McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心注和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS患者血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清、102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的抗体确为HFRS病毒特异性抗体。     

合成肽为抗原免疫层析纸条诊断流行性出血热

目的：建立一种以合成肽为抗原的胶体金免疫层析纸条用于检测流行性出血热患者血清中特异性的IgM,IgG，IgA，方法，采用戊二醛偶联8肽到BSA上，用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记偶联8肽，组装成免疫层析试纸条，结果：胶体金－8肽免疫层析纸条和流行出血热患者血清中IgM，IgG，IgA，出现特异性反应，正常人血清未出现阳性反应，和荧光免疫检测结果比较IgA符合率为100％，IgA为89％，IgG为79％，结论：以肽作抗原方便无污染特性高制作的免疫层析纸条灵敏度高，简便快速，同时可检测IgM，IgG，IgA，无须特殊设备，有广泛应用前景。     

黑龙江省2019—2021年肾综合征出血热患者血清标本抗体检测

目的 检测黑龙江省2019—2021年肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)疑似患者血清标本中的汉坦病毒急性期和恢复期抗体水平,为该疾病防控提供科学依据。方法 应用酶联免疫吸附法对采集到的肾综合征出血热疑似患者急性期血清样本进行汉坦病毒IgM抗体检测,对恢复期血清标本进行IgM单抗体、IgG单抗体检测,使用SPSS 19.0软件对各年份间患者急性期血样IgM抗体阳性率进行χ²检验分析,使用EpiData 3.1和Excel2003软件对患者性别、职业、年龄、发病日期及初诊间隔时间数据进行整理分析。结果 共检测肾综合征出血热疑似患者急性期血清351份,恢复期血清208份。急性期血清标本IgM抗体阳性317份,阳性率为90.31%,各年份之间患者急性期IgM抗体阳性率差异无统计学意义(χ²=0.895,P=0.639)。患者恢复期血清IgM单抗体阳性32份(15.39%);血清IgG单抗体阳性28份(13.46%);IgM、IgG抗体双阳性148份(71.15%)。男女患者性别比4...     

检测肾综合征出血热血清IgM的ELISA捕捉一步法的建立及初步应用

目的 :建立一种快速、简便、敏感 ,适合医院和基层门诊应用的检测肾综合征出血热血清特异性IgM的方法。 方法 :以羊抗人 μ链为包被抗体 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的抗 -HFRS病毒特异性单克隆抗体 (McAb)与HFRS病毒抗原(Ag)结合成复合物为指示标记物 ,建立了检测HFRS血清特异性IgM的ELISA反向捕捉一步法。 结果 :整个试验过程仅需1h ,操作简便。用该法与山东省淄博市生产的ELISA二步法试剂盒对比检测HFRS血清 6 0份 ,两法均为阳性 5 4份 ,均为阴性 3份 ,总符合率 95 %。结论 :ELISA捕捉一步法快速、简便、敏感 ,适合医院和基层门诊应用 ,可用于HFRS的早期诊断及流行病学研究     

陕西延安地区肾综合征出血热自然疫源地调查研究初报

目的 :查明陕西延安地区是否为肾综合征出血热 ( HFRS)自然疫源地及新疫区。方法 :选择有疫情报告地区 ,进行人间疫情调查、健康人群特异性抗体检测 ;鼠间疫情调查在调查点野外和居民区 ,用夹夜法捕鼠 ,调查鼠种及鼠密度 ,采集鼠肺及血清标本。鼠肺冰冻切片用免疫荧光法检测汉坦病毒抗原 ;鼠血用间接免疫荧光法和酶联免疫法检测 Ig G抗体。结果 :对延安市防疫站 2 0 0 1年统计的 7例 HFRS患者进行流行病学调查 ,均属在当地感染 ;检测延安市洛川县交口河镇 2 4 5例人血标本汉坦病毒特异性 Ig G抗体 ,阳性 5 0例 ,人群隐性感染率为 2 0 .41 %。检测 2 2份鼠肺及鼠血标本 ,HV抗原均为阴性 ;HV抗体 IFA法阳性 1例 ,ELISA法阳性 5例。结论 :延安地区有 HFRS散发病例 ,洛川交口河镇健康人群、褐家鼠、小家鼠中有汉坦病毒感染 ,证实了延安市洛川县交口河镇为 HFRS自然疫源地及新疫区。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的：为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热（HFRS）抗体的检测方法。方法：458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法（CGIDA）与酶联免疫吸附法（ELLISA）对比检测特异性免疫球蛋白M抗体（抗HV－IgM）、免疫荧光法（IFAT）对比检测特异性免疫球蛋G抗体（抗HV－IgG0并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果：458例HFRS病人血清，以CGIDA法检测抗HV－IgM，阳性358例，与ELISA法作结果评价时，CGIDA灵敏度80％，特异度100％；以CGIDA法检测抗HV－IgG，阳性386例，与IFAT法作结果评价时，CGIDA灵敏度91％，特异度100％。结论：CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照，均有简便、快速、特异、灵敏之优点，检测抗HV－IgM，CGIDA法敏感性差于ELISA法，但是无假阳性；检测抗HV－IgM，CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化

目的:探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化。方法:用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA、IgM,寻找HFRS病人IgA、IgM抗体的动态变化规律。结果:几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA、IgM应答,尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高,抗rGP出现亦早,但滴度偏低。结论:应用rNP和rGP为抗原,在发病早期检测IgM的同时,检测I-gA,可以起到互补的作用,特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。     

传染性非典型肺炎患者体液免疫特征初步研究

目的：探讨传染性非典型肺炎(severe acute respiratory syndrome，SARS)患者特异性体液免疫特征。方法：采用ELISA技术检测SARS患者血清中特异性IgG和IgM水平。结果：SARS患者住院期间血清特异性IgG水平持续升高，阳性检出率为77．3％；特异性IgM抗体水平住院3周内持续升高，第3周达到最高值，阳性检出率达60．O％，第4周则迅速下降。SARS患者血清IgM阳性出现时间早于IgG 1周。结论：SARS患者血清中均存在特异性IgG抗体，而特异性IgM只存在70％～80％患者血清中。SARS特异性抗体产生的时间和变化特点相似于其它传染性疾病。     

汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化

目的：探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化。方法：用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白（rNP）和糖蛋白（rGP）为抗原，检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA、IgM，寻找HFRS病人igA、IgM抗体的动态变化规律。结果：几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA、IgM应答，尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高．抗rGP出现亦早，但滴度偏低。结论：应用rNP和rGP为抗原，在发病早期检测IgM的同时，检测IgA，可以起到互补的作用，特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。     

献血者巨细胞病毒感染筛查的初步研究

目的：探讨检测人巨细胞病毒(HCMV)的低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原对健康献血巨细胞病毒感染情况的筛查。方法：对2003年2～7月收集的103份EDTA抗凝外周血标本，用免疫组化方法进行pp65抗原血症检测，同时以ELISA法检测其中的86份血清中的IgM和IgG抗体。结果：103份标本中共有10份pp65抗原阳性，阳性率为9．71％；ELISA法检测86份标本CMV—IgM抗体全部阴性，CMV—IgG抗体56例阳性，阳性率为62％(56／86)，10份pp65抗原阳性的标本中，CMV—IgG阳性9例。结论：pp65抗原是检测CMV感染的一种敏感、特异的方法，而检测CMV—IgM、CMV—IgG不能预测CMV的活动性感染，因此对需要输注全血、成分血的免疫力低下或各种移植病人，应进行CMVpp65抗原的检测。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法。方法 458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELLISA)对比检测特异性免疫球蛋M抗体(抗HV-IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋G抗体(抗HV-IgG)并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果 458例HFRS病人血清,以CGIDA法检测抗HV-IgM,阳性358例,与ELLISA法作结果评价时,CGIDA灵敏度80％,特异度100％;以CGIDA法检测抗HV-IgG,阳性386例,与IFAT法作结果评价时,CGIDA灵敏度91％,特异度100％。结论 CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HV-IgM,CGIDA法敏感性差于ELLISA法,但是无假阳性;检测抗HV-IgM,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附试验在诊断肾病综合征出血热中的价值

寻找一种快速、敏感、特异的诊断肾病综合征出血热 (HFRS)方法。方法　采用碘化钠 -异硫氰酸胍 -氯仿法抽提病毒核酸 ,逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测不同病程中 HFRS患者血清中的汉坦病毒感染情况 ,并采用间接酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测特异性 Ig M抗体。结果　 84.7%患者血清中汉坦病毒核酸检测为阳性 ,其中病程为 1周内者检出率为 10 0 % ,1～ 2周者为 6 0 % ,超过 2周者为 33.3% ,而特异性 Ig M的总检出率为 70 .0 5 % ,病程在 1周、1～ 2周、超过 2周者检出率分别为 6 4%、90 %、6 6 .6 %。结论　RT-PCR和 ELISA都是 HFRS的特异性诊断方法 ,两者可相互补充 ,提高诊断率     

丙型肝炎病毒标志物测定的临床应用

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。　方法 :对 2 44份 HCV感染者、33份对照血清和 35份 HCV特异性 Ig G抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行 HCV四种标志物测定。抗HCV- Ig G、Ig M和 GOR抗体采用间接 EL ISA法 ,HCV C33抗原采用双抗体夹心 EL ISA法。　结果 :抗 HCV- Ig G、抗 HCV- Ig M、HCV C33和抗 GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高 ,分别为 10 0 .0 %、85 .7%、46 .4%和 6 4.3% ;急性输血后丙型肝炎组检出率为 6 6 .7%、10 0 .0 %、2 2 .9%和 42 .9% ;慢性稳定性丙型肝炎组为 94.1%、2 6 .5 %、17.6 %和 5 2 .9% ;血透患者组为 6 2 .6 %、31.3%、4.8%和 45 .6 %。血清抗 HCV Ig G阳性组初乳为 17.1%、2 .9%、8.5 %和 37.1%。血清和初乳对照组除 1例献血员血清抗 HCV- Ig G阳性外 ,其余均为阴性结果。　结论 :除抗 HCV- Ig G外 ,抗 HCV- Ig M、HCV C33和 GOR抗体三种标志物在 HCV感染的相关疾病组中 ,有一定的阳性检出率 ,均可作为 HCV感染的标志 ,可用于 HCV感染后的实验室诊断。     

重组核衣壳蛋白免疫滴金检测肾综合征出血热抗体差异的研究

目的比较重组核蛋白抗原制备的胶体金免疫试剂盒与病毒悬液抗原制备的胶体金免疫试剂盒在检测肾综合征出血热特异性抗体的差异。方法以汉坦76—118病毒M14626株s片段为模板，克隆334bp片段，重组表达核衣壳蛋白，以此蛋白作为抗原，制备胶体金试剂盒，与以病毒悬液为抗原的胶体金试剂盒进行平行检测300例肾综合征出血热血清IgM和IgG抗体。并与酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光法（IFA）对比检测。结果成功构建了重组核蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-S，获得高纯度的抗原，分子量约12kD，以此蛋白为抗原制备胶体金试剂盒。检测300例HFRS病人血清抗HFRSigM，rNPCGIDA阳性检出率为90．7％，后者高于前者，差异有显著性（X^2=32．9，P〈0．05）。用rNP与天然NP平行检测蛋白表达法HFRSIgM76.3％，HFRSIgG84．2％；细胞培养法HFRSIgM86．8％，HFRSIgG92．1％。HFRSIgM符合率达89．7％，HFRSIgG符合率达92．3％；CGIDA法检测HFRS IgM的敏感性为75.0％，特异性为100％；CGIDA法检测HFRSIgG的敏感性为83．1％，特异性为100％。结论该重组核蛋白的CGIDA对HFRS的早期诊断具有较好的应用价值。但是敏感性及特异性均低于细胞培养法的CGIDA。     

HFRS患者尿抗体检测的意义

应用二种ELISA技术分别对25名HFRS患者203份尿液标本特异性IgG、IgM抗体进行了动态研究,发现其抗体阳性率分别为84％(21/25)与60％(15/25),而16％(4/25)的患者既无IgG又无IgM抗体,表明尿抗体检测阴性不能排除HFRS,而只能作为参考指标。病程中IgG抗体平均滴度与每日标本的阳性率均高于IgM,证实了尿中抗体的出现是由于肾脏受损而漏出的结论。     

血清戊型肝炎抗体检测的比较研究

目的评价戊型肝炎抗HEV E2 IgM、IgG酶联免疫试剂(捕获法)在戊型肝炎诊断中的意义。方法对226例肝病患者及50例健康体检者进行抗HEV E2 IgM、IgG检测,同时对226例患者进行上海科华抗HEV IgM、IgG试剂平行检测。结果抗HEV E2 IgM ELISA试剂在226例肝病患者中检出43例阳性,阳性率为19.0%。上海科华试剂在226例肝病患者中检出45例抗HEV-IgM阳性和/或抗HEV-IgG阳性,阳性率为19.9%,与抗HEV E2 IgM ELISA试剂检测结果相符,差异无统计学意义(P>0.05)。抗HEVE2IgM阴性、抗HEV IgG阳性的99例临床诊断考虑戊型肝炎既往感染病例中,上海科华试剂检出16例抗HEV IgG阳性,占16.2%。结论抗HEV E2 IgM ELISA试剂用于戊型肝炎急性感染的检测灵敏准确,是一个较好的HEV近期感染指标。万泰抗HEVIgG试剂在戊型肝炎既往感染的诊断上具有准确、敏感的优势。     

应用合成肽检测病毒性心肌炎患者血清中柯萨奇B组病毒抗体

目的研究应用合成肽代替完整病毒检测柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）抗体及其在病毒性心肌炎（ＶＭＣ）病因诊断中的作用。方法从ＣＶＢ衣壳蛋白ＶＰ１及ＶＰ３的保守区及ＣＶＢ３衣壳蛋白ＶＰ２的非保守区各选出一段多肽（分别称为ＶＰ１－１肽、ＶＰ３－１肽、ＶＰ２－１肽）进行化学合成,应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测这几条多肽与型特异性ＣＶＢ１～６抗体的结合反应。以ＶＰ１－１肽、ＶＰ３－１肽作包被抗原,用间接ＥＬＩＳＡ检测患者血清中ＣＶＢＩｇＧ及ＶＣＢＩｇＭ抗体。结果ＶＰ１－１肽和ＶＰ３－１肽与型特异性ＣＶＢ１～６抗体均有良好的结合反应。８５例健康人、６７例急性ＶＭＣ、３９例慢性ＶＭＣ患者血清ＣＶＢＩｇＧ阳性率分别为２３．５％、５３．７％、３８．５％,ＣＶＢＩｇＭ阳性率分别为７．１％、４９．３％、２８．２％。ＣＶＢＩｇＭ抗体与中和抗体检测结果之间有良好的相关性（Ｐ＜０．００１）,阳性率无明显差别（Ｐ＞０．０５）。结论应用合成肽抗原检测ＣＶＢＩｇＭ抗体有较好的敏感性和特异性。