福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达与纯化

目的：表达和纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC，研究福氏志贺菌的致病机制。方法：将含有ipaC基因的pET32a-i-paC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21（λDE3），在异丙基硫代－β－D半乳糖苷（IPTG）诱导下表达，对诱导后的表达产物进行SDS－PAGE鉴定，并采用QIA expressionist^TM蛋白纯化系统来纯化目的蛋白。结果：诱导后的表达产物经SDS－PAGE发现有一相对分子质量约为63000的条带，其含量约占总蛋白量的11％，以350mmol/L咪唑洗脱液洗脱，目的蛋白纯度可达90％以上，结论：pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后，可稳定，高效地表达目的蛋白，QIA－expressionistTM蛋白纯化系统是一种简便，高效的纯化系统，可获得高纯度的目的蛋白。     

福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达与纯化

目的表达和纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC,研究福氏志贺菌的致病机制。方法将含有ipaC基因的pET32a-i-paC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21(λDE3),在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,对诱导后的表达产物进行SDS-PAGE鉴定,并采用QIA expressionistTM蛋白纯化系统来纯化目的蛋白。结果诱导后的表达产物经SDS-PAGE发现有一相对分子质量约为63 000的条带,其含量约占总蛋白量的11%,以350 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,目的蛋白纯度可达90%以上。结论pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后,可稳定、高效地表达目的蛋白,QIA-expressionistTM蛋白纯化系统是一种简便、高效的纯化系统,可获得高纯度的目的蛋白。     

福氏志贺菌耐药情况与临床选药

目前我国细菌性痢疾(简称菌痢)发病率在细菌性腹泻中仍居首位,也是严重威胁人群健康的一种常见病、多发病。自80年代开始已有疗效较好的喹诺酮类抗生素应用于临床,然而到1999年下半年以来,细菌性痢疾在我院平均住院日明显延长,治疗难度较前几年明显增大,为指导临床用药,提高疗效,缩短住院日,现将我院1997年1月—1999年11月,已培养出的福氏志贺菌的抗菌药物敏感结果进行总结和分析。材料和方法1　菌株来源　105株福氏志贺菌为我院1997年1月—1999年11月间,急诊科、传染科、内科、儿科住院患者粪便培养分离所得,同一患者在2个月内连续培养出同…     

福氏志贺菌药敏试验结果分析

细菌性痢疾是一种急性肠道传染病,菌型较多,各地流行的菌型不一.我市以福氏2a志贺菌流行较为严重,现将我科细菌室1996年6月至2004年10月分离培养的106株福氏志贺菌的鉴定及药敏结果统计分析如下.     

组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力影响的初步研究

目的初步研究福氏志贺菌组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力的影响。方法通过构建志贺菌：EnvZ胞内段（SF-EnvZc）蛋白的原核表达质粒,表达并纯化SF-EnvZc蛋白,在SPECS公司的小分子化合物库中模拟筛选出的10个候选EnvZ抑制剂的基础上,通过体外磷酸化的方法筛选出能够有效地抑制SF- EnvZc蛋白磷酸化的小分子化合物（EnvZ抑制剂）,然后采用表面等离子共振（SPR）技术检测EnvZ抑制剂与SF-EnvZc蛋白的结合力,并采用小鼠角结膜志贺菌感染模型检测EnvZ抑制剂对福氏志贺菌株Sf9380毒力的影响。结果在10个候选EnvZ抑制剂中,化合物1、2、3能够有效地抑制SF-EnvZc蛋白的磷酸化,其IC50值分别为（70．17±5．83）、（10．18±0．86）和（37．66±9．64）μmol／L,且上述3个化合物表现出对SF-EnvZc蛋白的高亲和力,其平衡解离常数（Kd）分别为4．08、3．57和2．94μmol／L,其中化合物1和2能够明显抑制福氏志贺菌株Sf9380导致的小鼠角结膜炎症反应（由＋＋＋变为-）,化合物3能够明显降低其炎症反应（由＋降为＋）,化合物1、2、3的最小有效浓度分别为12．5、12．5和100μmol／L结论筛选出3个EnvZ抑制剂,化合物1、2、3能够不同程度地抑制或降低福氏志贺菌导致的小鼠角结膜炎症反应,提示EnvZ抑制剂能够降低福氏志贺菌的毒力。     

永州市福氏志贺菌临床分离株毒力基因的研究

目的对2012年湖南省永州市医院分离的144株福氏志贺菌进行毒力基因的检测,以了解其毒力基因的携带情况。方法针对毒力基因,设计特异性引物,采用PcR方法检测临床分离株中ial、ipaH和icsP毒力基因的分布情况。结果I44株福氏志贺菌中,其中F1a65株（451％）,F2a50株（208％）,F×24株（167％）,其他25株（173％）。ip＆H、icsP基因的阳性率为1oo％（144／144）,而iaI基因的阳性率为53．4％（77／I44）。结论永州市的福氏志贺菌的ipaH和FcsP携带率非常高,而iaI基因携带率相对较低。     

福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达、纯化及免疫活性鉴定

目的表达、纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC并对其免疫活性进行鉴定。方法将含有ipaC基因的pET32a．ipaC表达质粒载体转入大肠杆菌BL21（kDE3）中表达,表达产物进行SDS—PAGE鉴定,并采用QIA expressionist^TM蛋白纯化系统纯化IpaC蛋白;用纯化的蛋白免疫动物获得抗血清,Western-blot检测抗原的免疫活性。结果诱导后的表达产物经SDS—PAGE发现有一相对分子量约为63000的条带,其含量约占总蛋白量的11％,对融合蛋白进行纯化纯度可达90％以上,抗His的抗体Western-blot分析,发现特异性区带出现在63000u处,证明该蛋白是所要表达的融合蛋白,制备的免疫血清可与Ipac发生特异免疫反应。结论pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后,可稳定、高效地表达毒力蛋白IpaC,且纯化后的蛋白具有免疫活性。     

福氏志贺菌引起皮肤伤口感染1例

志贺菌属的细菌 ,是人类细菌性痢疾 (菌痢 )的病原菌。福氏志贺菌是肠杆菌科志贺菌属中最常见的一种病原菌 ,主要经消化道传播 ,一般只引起人类肠道传染病 (痢疾及急性胃肠炎 )。尚未见引起皮肤软组织感染的病例 ,现报道 1例。1　临床资料患者男性 ,5 4岁 ,因臀部溃疡于 2 0 0 2年 5月 2 0日入包头医学院三附院皮肤科治疗。患者于就诊前半年曾发烧、腹泻 ,次数较多 ,为粘液稀便 ,口服止泻药(品名及剂量不详 ) 3天后治愈。当时 ,臂部皮肤有破损未引起注意 ,后逐渐扩大、变深 ,内呈蜂窝状。经当地乡村诊所给予对症处理 (具体不详 )效果差 ,即…     

兰州市志贺菌相关毒力基因

目的调查兰州市分离志贺菌株的毒力基因型。方法常规分离志贺菌,应用聚合酶链反应检测志贺菌肠毒素1基因（set1A和set1B）、志贺菌肠毒素2基因（sen）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）、侵袭相关位点基因（ial）和多重调控基因（virA）。结果兰州市志贺菌毒力基因virA、set1A阳性率为100％;ipaH阳性率为93．7％;ial、sen、set1B阳性率分别为56．2％、62．5％、25．0％,set1B仅在福氏志贺菌Ⅳ型中检出。结论兰州市志贺菌中携带的毒力基因存在差异,virA、set1A和ipaH较稳定,可作为靶基因用于兰州市志贺菌的检验,set1B可用于筛选福氏志贺菌Ⅳ型菌株。     

儿童福氏志贺菌超广谱β内酰胺酶CTX-M基因型的研究

目的 了解唐山地区产CTX-M型超广谱B内酰胺酶（EsBk）福氏志贺菌的流行基因型,为有效预防和控制该类感染提供理论依据。方法临床分离的无重复产ESBLs的福氏志贺菌43株,采用CLSI推荐的表型筛选和确证试验检测ESBLs,采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX-M基因型。结果43株产ESBLs的福氏志贺菌中,产CTX-M基因型的有19株（44．2％）,经PCR扩增及测序,19株具有ESBLs表型的福氏志贺菌中有17株表达CTX-M-14,1株表达CTX-M-57,1株表达CTX-M-3。结论唐山地区存在着CTX-M基因的流行,应加强唐山地区产CTX-M型ESBLs菌株的检测。     

白化豚鼠与花色豚鼠高脂造模以及降脂药效学的比较

目的 比较分析白化豚鼠与花色豚鼠在构建高脂血症模型以及评价降脂药效学方面的差异,为高脂血症模型建立时豚鼠的品种选择提供参考。方法 选取5周龄的白化豚鼠和花色豚鼠测定基础血脂水平,具体包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）和低密度脂蛋白（LDL-C）。随后分别随机分为正常组（12只）和高脂模型组（24只）,正常组饲喂普通饲料,高脂模型组饲喂高脂饲料以构建高脂血症模型;饲喂4周后,同上测定血脂水平。进一步将高脂模型组随机分为匹伐他汀钙组（12只）和溶媒对照组（12只）,匹伐他汀钙组每天灌胃给予匹伐他汀钙（1mg/kg）,溶媒对照组每天灌胃给予同体积的溶媒,持续给药4周,并同步饲喂高脂饲料;给药结束后,同上测定血脂水平。结果 当给予普通饲料喂养时,白化豚鼠血脂较为稳定,随周龄增长没有显著变化,而花色豚鼠的TC和LDL-C在9周龄后才比较稳定。当给予高脂饲料喂养时,白化豚鼠的TC、TG和LDL-C在造模的四周时间内迅速上升,且增幅显著大于花色豚鼠,HDL-C与花色豚鼠的变化幅度相似。运用模型组豚鼠,进行降脂药效学的考察,匹伐他汀在白化豚鼠高脂血症模型中降脂（TC、TG和LDL-C）幅度更大、升高HDL-C的作用更显著。结论 在选用正常豚鼠评价降脂作用时,降TG或升HDL-C类药物宜选用5周龄之后的白化豚鼠,降TC或LDL-C类药物宜选用9周龄之后的花色豚鼠;在选用高脂血症豚鼠模型评价降脂作用时,白化豚鼠较花色豚鼠在造模后的血脂水平更加紊乱,且对降脂药物的敏感程度更高,故可作为构建高脂血症模型和评价降脂药效学研究较佳的实验动物。     

盐酸小檗碱对豚鼠血液动力学的影响

静脉灌注Ber能引起豚鼠血液动力学参数(LVP、±dp/dtmax、SBP和DBP)明显增加,4mg/kg时,+dp/dtmax和-dP/dtmax均增快41％,而对心衰豚鼠增快更显著,分别增快76％和70％。表明Ber有正性肌力作用,对心衰有效。     

庆大霉素在豚鼠外淋巴中的蓄积现象

根据药力代动力学原理，采用荧光偏振免疫法（ＦＰＩＡ）检测不同时间内豚鼠外淋巴中庆大霉素的浓度，了解其蓄积的情况。结果表明：（１）外淋巴内的药物浓度随庆大霉素用药量的增加而上升、基本上呈线性关系；（２）在注射７ｄ的一组动物，停药７２ｈ仍能测到药物，其浓度接近血清最侈有效浓度，达１．３７±０．９５μｇ／ｍｌ，提示内耳对药物排泄十分缓慢，确实存在外淋巴对庆大霉素的明显蓄积；（３）前述事实表明，即使已停药     

老龄豚鼠耳蜗微循环与SOD变化

[目的]研究老龄豚鼠血管纹微循环与脑SOD含量变化在豚鼠老年聋发生过程中的作用。[方法]根据21只26月龄雄性豚鼠,8只3月龄豚鼠的听性脑干诱发电位(ABR)测量结果,将动物分成老龄组、老年聋组、正常组。比较各组豚鼠血管纹微血管面积与脑组织超氧化物歧化酶(SOD)含量的关系。[结果]老龄组与老年聋组豚鼠的血管纹微血管面积均比正常3月龄豚鼠减少,SOD含量亦明显减少,相关性检验表明老年聋豚鼠血管纹微血管面积与脑组织超氧化物歧化酶(SOD)含量有显著性相关。[结论]随增龄的微循环障碍不是导致老年聋发生的唯一决定因素。缺血再灌注可能产生了更多的自由基,对组织的损害更严重。自由基的清除障碍可能对听觉神经传导具有一定的影响。     

熊果苷制剂对豚鼠皮肤安全性及脱色作用的研究

目的研究不同浓度的熊果苷制剂外用对豚鼠皮肤的敏感性、刺激性及黑素细胞和黑素颗粒的变化,为临床治疗黄褐斑及炎症后色素沉着提供安全和治疗依据。方法选用不同浓度的熊果苷制剂涂抹豚鼠皮肤,通过皮肤敏感试验、刺激试验、皮肤色素值测定和组织病理学检查等方法,观察豚鼠皮肤的形态学和组织学的变化。结果豚鼠皮肤对不同浓度的熊果苷制剂无过敏反应;而刺激反应不同,3%、5%和10%浓度的熊果苷制剂对皮肤没有刺激,15%的熊果苷制剂可引起皮肤轻微潮红,无水肿,为弱刺激性;20%的熊果苷制剂引起皮肤潮红、水肿,具有中等刺激性。豚鼠皮肤颜色的变化随着熊果苷浓度的增加色素值明显减少,其中3%、5%、10%浓度的熊果苷制剂使用3、4周后色素值的变化与单霜相比具有统计学意义。组织病理显示:3%、5%、10%浓度的熊果苷制剂对黑素细胞数量无影响,黑素颗粒随着浓度的增加逐渐减少,15%和20%的熊果苷制剂使黑素细胞数量明显减少,黑素颗粒减少。结论 3%、5%、10%熊果苷制剂外用对豚鼠皮肤是安全且有效的。     

雾化吸入肝素对致敏豚鼠血及肺组织组胺含量的影响

目的 :观察吸入肝素对致敏豚鼠血、肺组织组胺含量的影响。方法 :以卵蛋白作为抗原 ,激发豚鼠形成哮喘豚鼠模型 ,随机分成致敏组 (A组 )、给药组 (B组 )和对照组 (C组 ) ,在卵蛋白雾化吸入后 3 0min、17h测定血、肺组织组胺浓度。结果 :致敏豚鼠吸入肝素后 ,再次接触抗原可抑制血、肺组织组胺浓度升高。结论 :肝素抑制过敏反应可能和抑制肥大细胞释放组胺有关     

豚鼠溃疡性结肠炎模型

采用二硝基氯苯以及乙酸分别复制出二种豚鼠溃疡性结肠炎UC。急性组均表现为结肠粘膜充血水肿,大量炎性细胞浸润,溃疡形成,严重者发生坏死。但慢性组无慢性炎症改变。二硝基氯苯所致的UC模型提示细胞免疫反应参予了UC的病理过程。而乙酸则为UC的直接致炎剂。二种豚鼠模型的比较显示了UC病因发病机理的复杂性。     

雷公藤多甙对哮喘豚鼠炎症的抑制作用

目的：通过哮喘豚鼠模型研究雷公藤多甙（ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｐｏｌｙｇｌｙｃｏｓｉｄｅ，ＴⅡ）对哮喘豚鼠炎症的抑制作用。方法：用卵白蛋白诱发致敏豚鼠哮喘发作，同时进行ＴⅡ与地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）的对照治疗，观察豚鼠支气管－肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中细胞学、肺组织病理及超微结构的变化。结果：豚鼠诱发哮喘后２４ｈ和７２ｈＢＡＬＦ中炎性细胞、嗜酸细胞总数及其分类计数的结果显示，哮喘组较正常对照组明显增多，而ＴⅡ和ＤＥＸ治疗组尤其是ＴⅡ大剂量组则明显减少，与正常对照组比无显著差异（Ｐ＞０．０５），与哮喘组比有明显差异（Ｐ＜０．０５）。组织形态学也显示ＴⅡ对哮喘豚鼠迟发性哮喘反应有明显的抑制作用。结论：ＴⅡ对哮喘豚鼠炎症有明显的抑制作用。     

吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

目的:研究吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症的影响,探讨肝素治疗哮喘的可能机制。方法:建立哮喘豚鼠模型,用肝素雾化吸入,观察支气管灌洗液(BALF)和支气管或细支气管壁的细胞成分变化。光镜和电镜下观察气道及肺组织病理变化。结果:肝素治疗组BALF中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞较哮喘模型组有显著减少(P<0.01),在支气管或细支气管壁,肝素治疗组肥大细胞数显著高于哮喘模型组(P<0.01),嗜酸性粒细胞有显著下降(P<0.01),光镜和电镜下气道损伤减轻。结论:肝素可以抑制哮喘豚鼠气道炎症,减轻哮喘豚鼠气道炎症损伤。     

豚鼠饮水中添加维生素C的饲料脱青观察

采用饮水中添加维生素C(Vc)的方式进行不同生理状况下豚鼠饲料的脱青观察。当饮水中Vc浓度为350mg／L时,可满足生长豚鼠,繁殖期雄性豚鼠及非妊娠非哺乳的雌性豚鼠的Vc需要,当饮水中Vc浓度达700mg／L时,可满足各种生理状况下豚鼠对Vc的需求。实验结果表明：饮水中添加Vc进行豚鼠饲料脱青切实可行,但不同生理状况下豚鼠对饮水中Vc浓度的要求有较大差别,妊娠后期及哺乳期豚鼠饮水中Vc的浓度要求最高。