脾LAK细胞培养上清中铜锌SOD的检出及其意义

脾ＬＡＫ细胞培养上清中铜锌ＳＯＤ的检出及其意义张满朝，李秋瑾，吴敏，张宇撰，曾吕录（兰州军区军事医学研究所兰州７３００２０）已有报道，ＬＡＫ细胞具有清除自由基的能力，这一现象的发现，为免疫细胞抗衰老、抗辐射及维持机体内自由基平衡提供了依据（见：朱敏生...     

人胎儿脾胸腺细胞培养上清sIL—2R的分析

应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法分析了不同胎龄脾、胸腺细胞培养上清和血清ｓＩＬ－２Ｒ的变化。结果显示：（１）胎儿脾、胸腺细胞体外在ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３刺激下，上清中可产生高水平的ｓＩＬ－２Ｒ．并且随培养时间的延长显著增高（Ｐ＜０．０１）；（２）胎儿腺细胞培养上清ｓｉｌ－２Ｒ水平呈负相关。结果提示：ｓＩＬ－２Ｒ不仅是胎儿淋巴细胞活化的标志，还可能在淋巴细胞分化，成熟过程中发挥免疫调节作用。胎儿血清ｓＩＬ－     

人胎儿脾胸腺细胞培养上清sIL－2R的分析

应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法分析了不同胎龄脾、胸腺细胞培养上清和血清ｓＩＬ－２Ｒ的变化。结果显示：（１）胎儿脾、胸腺细胞体外在ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３刺激下，上清中可产生高水平的ｓＩＬ－２Ｒ。并且随培养时间的延长显著增高（Ｐ＜０．０１）；（２）胎儿脾细胞培养上清ＳＩＬ－２Ｒ明显高于胸腺（Ｐ＜０．０１）；（３）胎儿血清ｓＩＬ－２Ｒ显著高于成人，并随胎龄的增大逐步下降．胎龄与ｓＩＬ－２Ｒ水平呈负相关。结果提示：ｓＩＬ－２Ｒ不仅是胎儿淋巴细胞活化的标志，还可能在淋巴细胞分化、成熟过程中发挥免疫调节作用。胎儿血清ｓＩＬ－２Ｒ增高并随胎龄成熟而下降，推测可能参与胚胎期免疫耐受。     

人肺癌PG细胞培养上清液对PBMC凋亡的影响

目的:探讨PG肿瘤上清对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的增殖抑制及诱导凋亡方面的影响,并探讨了PG细胞影响PBMC凋亡的作用机制。方法:在PBMC培养体系中分别加入不同条件的PG培养上清。在24、72小时收集PBMC,采用流式细胞术测定其对PBMC细胞周期、凋亡率的影响,另外,通过免疫印迹法、流式细胞术分别测定了Bcl-2、Fas蛋白表达的情况来观察PBMC凋亡相关蛋白的变化。结果:PG肿瘤上清没有抑制PBMC进入细胞周期,在PG上清的作用下,PBMC凋亡率显著增加,并且发现PG上清能够调节PBMC内凋亡相关蛋白Bcl-2、Fas的表达量。结论:PG上清能够调节PBMC凋亡相关蛋白量,进而诱导PBMC凋亡,这可能是导致肿瘤微环境中PBMC数量低下的主要原因。     

应用Protein G纯化细胞培养上清中的大鼠单抗

用ｍｉｎｉＰｅｒｍ系统旋转连续培养大鼠杂交瘤细胞株,获得大量含抗鼠ＩＬ－４（ＩｇＧ１）和ＩＬ－５（ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ）抗体的培养上清;经ＰＭ１０膜超滤,５０％饱和硫酸铵沉淀及链球菌Ｃ蛋白－琼脂糖亲和层析纯化ＩｇＧ单抗。结果每升杂交瘤细胞２上清得到大鼠,ＩｇＧ２２－３６ｍｇ;１次可纯化抗体２０ｍｇ;经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＥＬＩＳＡ鉴定,所得到的抗体纯度高,活性保持良好。     

LAK细胞培养物上清中可溶性因子的杀瘤活性

<正> 已经证明LAK细胞培养物上清中的可溶性因子中含有IFN-γ、TNF、GM-CSF等细胞因子,并参与造血调控、白血病细胞诱导分化等多种生物学效应。本实验拟进一步阐明LAK细胞杀瘤活性中可溶性因子的作用。 方法和结果 按本室常规方法,调整正常人PBL为2×10~6/ml,在500u/ml IL-2的基本条件下诱生LAK细胞。培养结束后经1500r/min离心10分钟取培养     

克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱导作用

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分化成熟，反映了ＬＡＫ细胞抗白血病作用的多向性。     

嗅鞘细胞培养上清液促进大鼠周围神经损伤后的修复与再生

文题释义：细胞培养上清：细胞在正常生理过程中会释放一些信息物质,包括可溶性因子、细胞外囊泡、蛋白质、各种RNA等,这些物质能够在细胞间通讯,乃至在多种生理过程中发挥重要作用。在细胞培养过程中,这些物质由细胞分泌至细胞培养液中。这种含有细胞分泌的活性物质并去除了细胞碎片等杂质的培养液,称为细胞培养上清。 神经再生：损伤后的神经再生是一个复杂的生理过程,受多种因素的影响和调节。神经再生过程可归纳为3个方面：受损神经近端轴突的萌芽和伸长,再生轴突的髓鞘化,再生轴突与靶器官之间突触连接的重建。神经再生分为中枢神经再生及周围神经再生。受轴突外部再生微环境的影响,中枢神经再生较外周神经再生更为困难。 背景：既往研究发现嗅鞘细胞培养上清可以促进脊髓损伤后轴突再生及功能恢复,但应用于周围神经损伤治疗方面鲜有报道。 目的：探讨嗅鞘细胞培养上清是否有助于周围神经损伤后的神经修复。 方法：分离纯化嗅鞘细胞并鉴定,制备嗅鞘细胞培养上清。在体外环境将嗅鞘细胞培养上清作用于背根神经节组织块,观察背根神经节轴突生长情况;在体内环境将嗅鞘细胞培养上清应用于大鼠坐骨神经缺损模型,观察坐骨神经轴突再生及髓鞘化情况。 结果与结论：①嗅鞘细胞纯度高达(94.4±3.1)%;②与空白对照组和低剂量嗅鞘细胞上清组对比,高剂量嗅鞘细胞上清组背根神经节组织块的5根最长神经轴突平均长度显著增加(P < 0.05);③免疫荧光显示嗅鞘细胞上清处理组与自体神经移植组类似,再生神经贯通缺损区域,并且再生神经排列有序,神经再生情况显著优于空白对照组;④透射电子显微镜观察显示嗅鞘细胞上清处理组再生神经轴突的数量和髓鞘厚度显著高于空白对照组(P < 0.05);⑤结果表明,嗅鞘细胞培养上清能够促进周围神经损伤后轴突再生及再生轴突的髓鞘化,为周围神经损伤提供了一种新的基于嗅鞘细胞的无细胞疗法。 ORCID: 0000-0002-9558-8585(杨雨洁) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

脾LAK细胞与Yac－1细胞共同培养上清的特性观察

脾ＬＡＫ细胞与Ｙａｃ－１细胞共同培养上清的特性观察兰州军区军事医学研究所兰州７３００２０张满朝，李秋瑾，吴敏，张宇撰，曾召录观察了脾ＬＡＫ（ｓＬＡＫ）细胞与Ｙａｃ－１Ａ／Ｓｎ小鼠淋巴瘤细胞共同培养过程中的形态变化，并测定不同时期共同培养上清中游离核酸...     

大鼠脑组织细胞培养的形态学观察

为观察原代培养 SD大鼠大脑组织 ,包括神经干细胞在内的各种细胞的形态 ,取新生大鼠 ,无菌操作下取出整个大脑 ,制备成单细胞悬液 ,接种培养 ,免疫细胞化学鉴定各类细胞的同时用光镜和扫描电镜对不同阶段和种类的细胞进行形态学观察。结果显示 :在体外培养出神经元、胶质细胞和神经干细胞 ;神经细胞在体外的发育时程跟体内基本一致 ,神经干细胞在体外 2 0 d左右分化成熟 ,获取了神经细胞和干细胞体外培养的光镜和扫描电镜形态。结果提示 ,成体神经细胞体外分离、培养的条件关键点在于尽可能贴近自然 ,由此可保证细胞培养的质量 ,获得可靠的神经干细胞、神经元和胶质细胞。为各类神经细胞提供了形态学资料。     

LAK 细胞培养上清及裂解液诱导 Raji细胞凋亡的研究

用流式细胞仪、 Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ 荧光素核染后显微镜下计数和电镜三种方法观察 Ｌ Ａ Ｋ 细胞培养上清和裂解液诱导 Ｒａｊｉ肿瘤细胞的凋亡。发现该上清和裂解液与靶细胞共同作用３ｈ 后瘤细胞凋亡率显著增高， 到９ｈ 达最高点， 亚二倍体 Ｄ Ｎ Ａ峰积分面积可达４８ ％ 。在电镜下观察到胞体缩小、表面平滑化、染色质靠边浓集、不连续凋亡小体形成等典型的细胞凋亡现象。提示诱导肿瘤细胞的凋亡是 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤机制之一， 并可能通过可溶性因子发挥作用。     

人胎脾LAK细胞活性发育动力学

本文采用4h~(51)Cr释放试验观察了不同眙龄脾的LAK细胞活性。胚胎发育至16周时,胎脾淋巴细胞经IL-2诱导72～96h后,产生明显的LAK活性,对Raji靶细胞的杀伤率为67.7±2.2％,而16周前(15周)的LAK活性低下(20.2±5.8％)。结果还显示,16周后的胎睥LAK活性与眙龄增长无关,与正常成人水平无显著性差异(P>0.05);胎脾LAK前体细胞的发生可能早于NK细胞。     

氧化苦参碱对LAK细胞活性的影响

ＬＡＫ细胞具有很强的广谱杀瘤作用，而氧化苦参碱具有较强的免疫抑制作用。本文研究了氧化苦参碱对ＬＡＫ细胞活力的影响，结果表明：氧化苦参碱可抑制ＩＬ－２对小鼠脾细胞的促增殖作用，并且对ＩＬ－２活化ＬＡＫ细胞杀伤Ｐ８１５的能力也有抑制作用。当ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）与２００μｇ／ｍｌ的氧化苦参碱共同孵育４ｄ后，可使ＬＡＫ细胞杀瘤能力（在效靶比为１００：１时）的８２．５％被抑制。同时氧化苦参碱本身对Ｐ８     

肿瘤靶细胞~(125)Ⅰ-UdR标记方法的建立及其在LAK活性测定中的应用

本文选用~(126)Ⅰ-UdR进行肿瘤靶细胞同位素标记,并用于LAK细胞活性测定。靶细胞~(125)Ⅰ-UdR标记率在一定时间内随标记时间延长而增加,与~(125)Ⅰ-UdR和FUdR的剂量呈正相关关系,其自发释放随效靶作用时间的延长而增加.将此方法用于LAK活性测定取得较好的实验结果,并具有外照射损伤小、标记率高、自发释放相对低而特异性释放高等优点。     

转移因子和免疫核糖核酸对LAK细胞抗肿瘤活性的影响

本研究用重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）联合转移因子（ＴＦ）或抗肿瘤免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ）作用于外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），测定其对Ｋ５６２，Ｒａｊｉ及Ｈ７４０４细胞的杀伤活性。结果发现，高浓度ＴＦ（０．２５ｕ／ｍｌ）可抑制ＬＡＫ活性，ＴＦ进一步稀释（０．１２５ｕ／ｍｌ）可使其抑制作用消失。ＴＦ和抗肿瘤ｉＲＮＡ不能进一步提高最适剂量ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ活性，但能显著增强亚适剂量ｒＩＬ－２（２００ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ活性，诱导ＬＡＫ活性增高的ＴＦ最适剂量为０．０３１ｕ／ｍｌ。ＴＦ或抗肿瘤ｉＲＮＡ单独不能诱导出ＬＡＫ活性，而当两者联合应用可诱导ＰＢＭＣ产生ＬＡＫ活性。本文为ＴＦ及抗肿瘤ｉＲＮＡ协同ＬＡＫ细胞疗法在临床应用提供实验基础。     

LAK细胞的抗肿瘤抗转移作用

由于绝大多数肿瘤细胞的抗原性是十分微弱的,甚至是难以发现的。因此,以识别特异性抗原为其作用基础的T细胞,在肿瘤免疫上的作用便受到了非难和怀疑。免疫监视学说也做了相应修正。最近人们越来越重视非特异性免疫效应细胞的作用,特别是天然杀伤细胞(Natural Killercells,NK)但NK细胞只对某些白血病细胞,淋巴瘤细     

双特异性抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用影响的体外研究

将抗ＣＤ３与抗ＨＢｓ的单克隆抗体经化学偶联得到双特异性抗体，观察该双特异性抗体对ＬＡＫ细胞增殖和增强细胞毒性的作用。结果显示双特异性抗体显著提高ＬＡＫ细胞与２．２．１５细胞结合率；促进淋巴细胞增殖。１２５Ｉ－ＵｄＲ释放试验检测发现双特异性抗体增强ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞的细胞毒性且与抗体浓度呈正相关。进一步对抗体的特异性研究表明，加入双特异性抗体后ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞毒性作用显著高于对照组。     

白细胞介素2快速诱导人LAK细胞的实验研究

本文采用~(125)IUdR释放法测定了大剂量白细胞介素2(IL-2)体外短期诱导人脐血,正常人、良性瘤及恶性瘤病人外周血淋巴细胞的抗肿瘤活性,发现四种来源的淋巴细胞在大剂量IL-3作用15分钟时均可诱导出一定水平的LAK活性,最适IL-2用量为6×10~3u/1.2×10~7细胞/ml,最适体外培养时间为3天。     

抗人小细胞型肺癌和抗CD3单克隆抗体的异质交联体的制备及其增强LAK细胞杀伤活性的实验研究

本文报道了用化学交联法制备同时识别人小细胞型肺癌表面相关抗原和人ＣＤ３抗体的双特异性抗体２Ｄ６－ＵＣＨＴ１的实验研究工作。（５１）Ｃｒ释放法测试结果表明：２Ｄ６－ＵＣＨＴ１可显著增强ＬＡＫ细胞对靶瘤细胞的毒性，而且这种增强效应与加入双特异性抗体的浓度相关。     

抗NKG2D多克隆抗体抑制NK和LAK细胞细胞毒效应的研究

目的 :分析抗NKG2D多克隆抗体 ( pAb)对NK和LAK细胞毒作用的影响。方法 :应用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,经 10mg/LPHA和 1× 10 6U/LrhIL 2诱导LAK细胞产生 ,再应用流式细胞术 (FCM)分选NK细胞并进行表型检测。加入抗NKG2DpAb封闭NK和LAK细胞表面的NKG2D分子后 ,用MTT比色法检测其细胞毒效应。结果 :经FCM分析证实 ,获得高纯度、高活性的NK细胞。抗NKG2DpAb能显著抑制NK和LAK细胞对K5 6 2、HepG2细胞的细胞毒效应。NK细胞对两种靶细胞的细胞毒效应分别下降了 82 .9%和 75 .6 % ;LAK细胞对两种靶细胞的细胞毒效应分别下降了 5 2 .8%和 5 0 .2 %。但抗NKG2DpAb不能显著抑制两种效应细胞对人鼻咽癌细胞系CNE的细胞毒效应。结论 :抗NKG2DpAb可通过封闭NK和LAK细胞表面的NKG2D分子 ,抑制其对肿瘤细胞的细胞毒效应