新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡杀伤作用的研究

目的探讨新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2的体外杀伤效应及作用机制。方法体外培养CNE-2细胞,应用MTT比色法观察新福菌素对CNE-2细胞增殖的抑制作用。倒置显微镜下观察实验组细胞的生长及结构变化,同时采用逆转录．聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测BaxmRNA基因的表达。结果新福菌素在体外对CNE-2细胞有较强的增殖抑制作用,能诱导CNE-2细胞凋亡;同时进行BaxmRNA基因表达检测发现对照组CNE-2细胞BaxmRNA表达呈弱阳性;实验组CNE．2细胞BaxmRNA表达均呈阳性,且随着新福菌素浓度的增加而逐渐增强。结论新福菌素对CNE-2细胞有明显的杀伤效应,杀伤机制可能是诱导鼻咽癌细胞凋亡,并与凋亡相关基因BaxmRNA表达上调有关。     

EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2及相关基因表达的影响

目的:研究EGCG对鼻咽癌细胞系CNE-2的增殖与凋亡作用,探讨其对细胞增殖与凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:应用MTT实验、流式细胞仪检测细胞的增殖与周期;Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果:EGCG明显抑制CNE-2细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用具有剂量-效应关系。EGCG抑制CNE-2细胞Bcl-2表达,诱导CNE-2细胞Bax、Caspase-3表达。结论:EGCG在体外具有抗鼻咽癌细胞的作用,此作用可能是通过调节细胞增殖与凋亡基因的表达实现的。     

普鲁卡因对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响

目的:探讨普鲁卡因(procaine)对人鼻咽癌(NPC)细胞CNE-2Z的影响。方法:体外培养的NPC细胞CNE-2Z分别加入不同浓度的普鲁卡因,并作用不同的时间。应用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-Dimethyl-thiaoly)-2,5-diphenyl-2H tetrazolium bromide,MTT]法和流式细胞仪检测观察普鲁卡因对NPC细胞CNE-2Z的影响,同时用RT-PCR分析p16和RASSF1A mRNA的表达情况。结果:普鲁卡因能显著抑制CNE-2Z细胞增殖,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。普鲁卡因使细胞周期阻滞于G1期,并能上调CNE-2Z细胞RASSF1A mRNA的表达,但对p16 mRNA表达无明显影响。结论:普鲁卡因对CNE-2Z细胞有增殖抑制作用,它能上调CNE-2Z细胞RASSF1A mRNA的表达,推测这可能是普鲁卡因抑制CNE-2Z细胞增殖的重要分子机制之一。     

双氢青蒿素诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及其机制

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用及其机制。方法:以体外培养的CNE-2细胞为研究对象,分别采用CCK-8法观察不同浓度和时间DHA对CNE-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测CNE-2细胞的凋亡率,caspase-3活性检测法检测不同浓度DHA处理后CNE-2细胞中caspase-3的活性变化。结果:CCK-8法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,CNE-2细胞的增殖显著抑制(P<0.05);流式细胞仪Annexin V-FITC法,结果显示DHA诱导CNE-2细胞凋亡具有浓度依赖性;caspase-3活性检测法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,caspase-3的活性显著提高(P<0.05)。结论:DHA能有效抑制CNE-2细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是能上调CNE-2细胞中caspase-3的活性。     

利用RNA干扰效应阻抑鼻咽癌细胞bcl-xL基因表达和诱导癌细胞凋亡的研究

目的研究RNA干扰(RNA interference)效应对人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE-2Zbcl-xL基因表达的抑制作用及其对CNE-2Z细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法使用美国Ambion公司提供的网上设计软件设计针对人bcl—xL基因的小干扰RNA(siRNA)序列，体外转录试剂盒合成siRNA；荧光素标记试剂盒标记siRNA；脂质体法将siRNA转入CNE-2Z细胞株。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率；RT—PCR法半定量检测siRNA对bcl—xL基因表达的抑制作用；噻唑蓝法检测siRNA对细胞生长增殖抑制作用；流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果荧光显微镜下荧光素标记的siRNA转染组可见到细胞内清晰的绿色荧光，而在未转染siRNA对照组未见；各siRNA转染组bcl—xL mRNA表达水平有不同程度的下调，下调范围在10％～70％之间，而在未转染对照组内bcl—xLmRNA表达水平无明显改变；细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖性(剂量增加，抑制率增高)和时间依赖性；各浓度siRNA4转染组可不同程度诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论体外转录合成的siRNA能特异有效地下调bcl—xL基因的表达，不同序列特异性的siRNA下调bcl—xL基因表达的能力不同；瞬时转染bcl—xLsiRNA4能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡；siRNA不仅为基因组功能分析提供了强有力的工具，而且为抗鼻咽癌基因治疗提供了新的思路。     

EGCG对鼻咽癌细胞增殖抑制和凋亡诱导时NF-κB和caspase-3的表达变化

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）作用于鼻咽癌CNE-2细胞后,对转录因子NF-κB和凋亡效应酶caspase-3表达的影响,以及这两个基因的表达与鼻咽癌细胞凋亡和增殖的关联性。方法体外培养鼻咽癌细胞CNE-2,MTT法检测细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期的改变。RT-PCR检测NF-κB和caspase-3的表达。结果EGCG能明显的抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导其凋亡,并表现为浓度依赖性：流式分析显示,EGCG干预鼻咽癌细胞CNE-2在48小时后,细胞被阻滞于G1期。80mg/L EGCG处理鼻咽癌细胞24小时和48小时后,均能下调NF-κB表达,上调caspase-3表达。结论EGCG可能通过抑制NF-κB和诱导caspase-3的表达来发挥其抗鼻咽癌细胞的生物学作用。     

美洛昔康对人鼻咽癌CNE-1细胞株的作用

目的探讨美洛昔康对鼻咽癌细胞株CNE-1生长抑制及诱导凋亡的作用。方法应用肿瘤细胞培养技术,随机分组和空白对照设计,培养不同时间后,用MTT法、AO＋EB染色法、流式细胞仪检测法,观察美洛昔康对CNE-1生长抑制的剂量和时间效应,分析细胞凋亡发生率,细胞免疫荧光法检测细胞内COX-2蛋白的表达。结果美洛昔康能抑制CNE-1细胞的生长。美洛昔康处理CNE-1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变。流式细胞分析显示美洛昔康呈浓度依赖性诱导CNE-1细胞凋亡。细胞免疫荧光结果表明美洛昔康处理细胞后,随药物浓度的增加,COX-2蛋白表达下降。结论美洛昔康具有抑制CNE-1细胞生长,诱导CNE-1细胞凋亡的作用,其机制可能与COX-2蛋白有关。     

丹酚酸B对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 研究丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞的半数抑制浓度(IC50);用IC50浓度的丹酚酸B处理人鼻咽癌CNE-2细胞后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;在荧光显微镜下应用Hoechst33258荧光...     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察其对鼻咽癌细胞生长的影响;透射电子显微镜检测细胞凋亡,应用流式细胞术观察DNA的含量和凋亡的变化情况,TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。结果：体外塞来昔布抑制CNE-2细胞生长,呈浓度和时间依赖性。透射电镜观察到细胞皱缩、胞质丢失、核质浓缩以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。流式细胞术显示细胞凋亡率显著增高,在80、100gmol／L浓度下细胞凋亡率分别为（10．47±0．18）％和（20．17±0．55）％,与对照组（1．57±0．27）％比较差异均有统计学意义;塞来昔布使G0／G1期细胞比例升高,S和G2／M期比例下降,呈一定剂量效应关系。TUNEL染色法显示药物组凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）。结论：塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,并诱导其凋亡;其机制可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

Cyclin D1在EGCG抗鼻咽癌中表达的变化及意义

目的：探讨Cyclin D1基因在表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抗鼻咽癌中表达的变化及意义,揭示EGCG的抗鼻咽癌作用机制。方法：体外培养低分化鼻咽癌细胞株CNE-2并以不同浓度EGCG处理,倒置显微镜下观察不同浓度EGCG作用48h后CNE-2细胞的形态变化,采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,半定量逆转录PCR检测细胞中Cyclin D1mRNA的表达变化。结果：EGCG处理后,CNE-2细胞的数量及密度逐渐降低,分裂象减少,贴壁差,部分细胞变圆且体积变小,漂浮及凋亡细胞不断增多;细胞增殖明显受到抑制,CNE-2细胞被阻滞在G0/G1期,呈时间和剂量依赖性（P〈0.05）;Cyclin D1mRNA表达明显下调,且EGCG作用浓度与时间依赖性（P〈0.05）。结论：EGCG抑制CNE-2细胞的增殖,可能与其呈浓度与时间依赖性下调Cyclin D1mRNA的表达相关。     

RNA同时干扰四个不同基因对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的实验研究

目的 应用RNA干扰技术构建一个载体同时编码四个基因,即血管内皮生长因子(VEGF)、致癌基因蛋白(c-myc)、存活素(survivin)和端粒酶反转录酶的短发夹重组质粒,并与单基因质粒做对比,通过体内外实验,研究其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响.方法 构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和端粒酶反转录酶并含荧光素标记的短发夹RNA质粒命名为P-1,并构建单独表达VEGF、c-myc、survivin和端粒酶反转录酶的质粒,分别命名为P-2、P-3、P-4和P-5,分别将其将转染人鼻咽癌CNE-2Z细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内.以激光共聚焦显微镜观察质粒在CNE-2Z细胞及瘤体内的转染及表达情况.四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞增殖活性,实时PCR在mRNA水平上检测对目的基因表达的抑制作用,免疫印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果,Trans well侵袭小室模型观察导入CNE-2Z细胞对其恶性生物学行为的改变,流式细胞仪观察各组凋亡率,体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 多基因干扰质粒转染鼻咽癌细胞后,CNE-2Z细胞增殖受到明显抑制,体外侵袭能力显著下降(P值均＜0.05).实时PCR证实多基因组4个不同基因mRNA表达均降低,免疫印迹技术验证目的基因蛋白同时表达下调.流式细胞仪结果证明多基因凋亡率明显高于单基因组(P值均＜0.05).体内抑瘤实验表明,与阴性组和空白组相比,P-1组移植瘤生长明显受到抑制(P＜0.05),并且多基因质粒抑制肿瘤细胞增长的作用要强于单基因干扰质粒(户值均＜0.05).结论 同时干扰多个基因能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础.     

黄芩苷对鼻咽癌化疗期间激素使用影响的实验研究

目的 探讨黄芩苷对地塞米松干扰鼻咽癌细胞化疗效果的影响。方法 将常规培养的人低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z分为四组（空白对照组、单纯紫杉醇处理组、地塞米松干扰组、黄芩苷预处理组）。MTT法检测各组细胞的OD值并计算各组细胞的增殖率;RT-PCR法检测细胞中与增殖相关的基因Cyclin D1和Caspase-12的表达。结果 地塞米松对紫杉醇处理后的CNE-2Z细胞中凋亡基因Caspase-12的上调和原癌基因cyclinD1的下调均产生显著的抑制,紫杉醇诱导的细胞凋亡现象部分被地塞米松所逆转,导致CNE-2Z细胞的存活率增高;而加入了黄芩苷后,地塞米松的这种逆转效应被部分抑制。结论 地塞米松降低了CNE-2Z细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,黄芩苷能够对抗地塞米松的这种效应,部分恢复了鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

DNA拓扑异构酶I抑制剂诱导鼻咽癌上皮细胞凋亡的实验研究

拟从细胞凋亡角度出发，探讨能够诱导鼻咽癌上皮细胞凋亡的因素，为有效地防治该恶性肿瘤提供新的思路。方法：光镜下观察细胞的形态变化；流式细胞仪检测细胞周期变化及亚二倍体比例；ＤＮＡ凝胶电泳及二苯胺法测定ＤＮＡ片段化程度。结果：一定浓度的拓扑异构酶Ｉ抑制剂喜树碱（ＣＰＴ）体外作用于人低分化鼻咽癌上皮细胞系ＣＮＥ－２Ｚ细胞一定时间后，镜下可见细胞体积缩小，染色质凝聚，胞膜突起及凋亡小体形成等形态变化。２￣     

喜树碱诱导鼻咽癌细胞凋亡的线粒体机制探讨

目的 :了解喜树碱 (CPT)诱导鼻咽癌细胞凋亡是否与线粒体膜电位改变有关。方法 :用 2 μmol/ L 的CPT 处理 CNE- 2 Z细胞 ,经流式细胞仪、Hoechst332 5 8/ PI双重染色鉴定凋亡细胞 ,同时用罗丹明 12 3(Rhodamine12 3)染色后 ,经流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 :CPT可明显降低线粒体膜电位 ,2 μm ol/ L 的CPT处理 CNE- 2 Z细胞 2 4h后 ,罗丹明 12 3摄取量低的细胞明显增加 ,达 (19.0± 3.0 ) % ,与 DMSO对照组的(7.0± 1.4) %相比 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :降低线粒体膜电位可能是 CPT诱导鼻咽癌细胞凋亡的机制之一。     

TRAIL与紫杉醇联合应用对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与紫杉醇联合对鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞株的生长抑制作用及凋亡诱导效应。方法:TRAIL和紫杉醇分别单独作用及联合作用于CNE-1和CNE-2细胞后,CCK-8法检测其生长抑制率,流式细胞术检测其凋亡率。结果:TRAIL和紫杉醇对CNE-1和CNE-2细胞均具有抗增殖作用,且在一定范围内呈时间-剂量依赖性;TRAIL与紫杉醇联合应用于CNE-1和CNE-2细胞,其生长抑制率和凋亡率均大于二者单独应用时细胞生长抑制率和凋亡率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TRAIL和紫杉醇联合作用于鼻咽癌细胞,其生长抑制率和凋亡率显著高于二者单独用药,两药联合应用具有协同杀伤效应,明显优于单独用药。     

联合靶向阻断EGFR和mTOR信号通路对鼻咽癌细胞生长影响的研究

目的观察联合阻断表皮生长因子受体（EGFR）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）介导的信号通路对鼻咽癌细胞株CNE-1及CNE-2的影响。方法EGFR酪氨酸激酶拮抗剂（Tarceva）、mTOR抑制剂（Rapamycin）单独（单独处理组）和联合处理（联合处理组）鼻咽癌细胞株CNE-1及CNE-2后,CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞法检测细胞周期和凋亡率。结果①Tarceva、Rapamycin单独处理组对CNE-1和CNE-2细胞株均产生剂量依赖性抗增殖作用。②联合用药组CNE-1和CNE-2细胞生长抑制率显著大于两者单独处理组生长抑制率之和（P〈0.05）。③联合处理组的G1期细胞比例大于单独处理组之和（P〈0.05）。联合处理组的细胞凋亡率高于单独处理组（P〈0.05）。结论Tarceva及Rapamycin联合靶向治疗能协同性地抑制鼻咽癌细胞生长,这种效应可能通过增加G1期细胞阻滞及凋亡来实现。     

POT1蛋白在人鼻咽癌细胞系及鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)在人鼻咽癌细胞系及鼻咽癌组织中的表达、细胞定位及临床意义。方法应用Western blot法检测POT1蛋白在人鼻咽癌系、人鼻咽上皮细胞系、鼻咽癌组织、癌旁组织中的表达;应用细胞免疫荧光检测POT1蛋白在鼻咽癌细胞中的定位。结果 POT1蛋白在人鼻咽癌细胞系CNE-1、5-8 F、CNE-2、6-10 B中的表达强度高于在人鼻咽上皮细胞系NP69中的表达强度,分别为2.8、2.3、1.9、1.5倍;POT1蛋白主要定位于细胞质;鼻咽癌组织中POT1蛋白表达量(0.6414±0.0979)明显高于癌旁组织中的表达量(0.4386±0.0912),两组比较有统计学意义(P<0.05);鼻咽癌组织中POT1蛋白表达强度与鼻咽癌的临床分期、T分期有关(P<0.05),但与患者年龄、性别、颈部淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 POT1蛋白表达可能与鼻咽癌的发生与发展有关。