微小RNA-489调控脑源性神经营养因子在甲状腺乳头状癌中的作用机制研究

目的　分析微小RNA（microRNA，miR）-489在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）发生发展过程的影响，并探讨其在甲状腺乳头状癌临床诊断的价值。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测甲状腺乳头状癌组织中脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）及miR-489的表达变化；TargetScan和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-489可靶调控BDNF；CCK-8、Transwell迁移侵袭实验等探究miR-489和BDNF对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的影响；构建裸鼠植瘤模型探究miR-489在体内实验中对甲状腺乳头状癌的影响。结果　miR-489在甲状腺乳头状癌组织及转移的肿瘤组织中的表达降低（P＜0.01）；BDNF是miR-489的靶基因；过表达BDNF能逆转miR-489对TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用（P＜0.05)；miR-489可抑制裸鼠肿瘤的生长（P＜0.01）。结论　miR-489通过抑制靶基因BDNF的表达在甲状腺乳头状癌中扮演抑癌基因的角色。     

榄香烯治疗人喉癌裸鼠模型的实验研究

目的：研究榄香烯对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠模型移植瘤的生长抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法：建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下移植模型。应用榄香烯治疗,观察移植肿瘤和裸鼠生长情况,计算肿瘤抑制率;逆转录PCR检测肿瘤组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）mRNA表达情况。结果：榄香烯对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠模型移植瘤的增殖具有明显抑制作用,抑瘤率为52.24%。在实验组和对照组之间,鼠净重、瘤重和瘤体积相比,差异有统计学意义（均P〈0.01）;实验组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达低于对照组（P〈0.01）。结论：榄香烯可显著抑制人喉鳞状细胞癌裸鼠模型肿瘤的生长,其机制与榄香烯抑制VEGF-C和VEGFR-3的表达有关。     

抗人IgM抗体抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长机制

目的　观察抗人IgM抗体作用于人鼻咽癌HNE-1裸鼠移植瘤生存素（Sur vivin）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、血管生成素-2（angiopoietin-2,Ang-2）及移植瘤内微血管密度（microvessel density,MVD）表达变化情况,探讨IgM抗体抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长可能的作用机制。方法　应用免疫组化SABC法检测移植瘤组织中Survivin、PCNA、Ang-2表达情况,免疫组化SAP法检测CD31标记的移植瘤内微血管并计数MVD。结果　①实验组Survivin、PCNA、Ang-2阳性表达的结果显著低于IgG对照组和PBS对照组,差异有统计学意义;②实验组MVD为12.54±0.47,显著低于IgG对照组（16.95±0.21）及PBS对照组（17.17±0.47）,差异有统计学意义;③HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织中MVD分别与Survivin和Ang-2呈显著正相关关系（r 分别为0.754、0.696,P 均＜0.05）。结论　①抗人IgM抗体可以显著抑制HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织内Survivin、PCNA、Ang-2的表达;②抗人IgM抗体可以显著抑制HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织MVD,其机制可能与抑制Ang-2、Survivin的表达有关;③抗人IgM抗体抑制HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长的机制可能与其抑制Survivin、PCNA、Ang-2的表达,促进凋亡、抑制细胞增殖和血管生成有关。     

蛋白激酶CK2α特异性siRNA对人喉癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究蛋白激酶CK2α特异性siRNA对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长和蛋白激酶CK2α表达的影响。方法：裸鼠皮下种植人喉癌Hep-2细胞,肿瘤长到一定大小时,在肿瘤局部注射蛋白激酶cK2a特异性siRNA表达质粒,观察肿瘤生长情况,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测蛋白激酶CK2α mRNA在肿瘤中的表达,应用免疫组织化学方法检测蛋白激酶CK2α蛋白在肿瘤中的表达。结果：转染蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒后,裸鼠移植瘤生长缓慢（P〈0．01）,裸鼠移植瘤中蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白表达均较非特异干扰组和空白组明显下降（P〈0．05）。结论：蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达载体可以下调裸鼠移植瘤中蛋白激酶CK2α表达,抑制肿瘤生长。RNA干扰技术可能成为治疗喉癌的一种新途径。     

小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,探讨移植瘤中增殖细胞核抗原（PCNA）及p53蛋白表达的变化。方法：根据hTERT cDNA序列构建表达短发夹RNA（shRNA）的、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒pshRNA,其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型,将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达;以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果：所有裸鼠均接种成功,5d后可见皮下肿瘤形成,14d左右肿瘤直径达5～7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现：pshRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较,转染质粒完毕后7d抑瘤率为76．50％,P〈0．01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调（P〈0．05）,p53蛋白表达显著上调（P〈0．05）。结论：靶向hTERT mRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导PCNA下调,促进p53蛋白表达所致。     

HNP1基因转染对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长影响的实验研究

目的:观察人α-防御紊HNP1基因对人鼻咽癌细胞株HNE-1生长的影响,探讨其在裸鼠鼻咽癌移植瘤生长中的作用.方法:HNP1基因通过脂质体介导转染人鼻咽癌HNE1细胞株,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察对HNE-1细胞的细胞毒性作用,将筛选的含pcDNA3.1( )-HNP1质粒的HNE-1细胞和空pcDNA3.1( )质粒的HNE-1细胞以及单纯的HNE-1细胞培养、收集后分别注射于8周龄雌性BALB/c裸鼠的右侧腹壁皮下,观察肿瘤生长速度,免疫组织化学检测α-防御素1在肿瘤组织中的表达.结果:HNP1基因转入鼻咽癌HNE-1细胞后能成功地表达有活性的α-防御素1,MTT实验证实有细胞毒作用,转染HNP1基因组裸鼠较对照组肿瘤生长速度慢,体积小.结论:通过转基因方法能表达有活性的α-防御素1并能抑制裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长.     

E1A基因对裸鼠移植瘤生长的抑制和化学治疗的增敏作用

目的　探讨E1A基因对人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和化学治疗 (化疗 )增敏作用及其相关机理。方法　通过裸鼠致瘤实验 ,观察了E1A基因的抑瘤作用。通过模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验 ,观察E1A基因及其与博来霉素联合应用在动物体内的疗效。采用免疫组织化学染色检测E1A基因对HER 2 /neu表达的影响。结果　裸鼠致瘤实验结果显示 :6 86LN 1 E1A细胞形成的肿瘤较 6 86LN 1和 6 86LN 1 vect的出瘤时间晚 ,生长慢 ,瘤重小 ,抑瘤率为 71 8%。模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验结果显示 :与对照组相比 ,博来霉素组、E1A基因组和E1A基因加博来霉素组的抑瘤率分别为 :5 3 1%、76 8%和 96 7% ,与博来霉素组相比 ,E1A基因加博来霉素组的抑瘤率为 :92 8%。免疫组织化学染色显示E1A基因能抑制HER 2 /neu的表达。结论　E1A基因能够明显抑制人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤的生长并显著增加其对博来霉素敏感性 ,具有较好的临床应用前景 ,该作用可能与E1A基因抑制HER 2 /neu的表达有关。     

地龙蛋白组分Ⅲ对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤血管密度和MMP-9表达的影响

目的观察地龙蛋白组分Ⅲ对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤血管密度和MMP-9表达的影响。方法裸鼠接种HNE1细胞形成移植瘤,至肿瘤体积达1cm×1cm×1cm后,随机分为地龙组和对照组,分别于腹腔注射地龙蛋白组分Ⅲ和生理盐水,连续用药20天,然后处死动物,测量鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的体积重量,并制备组织切片,显微镜下计数瘤旁血管密度,免疫组化S-P法检测组织中金属基质蛋白酶9的表达活性。结果地龙组用药处理后,与对照组进行比较,地龙组裸鼠移植瘤的体积和重量均明显降低(P<0.05),瘤旁血管密度明显减少(P<0.05),金属基质蛋白酶9表达明显减弱(P<0.05)。结论地龙蛋白组分Ⅲ可能通过抑制金属基质蛋白酶9的表达活性和抑制瘤旁微血管的生长而抑制鼻咽癌细胞的转移潜能。     

E1A基因对裸鼠移植瘤生长的抑制和化学治疗的增敏作用

目的 探讨E1A基因对人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和化学治疗(化疗)增敏作用及其相关机理。方法 通过裸鼠致瘤实验，观察了E1A基因的抑瘤作用。通过模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验，观察E1A基因及其与博来霉素联合应用在动物体内的疗效。采用免疫组织化学染色检测E1A基因对HER-2／neu表达的影响。结果 裸鼠致瘤实验结果显示：686LN-1-E1A细胞形成的肿瘤较686LN-1和686LN-1-vect的出瘤时间晚，生长慢，瘤重小，抑瘤率为71．8％。模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验结果显示：与对照组相比，博来霉素组、E1A基因组和E1A基因加博来霉素组的抑瘤率分别为：53．1％、76．8％和96．7％，与博来霉素组相比，E1A基因加博来霉素组的抑瘤率为：92．8％。免疫组织化学染色显示E1A基因能抑制HER-2／neu的表达。结论 E1A基因能够明显抑制人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤的生长并显著增加其对博来霉素敏感性，具有较好的临床应用前景，该作用可能与E1A基因抑制HER-2／neu的表达有关。     

LncRNA SNHG12靶向结合miR-206对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡及AKT3蛋白的作用机制CSCD

目的 研究lncRNA SNHG12靶向结合miR-206对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡及AKT3蛋白的作用机制。方法选取2020年1月～2021年1月于新乡市中心医院接受治疗的甲状腺乳头状癌患者的癌组织与癌旁组织标本各10例作为研究对象。将甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞分成3组：实验组（TPC-1常规培养无处理组）、转染组（SNHG12基因沉默组）和对照组（转染不相关序列组）。RT-PCR检测lncRNA SNHG12、miR-206水平，CCK-8检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫印迹检测AKT3，双荧光素酶报告检测lncRNA SNHG12靶向miR-206，双荧光素酶报告检测向miR-206靶向AKT3。结果 lncRNA SNHG12在甲状腺乳头状癌组织中的表达量高于癌旁组织（t=11.240,P<0.05）,miR-206在甲状腺乳头状癌组织中的表达量低于癌旁组织（t=6.795,P<0.05）。lncRNA SNHG12在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平最低，在TPC-1中的表达量高于在K1、BCPAP细胞中的表达（t=5.753,P<0.05）。miR-206在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平最高，在TPC-1细胞中的表达低于在K1、BCPAP细胞中的表达（t=11.000,P<0.05）。与对照组相比，转染组lncRNA SNHG12表达水平、细胞凋亡率、AKT3蛋白表达降低（t=5.306,P <0.05;t=19.850,P <0.001;t=12.440,P <0.001），而miR-206表达升高（t=2.504,P<0.05），转染组在24、48、72 h的细胞增殖低于对照组（F=42.000、69.740、52.510,P<0.01）。结论 低表达的lncRNA SNHG12通过靶向上调miR-206表达、抑制AKT3蛋白，从而抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡。     

血清微小RNA-222-3p在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的　探讨血清微小RNA-222-3p（miR-222-3p）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中的表达及其临床意义。方法　提取121例PTC及甲状腺良性疾 病患者血清中的总RNA,采用qRT-PCR方法检测miR-222-3p的表达情况,分析其与PTC临床病理特征的关系,并探讨其对PTC的临床诊断价值。结果　血清miR-222-3p在PTC患者中的中位表达水平显著高于良性对照组（2.2188 vs0.7022,P <0.05）。血清miR-222-3p的表达水平与PTC的肿瘤最大径、双侧累及、病灶数量及淋巴结转移状况等密切相关（P 均<0.05）,但与性别、年龄、被膜侵犯及TNM分期等无关（P 均>0.05）。ROC曲线分析显示,miR-222-3p诊断PTC的AUC为0.717,灵敏度为79.75%,特异性为61.90%。结论血清miR-222-3p在PTC患者中高表达,其表达水平能反映PTC的进展情况,并对PTC的临床诊断具有一定价值。     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子与甲状腺癌颈淋巴转移的关系

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与甲状腺乳头状癌颈淋巴转移的相关性.方法 采用免疫组织化学方法对79例甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织的COX-2和VEGF蛋白表达进行检测,其中伴有颈淋巴结转移(N )的甲状腺乳头状癌患者46例,不伴颈淋巴结转移(N-)患者33例.结果 颈淋巴结转移组(Ⅰ～Ⅱ期)甲状腺乳头状癌原发灶标本COX-2和VEGF的表达阳性率分别为81.6%和86.8%,不伴颈淋巴结转移组甲状腺乳头状癌原发灶标本COX-2和VEGF的表达阳性率分别为54.5%和66.7%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.05).在颈淋巴结转移组中,原发灶组织COX-2和VEGF的表达具有相关性(P＜0.05).结论 COX-2在甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移中起着重要作用,其作用可能通过调控VEGF途径来实现.     

Intratumoral lymphatics and lymph node metastases in papillary thyroid carcinoma

OBJECTIVE: To examine the relationship between lymphatic vessel density and clinical and pathological variables in patients with well-differentiated papillary thyroid carcinoma. SUBJECTS: Clinical information was retrieved on 109 previously untreated patients with well-differentiated papillary thyroid carcinoma treated with total thyroidectomy and postoperative iodine I 131 ablation. Median follow-up was 38 months. DESIGN: Archived tissue specimens were sectioned and stained with hematoxylin-eosin and anti-LYVE-1 antibody, a highly specific marker for lymphatic endothelium. The size of the tumor and its multifocality were noted and lymphatic vessel density was measured by means of Chalkley point counting. RESULTS: Numerous intratumoral lymphatics were seen in papillary thyroid carcinoma. There was a highly significant association between the presence of intratumoral lymphatics and the presence of neck node metastases (P<.001). There was also a significant association with male sex (P =.03) and the presence of multifocal disease (P =.05). The presence of intratumoral lymphatics remained significantly associated with the presence of nodal metastases at presentation (P =.003) on multivariate analysis. Intratumoral lymphatics were not a significant predictor of tumor recurrence (P =.42, log-rank test). CONCLUSIONS: The development of intratumoral lymphatics in well-differentiated papillary thyroid carcinoma appears to be associated with the spread of tumor to regional lymph nodes. The antimetastatic potential of targeting these lymphatics may be of potential therapeutic benefit in the future.     

P63蛋白在甲状腺肿瘤中表达的意义

目的:探讨p63蛋白在甲状腺腺瘤、甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡癌、鳞状细胞癌和甲状腺髓样癌中的表达意义,探索这些甲状腺疾病的可能起源,以及这些疾病病因之间有无联系。方法:运用免疫荧光法检测10例甲状腺腺瘤、25例甲状腺乳头状癌、4例甲状腺滤泡状癌、2例髓样癌和2例甲状腺鳞状细胞癌中p63的表达。结果:p63在甲状腺腺瘤、甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡癌、甲状腺鳞状细胞癌和甲状腺髓样癌中均有表达。p63在鳞状细胞癌和髓样癌中表达最高,在甲状腺乳头状癌中其表达与患者年龄、性别、肿块位置、肿块大小和有无转移无明显相关性。结论:①甲状腺组织内存在p63阳性标记的干细胞;②甲状腺乳头状癌、滤泡癌、鳞状细胞癌等可能起源相似。干细胞是多功能细胞,向不同方向分化,形成不同疾病;③p63在甲状腺鳞状细胞癌和髓样癌中表达最高,说明在鳞状细胞癌中残留干细胞较多,与肿瘤的生物学特性一致。     

COX-2和VEGF-C在甲状腺乳头状癌中的表达及与颈淋巴结转移的关系

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与颈淋巴结转移的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测40例甲状腺乳头状癌组织中COX-2和VEGF-C的表达情况,并进行颈淋巴结转移相关性分析.结果:甲状腺乳头状癌组织中COX-2和VEGF-C的表达阳性率分别为70.0%(28/40)和75.0%(30/40),其中颈淋巴结转移组COX-2和VEGF-C的表达阳性率分别为80.8%(21/26)和84.6%(22/26),无颈淋巴结转移组分别为50.0%(7/14)和57.1%(8/14),两组之间差异均有统计学意义(P＜0.05).甲状腺乳头状癌组织中COX-2和VEGF-C之间表达呈正相关(r＝0.378,P＜0.05).结论:COX-2和VEGF-C在甲状腺乳头状癌组织中高表达且关系密切,两者在甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移中发挥作用且可能有协同效应.     

甲状腺癌中细胞因子信号转导抑制因子3的表达及临床意义

目的探讨在甲状腺癌、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor ofcytokine signaling 3,SOCS-3)的表达情况和其与相关临床病理参数之间的关系,从而为甲状腺癌的发病机制研究奠定基础,提供理论依据,为甲状腺癌的临床预防及治疗提供新的思路。方法应用免疫组化SP法检测JAK/STAT通路中的SOCS-3在70例甲状腺癌组织、30例甲状腺腺瘤组织及12例正常甲状腺组织中的表达情况。结果①SOCS-3在甲状腺癌组织中高表达,在甲状腺腺瘤组织及正常甲状腺组织中均低表达或无表达,差异有统计学意义;②SOCS-3的表达与甲状腺癌中有无淋巴结转移正相关,与患者年龄及性别无关。结论 SOCS-3在甲状腺癌中高表达,在甲状腺癌信号传导通路上SOCS-3的表达可能是由多因素调节的,并且与甲状腺癌的发病机制密切相关。     

High prevalence of parvovirus B19 infection in patients with thyroid nodules: A case-control study

BackgroundThe incidence of thyroid nodules has increased dramatically in recent decades.Although this increase has been attributed to improved imaging modalities, the question arises as to whether other environmental factors, such as infectious agents are influential.MethodsAdult patients with newly diagnosed papillary thyroid carcinoma, benign thyroid nodules, and healthy euthyroid controls without nodules; were recruited. Various clinical and biochemical parameters including thyroid function tests and serum Parvovirus B19 Ab (IgG) were assessed and compared between groups.ResultsIn this study, data from 364 patients with papillary thyroid carcinoma, 370 patients with benign thyroid nodules, and 360 healthy euthyroid individuals without nodules were analyzed as a control group. The prevalence of parvovirus B19 infection in papillary thyroid carcinoma patients was 58.8% that was significantly higher than the two groups of benign thyroid nodules (49.2%) and the control group (45.0%). In the papillary thyroid carcinoma group, a significant positive correlation was found between tumor size and TSH (r = 0.129, p = 0.014), and between tumor size and B19-Ab (r = 0.176, p = 0.001).ConclusionThe rate of parvovirus B19 infection was higher in patients with papillary thyroid carcinoma and benign thyroid nodules than in the control group. Also, patients with papillary thyroid carcinoma had significantly higher rates of B19 infection than those with benign thyroid nodules.     

DNA ploidy in papillary carcinoma of the thyroid gland in children and adolescents

OBJECTIVE: To evaluate DNA ploidy in papillary thyroid carcinoma in children in correlation to the clinical course of the disease. METHODS: Flow cytometric DNA ploidy measurements were performed on formalin-fixed, paraffin-embedded tumor specimens from 14 children and 14 adult patients with papillary carcinoma of the thyroid gland. Analysis of DNA content was performed blind to patient's age and clinical presentation. RESULTS: Seven patients presented with cervical metastasis, one patient had distal metastasis and four patients had local invasion. All patients underwent total thyroidectomy. Seven children underwent bilateral modified neck dissection. Twenty-five tumors expressed diploid DNA content. No statistically significant difference in DNA content was observed between the tumors from child and adult patients. No correlation was found between DNA content and aggressive presentation in the pediatric group. CONCLUSION: Our primary results indicate that diploid DNA content is common in papillary thyroid carcinoma in children and aggressive clinical presentation is not associated with DNA aneuploidy. Larger prospective studies and long-term clinical follow-up is warranted to document the clinical significance of these observations.