中BLU与cyclin D1和cyclin B1的表达及其临床意义

目的 探究BLU与cyclin D1和cyclin B1在鼻咽癌(NPC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测97例NPC组织及36例慢性鼻咽炎(CN)组织中BLU与cyclin D1、cyclin B1的表达,运用统计学方法分析三者的表达与NPC患者临床病理特征参数及预后的关系.结果 在NPC组织中,B...     

咽拭子检测潜伏膜蛋白1在鼻咽癌诊断中的应用

目的：验证咽拭子法检测EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP1）在鼻咽癌诊断中应用的可行性;检测LMP1野生型及30bp缺失变异型在鼻咽癌中的分布情况。方法：用咽拭子法收集鼻咽癌组及对照组鼻咽部脱落细胞,微量提取DNA,经PCR扩增人β珠蛋白基因序列验证咽拭子法的可行性,用特异性引物扩增出特异的LMP1序列,验证其在鼻咽癌诊断中的意义。测序分析LMP1变异情况。结果：咽拭子合格率为96．4％,LMP1基因作为鼻咽癌的检测指标,灵敏度为91．7％,特异性为95．6％,其中变异型LMP1在鼻咽癌中的表达频率为80．6％,野生型为11．1％。结论：咽拭子法可作为一种基因检测手段,LMP1基因的检测可以协同EB病毒壳抗原（EBVCA）-IgA作为鼻咽癌诊断的辅助指标,在LMP1（＋）的鼻咽癌患者中LMP1—30bp缺失突变普遍存在。     

重庆地区鼻咽癌患者血浆EBV-LMP1基因检测及缺失变异分析

目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆EB病毒潜伏膜蛋白l(EBV-LMP1)基因存在情况及碱基缺失变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中的作用.方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌对照者外周血40例,提取DNA后,采用PCR特异性地扩增LMP1基因N端(包含Xho Ⅰ酶切位点)和C端(包含30 bp缺失的区域),N端PCR产物进行Xho Ⅰ酶切.用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析酶切及PCR产物,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析.结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出特异性LMP1基因条带,阳性率为100%.40例非鼻咽对照者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%.与B95-8原型LMP1比较,电泳分离、酶切分析、测序及软件序列分析,48例鼻咽癌患者和38例非鼻咽癌对照者外周血未发现1例存在LMP1基因N端Xho Ⅰ酶切位点和C端30 bp的缺失变异.结论:我国重庆地区鼻咽癌患者和非鼻咽癌对照者血浆携带的EBV为非缺失型(原型);LMPl基因缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究.     

鼻咽癌组织中LMP1和VEGF蛋白表达及其临床意义

目的探讨LMP1和VEGF基因蛋白表达与鼻咽癌（NPC）预后的相关性。方法对40例NPC放疗前活检标本,应用免疫组织化学技术检测LMP1和VEGF蛋白在NPC组织中的表达情况,并分析二者表达与NPC分期、放疗敏感性、生存率、转移及复发之间的关系。结果NPC组织中LMP1和VEGF蛋白阳性表达率分别为72.5%和60.0%。NPC分期、放疗敏感性、淋巴结转移、生存率及远处转移与LMP1蛋白高表达密切关系,VEGF的高表达则与鼻咽癌的分期、颈淋巴结转移、远处转移、生存率密切关系。LMP1蛋白表达与VEGF表达呈正相关（相关系数为r=0.812）。结论LMP1和VEGF蛋白高表达对判断病变进展、预测放疗敏感性、生存率及转移有重要参考价值。     

EB病毒潜伏膜蛋白-1和环氧合酶-2及血管内皮生长因子C在鼻咽癌中的表达及其关系

目的:探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)、环氧合酶-2(COX-2)及EB病毒潜伏膜蛋白-1(LMP1)在鼻咽癌中的表达及其关系。方法:采用免疫组织化学法检测57例鼻咽癌组织中LMP1、COX-2及VEGF-C在鼻咽癌组织中的表达。结果:鼻咽癌组织中LMP1、COX-2及VEGF-C表达率分别为49.1%(28/57)、75.4%(43/57)和59.6%(34/57);经Spearman相关分析,它们之间呈相互正相关关系(均P<0.05)。结论:鼻咽癌中LMP1及COX-2可能直接上调VEGF-C表达,或者LMP1通过促进COX-2表达上调VEGF-C表达,从而对肿瘤的淋巴转移及发生发展起到促进作用。     

Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein 1 induces interleukin-8 through the nuclear factor-kappa B signaling pathway in EBV-infected nasopharyngeal carcinoma cell line

BACKGROUND/OBJECTIVES: Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a highly invasive and metastatic malignant tumor and is associated with Epstein-Barr virus (EBV) infection that exhibits type II latency. Angiogenesis is essential for tumor growth, invasion, and metastasis. Our previous studies have indicated that interleukin (IL)-8 was over-expressed in many NPC tissues and was found to be significantly correlated with angiogenesis by immunohistochemistry. STUDY DESIGN: In vitro design. METHODS: The influence of the EBV genome for IL-8 gene expression was studied using the EBV-genome-positive and -negative epithelial/NPC hybrid cell line NPC-KT. The EBV-positive and -negative clones were selected by polymerase chain reaction and in situ hybridization. RESULTS: EBV-positive clones expressed abundant IL-8 mRNA compared with EBV-negative clones. This result indicated that over-expression of IL-8 depended on the presence of EBV genomes in NPC-KT cells. Two encoded genes, latent membrane protein (LMP)1 and EBV-encoded small RNAs (EBERs), expressed in NPC were transfected in EBV-negative NPC-KT cells. LMP1 transactivated the IL-8 promoter, whereas EBERs did not. Moreover, the nuclear factor (NF)-kappa B binding site in the IL-8 promoter was essential for the response to LMP1, and the activator protein (AP)-1 binding site played only a partial role. CONCLUSIONS: LMP1 induces IL-8 mainly through the activation of NF-kappa B and partly through AP-1 in NPC model cell lines, NPC-KT, and this suggests that LMP1 plays an important role in the angiogenesis of NPC.     

鼻咽癌中EBV LMP1激活NF—κB的实验研究

目的：探讨在鼻咽癌细胞系中ＥＢ病毒潜伏膜蛋白ＬＭＰ１能否激活重要的核转录因子ＮＦ－κＢ,及ＮＦ－κＢ的活化对鼻咽癌细胞猕 表型的影响。方法：我们选用两种鼻咽癌细胞系即有ＬＭＰ１表达的ＣＮＥ－ＬＭＰ１和无ＬＭＰ１表达的ＨＮＥ１,用包含ＮＦ－κＢ结合位点萤虫素酶报道基因共转染的方法及软琼脂集落形成观察两株细胞中的ＮＦ－κＢ的活性。结果：建立稳定表达包含ＮＦ－κＢ结合位点萤虫素酶报道基因的两种细胞株。     

Differentiation of Recurrent Nasopharyngeal Carcinoma and Skull Base Osteoradionecrosis by Epstein‐Barr Virus‐Derived Latent Membrane Protein‐1 Gene

Objectives In patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC), the differentiation between recurrent primary cancer and osteoradionecrosis (ORN) is clinically difficult. Epstein‐Barr virus (EBV)‐derived latent membrane protein‐1 (LMP‐1) has been demonstrated to be highly associated with NPC. The objective of this study is to define the role of the LMP‐1 gene in the differential diagnosis of recurrent NPC and ORN. Study Design Prospective. Methods From July 1998 to June 2000, 15 postirradiated patients with NPC who were initially diagnosed to have skull base ORN underwent endoscopic sequestrectomy. The sequestra were examined for the presence of the LMP‐1 gene and cancer. Results Two of 15 patients had recurrent cancer and only these two patients demonstrated a positive LMP‐1 gene in their surgically removed sequestra. The presence of the LMP‐1 gene in the sequestrum coincided with biopsy‐proven local recurrence. Conclusions The LMP‐1 gene is a potential marker to differentiate between recurrent NPC and ORN. The presence of the LMP‐1 gene in patients with ORN may indicate local recurrence.     

免疫球蛋白kappa轻链基因在鼻咽癌中表达的初步研究

目的：为了探讨Ｉｇｋ是否参与了鼻咽癌的癌变过程及可能机制，对Ｉｇｋ在鼻咽癌中的表达进行了研究，并初步探讨Ｉｇｋ与ＥＢ病毒潜伏膜蛋白基因ＬＭＰ－１在鼻咽癌中的相关性。方法：分别运用原位杂交技术和免疫组化技术检测鼻咽癌活检组织中Ｉｇｋ的ＲＮＡ和蛋白质水平的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析两株鼻咽癌细胞系（ＣＮＥ１和ＣＮＥ＿ＣＭＰ）ｋａｐｐａ蛋白的表达及强度差异。结果：原位杂交技术显示１００％（４２例／４２     

Monitoring tumor recurrence with nasopharyngeal swab and latent membrane protein-1 and epstein-barr nuclear antigen-1 gene detection in treated patients with nasopharyngeal carcinoma

OBJECTIVES: Epstein-Barr virus (EBV) is closely related to nasopharyngeal carcinoma (NPC). Detection of EBV genomic DNA in a nasopharyngeal swab specimen may indicate the presence of NPC, and the EBV genomic DNA is only detected in patients with NPC and not in other head and neck cancers. This study aims to prove that detection of EBV genomic DNA by means of the latent membrane protein (LMP)-1 gene and the Epstein-Barr nuclear antigen (EBNA)-1 gene in the nasopharynx in NPC patients after radiation therapy indicates local recurrence of NPC. STUDY DESIGN: Prospective. METHODS: Nasopharyngeal swab with polymerase chain reaction (PCR)-based LMP-1 and EBNA-1 gene detection was used to monitor local recurrence in 84 NPC patients who completed radiation therapy. RESULTS: Of the 12 patients demonstrating positive LMP-1 and EBNA-1 gene, 11 had local recurrence, and 10 of them had early rT1 mucosal recurrence. Subsequent salvage nasopharyngectomy controlled local disease in nine. Only one local recurrence in the skull base failed to show LMP-1 gene initially. Detection of LMP-1 gene and later verification with EBNA-1 gene from nasopharyngeal swabs in NPC patients after radiation therapy predicted local recurrence with a sensitivity of 91.7% and a specificity of 98.6%. CONCLUSIONS: Nasopharyngeal swab with LMP-1 and EBNA-1 gene detection is a useful and reliable method to monitor local recurrence in NPC patients. It helps to detect recurrence early and may improve local control and enhance survival.