脂质体包封率测定方法研究进展

包封率是脂质体研究的重点,脂质体作为药物载体只有对药物的有效包载,才可能较好地发挥临床治疗作用.本文主要介绍脂质体包封率的各种测定方法并对其适用范围、优越性和局限性进行归纳总结,以期为载药脂质体的研发和应用提供参考.     

多西他赛热敏脂质体的制备及含量和包封率的测定

目的制备多西他赛(DTX)热敏脂质体(docetaxel-loaded thermosensitive liposomes,DTL),建立其含量和包封率测定方法。方法采用薄膜分散法制备DTL并用高效液相色谱法(HPLC)测定脂质体中多西他赛的含量。采用高速离心法分离脂质体与游离药物并测定包封率。结果制备的DTL粒径均一,平均粒径为104 nm,相变温度为42.20℃。辅料和溶剂不干扰主药含量测定,线性范围为1.0～100.0μg/ml(r=1);多西他赛平均回收率为99.50%(RSD=0.65%)。药物在脂质体中的包封率大于98%。结论薄膜分散法可用于制备DTL。药物含量和包封率测定方法简便快速,准确可靠,专属性强。     

多西他赛热敏脂质体的制备及含量和包封率的测定

目的制备多西他赛（DTX）热敏脂质体（docetaxel-loaded thermosensitive liposomes,DTL）,建立其含量和包封率测定方法。方法采用薄膜分散法制备DTL并用高效液相色谱法（HPLC）测定脂质体中多西他赛的含量。采用高速离心法分离脂质体与游离药物并测定包封率。结果制备的DTL粒径均一,平均粒径为104 nm,相变温度为42.20℃。辅料和溶剂不干扰主药含量测定,线性范围为1.0～100.0μg/ml（r=1）;多西他赛平均回收率为99.50%（RSD=0.65%）。药物在脂质体中的包封率大于98%。结论薄膜分散法可用于制备DTL。药物含量和包封率测定方法简便快速,准确可靠,专属性强。     

高效液相色谱法测定奥扎格雷钠脂质体的包封率

 目的 建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定奥扎格雷钠脂质体包封率的检测技术。方法 采用HPLC,以C₁₈色谱柱分离,以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)为流动相,检测波长为274 nm测定。结果 奥扎格雷在10～100 μg/ml浓度范围内线性关系良好,r=0.9997。日内、日间RSD均小于0.5%,方法回收率为(100.2±0.42)%,样品的平均包封率为(94.89±0.44)%。结论 该测定方法简单,准确度高,灵敏度好,适合奥扎格雷钠脂质体的包封率测定。     

微柱离心高效液相色谱法测定盐酸阿霉素磁性热敏脂质体包封率

目的建立微柱离心高效液相色谱法测定盐酸阿霉素磁性热敏脂质体包封率。方法采用SephadexG-50分离脂质体和游离药物,采用高效液相色谱法测定过柱后游离药物含量和过柱前脂质体中药物含量,通过包封率计算公式得出盐酸阿霉素磁性热敏脂质包封率。结果在所选色谱条件下,脂质体其他组分不干扰样品的测定,盐酸阿霉素在5.0100.0μg/m l（r=0.9992,n=7）范围内线性关系良好。洗脱曲线研究结果表明微柱离心法能有效将盐酸阿霉素磁性热敏脂质体与游离药物分离,低、中、高3种浓度的微柱离心法平均加样回收率分别为（97.30±1.11）%、（95.97±1.26）%、（96.78±0.73）%,RSD分别为1.14%,1.32%,0.75%（n=3）。微柱离心高效液相色谱法测定3个不同批号盐酸阿霉素磁性热敏脂质体平均包封率分别为（82.77±0.88）%、（83.03±1.38）%、（80.68±0.42）%（n=3）,RSD分别为1.06%、1.65%、0.51%。结论该方法准确度高,重复性好并方便快捷,可用于盐酸阿霉素磁性热敏脂质体包封率的测定。     

交错融合脂质体的制备

目的研究交错融合脂质体（IFVs）的制备。方法采用改良方法制备交错融合脂质体（IFVs）,应用激光散射粒度分析仪（PCS）对其粒径大小及分布情况进行测定,利用高压液相色谱仪测定其包封率。结果 IFVs脂质体粒径为100 nm左右。包封率为（69.0±5.4）%,远高于其他类型脂质体,并且性质稳定。结论 IFVs是一种大单层脂质体,其特点是粒径均匀（100 nm）,包封容积大,可达20~25μl/μmol脂质,可以携带足够量药物。     

微柱离心-HPLC法测定盐酸伊立替康脂质体包封率

目的：建立盐酸伊立替康脂质体包封率的测定方法,对盐酸伊立替康脂质体进行质量评价。方法：葡聚糖凝胶G-50微柱离心法分离脂质体和游离药物;采用HPLC法测定药物含量,计算包封率。结果：Sephadex G-50对盐酸伊立替康的吸附率为96.61%,对空白脂质体的洗脱率在98.0%-101.1%,对空白脂质体几乎无吸附。含量测定的线性范围为1.0-40.0 mg·L-1,线性关系良好（r=0.999 6）,用此法测定3份盐酸伊立替康脂质体的包封率为83.33%-91.43%,RSD在1.27%~1.93%。结论：该方法可用于盐酸伊立替康脂质体包封率的测定。     

表阿霉素脂质体的制备与质量评价

目的:制备盐酸表阿霉素脂质体,建立HPLC含量测定方法并优选包封率测定方法.方法:采用薄膜分散-pH梯度法制备盐酸表阿霉素脂质体;采用HPLC测定药物含量;采用葡聚糖凝胶色谱、超滤及透析3种分离方法测定脂质体的包封率.结果:制备的表阿霉素脂质体粒径较小、分布较窄;3种方法测得盐酸表阿霉素脂质体的包封率分别为96.1%,98.4%,92.9%;结论:薄膜分散-pH梯度法适于制备盐酸表阿霉素脂质体,含量测定方法可靠.超滤法可以准确、快速地测定脂质体包封率.     

奥沙利铂长循环热敏脂质体的包封率测定及体外释放考察

目的:建立奥沙利铂脂质体的包封率和含量测定方法,并对其体外释放进行考察.方法:采用逆相蒸发法制备奥沙利铂脂质体,用葡聚糖凝胶G-50柱分离载药脂质体和游离药物,以水为洗脱液,RP-HPLC法测定包封率,采用透析法考察脂质体在37℃和41℃的体外释放规律.结果:柱层析分离方法的药物回收率为99.25%,柱加样回收率为100.37%;药物含量测定方法的工作曲线为A =3E 06c-3290.8(n=5),r=0.9999,线性范围0.0201～2.0100 mg/ml,方法回收率为100.70%;脂质体在41℃条件下的释放规律符合一级动力学过程.结论:本方法简便、灵敏、准确,可以用于测定奥沙利铂脂质体的含量和包封率,所制得的脂质体具有明显的热敏释放特征.     

大蒜油固体脂质纳米粒的制备工艺研究

目的制备大蒜油固体脂质纳米粒,考察主要影响因素。方法采用高压匀质法和熔融乳化-超声法制备大蒜油固体脂质纳米粒混悬液。以单因素考察影响制备大蒜油固体脂质纳米粒的处方和工艺因素,通过正交设计优化最优处方。结果所得纳米粒为圆整的类球形实体粒子,平均粒径为(106.5±40.3)、(152.3±52.5)nm,包封率为98.6%、98.3%。结论采用高压匀质法和熔融乳化-超声法制备大蒜油固体脂质纳米粒方法是可行的。     

盐酸表阿霉素-紫杉醇复方脂质体的制备

目的进行盐酸表阿霉素-紫杉醇复方脂质体的制备工艺研究并建立同时测定两药含量的高效液相色谱方法。方法采用薄膜分散-pH梯度法制备复方脂质体。Venusil MP C18色谱柱（250cm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-甲醇-10mmol/L磷酸盐缓冲液（pH2.5）（36∶32∶32）;检测波长：227nm;流速：1.0ml/min。结果盐酸表阿霉素与紫杉醇出峰时间分别为4.2、14.8min;线性方程分别为Y=216300X-34525（r=0.9998,0.1~25μg/ml）,Y=161480X-84107（r=0.9998,0.3~75μg/ml）。盐酸表阿霉素和紫杉醇的回收率均在99%~101%范围内,日内和日间RSD均〈2%。制备的复方脂质体平均粒径162nm,盐酸表阿霉素与紫杉醇的含量分别为0.27、0.83mg/ml;包封率分别为98.6%、95.5%。结论本研究制备的复方脂质体粒径较小,包封率较高,建立的高效液相色谱法可以同时测定盐酸表阿霉素和紫杉醇的含量。     

自发性高血压大鼠中枢胰岛素的表达

目的　对脑胰岛素的含量进行确认 ,探讨脑胰岛素的来源、作用。方法　用放射免疫法测定自发性高血压大鼠(SHR)各脑区胰岛素含量及血浆中胰岛素的含量。结果　下丘脑胰岛素含量最高 ,下丘脑、嗅球、海马、延髓、桥脑、小脑胰岛素含量明显高于血浆。脑胰岛素含量由高到低依次为 :下丘脑、嗅球、海马、延髓、基底节、桥脑、小脑、中脑、大脑皮层。结论　脑可能自身产生胰岛素 ,中枢胰岛素可能在高血压病中起作用。     

酒石酸长春瑞滨热敏脂质体血管刺激性和急性毒性初步研究

目的以酒石酸长春瑞滨注射液（VRB—I）为对照制剂,研究酒石酸长春瑞滨热敏脂质体（VRB—TL）的血管刺激性和急性毒性。方法家兔耳缘静脉输注VRB—I和VRB—TL进行血管刺激性考察;小鼠尾静脉输注VRB—I和VRB—TL观察其毒性反应和死亡情况。结果VRB—I具有明显的血管刺激性,VRB—TL对血管没有明显的刺激作用。VRB—TL和VRB—I的小鼠半数致死剂量（LD50）相同,均为36mg·kg^-1。但VRB-TL的最大耐受剂量为23．04mg·kg^-1,高于VRB—I。结论VRB—TL安全性优于VRB—I。     

糖尿病患者甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇比值水平与胰岛素抵抗的关系

目的探讨血清甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇(TG/HDL-C)比值水平与胰岛素抵抗的关系。方法对146例2型糖尿病患者测定空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG),TG,HDL-C,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,计算TG/HDL-C比值,并按TG/HDL-C和FBG水平分组,比较组间差异与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的关系。结果糖尿病组TG/HDL-C比值水平(2.531±3.741)显著高于正常对照组(0.898±0.487),差异有显著性(t=4.279,P<0.001)。TG/HDL-C比值增高组HOMA-IR(3.291±2.004)明显高于TG/HDL-C比值正常组(2.403±1.789),差异有显著性(t=2.796,P<0.01)。血糖水平>10 mmol/L组HOMA-IR(3.575±2.216)明显大于血糖水平≤10mmol/L组(2.384±1.584),差异有显著性(t=3.760,P<0.001)。结论糖尿病患者TG/HDL-C比值水平与胰岛素抵抗存在着密切的相关性。     

诺和锐联合甘精胰岛素与胰岛素泵治疗老年糖尿病疗效比较

目的：对比两种胰岛素强化治疗对老年糖尿病的效果。方法：选取54例年龄大于60岁得糖尿病患者,随机分为两组,分别予以诺和锐联合甘精胰岛素（A组）和胰岛素泵（B组）治疗并对比分析。结果：B组血糖达标时间优于A组,统计学分析有显著性差异（P〈0.05）。治疗前及治疗后两组各点血糖均无显著性差异（P〉0.05）,治疗后两组患者血糖水平明显下降,各点与同组治疗前比较均有显著性差异（P〈0.01）,B组血糖达标时间优于A组,统计学分析有显著性差异（P〈0.05）。结论：积极的胰岛素强化,可以有效的稳定血糖,改善自身胰岛细胞功能。其中诺和锐用于胰岛素泵治疗老年糖尿病与诺和锐联合甘精胰岛素相比较,所需时间更短且安全性更佳。     

Effects of 2-mercaptopropionyl Glycine on Radiation-induced Lipid Peroxidation in Liposomes and in Rat Liver Microsomal Suspensions

Summary

γ-Irradiation of rat liver microsomal suspensions resulted in the accumulation of both malondialdehyde (MDA) and lipid hydroperoxides. The presence of 2-mercaptopropionylglycine (MPG) during the irradiation period decreased the formation of MDA and lipid hydroperoxides in a dose (MPG)-dependent manner. This may be attributed to the ability of MPG to scavenge the free radicals produced by irradiation. Post-irradiation incubation of microsomes further enhanced the production of both MDA and lipid hydroperoxides; when high concentrations of MPG were present during the incubations the production of MDA and lipid hydroperoxides was substantially decreased. This antioxidant role of MPG was demonstrated for both pre-irradiated microsomes and liposomes and is thought to be due to the conversion of the hydroperoxy to hydroxy fatty acids within the lipid bilayer, as well as the scavenging action on initiating free radicals.