应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4 mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14 d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-β1免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

兔下颌牵引成骨区应用rhBMP-2对BMP-7表达的影响

目的:研究不同剂量外源性rh BMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨BMP-7表达的影响。方法:选取成年日本大耳白兔45只,雌雄不限,适应性饲养1周,随机分为对照组、实验1组和实验2组,每组各15只。在兔下颌骨磨牙前行截骨术,分别将空白胶原载体、rhBMP-2胶原复合物1.5 mg和rh BMP-2胶原复合物3 mg植入其下颌骨切开处。观察稳定期的第1、3、7、14、28 d的兔的新骨生成,并用免疫组织化学染色法观察BMP-7的表达。结果:成骨细胞(OB)和骨髓基质细胞(SC)的细胞质免疫组织化学法BMP-7阳性表达呈棕色或棕褐色颗粒状着色,结果显示BMP-7的表达与rh BMP-2有剂量依赖性。在同一稳定期内实验组兔成骨细胞和骨髓基质细胞与对照组有显著性差异(P<0.05),且实验2组与实验1组也有显著性差异(P<0.05),在同一剂量下,稳定期1 d BMP-7表达达到高峰,主要集中在间充质细胞的细胞质中,随着稳定期的延长其表达逐渐下降,但稳定期3 d和7 d BMP-7仍为强阳性表达,稳定期14 d进一步减弱,到稳定期28 d表达的很少,达到正常水平。结论:BMP-7在兔牵引成骨过程的不同稳定期的成骨细胞和骨髓基质细胞有不同的表达,说明其对牵引成骨的新骨形成有一定的调节作用。     

下颌骨牵引成骨过程中转化生长因子表达

目的通过建立兔下颌骨牵引成骨实验动物模型,研究下颌骨牵引成骨过程中TGF-β1表达及意义。方法选用新西兰白兔30只,随机选取6只动物作空白对照组,24只动物右侧下颌骨植入外置式颌骨牵引器。经7d延迟期后,按1mm/d速率延长下颌骨7d,固定期8周。在延迟期第7天,牵引期第2、4、7天,固定期第1、3、6、8周分别处死3只动物,采用免疫组化、RT-PCR方法,检测TGF-β1表达变化。结果TGF-β1表达贯穿下颌骨牵引成骨全过程,下颌骨牵引成骨过程中不同时相多种组织细胞参与表达TGF-β1。TGF-β1 mRNA及其蛋白表达在牵引早期达到高峰,此后逐渐减弱。结论TGF-β1在下颌骨牵引成骨血运重建及新骨生成过程中发挥重要作用。TGF-β1可能与传导机械牵引力刺激的细胞信号传导有关,从而启动血运重建和新骨生成机制。     

人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用

目的:对人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和β转化生长因子(TGF-β)在诱导成骨的协同作用进行探讨. 方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组. 分别于术后12 h～21 d共11个时间点取材,观察其诱导成骨过程. 结果:rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2/牛松质骨载体组,成骨量优于rhBMP-2/牛松质骨载体组,其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前,其组织钙含量明显高于对照组(P<0.05). 而单纯牛松质骨载体组在21 d 仅出现了少量增殖的间充质细胞. 结论:rhBMP-2和TGF-β在诱导成骨调节中存在着协同作用.     

内源性成骨因子在兔硬脑膜再生骨中的表达

目的：用外源性重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导兔结论：硬脑膜再生骨，研究内源性成骨因子骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和转化生长因子-βl（TGF-β1）的表达。方法：在诱导区加入rhBMP-2，应用免疫组化方法检测硬脑膜内源性BMP-2和TGF-β1不同天数的表达。结果：术后早期聚集的大量间充质细胞即出现表达BMP-2和TGF-β1，且随着间充质细胞分化为前软骨细胞并不断成熟，两因子的表达水平迅速提高。BMP-2在术后11 d表达最活跃，之后开始下降，而TGF-β1表达高峰出现在术后17 d。结论：外源性rhBMP-2在诱导颅骨再生过程中，能增强内源性BMP-2及TGF-β1在硬脑膜的表达，且BMP-2表达高峰早于TGF-β1。     

TGF-β1和VEGF在牙周膜牵引成骨术中的表达

目的观察经牙周膜牵引成骨术快速移动犬牙齿的牙周组织内细胞因子TGF-β1和VEGF的表达及变化,探讨TGF-β1和VEGF在牙周膜牵引成骨术中的作用,为其后的系列研究和临床应用提供依据。方法选用8只广州本地杂种犬,分别牵引下颌左右两侧第一前磨牙向后移动,A组为对照组,常规滑动法100g牵引;B、C、D纽为实验组,采用牙周膜牵引成骨术,B组的牵引速率为0．25mm／d;C组的牵引速率为0．5mm／d;D组的牵引速率为1mm／d。结果TGF-β1主要表达于成骨细胞与成纤维细胞,VEGF主要表达于血管内皮细胞与成骨细胞。在牵引术后,TGF-β1和VEGF的表达增加,2周时达到高峰;C组的分泌水平最高;固定4周时,各组之间的分泌水平没有明显的区别。结论牵引固定2周时,TGF-β1和VEGF因子大量表达于移动牙的近远中牙周间隙,其中c组最活跃,至固定4周时,两种细胞因子的表达与对照组无差别。     

转化生长因子-β1对骨形态发生蛋白诱导成骨的促进作用

目的：我们通过观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TCF－β1）和骨形态发生蛋白(bone morpho-genetic protein,BMP)共同修复骨缺损,达到进一步阐明BMP诱导成骨机制的目的,方法：实验采用日本大耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型,分为实验组,对照组和空白组,缺损内分别植入BMP／TGF－β1／载体,BMP／载体,载体,通过X线,组织学及电镜对比观察三组骨缺缶修复情况,结果：实验组骨缺损无论是骨痂出现还是骨接发生时间均较对照组明显提前,空白组骨缺损形成骨不连,实验组成骨细胞和软骨细胞无论出现的时间,数量和功能活跃程度均优于对照组,电镜观察见成骨细胞,软骨细胞内线粒体丰富,内质网增多,而对照组则相对较少,软骨细胞内线粒体丰富,内质网络增多,而对照组则相对较少,结论：TGF－β1具有促进BMP诱导成骨的作用,TGF－β1通过促进间充质细胞分裂增殖为BMP提供靶细胞,促进成骨细胞及软骨细胞的分裂增殖,促进骨细胞合成产生I型胶原,促进基质钙化,碱少骨吸收等作用来促进BMP的诱导成骨。     

TGF—α诱导体内成骨效应

目的：β转化生长因子（ＴＧＦ－β）可诱导间充质细胞合成软骨特异性蛋白聚糖和Ⅱ型胶原，刺激成骨细胞的增殖及胶原合成。本实验旨在探讨牛血小板ＴＧＦ－β在体内的成骨活性。方法：以牛血小板为原料，采用酸醇抽提方法，提取血小板蛋白。经柱层析纯化出其中分子质量为２５ｋｕ的ＴＧＦ－β。在小鼠股骨中下段前方骨膜下注射ＴＧＦ－β溶液２０μｌ（含ＴＧＦ－β４００ｎｇ）；每日一次，最长连续注射１０次。结果：骨膜下注射Ｔ     

不同降解率β-TCP/rhBMP-2 复合人工骨的研制及骨诱导活性检测

骨缺损修复是骨科领域的重要课题,除使用生物材料外,人工材料也被广泛应用.但目前尚无理想的人工骨材料.为适应临床上不同植骨的需求,我们研制出了不同降解率的β-磷酸三钙(β-TCP),将其与基因重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)复合制备成不同降解率的β-TCP/rhBMP-2复合人工骨并对其异位诱导成骨活性进行评价.     

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ, Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的 对β转化生长因子（TGF-β）增强人重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2)诱成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究。方法 BALB/c小鼠110只随机分为2组，每组55只，设立rhBMP-2/TGF-β为实验组，rh-BMP-2为对照组，分别于3-21d共8个时间点取材，采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的Ⅰ，Ⅱ型胶原进行检测；对ALP活性进行定量分析。观察2组在诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达情况。结果 Ⅱ型胶原的出现是和成软骨，软骨细胞的出现相伴随的，但是，肥大，变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原，作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原，ALP在软骨形成期即有表达，但是随着成骨细胞的出现，骨组织的形成Ⅰ型胶原仍表现为高表达，而ALP的表达则呈下降趋势。实验组CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达早于对照组。结论 TGF-β增强了rhBMP-2诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达。     

不同剂量rhBMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及其OPG表达

目的 研究不同浓度rhBMP-2在不同时间对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及牵引区新骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达.方法 在48只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-21.5 mg和rhBMP-2 3 mg胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,稳定期第1、3、7、14天,分别处死各组动物,取牵引区新生骨痂行OPG免疫组化染色.结果 下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色OPG主要定位于成骨细胞的胞浆中.在同一时间内,应用rhBMP-2组较对照组有显著性差异(P<0.05),且rhBMP-23 mg剂量组较rhBMP-2 1.5 mg剂量组有显著性差异(P<0.05).结论 动物实验表明,rhBMP-2能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成并具有浓度依赖性.     

人重组骨形态发生蛋白—2和β转化生长因子在诱导成骨中的 …

对人重组骨形态发生蛋白－２和β转化生长因子在诱导成骨的协同作用进行探讨。方法：２１０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为３组,每组７０只,试验侧均位于右后肢,设立ｒｈＢＭＰ－２／牛松质骨载体,单纯牛松质骨载体为对照组,分别于术后１２ｈ－２１ｄ共１１个时间占才,观察其诱导成骨过程。结果ｒｈＢＭＰ－２／ＴＧＦ－β／牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖,分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于ｒｈＢＭＰ－２牛松质骨载体     

生长因子（IGF—Ⅰ、TGF—β1和BMP—2）对兔关节软骨细胞体外增殖的作用

目的 观察IGF－Ⅰ、TGF-β1和BMP－2对培养兔关节软骨细胞增殖的作用。方法 采用体外培养2兔关节软骨细胞的方法，利用^1H-TdR掺入反映软骨细胞增殖。结果 IGF－Ⅰ和TGF-β1均可促进软骨细胞^3H-TdR掺入增加，并有一定的协同作用。面BMP－2对软骨细胞^3H-TdR掺入无显著影响，但与TGF-β1和IGF－I合用时却有抑制^3H-TdR掺入的作用。结论 生长因子之间的不同组合可以协同或拮抗方式影响软骨细胞的增殖，提示生长因子在关节软骨退变和防治上可能有重要的意义。     

TGF—β1基因转染骨髓基质干细胞促进BMP-2活性多肽大鼠体内异位成骨

目的 评价转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染骨髓基质干细胞(BMSC)能否增强骨形态发生蛋白(BMP)活性多肽P24在大鼠体内异位成骨的能力.方法 通过新型非病毒基因载体K(16) GRGDSPC将TGF-β1真核表达载体质粒pcDNA3-TGF-β1导入BMSC,筛选出阳性克隆并扩大培养.将稳定转基因细胞与胶原海绵复合,同时加入BMP-2活性肽P24,构建转基因细胞/胶原海绵/P24复合体.将该复合体植入大鼠竖脊肌浅层肌袋,3、5、8周时对植入局部行CT成像,组织碱性磷酸酶(ALP)活性检测及组织切片的苏木精-伊红染色,观察复合体异位成骨的能力.结果 免疫组化SABC法检测转染后BMSC中TGF-β1的表达,见实验组呈阳性染色.3、5、8周时CT成像两组均可见骨组织形成,且呈时间相关性,实验组CT值分别为(254±20)、(331±34)、(477±37)Hu,均明显高于同期对照组的CT值[分别为(237±17)、(298±31)、(433±45)Hu](均P<0.05);植入局部ALP活性测定实验组分别为(57.78±0.64)、(65.70±0.59)、(71.83±0.67)U/L,亦高于对照组[分别为(55.46±0.55)、(63.27±0.53)、(70.32±0.63)U/L];苏木精-伊红染色可见实验组编织骨的数量明显多于对照组.结论 K(16) GRGDSPC能成功介导TGF-β1基因转染BMSC并有效表达;TGF-β1基因转染BMSC可增强BMP-2活性肽P24的异位成骨能力.     

骨形成蛋白-2在上颌骨快速牵引骨愈合中的作用

目的探索上颌骨经缝牵引中(当弹性牵引力大于800g)加入重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对新骨形成的影响。方法将36只健康杂种犬随机分为5个组,即对照组、400g组、600g组、800g组及800g+rhBMP-2组(联合组)。术后1～8周处死动物,行X线检测及免疫组织化学染色检测。结果各牵引组上颌骨成功前徙,以600g组效果明显[(25.3±5.2)mm]。800g组在2周内牵引速度快,4周后明显减慢[(12.1±2.3)mm],但在注射rhBMP-2后得以改善[(24.2±3.4)mm]。BMP-2、BMP-4、BMP-7阳性染色主要定位于成骨细胞细胞质中,BMP-7在注射rhBMP-2后光密度值明显增强。CT检测各牵引组腭骨水平板骨密度值明显减低,以800g组最为显著[(317.8±185.5)HU],而在注射rhBMP-2后骨密度值明显增强[(1 158.0±93.0)HU]。结论骨缝牵引前移上颌骨能在微创早期延长骨长度;rhBMP-2可以有效促进骨形成并在调节rhBMP-7活性方面起到一定作用。     

碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β_1在人胎儿内耳的定位表达

利用免疫组织化学技术对胎龄为９．５～２９周的１０例人胎儿内耳中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β１）的表达情况进行研究。免疫组织化学染色采用ＬＳＡＢ方法并参考Ｓｈｉ等火棉胶包埋人颞骨切片免疫组化染色技术。结果发现：ｂＦＧＦ及ＴＧＦ－β１在全部胎儿的内耳中均有表达。ｂＦＧＦ在Ｃｏｒｔｉ＇ｓ器、前庭斑和壶腹嵴的感觉上皮有较强的表达，但在９．５周的Ｃｏｒｔｉ＇ｓ器始基一部细胞群染色相对较深而下部细胞群相对稍浅。分化成熟后的毛细胞及支持细胞均维持较强的表达。ＴＧＦ－β１在各…     

重组人骨形成蛋白2在皮肤成纤维细胞中的表达

目的 构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。方法 构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2，并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后，采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达。结果 RT-PCR显示转染后的CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞可以有效地转录BMP2 mRNA。结论 含有人BMP2 cDNA的重组质粒pRK5-hBMP2转染正常人皮肤成纤维细胞后可以有效地表达BMP2。     

rhBMP-2珊瑚复合人工骨诱导骨形成的动物实验研究

[目的]研究rhBMP-2珊瑚复合人工骨在兔体内诱导异位成骨的活性.[方法]将大肠杆菌表达的重组人骨成形蛋白-2(rhBMP-2)与珊瑚复合,制成rhBMP-2珊瑚复合人工骨,将其植入兔股部肌肉,各10例,以单纯珊瑚植入作对照,通过大体和组织学测量等方法,观察新骨形成的特点和珊瑚降解的过程.[结果]组织学显示在植入5周后rhBMP-2珊瑚复合人工骨在植入部位可见散在的编织骨形成,新生骨融合生长,成为含骨髓的板层骨,珊瑚体积明显减少;而对照组未见软骨和骨组织的形成.[结论]rhBMP-2珊瑚复合人工骨具有良好的异位诱导成骨能力.     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

人成骨肉瘤细胞系转化生长因子β1成熟肽基因克隆及序列分析

目的：分析人成骨肉瘤细胞系中转化生长因子β1(TGF—β1)成熟肽基因序列，探讨TGF—β1基因突变存在的可能性及其病理机制。方法：提取人成骨肉瘤细胞系SOSP—9607中的总RNA，采用逆转录PCR(RT—PCR)方法获得TGF-β1成熟肽基因，经克隆后进行序列测定和分析。结果：发现人成骨肉瘤细胞系中存在TGF-β1基因突变，并引起相应多肽的结构改变。结论：人成骨肉瘤细胞系肽SOSP-9607中存在TGF-β1基因突变，其可能在病理机制中起重要作用。