CYP1B1基因缺失小鼠眼前房角组织结构的观察

目的 研究细胞色素P450 181(CYP1B1)基因对小鼠眼前房角组织结构的影响.方法 实验研究.采用成年CYP1B1基因缺失小鼠模型,以同龄C57BL/6J小鼠为对照.通过塑料包埋切片技术,用光学显微镜和透射电子显微镜观察两组小鼠眼前房角组织的形态和超微结构.结果 C57BL/6J小鼠眼前房角组织发育正常;CYP1B1因缺失小鼠存在不同程度的房水引流系统发育畸形,表现为小梁网发育不良,网眼狭窄,小梁细胞结构变异,有时可见小梁柱间有异常存在的均质膜,Schlemm管狭窄或缺失,虹膜突从虹膜根直达全部小梁网.这些异常改变在CYP1B1基因缺失小鼠眼前房角内呈局灶性分布.结论 CYP1B1基因在房角的发育过程中有重要作用,其缺失可导致小梁网、Schlemm管、虹膜突等房水滤过道的结构异常,可能影响房水引流系统的代谢和功能.     

CYP1B1基因缺失小鼠在高糖皮质激素环境下对青光眼的易感性

目的观察高浓度糖皮质激素对CYP1B1^-/-小鼠青光眼易感性的影响。方法采用成年CYP1B1^-/-小鼠作为实验模型,以同龄C57BL／6J小鼠作为对照。每3天结膜下注射0．04mL倍他米松,用Tonopen眼压（IOP）笔每周定期测定小鼠IOP,于第一次给药前,给药后4、8、12周分别摘除眼球,制备石蜡切片,光学显微镜下观察小鼠视网膜形态和厚度,采用TUNEL法检测视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡。结果与给药前相比,2组小鼠给药后4、8、12周的IOP均较前升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;CYP1B1^-/-小鼠的IOP在给药后8周、12周较C57BL／6J小鼠显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。随着倍他米松注射时间的推移,2组小鼠视网膜纤维层均变薄,各时间组的总体差异有统计学意义（P〈0．05）;且CYP1B1^-/-小鼠视网膜纤维层厚度在给药后8周、12周较C57BL／6J小鼠显著变薄,差异有统计学意义（P〈0．05）。2组小鼠RGCs凋亡的速度与给药前相比均显著增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;且CYP1B1^-/-小鼠与C57BL／6J小鼠相比结果更为显著（P〈0．05）。结论在高浓度糖皮质激素的诱导下,CYP1B1^-/-小鼠对青光眼的易感性增加。     

STAT6基因敲除小鼠视网膜神经损伤的研究

目的研究信号转导与转录因子6（STAT6）基因敲除小鼠在视网膜急性缺血-再灌注损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）的损伤情况及视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化。方法野生型C57BL/6小鼠和STAT6基因敲除小鼠各8只,右眼制作急性缺血-再灌注损伤模型,左眼不做任何处理为对照组。急性缺血-再灌注损伤模型采用前房穿刺后生理盐水灌注法,液面高度保持约1.6m相当于眼压120mmHg,维持1h后拔出,再灌注48h后取眼球制作视网膜石蜡切片。TUNEL染色观察2种小鼠RGCs的凋亡,免疫荧光染色法观察视网膜GFAP的表达。结果急性缺血-再灌注损伤48h后,STAT6基因敲除小鼠RGCs的凋亡明显少于野生型C57BL/6小鼠。野生型小鼠损伤后视网膜内GFAP的表达较对照组明显增强,呈纤维样,排列呈栅栏状,由RGCs层贯穿至外核层,而STAT6基因敲除小鼠的GFAP表达增强不明显。结论 STAT6基因敲除对损伤后的RGCs有一定的保护作用,其保护作用有可能是通过降低胶质细胞的反应实现的。     

Rag-1基因敲除小鼠的眼部改变

目的观察Rag-1基因敲除鼠的眼部改变,为进一步研究Rag—1基因功能和其对眼球发育的影响打下一定的实验基础。方法取Rag-1基因敲除型和野生型两种小鼠各10只,雌性,4～6周龄。通过基因鉴定、屈光检查、视网膜电图（ERG）检查、眼球病理分析,观察两种小鼠的眼部情况。结果在眼前节、眼屈光和病理检查中,野生型和基因敲除型小鼠在结构上没有明显的差异．两者的屈光状态也无明显差异,均呈明显的远视状态。ERG主要反映视网膜的功能状态,两者的a波和b波没有明显的差异。结论Rag-1基因敲除型小鼠是一种非常理想的研究眼免疫功能的动物模型。     

T、B淋巴细胞联合免疫缺陷对急性高眼压小鼠视网膜神经细胞的影响

目的研究T、B淋巴细胞联合缺陷对急性高眼压小鼠视网膜神经细胞的影响。方法选取重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠和野生型C57BL／6小鼠各16只。2种小鼠分别随机取6只不做任何处理作为正常对照组,剩余10只作为模型组。采用前房穿刺的方法建立缺血一再灌注模型,每只小鼠取右眼为实验眼,左眼为模型对照眼。通过荧光金逆行标记技术,观察并计数再灌注后21d存活的视网膜神经节细胞（RGCs）;同时进行视网膜切片苏木精一伊红染色,观察再灌注后21d视网膜形态并测量内核层厚度。结果正常对照组SCID小鼠和C57BL／6小鼠的RGCs形态和数量、视网膜结构及厚度均无明显差异。视网膜缺血一再灌注损伤后21d,SCID小鼠RGCs的存活率为91％±5％,C57BL／6小鼠RGCs的存活率为78％±5％,二者比较差异有统计学意义（P=0．003）;SCID小鼠实验眼内核层厚度为（33．52±2．13）μm,模型对照眼为（34．06±3．00）μm,二者比较差异无统计学意义（P〉0．05）;C57BL／6小鼠实验眼内核层厚度为（22．44±1．70）μm,模型对照眼为（31．06±3．75）μm,二者比较差异有统计学意义（P=0．004）。结论急性高眼压模型中,T、B淋巴细胞联合免疫缺陷小鼠RGCs的存活率较高,视网膜损伤明显轻于野生型C57BL／6小鼠。     

人脐血干细胞对大鼠部分性视神经损伤保护作用机制的研究

背景视神经损伤后将导致视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡,而凋亡的重要机制是内质网应激（ERS）,减弱ERS可能对RGCs起到保护作用。目的探讨ERS在大鼠视神经损伤中的机制及人脐血干细胞对大鼠部分性视神经损伤后RGCs的保护作用。方法采用40g自制夹钳夹持102只SD大鼠的左眼视神经制作部分性视神经钳夹伤动物模型,用随机数字表法将动物分为模型损伤组和人脐血干细胞组,每组51只,均取左眼为视神经损伤眼,右眼为正常对照眼。人脐血于细胞组大鼠左眼造模后立即将10川人脐血干细胞注入玻璃体腔。分别在造模后3、7、14、21、28d各处死3只大鼠,苏木精一伊红染色后光学显微镜下观察大鼠RGCs形态学的改变,并对存活的RGCs进行计数。在造模后3、12、24、48、72h及1周各处死6只大鼠,分别进行TUNEL法检测2组大鼠RGCs的凋亡率及逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测上述时间点GRP78 mRNA和CHOP mRNA在2组大鼠视网膜中的表达。结果模型损伤组和人脐血干细胞组随造模时间的延长,RGCs存活的数量明显下降,差异均有统计学意义（F目目=20．100,P=0．007）,与模型损伤组相比,人脐血干细胞组RGCs存活的数量下降缓慢。各时间点间模型损伤组及人脐血干细胞组RGCs存活的数量明显低于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,而人脐血干细胞组RGCs的数量明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。TUNEL检测表明,人脐血干细胞组在造模后24h内未见RGCs凋亡,而模型损伤组可见大量TUNEL阳性细胞出现,造模后48h～1周人脐血干细胞组RGCs凋亡率明显低于模型损伤组,差异有统计学意义（P〈0．01）。人脐血干细胞组视网膜GRP78 mRNA表达较强,CHOP mRNA表达微弱,与模型损伤组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论ERS参与了大鼠部分性视神经损伤后RGCs的凋亡机制,人脐血干细胞对大鼠部分性视神经损伤后RGCs起保护作用。     

钝挫伤性视网膜脱离与房角改变

观察眼部钝挫伤后视网膜脱离同时伴前房角改变的27例(27眼)患者，其中能查见明显房角后退者23眼，有房角粘连者10眼．本组患暇房角改变与视网膜裂孔多在同—于午线或对称部位．有圆形裂孔的视网膜脱离，共发生时间距受伤时较长．钝挫伤后的前房角改变可成为眼外伤的永久标志．鉴于视网膜脱离与房角改变常同时存在，建议房角改变作为诊断钝挫伤性视网膜脱离的重要参考指标之一． （中华眼底病杂志，1993，9：74-76）     

Brn3b基因对视神经损伤条件下视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨Brn3b过表达对视神经损伤条件下视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）的保护作用。方法　选取雄性健康成年BALB/c小鼠60只,用微型视神经夹将小鼠右眼球后视神经夹持损伤,按视神经损伤后的天数依次分为第1、3、5、7、14天组,小鼠左侧正常眼作为空白组,明确视神经损伤天数条件。选取雄性健康成年BALB/c小鼠40只,用微量进样器以小鼠右眼玻璃体内注射的方法将腺相关病毒载体转染小鼠视网膜,建立Brn3b过表达模型并分组:Brn3b过表达组［转染Brn3b过表达腺相关病毒载体（Brn3b overexpressed adeno-associated viral vector,AAV-CMV-Brn3b）］和阴性对照组［转染空白腺相关病毒载体（blank adeno-associated viral vector,AAV-CMV-GFP）阴性对照物］,每组20只;之后,取Brn3b过表达组和阴性对照组各10只,用微型视神经夹将小鼠右眼球后视神经夹持损伤,构建模拟小鼠视神经损伤（controlled optic nerve crush,CONC）模型并分组:CONC-Brn3b过表达组和CONC-阴性对照组。利用视网膜铺片和切片免疫荧光标记相关蛋白表达量,检测Brn3b过表达对视神经损伤条件下RGCs、Brn3b和Caspase3蛋白表达的影响,并对其共定位情况做出统计分析。结果　与阴性对照组相比,Brn3b过表达组小鼠视网膜Brn3b的表达水平明显增加。在小鼠CONC模型制作后的第7天RGCs的总凋亡数量达到65%,第14天RGCs的凋亡数量未见进一步改变。免疫荧光标记的蛋白表达量及其共定位分析显示,在视神经损伤条件下,与CONC-阴性对照组相比,CONC-Brn3b过表达组小鼠RGCs的凋亡量以及凋亡因子Caspase3的表达量均明显减少,差异均有统计学意义（均为P＜0.001）。结论　Brn3b基因对视神经损伤条件下RGC具有明确的保护作用,Brn3b基因对凋亡因子Caspase3的表达可能具有一定的抑制作用。     

眼局部应用神经生长因子对视网膜的毒性研究

目的 兔眼局部应用不同剂量神经生长因子（NGF），观察NGF对视网膜的毒性作用。方法 健康灰兔42只，随机分为7组，每组6只。每只兔右眼结膜下或玻璃体内注射不同质量浓度的NGF 0.1ml，左眼注射生理盐水0.1ml作为对照。直接检眼镜检查：分别于注射前、注射后即刻、第1天和第7天观察视网膜情况。光镜及透射电镜检查：注药后第7天处死动物摘除眼球，光镜及透射电镜下观察视网膜情况。结果 直接检眼镜下均未发现眼底异常改变。光镜下，7组均未发现明显异常改变；透射电镜下只在第7组，即NGF 300μg/0.1ml玻璃体内注射组，发现视杆、视锥细胞盘膜内有裂隙，感光细胞内段的少部分线粒体嵴有损伤。结论 眼局部应用一般剂量NGF对兔眼视网膜无毒副作用。     

NMNAT1缺失对小鼠视网膜双极细胞和无长突细胞的影响

目的　探索烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1（NMNAT1）缺失对视网膜神经元细胞结构及功能的损伤作用。方法　利用NMNAT1^fl/fl小鼠与Six3启动子下表达Cre重组酶的转基因（Six3-Cre）小鼠杂交,获得NMNAT1条件基因敲除小鼠及其同窝对照小鼠,实时荧光定量PCR和Western blot进行检测。在基因敲除小鼠出生后第0、4、10、30天（P0、P4、P10、P30）取材,制作冰冻切片,分别进行HE染色测量视网膜厚度,免疫荧光染色鉴定受损细胞类型以及检测恢复蛋白和视紫质表达水平。结果　与同窝对照小鼠相比,基因敲除小鼠在P0时视网膜并没有明显的形态差异,视网膜厚度比较差异无统计学意义（P>0.05）;到P4时基因敲除小鼠表现出视网膜内层和外层中的分层破坏和大规模细胞死亡,基因敲除小鼠P4时距视神经500 μm、1000 μm、1250 μm的视网膜厚度均明显低于同窝对照小鼠（均为P<0.05）,而距视神经1750 μm的视网膜厚度尚未受影响（P>0.05）;基因敲除小鼠P10时距视神经500 μm、1000 μm、1250 μm、1750 μm的视网膜厚度均低于同窝对照小鼠（均为P<0.05）。基因敲除小鼠全部视网膜内外层的退化在 P30 时几乎完成。此外,与同窝对照小鼠相比,P4时基因敲除小鼠视网膜神经节细胞、双极细胞和无长突细胞的数量差异均没有统计学意义（均为P>0.05）,P10时视网膜神经节细胞没有显著差异（P>0.05）,基因敲除小鼠双极细胞、无长突细胞分别减少了约75%、51%（均为P<0.05）。与同窝对照小鼠相比,基因敲除小鼠在P4时视网膜几乎不表达恢复蛋白和视紫质（均为P<0.05）。结论　NMNAT1缺失主要导致视网膜双极细胞和无长突细胞损害以及恢复蛋白和视紫质缺失。     

New recessive compound heterozygous variants of RP1L1 in RP1L1 maculopathy

AIM: To identify a maculopathy patient caused by new recessive compound heterozygous variants in RP1L1. METHODS: Comprehensive retinal morphological and functional examinations were evaluated for the patient with RP1L1 maculopathy. Targeted sequence capture array technique was used to screen potential pathologic variants. Polymerase chain reaction and Sanger sequencing were used to confirm the screening results. RESULTS: Fundus examination showed round macular lesions appeared in both eyes. Optical coherence tomography showed that the inner segment/outer segment continuity was disorganized and disruptive in the left eye, but it was uneven and slightly elevated in the right eye. Fundus autofluorescence showed patchy hyper-autofluorescence in the macula. Visual field examination indicates central defects in both eyes. Electroretinogram (ERG) and multifocal ERG showed no obvious abnormalities. Fundus fluorescein angiography in the macula showed obviously irregular hyper-fluorescence in the right eye and slightly hyper-fluorescence in the left eye. We found that the proband carried a missense variant (c.1972C>T) and a deletion variant (c.4717_4718del) of RP1L1, which were originated from the parents and formed compound heterozygous variants. Both variants are likely pathogenic according to the ACMG criteria. Multimodal imaging, ERG and detailed medical history are important diagnostic tools for differentiating between acquired and inherited retinal disorders. CONCLUSION: A maculopathy case with detailed retinal phenotype and new recessive compound heterozygous variants of RP1L1 is identified in a Chinese family, which expands the understanding of phenotype and genotype in RP1L1 maculopathy.     

p21^WAF1/CIP1在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨p21^WAF1/CIP1在视网膜母细胞瘤（RB）中的表达及其与肿瘤的病理分期、组织分型、浸润深度的关系。方法利用免疫组织化学法检测p21^WAF1/CIP1在46例RB组织和15例正常视网膜组织中的表达。结果p21^WAF1/CIP1主要表达于细胞核及细胞浆内,在RB中的阳性表达率为47.83%,与正常视网膜组织相比差异有统计学意义（P=0.007）,并随肿瘤病理分期的进展而下降,与组织分型和浸润深度有关（P〈0.05）。结论p21^WAF1/CIP1在RB的发生发展过程中起重要作用,表达的下降与肿瘤恶化及预后不良相关。     

Study on IL-1α, IL-1β and sIL-1ra in Sera of Patients with Graves' Ophthalmopathy

Purpose:To evaluate the relationship between the serum levels of IL-1α, IL-1β, sIL-1ra and the activity and the severity of Graves' Ophthalmopathy(GO), as well as the therapeutic responses to high-dose Ⅳ methylprednisolone. Methods: Using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) systems, we measured serum concentrations of IL-1α、 IL-1β and sIL-1ra in 18 normal controls, 20 active GO,20 inactive GO, 18 Graves' disease(GD) on patients without ophthalmopathy and 10 active GO patients after high-dose Ⅳ methylprednisolone therapy.Results :The baseline median sIL-1 ra concentrations had no significant differences among active GO, inactive GO, GD and control groups. There was no correlation between baseline sIL-1ra levels and the severity of GO, cigarette smoking, and the responses to glucocorticoids therapy. However, responders had higher sIL-1ra levels (626.97 ±305.06 pg/ml) after glucocorticoids therapy than nonresponders (323.33 ± 93.09pg/ml). The concentration of IL-1α、IL-1β (＜ 3.9 pg/ml)in all samples was within the standards of the assays.Conclusion: The serum level of sIL-1ra in GO patients during high-dose Ⅳ methylprednisolone treatment is related to the therapeutic effect. The circulating baseline sIL-1ra concentrations are neither influenced by GO, the activity of GO, the severity of GO, GD, cigarette smoking nor predictive of the response to glucocorticoid treatment.     

原发性开角型青光眼患者谷胱甘肽转硫酶M1、P1基因多态性研究

目的 探讨谷胱甘肽转硫酶M1（GSTMl）、P1（GSTP1）基因多态性与原发性开角型青光眼（POAG）的关系。方法 采用分子流行病学病例对照的研究方法和聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术，检测68例POAG，43例原发性闭角型青光眼（PACG），98例正常对照组的GSTM1、GSTP1基因型。结果 GSTM1基因缺失率在POAG组（60．3％）明显高于正常对照组（40．8％）；GSTM1基因缺失个体发生POAG的危险率是正常对照组的2．074倍。GSTP1的基因多态性分布在各组之间无统计学差异（P=0．291）；而携带GSTM1（-）者，其GSTP1在各组之间分布不全相同（P=0．001），GSTM1与GSTP1基因交互作用使个体发生POAG的危险率增加12．197倍（OR=13．197）。结论 GSTM1基因多态性与POAG易感性有关，GSTM1和GSTP1基因型的交互作用对发生POAG风险有影响。     

CYP1B1突变与眼科疾病

细胞色素P4501B1（CYP1B1）是人体重要的代谢酶，本文从生化结构、细胞定位、遗传多态等方面对P4501B1基因（CYP1B1）进行了综述，并重点讨论了该基因的突变在原发性先天性青光眼、青少年型青光眼、Peters异常等眼病中的可能致病机制。     

Immunolocalization of CYP1B1 in normal, human, fetal and adult eyes

CYP1B1 is a cytochrome P450 enzyme implicated in autosomal recessive primary congenital glaucoma (PCG). The mechanism and function of CYP1B1 in the development of the PCG phenotype is unknown. Previously, investigators have reported detection of Cyp1b1 mRNA in the ciliary body and epithelium and neuroepithelium in the developing mouse eye, employing in situ hybridization techniques. Similarly, additional investigators have detected CYP1B1 mRNA in the iris, ciliary body, non-pigmented ciliary epithelial line, cornea, retinal-pigment epithelium, and retina in the human adult eye, using Northern blotting. This study was designed to immunolocalize CYP1B1 protein in the various ocular structures of normal, human fetal and adult eyes. Normal fetal and adult eyes were immunolabeled with a polyclonal antibody against human CYP1B1 using indirect immunofluorescence, and then compared with appropriate controls. The intensity of immunolabeling of the various ocular structures was assessed by qualitative and semi-quantitative techniques. In the anterior segment anti-CYP1B1 immunoreactivity (IR) was detected early in fetal development in the primitive ciliary epithelium. As well, the most intense CYP1B1 IR was in the non-pigmented ciliary epithelium. In addition, CYP1B1 IR was also present in the corneal epithelium and keratocytes, both layers of the iris pigmented epithelium, and retina. However, CYP1B1 IR was absent in the trabecular meshwork in all of the samples. In general, CYP1B1 immunolabeling in the human fetal eyes was more intense when compared to adult eyes. CYP1B1 IR was primarily immunolocalized to the non-pigmented ciliary epithelium and early in fetal development. In addition, CYP1B1 IR was not detected in the trabecular meshwork. These findings suggest that the abnormalities in the development of the trabecular meshwork in PCG may result from diminished or absent metabolism of important endogenous substrates in the ciliary epithelium due to non-functional CYP1B1 enzyme.     

视网膜色素上皮细胞PAI—1 mRNA的表达

目的 从基因转录水平确定人视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞是否具有合成纤溶酶原激活物抑制－１（ＰＡＩ－１）蛋白酶的生物学特性。方法 取供体人眼ＲＰＥ细胞进行体外培养,当细胞生长融合岳取ＲＮＡ,应用Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析技术,经特异３的探针对人ＲＰＥ细胞总ＲＮＡ进行检测。结果 在体外培养的ＲＰＥ细胞基因转录产生中存在ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的表达,其长度分别为３．０ｋｂ和２．３ｋｂ,结论 人ＲＰＥ细胞能够     

LncRNA HIF1A-AS1在增生性糖尿病视网膜病变中的表达及诊断价值

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)缺氧诱导因子-1α-反义链1(HIF1A-AS1)在增生性糖尿病视网膜病变(PDR)患者血清中的表达情况及诊断价值。方法:选取2019-07/2021-07本院收治的糖尿病视网膜病变(DR)患者160例,根据病变程度分为PDR组(80例)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)组(80例),同时选取本院100例健康体检者为对照组。检测并比较所有研究对象血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中LncRNA HIF1A-AS1表达水平;通过Logistic回归分析影响PDR发生的危险因素;利用受试者工作特征曲线(ROC)分析LncRNA HIF1A-AS1水平诊断PDR的临床价值。结果:PDR组患者血清中LncRNA HIF1A-AS1表达水平明显高于NPDR组和对照组,NPDR组高于对照组(P<0.05);PDR组、NPDR组患者糖尿病病程、HbA1c、TC、TG、LDL...     

原发性先天性青光眼CYP1B1基因变异初步研究

目的了解CYP1B1基因变异在中国原发性先天性青光眼(PCG)患者发病中的作用。方法收集来自不同地区的16例PCG患者,对其CYP1B1基因编码外显子进行直接测序,对照组进行单核苷酸多态性分析。结果在1例PCG患者中发现了一种变异,为8006G>A(R390H)。它是位于外显子III的错义突变。还发现了五种单核苷酸多态性,分别为3793T>G,R48G,A119S,A330S,V432L。结论CYP1B1基因是导致中国人PCG患者的致病基因,但也有其他变异可能和PCG变异有关。