鼠抗人单克隆抗体LH7：2在营养不良型大疱性表皮松解症诊断中的应用

目的 探讨鼠抗人单克隆抗体LH7：2诊断营养不良型大疱性表皮松解症的意义。方法 采用间接免疫荧光法对临床诊断为营养不良型大疱性表皮松解症（DEB）,分别来源于3个不同家系各1名患者,包括2名显性遗传型营养不良型大疱性表皮松解症（dominant DEB,DDEB)和1名隐性遗传型营养不良型大疱性表皮松解症（recessive DEB,RDEB)进行皮肤基底膜带（BMZ）Ⅶ型胶原检测,同时选择单纯型大疱性表皮松解症（EBS）、大疱性类天疱疮及正常人各1名做对照。结果 3名对照BMZ免疫荧光阳性,2名DDEB荧光均减弱,RDEB荧光阴性。结论 鼠抗人单克隆抗体LH7：2诊断营养不良性大疱性表皮松解症有重要意义。     

营养不良性大疱性表皮松解症COL7A1基因诊断及产前诊断

目的 分析2个营养不良性大疱性表皮松解症(DEB)家系致病基因COL7A1基因突变位点,并在此基础上探讨COL7A1基因分析用于产前诊断的可行性.方法 应用全基因捕获新一代测序(NGS)对2013年10月和2014年4月在郑州大学第一附属医院就诊的2个DEB家系中2例先证者COL7A1基因进行全基因突变检测,获得变异序列后,针对所检出变异序列进行PCR扩增后Sanger双向测序对2个DEB家系中2例先证者及其父母和100名健康个体的COL7A1基因序列进行突变验证分析,确定致病突变后,对其中1个家系中的高危胎儿进行孕早期产前诊断.结果 共发现4种COL7A1基因突变:c.5230G ＞T (p.E1744X)、c.5932C ＞T (p.R1978X)、c.5605-10 T＞G(IVS66-10 T＞G)、c.8305-1G＞A(IVS110-1G＞A).其中p.E1744X、IVS66-10 T＞G和IVS110-1G＞A为国际首次报道的突变.家系1中先证者携带COL7A1基因p.E1744X和p.R1978X无义突变,父母分别为杂合突变携带者;家系2中先证者携带COL7A1基因IVS66-10T＞G和IVS110-1G ＞A剪接区突变,父母分别为杂合突变携带者;100名健康个体未检测到上述突变.家系1中产前诊断胎儿携带与其先证者相同的突变为受累胎儿,胎儿父母选择治疗性引产术后,取胎儿标本行基因诊断,结果与产前诊断相同.结论 COL7A1基因突变是该2个DEB家系的致病原因,NGS结合Sanger测序方法可以快速且准确地进行该病的基因诊断和产前诊断.     

显性遗传营养不良性大疱性表皮松解症1例

患儿 ,男性 ,生后 3ｈ。因双下肢皮肤发红伴水疱 3ｈ入院。患儿为第 2胎 ,第 2产 ,孕 40周顺产。生后即发现双下肢及双足皮肤发红伴有水疱 ,皮肤呈烫伤样 ,部分大疱破溃。患儿反应好 ,哭声响。其它部位皮肤正常。患儿母亲所生第1胎为 1女婴 ,生后发现一侧下肢有同样皮肤损害 ,未曾诊治 ,于生后数天死亡。患儿父亲及姑母在儿童时期有膝部及踝关节部位受摩擦及碰撞后起大疱的病史。入院查体 :Ｔ36 .3℃ ,Ｒ 36 ,Ｐ 130 ,体质量 3ｋｇ。足月儿外貌 ,精神反应好。双下肢大腿伸侧 1/ 2以下及小腿、足背、足底内侧皮肤发红 ,呈烫伤样 ,伴有水疱及…     

新生儿遗传性营养不良性大疱性表皮松解症基因诊断1例

目的:探讨临床表现、皮肤活检病理诊断和基因诊断在遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的诊断意义。方法:分析1例新生儿起病的遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的临床和病理特点和基因诊断结果。结果:1例生后10 h入院新生儿,出生后即发现下肢有大片皮肤破损和糜烂,病变延伸至左侧踝关节和足底,住院后发现口腔内有血疱和水疱,住院期间皮肤受压和摩擦处多处出现新的大疱和皮肤脱落及皮肤糜烂。皮肤糜烂处分泌物和口腔分泌物细菌涂片和培养均未见细菌。取患儿皮肤做病理检查,结果光镜下可见真皮内有少量疏松结缔组织。电子显微镜下真皮层仅见少量纤维母细胞和胶原纤维,基质结构不清。大部分区域未见基底层,张力丝零散分布在真皮组织,部分区域有基底膜,但锚纤维结构不清,致密层变薄,符合遗传性营养不良性大疱性表皮松解症诊断标准。取患儿及其父母静脉血进行COL7A1基因检测,其母在COL7A1基因第13个外显子500上插入AGGG片段,其父在第98个外显子序列后剪切位点有一个G突变为A。患儿COL7A1基因出现复合杂合突变;突变位点分别与父亲和母亲位点一致,证实患儿遗传了来自父、母亲双方的突变基因,因此发病,其父母为表型正常的致病基因携带者。结论:对于临床怀疑遗传性大疱性表皮松解症患儿应先做皮肤病理检查,特别是通过电子显微镜超微结构观察做出初步分型,再根据病理类型进一步做相应基因检测确诊,如能对父母同时进行基因检测对今后优生可能有很大帮助。     

痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症一家系的基因突变检测

目的研究一中国汉族人痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症家系的基因突变。方法采用聚合酶链反应及直接测序的方法对家系中11例患者进行COL7A1基因突变检测,以家系中的16例健康者和100例无亲缘关系的正常人作对照。结果该家系11名患者的COL7A1基因的87号外显子第6859位碱基鸟嘌呤G被腺嘌呤A替代,家系中健康对照及无亲缘关系的正常人均未发现该突变。结论甘氨酸替代突变c.6859G>A(p.G2287R)引起该痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症家系发病。     

新生儿遗传性营养不良性大疱性表皮松解症基因诊断1例

目的：探讨临床表现、皮肤活检病理诊断和基因诊断在遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的诊断意义。方法：分析1例新生儿起病的遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的临床和病理特点和基因诊断结果。结果：1例生后10 h入院新生儿,出生后即发现下肢有大片皮肤破损和糜烂,病变延伸至左侧踝关节和足底,住院后发现口腔内有血疱和水疱,住院期间皮肤受压和摩擦处多处出现新的大疱和皮肤脱落及皮肤糜烂。皮肤糜烂处分泌物和口腔分泌物细菌涂片和培养均未见细菌。取患儿皮肤做病理检查,结果光镜下可见真皮内有少量疏松结缔组织。电子显微镜下真皮层仅见少量纤维母细胞和胶原纤维,基质结构不清。大部分区域未见基底层,张力丝零散分布在真皮组织,部分区域有基底膜,但锚纤维结构不清,致密层变薄,符合遗传性营养不良性大疱性表皮松解症诊断标准。取患儿及其父母静脉血进行COL7A1基因检测,其母在COL7A1 基因第13个外显子500上插入AGGG片段,其父在第98个外显子序列后剪切位点有一个G突变为A。患儿COL7A1基因出现复合杂合突变;突变位点分别与父亲和母亲位点一致,证实患儿遗传了来自父、母亲双方的突变基因,因此发病,其父母为表型正常的致病基因携带者。结论：对于临床怀疑遗传性大疱性表皮松解症患儿应先做皮肤病理检查,特别是通过电子显微镜超微结构观察做出初步分型,再根据病理类型进一步做相应基因检测确诊,如能对父母同时进行基因检测对今后优生可能有很大帮助。     

新生儿大疱性表皮松解症1例

<正>患儿,男,16d。因出生后发现皮肤多处大疱于2010年9月2日入院。胎龄40周,第1胎第1产,在当地医院自然分娩,脐带绕颈1周,否认出生窒息史及羊水异常。生后反应、吃奶可。出生时即可见甲缘皮肤破溃,甲床内可见红色斑片影,之后指甲内可见渗液、糜烂。不久臀部及髂后上棘等受压处出现红色皮疹,很快发展成水疱,疱液为黄色,周围有红晕,水疱逐渐发展为广泛的大疱,随后破溃,可见糜烂面,于当地医院给予     

隐性遗传性大疱性表皮松解症2家系3例伴小腿先天性无皮肤1例

病例1,女,24岁,生后至今全身反复起水疱.患者出生时就有右足背水疱,此后全身反复起水疱、大疱和血疱,吃奶时口腔、咽部起疱.10岁左右,指趾尖萎缩、甲脱,牙齿逐渐变黑、残蚀、脱落,进硬食后食道疼痛,常便后肛门出血,全身皮肤轻擦即破.3年前在民间医生处肌肉注射"激素"后皮疹曾好转.     

一营养不良型大疱表皮松解症家系的基因突变

目的:研究一营养不良型大疱表皮松解症家系的基因突变.方法:用组织病理,超微电镜及免疫荧光方法结合临床表现诊断为显性营养不良型大疱表皮松解症,采用聚合酶链反应,DNA直接测序以及限制性内切酶反应的方法对一营养不良型大疱表皮松解症家系进行基因突变情况的检测.结果:家系中患者及其父均存在COL7A1基因上第6376位的G突变为A,导致Ⅶ胶原2088位的甘氨酸被谷氨酸替代,而对照的健康人不存在此突变.结论:G2088E是引起该家系临床病变的特异突变,不是多态性变化.     

孕妇分娩遗传性营养不良性大疱表皮松解症患儿1例

1病例摘要
　　患者,28岁,G3P2,宫内孕足月3胎,不规律宫缩1h,已见红未破水于2014年11月3日入院。平素月经规律3~4/30d,末次月经2013－02－10,预产期2014－11－17,停经45d自测尿妊娠试验(＋),孕早期B 超符合孕周,孕早期无感冒、发热及风疹史,无放射线及毒物接触史,无阴道流血史,孕期OGTT正常,未做产前诊断,孕4＋个月初觉胎动,孕晚期无双下肢浮肿,无头痛、头晕及视物不清等不适。入院时查体：T36.8℃, P96次/min,R18次/min,Bp130/80mmHg,心肺检查未见异常,下腹部见一横行手术瘢痕,宫高34cm,腹围106cm,胎位：头位,胎心140次/min,内诊：宫颈管展平,宫口开大1cm,儿头S－3,胎膜存,骨盆内外测量正常。 B 超：宫内晚孕,单活胎,头位,随机血糖4.8mmoL/L。入院诊断：①宫内孕38周孕3产2头位;②瘢痕子宫(剖宫产史);③不良孕产史,孕妇于2014－11－0311：39行会阴侧切术阴道分娩一女婴,羊水清,量约500mL,阿氏评分为10－10－10分,新生儿娩出后见双下肢及口腔出血性大疱。孕妇于2008年足月顺产1次,2009年足月剖宫产一次,新生儿出生后均有皮肤出血性大疱表现,出生后1周均夭折,但未进一步诊断。既往无肝炎、结核等传染病史,家族中无传染病及遗传病史。产妇及丈夫皮肤无异常。新生儿出生后全班情况差,1周后家属放弃治疗,10d后夭折。本次对患儿做进一步检查,确诊为遗传性营养不良性大疱表皮松解症。     

单纯型大疱性表皮松解症的角蛋白基因突变分析

目的检测单纯型大疱性表皮松解症(EBS)致病基因角蛋白5(K5)和角蛋白14(K14)基因突变,分析基因型和表型之间的相关性。方法采用PCR和直接测序法对中国汉族人3个EBS家系进行K5基因和K14基因的突变检测,以100例健康人作为正常对照。结果K5基因发现2个突变,一个为移码突变c.1649delG,另一个为错义突变c.508G>A;K14基因发现一个错义突变,为c.1237G>A;在正常对照中未发现上述突变。结论K5或K14基因突变导致该3个家系中患者发病。     

单纯性大疱性表皮松解症Weber-Cockayne亚型一家系调查

单纯性大疱性表皮松解症(epidermolysis bullosa simplex,EBS)Weber-Cockayne亚型(EBS-WC)为临床少见的遗传性疾病,家系调查报道甚少.近期对该病一个家系做了调查,并对本病的病因、病理、诊断及鉴别诊断、治疗与预后等方面进行了讨论,现报道如下.     

重组抗表皮生长因子受体人鼠嵌合单克隆抗体治疗晚期恶性肿瘤Ⅰ期临床试验

目的 评价重组抗表皮生长因子受体(EGFR)人鼠嵌合单克隆抗体(CMAB009)在晚期肿瘤患者中的药代动力学特点和安全性,初步观察疗效.方法 单中心、开放的Ⅰ期临床试验.试验分单次和多次给药两阶段.单次给药设100、250、400mg/m2三个剂量组,随后的多次给药分两组,A组为250 mg/m2,每周一次,连用4周;B组起始剂量400mg/m2,以后每周250 mg/m2,连用4周.多次给药后部分缓解(PR)或稳定(SD)的患者,继续每周给药250 mg/m2,直至病情进展或无法耐受.结果 2008年1～8月,共入组18例受试者,均来自中国医学科学院肿瘤医院.其中结直肠癌10例,非小细胞肺癌7例,胃癌1例.未观察到3/4级不良反应.1/2级不良反应主要有皮疹、甲沟炎、发热、恶心和头痛.2例(13.3%)结直肠癌患者获得PR,至疾病进展时间(TTP)分别为24和16周.结论 CMAB009的耐受性良好,不良反应均为1～2级,最常见的不良反应为皮疹和甲沟炎,可以观察到抗肿瘤疗效.

Abstract：

Objective To characterize the safety profiles and serum pharmacokinetic effects of antiepidermal growth factor receptor monoclonal antibody (CMAB009) in advanced cancer patients and evaluate the preliminary evidence of its anti-tumor activity. Methods This phase I, single-center clinical trial had 2 phases of treatment: single-dose phase, followed by a fixed weekly dose. Subjects meeting the inclusion criteria were enrolled. The subjects were randomly assigned to receive 1 of 3 initial doses of CMAB009 (100, 250 & 400 mg/m2) for the purpose of single-dose pharmacokinetic evaluation. After a 28-day washout period of allowing for the characterization of pharmacokinetic end points, the eligible patients were permitted to undergo a successive multi-dose phase study. They were divided into 2 dose groups, group A with 4 weekly doses of 250 mg/m2, group B with the initial dose of 400 mg/m2, followed by 3 weekly doses of 250 mg/m2. The subjects were closely monitored for adverse events throughout the trial. Results A total of 18 subjects were recruited, including colorectal cancer ( n = 10), non-small cell lung cancer ( n =7) and gastric cancer (n = 1 ). CMAB009-associated toxicity was minimal. And the most commonly reported Grade 1/2 adverse events were skin rashes, fever, nausea and headache. Two patients with colorectal cancer achieved partial remission and the time to progression (TTP) was 24 and 16 weeks respectively. Conclusion As a well-tolerated antitumor agent, CMAB009 may be safely administered by the above multi-dosing protocol.     

抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术 ,以结核杆菌H37Rv的培养滤液免疫Balb/c小鼠 ,以H37Rv及BCG抗原同时筛选杂交瘤细胞 ,得到了 7株稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株 ,并对它们的特性作了初步鉴定。在 7株单克隆抗体杂交瘤中 ,5株 (2C5、2C11、2D1、2E11及 3D3)为IgG1亚类 ,另两株 (3C3及 5D8)为IgM。腹水经ELISA检测 ,效价可达 10 -3 ～ 10 -4 ,同时应用ELISA及免疫印迹试验分析了 7株单抗的种间反应性 ,结果 7株单抗与其它结核杆菌有不同程度的交叉反应 ,其中 1株单抗 (5D8)与大肠杆菌超声抗原也有明显交叉反应 ,提示结核抗原组分十分复杂 ,不仅分支杆菌种间有共同抗原决定簇 ,甚至与其它种属也有相同或相似的抗原决定簇。将这 7株单抗用于结核血清学诊断的价值有待进一步评估     

抗日本血吸虫童虫表膜单克隆抗体的制备

目的为制备分泌抗日本血吸虫感染保护性单克隆抗体细胞株。方法应用杂交瘤技术，将照射致弱尾蚴免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤的细胞融合。结果经两次以上有限稀释克隆化后，抗日本血吸虫童虫表膜抗原阳性率为１００％，建立了５株稳定分泌抗童虫表膜单抗的细胞株。杂交瘤细胞诱生腹水，ＥＬＩＳＡ效价达１０．６４×１０５～１１．２８×１０５。初步鉴定单克隆抗体类型分别为ＩｇＭ、ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ２ｂ。抗原抗体定位于童虫表膜。结论该单抗的制备为进一步研制抗日本血吸虫童虫表膜分子疫苗奠定基础。     

人鼠嵌合型抗IL-2R单克隆抗体诱导肾移植受者sHLA-G5的表达上调

目的 探讨可溶性人类白细胞抗原G5(sHLA-G5)的表达上调是否为肾移植受者应用抗白细胞介素2受体(IL-2R)单克隆抗体的一个新的作用机制.方法 选取2006年1月至2007年12月解放军第三○九医院全军器官移植中心施行初次肾移植受者215例,根据是否使用抗IL-2R单克隆抗体分为:抗体使用组141例,抗体未使用组74例.健康对照组69例.采集外周血用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测sHLA-G5表达含量,并应用蛋白印迹方法和实时定量聚合酶链反应(Realtime PCR)进行验证.结果 移植术前,抗体使用组抗体使用后sHLA-G5的表达[(56±30)μg/L]高于抗体使用前[(34±20)μg/L],也高于健康对照组[(35±17)μg/L]和抗体未使用组[(36±19)μg/L,均P＜0.05].移植术后1 d、4 d、1周、2周,抗体使用组sHLA-G5表达随时间呈现上升趋势;而抗体未使用组sHLA-G5的表达术前术后波动很小,但术后各时间点抗体使用组sHLA-G5的表达均明显高于抗体未使用组[(95±35)μg/L比(54±16)μg/L;(131±24)μg/L比(75±22)μg/L;(167±44)μg/L比(62±17)μg/L;(172±35)μg/L比(45±16)μg/L,均P＜0.01].蛋白印迹法和PCR结果与ELISA法结果相一致.结论 肾移植受者早期应用抗IL-2R单克隆抗体能够诱导sHLA-G5的表达上调,这种调节利于移植物存活,降低排斥反应发生的可能性.

Abstract：

Objective To find whether the up-regulation of soluble human lecocyte antigen-G5 (sHLA-G5) levels is a new function mechanism of anti-interleukin-2 receptors (anti-IL-2R) monoclonal antibody treatment in kidney transplantation. Methods A total of 215 recipients at our centre from January 2006 to December 2007 were divided into antibody use group ( n = 141 ) and antibody non-use group ( n =74) and another healthy group (n =69). The sHLA-G5 level in peripheral blood was detected by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). And the expression of HLA-G5 was confirmed by Western blot and Real-time polymerase chain reaction (PCR). Results sHLA-G5 levels was (56 ± 30)μg/L in using antiIL-2 receptor monoclonal antibody before transplantation, It was higher than that before use antibody [(34 ±20) μg/L], also higher than healthy group [(35 ± 17) μg/L] and antibody non-use group [(36 ± 19)μg/L, P ＜0. 05, respectively]. At Day 1, Day 4, Week 1, Week 2 post-transplantation, the level of sHLA-G5 of recipients with antibody use was significantly higher than that of those with antibody non-use. The values were as follows: (95 ±35) μg/L vs (54 ± 16) μg/L , (131 ±24) μg/L vs (75 ±22) μg/L ,(167±44) μg/L vs (62 ± 17) μg/L, (172 ±35) μg/L vs (45 ±16) μg/L(all P＜0.01). And the results of Western blot and RT-PCR corresponded to those of ELISA. Conclusion The preoperative use of first dose of anti-IL-2R monoclonal antibodies results in the up-regulated level of sHLA-G5. Thus it is beneficial for protecting the kidney survival and reducing the risks of acute rejection.     

隐性遗传性人疱性表皮松解症2家系3例伴小腿先天性无皮肤1例

病例1,女,24岁,生后至今全身反复起水疱。患者出生时就有右足背水疱,此后全身反复起水疱、大疱和血疱,吃奶时口腔、咽部起疱。10岁左右,指趾尖萎缩、甲脱,牙齿逐渐变黑、残蚀、脱落,进硬食后食道疼痛,常便后肛门出血,全身皮肤轻擦即破。     

抗人A血型单克隆抗体的制备及其初步鉴定

分别用A型全血球和提取A型膜抗原免疫8周龄Balb/c鼠,进行细胞融合,建立了10株抗A型血型单克隆抗体。特异性鉴定表明仅与A、AB型血球发生盐水凝集。无冷凝集现象。培养上清和腹水与2％A型血球盐水凝集效价分别在1:32～128和1:512～4096,对200人份献血员血液标本检定,其中6株与标准人血清符合率达100％,A亚型鉴定10株全部属抗A_1亚型。免疫球蛋白亚类测定除A_4株是IgG_3,余均属IgM。