Western blot检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达

目的:检测C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中的表达水平。方法:收集15例寻常型银屑病患者皮损和10例正常对照组皮肤组织标本,提取总蛋白,采用Western blot技术检测两组组织中C/EBPβ蛋白的表达水平,采用Pearson相关性分析评估C/EBPβ蛋白表达水平与患者PASI评分的相关性。结果:寻常型银屑病患者皮损中C/EBPβ蛋白表达水平(0.84±0.41),明显低于正常对照组(1.15±0.26),差异有统计学意义(t=2.12,P<0.05)。Pearson相关性分析显示C/EBPβ蛋白表达量与患者PASI评分呈负相关性(r=-0.66,P<0.05)。结论:C/EBPβ蛋白在寻常型银屑病皮损中表达下调,为后续深入研究C/EBPβ蛋白在银屑病发病机制中的作用奠定了基础。     

寻常性银屑病皮损中STAT3的表达及磷酸化STAT3的水平

目的检测寻常性银屑病患者进行期斑块状皮损角质形成细胞(KCs)STAT3的表达和活化STAT3(p-STAT3)的水平,并探讨其意义。方法采用免疫组化Polymer酶标二抗法,检测21例银屑病皮损和20例取材于外科手术的正常皮肤KCs中STAT3的表达和p-STAT3的水平,并对银屑病患者进行PASI评分。结果银屑病皮损KCs中STAT3表达显著高于取材于外科手术的正常皮肤组织(后者呈低表达)(P<0.05),且其p-STAT3水平亦显著高于后者(后者呈低水平)(P<0.05);皮损KCs中STAT3表达和p-STAT3水平与银屑病PASI评分之间均存在正相关(r=0.633,0.680,P均<0.05),随着STAT3表达的增加、p-STAT3水平的升高,患者PASI评分也呈升高趋势。结论角质形成细胞STAT3的表达增加和活化在银屑病发病机制中可能起重要作用。     

miR-17-3p在寻常型银屑病患者中的表达研究

目的:研究miR-17-3p在寻常型银屑病皮损及外周血中的表达情况,探讨其参与寻常型银屑病的发病机制。方法:收集寻常型银屑病患者(17例)的皮损组织和外周血及正常对照组(4例)皮肤组织和外周血,提取miRNA。采用Real-time PCR技术检测miR-17-3p miRNA的表达并进行比较。免疫组化法检测寻常型银屑病皮损组织(25例)和正常皮肤组织(15例)中miR-17-3p的可能靶基因FNIP1蛋白的表达,Pearson相关分析银屑病患者外周血中miR-17-3p的表达水平与患者PASI评分的相关性。结果:Real-time PCR显示miR-17-3p miRNA在寻常型银屑病患者组皮损及外周血中表达量较正常对照组均明显降低(t值分别为34.62、9.16,P值均<0.05)。miR-17-3p外周血中表达量与患者PASI评分呈负相关(r=-0.56,P=0.019)。寻常型银屑病患者皮损中FNIP1蛋白表达阳性率明显高于对照组(X~2=9.72,P<0.05)。结论:寻常型银屑病患者皮损及外周血中miR-17-3p表达下调可能与银屑病的发病有关,miR-17-3p可能通过调节靶基因FNIP1参与银屑病发病。通过检测外周血中miR-17-3p的表达量可能可以评估患者病情严重程度。     

CX3C型趋化因子受体CX3CR1 mRNA在银屑病患者中的表达

目的:测定趋化因子受体CX3CR1 mRNA在银屑病患者中的表达水平及其与PASI之间的关系。方法:应用RT-PCR法检测了33例斑块状银屑病患者皮损处、非皮损处皮肤和淋巴细胞及其中16例治疗后患者淋巴细胞中CX3CR1 mRNA的表达水平,设30例健康人为对照组;将检测结果与PASI及皮损处与淋巴细胞中该受体的表达水平分别进行相关性分析。结果:CX3CR1mRNA表达水平:在银屑病治疗前与治疗后外周血淋巴细胞中分别为1.64±1.19与2.15±1.30,均明显高于对照组(0.72±0.72,P<0.001);在银屑病皮损处表皮中为1.33±0.40,明显高于对照组(0.89±0.26,P<0.001)及非皮损处皮肤(0.94±0.45,P<0.01);在银屑病皮损处真皮中为1.59±0.76,明显高于对照组(0.89±0.41,P<0.001)及非皮损处皮肤(1.21±0.53,P<0.01),并与PASI(r=0.601,P<0.001)及淋巴细胞中该受体的表达水平之间呈正相关(r=0.351,P<0.05),非皮损处真皮中CX3CR1 mRNA表达水平也高于对照组(P<0.05)。结论:CX3CR1可能主要通过参与活化、趋化淋巴细胞而在银屑病的发病机制及病理状态的维持中起到重要作用。     

寻常型进行期银屑病皮损中VEGF、EGFR的表达及其与PASI指数的相关性研究

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)在进行期寻常型银屑病皮损及非皮损中的表达及其与PASI指数的关系,探讨银屑病发生发展中表皮增殖和血管生成的关系。方法以30例寻常型进行期银屑病患者为研究对象,记录患者的银屑病皮损面积和严重度(PASI)积分,采用免疫组化技术(PV-9000两步法)检测30例进行期寻常型银屑病皮损及其邻近皮肤、15例正常皮肤中VEGF、EGFR的表达情况。结果①皮损组VEGF表达总阳性率为100%,明显高于邻近组和正常对照组,具有显著性差异;EGFR表达总阳性率为100%,与邻近组相比无显著性差异,明显高于正常对照组,具有显著性差异。②皮损组VEGF阳性染色评分与PASI积分无相关性(rs=0.2821,P>0.05),EGFR阳性染色评分与PASI积分呈正相关(rs=0.4529,P<0.05)。③VEGF阳性染色评分与EGFR阳性染色评分无相关性(r=0.2247,P>0.05)。结论①VEGF、EGFR在进行期寻常型银屑病患者皮损中异常高表达。②VEGF与PASI积分之间无相关性,提示VEGF与银屑病的病情活动性有关,而与疾病的严重程度无关。EGFR与PASI呈正相关,提示EGFR与银屑病的严重程度相关,而与疾病的活动性无关。③VEGF和EGFR无相关性提示两者在银屑病的发病机制中无直接的协同作用。     

Sharpin蛋白在寻常型银屑病皮损内的表达及其与PASI评分关系的研究

目的:探讨Sharpin蛋白在寻常型银屑病皮损内的表达及其与PASI评分的关系。方法:采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法检测Sharpin在寻常型银屑病及正常皮肤内的表达,并探讨其与临床病理特征的关系。结果:Sharpin mRNA在寻常型银屑病皮损内较正常皮肤内表达明显升高,两者差异有统计学意义(t=0.03,P0.05);免疫组化结果提示Sharpin蛋白在寻常型银屑病皮损内高表达,且在寻常型银屑病皮损内的阳性表达率高于正常皮肤组织,平均染色得分亦高于正常皮肤(P值均0.05)。此外,Sharpin蛋白表达与治疗前寻常型银屑病PASI评分呈正相关(r=0.83,P0.05)。结论:Sharpin蛋白可能参与了银屑病发病机制,对提示银屑病病情及预后可能具有一定的意义。     

转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α在银屑病皮损中的表达及意义

目的 探讨转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBP-α）在寻常性银屑病皮损中的表达及与角质形成细胞异常增殖及皮损严重程度间的相关性。 方法 用免疫组化二步法及Western印迹检测30例寻常性银屑病患者皮损和30例健康对照皮肤的表皮中C/EBP-α。免疫组化法检测Ki-67的表达,并根据Ki-67阳性表达数量计算增殖指数,Pearson相关分析法分析寻常性银屑病皮损中C/EBP-α的表达水平与角质形成细胞Ki-67增殖指数及银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI评分）间的相关性。 结果 C/EBP-α主要在角质形成细胞胞质中表达,寻常性银屑病皮损中C/EBP-α的表达较健康对照皮肤明显下调（t = 7.82,P ＜ 0.05）。Ki-67主要在角质形成细胞胞核中表达,寻常性银屑病皮损中角质形成细胞的增殖指数明显高于健康对照皮肤（t = 4.54,P ＜ 0.05）。经Pearson相关分析,寻常性银屑病皮损中C/EBP-α表达水平与增殖指数呈负相关,与PASI评分呈负相关。Western印迹结果亦显示,C/EBP-α在银屑病皮损处的表达量显著下调。 结论 C/EBP-α在寻常性银屑病皮损中表达下调,可能参与了寻常性银屑病的发病过程。     

窄谱中波紫外线对寻常性银屑病患者血清和皮损中IFN-γ,IL-4的影响

目的研究311nm窄谱中波紫外线(NB-UVB)对寻常性银屑病患者血清和皮损中IFN-γ和IL-4的影响。方法40例寻常性银屑病患者随机分为NB-UVB和对照两组,每组20例,NB-UVB组每周光疗3次,共4周,对照组不予光疗。治疗前后分别以银屑病严重程度PASI评分标准评分,以ELISA法测定血清中IFN-γ和IL-4含量,以免疫组化方法和图像分析系统分析IFN-γ和IL-4在银屑病皮损中的表达,结果以积分光密度值(IOD值)表示。结果两组患者治疗后PASI评分均显著下降(P<0.05),且NB-UVB组低于对照组(P<0.05);血清IFN-γ水平均下降(P<0.05),而IL-4水平无明显变化;皮损中IFN-γ表达明显下降(P<0.05),且NB-UVB组低于对照组(P<0.05);IL-4水平增高(P<0.05),且NB-UVB组高于对照组(P<0.05)。结论NB-UVB可以调节寻常性银屑病血清IFN-γ水平和皮损中IFN-γ,IL-4的表达,改善患者体内Th1,Th2失衡状态达到治疗效果。     

窄谱中波紫外线治疗前后银屑病皮损中朗格汉斯细胞的表达

采用免疫组化SP法染色技术检测了27例寻常型银屑病患者NB-UVB治疗前后皮损及皮损周围正常皮肤临近非LC的表达;采用银屑病皮损面积和严重性指数(PASI)进行病情严重程度评分.27例银屑病患者中,治疗前银屑病患者皮损中LC的表达水平高于非皮损及治疗后皮损(P<0.05);银屑病皮损的严重程度PASI评分与CD1a抗原的表达量之间无相关性(r=-0.27,P>0.05).推测NB-UVB可以通过诱导表皮中朗格汉斯细胞凋亡,调节皮肤免疫系统发挥治疗作用.     

银屑病患者皮损处γδT细胞受体γ链V区取用模式的初步研究

目的探讨银屑病患者皮损处γδT细胞的取用模式及其在银屑病发病中的作用。方法通过实时荧光定量PCR的方法检测18例寻常性银屑病患者和18例正常人皮肤及外周血PBMC中γδT细胞受体γ链V区基因(TRGV,T cell receptor gamma variable,亦称Vγ,TCRGV)的表达情况。结果寻常性银屑病组皮损中Vγ9的表达率为对照组皮肤的4.3倍,而对照组外周血PBMC中Vγ9的表达率为寻常性银屑病组的2.7倍,差异均有统计学意义(P=0.00003,0.0002)。对照组皮肤Vγ11的表达率为寻常性银屑病组皮损的3.5倍,差异有统计学意义(P=0.0003)。银屑病组和对照组比较外周血PBMC中Vγ11的表达率、皮肤及外周血PBMC中Vγ1-8和Vγ10的表达差异均无统计学意义(P均0.05)。结论寻常性银屑病患者皮损中γδT细胞Vγ9较正常人高表达,Vγ9+γδT细胞可能是银屑病患者真皮中有致病作用的γδT细胞的主要亚型;银屑病患者皮损中γδT细胞Vγ11较正常人低表达。对这一现象有必要进行深入研究。     

银屑病患者血清和皮损中血管内皮细胞粘附分子的对比研究

目的 探讨银屑病患者血清和皮损中4种血管内皮粘附分子表达与银屑病疾病活动性之间的关系。方法 采用ELISA法检测36例银屑病患者治疗前后和36例健康人的血清中可溶性粘附分子（sICAM-1、sICAM-3、sVCAM-1、sELAM）的浓度。同时用ABC免疫组化染色技术检测了36例银屑病患者皮损和临床治愈处皮肤粘附分子（ICAM－1、ICAM－3、VCAM－1、ELAM）的表达情况。结果 与正常人相比，银屑病患者皮损部位4种粘附分子的原位表达呈明显上调（P＜0.005），同时患者血清中4种可溶性粘附分子浓度也明显升高（P＜0.001）。经治疗后银屑病患者皮损部位4种粘附分子的原位表达明显下调（P＜0.05），同时血清中4种可溶性粘附分子浓度比前也下降（P＜0.05）；血清中4种可溶性粘附分子的浓度与银屑病疾病活动严重指数（PASI）均呈正相关，但治疗前后sVCAM-1的水平上升和下降的幅度最大，且与PASI的相关性最好。结论 血管内皮细胞粘附分子参与银屑病的发病机制；患者血清中可溶性粘附分子浓度的升高可能与皮损部位血管内皮细胞上相应的粘附分子高表达有关；血清VCAM－1的水平可以作为反映银屑病疾病活动的一个新的敏感指标。     

寻常性银屑病皮损中SP,NK-1R和IL-23 p19基因的表达

目的探讨银屑病皮损组织中P物质(SP),SP受体(NK-1R)和IL-23 p19基因实时定量表达的意义。方法收集45例银屑病患者(PASI评分<12分的25例,PASI评分≥12分)与20名正常对照者的临床资料,采用Real-time PCR检测患者和对照组的SP,NK-1R和IL-23 p19的mRNA定量表达水平。结果SP,NK-1R和IL-23 p19mRNA在正常对照组、银屑病PASI(12组和PASI≥12组中的相对表达量均明显增高,差异有显著性(P<0.001)。相关分析显示,IL-23p19 mRNA在各组的表达与SP,NK-1R的表达呈正相关(r分别为0.867和0.846,P<0.001)。结论SP,NK-1R,IL-23p19可能参与银屑病的发病,并与银屑病严重程度相关。     

寻常性银屑病患者表皮中DNA总体甲基化水平检测

目的通过检测寻常性银屑病患者表皮DNA总体甲基化水平,探讨DNA甲基化在银屑病发生发展过程中的作用。方法采用荧光比色法检测寻常性银屑病患者表皮DNA总体甲基化水平,与同一患者非皮损部位及健康对照者表皮进行对照研究,并分析其与病情严重程度的相关性。以PASI评分评估银屑病病情严重程度。结果在30例银屑病患者皮损、非皮损部位表皮及28名健康对照者表皮中检测到不同程度的DNA甲基化,分别为(4.92±2.12)%、(2.85±1.35)%和(2.32±0.99)%。银屑病患者皮损部位表皮DNA总体甲基化水平显著高于同一患者的非皮损部位(P<0.0001)及健康对照者(P<0.0001),而非皮损部位DNA总体甲基化水平与健康对照者之间差异无统计学意义(P>0.05)。银屑病患者皮损部位表皮中DNA总体甲基化水平与PASI评分之间存在显著相关性(P<0.0001)。结论寻常性银屑病患者表皮中DNA总体甲基化水平明显升高,且与疾病严重程度呈正相关。     

寻常型银屑病患者体内半乳糖凝集素家族蛋白表达研究

 目的:探讨寻常型银屑病（PV）患者体内半乳糖凝集素（Gal）家族蛋白表达情况。方法:采用ELISA法检测30例PV患者与30例正常对照者血清中Gal-1、Gal-3、Gal-7、Gal-9的水平;采用免疫组化检测15例PV患者皮损与10例正常皮肤中Gal-1、Gal-3、Gal-7、Gal-9的表达及细胞定位;以平均光密度值评价表达水平,比较其在PV患者与正常对照组中表达的差异。结果:与正常对照者相比,PV患者血清中Gal-1水平明显上调［（39.57±11.33） ng/mL比（31.93±7.98） ng/mL,t=3.02,P=0.004）］,且与PASI评分呈正相关（r=0.37,P=0.049）;皮损中Gal-1主要表达于真皮且表达明显上调（0.030±0.043比0.011±0.002,t=3.34,P=0.003）;PV患者表皮中Gal-3表达下调（0.016±0.001比0.060±0.018,t=-2.85,P=0.009）、 Gal-7上调（0.090±0.011比0.049±0.009,t=2.58,P=0.017）、 Gal-9下调（0.011±0.002比0.049±0.007,t=-6.16,P<0.001）。结论:Gal家族成员Gal-1、Gal-3、Gal-7、Gal-9在PV患者血清中的水平及皮损局部的细胞定位与表达各不相同,提示其在PV中的功能也存在差异,有可能参与了PV的发病机理。     

The association of PASI scores with CRH-R1 expression in patients with psoriasis

Stress is a well-known triggering factor along with genetic predisposition on the onset and during the course of psoriasis by altering the cellular constituents of the immune system. In the skin, there is a local hypothalamic–pituitary–adrenal (HPA) axis which is the equivalent of the central HPA axis. Corticotropin-releasing hormone (CRH) is a major regulator of the HPA axis in response to stress. This study was planned to show the role of CRH receptor type 1 (CRH-R1) in pathogenesis of psoriasis, the relation with the severity of psoriasis, and interpersonal variance in skin biopsy specimens of the psoriasis patient. Study involved 46 patients with psoriasis and 20 healthy control subjects who were older than 18 years. The clinical sign and PASI scores of psoriasis patients were recorded. Immunohistochemically, expression of CRH-R1 was investigated in psoriatic lesions and control group skin. A statistically significant increase of the expression of CRH-R1 was found in the skin biopsies of psoriasis patients compared with the control group patients. In patients with psoriasis, there was a positive correlation between the expressions of CRH-R1 and PASI scores (p = 0.001, r = +0.572). In addition, a statistically significant increase of PASI scores was found in the intense-stained CRH-R1 group compared with the weakly stained CRH-R1 patient group. The present study has demonstrated that CRH-R1 could have a role in pathogenesis of the psoriasis and stress may increase the intensity of psoriasis.     

Sprouty1、2、4在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达及临床意义

【摘要】 目的 研究Sprouty在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达及其与病情严重度的相关性。方法 2018年5 - 11月于南方医科大学皮肤病医院收集15例寻常型银屑病皮损及10例正常对照皮肤标本,采用免疫组化检测银屑病皮损与对照皮肤组织中Sprouty1、2和4蛋白的分布,Western印迹检测Sprouty1、2和4蛋白的表达,逆转录PCR（RT-PCR）检测Sprouty1、2和4 mRNA的表达。采用Pearson相关分析检验Sprouty蛋白表达量与银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）相关性。结果 免疫组化显示,银屑病皮损和对照皮肤均有Sprouty1、2和4表达,Sprouty1在对照皮肤颗粒层细胞的细胞膜和细胞质呈强表达,在银屑病皮损颗粒层的细胞膜少量表达,Sprouty4在银屑病组中的表达强于对照组,Sprouty2在两组中均少量表达。RT-PCR和Western印迹显示,银屑病组和对照组皮肤中均有Sprouty1 mRNA和蛋白的表达,银屑病组Sprouty1 mRNA（0.844 ± 0.169）和蛋白（0.148 ± 0.141）的表达均明显低于对照组（分别为0.972 ± 0.105和0.413 ± 0.108）,两组比较,均P < 0.05;且银屑病组Sprouty1蛋白表达量与PASI评分呈负相关（r = -0.628,P = 0.012）。银屑病组Sprouty4蛋白和mRNA表达量分别为1.306 ± 0.283、1.727 ± 1.017,均明显高于对照组（0.584 ± 0.304和0.714 ± 0.615）,差异均有统计意义（t值分别为6.063和2.814,均P＜0.05）,且银屑病组Sprouty4蛋白表达量与PASI评分呈正相关（r = 0.812,P < 0.001）;两组均少量表达Sprouty2蛋白和mRNA,组间差异无统计学意义（均P＞0.05）,且蛋白表达量与PASI评分无显著相关性（r = 0.436,P = 0.104）。结论 银屑病皮损中Sprouty1、4蛋白表达水平与PASI评分存在相关性,提示二者与银屑病的发病相关。     

甲氨蝶呤对银屑病信号转导和转录激活因子4的表达调控

目的探讨甲氨蝶呤(MTX)对银屑病患者皮损内信号转导和转录激活因子4(STAT4)表达的影响。方法利用荧光定量聚合酶链反应法测定20例寻常性银屑病患者治疗前后皮损内及17例正常对照者皮肤中STAT4mRNA的定量表达,采用直线相关回归方法分析STAT4mRNA的表达与银屑病病情严重指数(PASI)的关系。结果银屑病皮损内STAT4mRNA高于正常对照者的表达水平(P=0.0016)。银屑病皮损内STAT4 mRNA的表达与患者病情严重程度呈显著正相关(P<0.0001)。银屑病患者经过MTX治疗6周后,皮损明显改善,皮损内STAT4 mRNA的表达水平低于治疗前(P=0.0036),与正常对照者的差异无显著性(P=0.0522)。结论STAT4可能在银屑病的发病中起重要作用。MTX能抑制银屑病皮损内STAT4 mRNA的过度表达,这可能是MTX治疗银屑病的作用机制之一。     

银杏石榴煎治疗寻常性银屑病及其对VEGF,PlGF表达的影响

目的观察中药银杏石榴煎治疗进行期寻常性银屑病的疗效及其对患者血清中血管内皮细胞因子(VEGF)及皮损组织中胎盘生长因子(PlGF)表达的影响。方法治疗前后对银屑病患者皮损进行PASI评分,采用ELISA法检测患者治疗前后和正常对照者血清中VEGF的表达水平,并采用免疫组化方法检测患者治疗前后皮损和正常人皮肤中PlGF表达变化。结果①银杏石榴煎可显著改善患者临床症状,治疗前PASI评分(32.814±14.768)较治疗后(2.858±1.813)明显下降(P<0.01);②患者血清中VEGF水平(115.185±36.379pg/mL)明显高于正常对照(40.489±10.955pg/mL)(P<0.01),治疗后(68.012±23.016pg/mL)其水平明显下降(P<0.01);③患者皮损表皮及真皮中内皮细胞、炎症细胞可见明显PlGF阳性表达,治疗后阳性细胞表达减少(P<0.05)。结论银屑病患者血清中VEGF及皮损中PlGF呈高表达,银杏石榴煎可明显降低它们的表达,是治疗银屑病的有效药物。     

TL1A及其受体DcR3在寻常型银屑病皮损中的表达

目的：检测TL1A及其受体DcR3在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达。方法：采用免疫组织化学法和实时荧光定量RT-PCR法对30例寻常型银屑病患者皮损中TL1A和DcR3水平进行检测。结果：银屑病组中TL1A和DcR3蛋白阳性表达率分别为93.3%和90%,正常对照组中TL1A和DcR3蛋白阳性表达率分别为20%和60%;银屑病组TL1AmRNA和DcR3 mRNA表达CT值分别为4.909土1.607和3.430土1.449,正常对照组TL1AmRNA和DcR3 mRNA表达CT值分别为1.250土0.650和1.011土0.150,银屑病组中TL1A和DcR3蛋白及mRNA水平明显高于正常对照,差异均有统计学意义。银屑病皮损中TL1A与DcR3的表达以及TL1AmRNA与DcR3mRNA蛋白的表达均呈正相关性（r=0.735 P<0.01和r=0.2436 P>0.05）。结论：TL1A和DcR3可能参与银屑病炎症的发生机制。     

寻常性银屑病患者皮损中T-bet和GATA-3的表达

目的探讨Th1细胞特异性转录因子T-bet和Th2细胞特异性转录因子GATA-3在寻常性银屑病发病机制中的意义。方法采用免疫组化技术检测23例寻常性银屑病患者皮损和6例正常人皮肤中CD4和CD8以及T-bet和GATA-3的表达和分布。结果寻常性银屑病患者皮损中CD4和T-bet的表达明显高于正常人皮肤(P<0.01),且CD4表达较强的皮损中T-bet的表达也较强,但两者表达阳性的淋巴细胞分布并不一致;而银屑病患者皮损中CD8和GATA-3的表达与正常人皮肤差异无显著性。结论寻常性银屑病皮损的形成和发展可能通过T-bet调控。