硝苯地平导致牙龈增生机制的研究

目的:在牙龈成纤维细胞(gingival fibroblasts(GFs))与牙龈角质形成细胞(gingival kerati-nocytes,GKs)共培养下,研究硝苯地平导致牙龈增生的可能机制。方法:用不同浓度(0、0.2、20μg/mL)硝苯地平处理GFs和GKs的共培养体系,3 d后用逆转录PCR、酶联免疫吸附实验以及流式细胞计数等方法观察角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)及其受体(keratinocyte growth factor receptor,KGFR)的表达。结果:在共培养条件下,硝苯地平导致GFs表达KGF显著增高,并呈浓度依赖性。同时硝苯地平能促进GKs中KGFR基因表达上调,膜KGFR蛋白表达水平在硝苯地平浓度为0.2μg/mL时上调。结论:间充质-上皮作用途径之一的角质细胞生长因子-受体间相互影响,在硝苯地平导致牙龈增生中起着一定的作用;体外GFs-GKs共培养模型能够在更接近体内环境的状态下进一步研究牙龈增生的机制。     

硝苯地平致药物性牙龈增生的危险指征分析

目的调查北京石景山区人群服用硝苯地平后出现药物性牙龈增生的患病率，并分析其危险指征。方法在北京石景山区进行横向调查，将616例患高血压或冠心病的个体纳入本项研究，其中205例患者服用硝苯地平（nifedipine）≥0．5年，411例未服用钙拮抗剂的患者作为对照组。通过问卷了解每例患者的人口学特征、刷牙出血情况、吸烟、糖尿病及用药情况，临床检查12颗前牙的龈沟出血指数（sulcus bleeding index，SBI），同时用照片评价法判断牙龈增生的程度和菌斑指数。以牙龈增生程度≥38．6％作为判断个体牙龈增生的阈值。结果服用硝苯地平的患者牙龈增生的患病率为7．3％，显著高于对照组的1．2％。Logistic回归分析结果表明，仅有SBI是该地区个体出现明显牙龈增生的相关因素（OR=5．92，P=0．001）。结论牙龈炎性反应是药物性牙龈增生的一个重要协同因素。     

硝苯地平对人牙龈上皮细胞bcl-2基因表达的影响

目的:体外观察硝苯地平(nifedipine,NIF)对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)bcl-2基因转录水平的调节,探讨NIF诱导的药物性牙龈增生(drug-induced gingival overgrowth,DGO)与凋亡抑制基因bcl-2的相关性.方法:采用牙周手术切除的健康牙龈组织.用酶消化法分离培养HGECs;免疫组织化学方法对培养细胞进行细胞鉴定;实时定量PCR技术检测不同浓度NIF(1 μg/ml、2 μg/ml和3 μg/ml)刺激下HGECs中bcl-2 mRNA水平,以0 μg/ml NIF为空白对照.采用SPSS 11.0软件包对所得数据进行单因素方差分析.结果:酶消化法获得的HGECs在体外培养中生长状态良好;免疫组织化学显示,HGECs抗角蛋白染色阳性,抗波形蛋白染色阴性;NIF处理24h后的HGECs bcl-2 mRNA水平随NIF浓度的增高而上升,3 μg/ml浓度组与空白对照组有显著差异(P＜0.05);NIF处理48h后.2 μg/ml、3 μg/ml浓度组HGECs bcl-2 mRNA水平与空白对照组差异明显(P＜0.05).结论:NIF调节体外培养的HGECs中bcl-2基因转录的水平.     

牙周非手术治疗对硝苯地平导致的老年人牙龈增生的疗效观察

目的:评价牙周非手术治疗对硝苯地平导致的老年人牙龈增生的治疗效果。方法:选取硝苯地平导致的牙龈增生患者18例,在基线和牙周非手术治疗后1个月、3个月、6个月、12个月分别记录菌斑指数、探诊深度、出血指数和牙龈增生指数。18例患者共13例完成了12个月的观察。结果:在观察期间,各指数持续改善(P<0.05),牙龈炎症持续减轻,牙龈增生状况明显改善。结论:牙周非手术治疗可改善硝苯地平引起的老年人牙龈增生的程度。     

非硝苯地平钙离子拮抗剂与牙龈增生的关系研究

目的:探讨服用非硝苯地平的钙离子拮抗剂(除硝苯地平之外的其他钙离子拮抗剂)与牙龈增生的关系.方法:选择北京医院内科高血压门诊就诊的成年高血压病患者,进行问卷调查和口腔健康检查.分为服用非硝苯地平钙离子拮抗剂的患者(简称服药组)及从未服用过钙离子拮抗剂的患者(简称对照组).问卷调查内容包括患者的一般状况,高血压患病史,服药史以及口腔卫生习惯等.口腔健康检查包括菌斑指数(plaque index PLI)、简化牙石指数(simple calculus index CI-S)、以及牙龈增生指数(gingival hyperplasia index HI)的检查和记录.结果:对照组患者牙龈增生患病率6.03%,服药组患者牙龈增生患病率31.25%,两者间的差异有显著性(P＜0.001),并且服药组患者中严重牙龈增生的患病率19.23%也显著高于对照组1.59%(P＜0.001).对照组平均HI值为1.4%,服药组平均HI值为10%,两者间的差异有显著性(P＜0.001).结论:服用非硝苯地平钙离子拮抗剂与高血压患者牙龈增生的患病间有显著相关性.     

硝苯地平引起牙龈增生20例临床观察

目的 观察服用硝苯地平引起的牙龈增生。方法 门诊随机观察与服用硝苯地平有关的牙龈增生病人20例,并了解停药前后的变化。结果 20例牙龈增生病人,通过停药和局部治疗,6月后随访,局部症状有所缓解。结论 服用硝苯地平可引起牙龈增生。     

L型钙通道对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期影响的研究

目的 研究L型钙通道对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及细胞周期的影响。方法 SD大鼠BMSCs原代培养、传代;RT-PCR检测BMSCs钙通道基因的表达;取第3代BMSCs,分为2组,实验组加入L型钙通道阻断剂硝苯地平(nifedipine,Nif),对照组不加药。MTT法测量其吸光度(A)值、流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果 RT-PCR结果显示,L型钙通道alC、CCHL2a亚基的mRNA呈高表达;L型钙通道阻断后,从BMSCs增殖第3天开始,实验组与对照组A值比较,组间差异均具有统计学意义;经Nif作用后,实验组S、S+G2M期细胞比例减少,GO/G1期细胞比例较对照组高,组间差异有统计学意义。结论 阻断L型钙通道可抑制BMSCs的DNA合成进而抑制细胞增殖。     

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目的评价牙周基础治疗对硝苯地平诱导药物性牙龈肥大的治疗效果。方法选择2012年6月至2013年6月于中国医科大学附属第四医院心内科门诊与病房、中国医科大学口腔医院牙周科门诊患者中诊断为高血压且服用硝苯地平后出现牙龈增生者23例,在初诊及牙周基础治疗后1、3、6个月分别记录患者牙周指标(牙龈增生指数、菌斑指数、出血指数和探诊深度等),分析牙龈增生指数与菌斑指数的相关性。结果所有患者各牙周指标在牙周基础治疗后1、3、6个月均有明显改善,与初诊比较差异有统计学意义(P<0.05);牙龈增生指数与菌斑指数存在显著正相关(P<0.05)。结论牙周基础治疗有利于硝苯地平诱导的药物性牙龈肥大的临床治疗。     

硝苯地平诱导药物性牙龈肥大牙周基础治疗临床效果评价

目的    评价牙周基础治疗对硝苯地平诱导药物性牙龈肥大的治疗效果。方法    选择2012年6月至2013年6月于中国医科大学附属第四医院心内科门诊与病房、中国医科大学口腔医院牙周科门诊患者中诊断为高血压且服用硝苯地平后出现牙龈增生者23例,在初诊及牙周基础治疗后1、3、6个月分别记录患者牙周指标（牙龈增生指数、菌斑指数、出血指数和探诊深度等）,分析牙龈增生指数与菌斑指数的相关性。结果    所有患者各牙周指标在牙周基础治疗后1、3、6个月均有明显改善,与初诊比较差异有统计学意义（P＜0.05）;牙龈增生指数与菌斑指数存在显著正相关（P＜0.05）。结论    牙周基础治疗有利于硝苯地平诱导的药物性牙龈肥大的临床治疗。     

硝苯地平性牙龈增生组织中成纤维细胞增殖和胶原分泌

目的探讨硝苯地平对牙龈组织中成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。方法体外原代培养硝苯地平易感性牙龈组织和非易感性组织中人牙龈成纤维细胞。MTT法观察硝苯地平对细胞增殖的影响,酶联免疫吸附试验检测硝苯地平对细胞Ⅰ型胶原表达水平的影响。结果在第1,3,5天,硝苯地平易感性牙龈组织和非易感性组织之间Ⅰ型胶原合成和细胞增殖在统计学上均有显著性差异。结论细胞增殖明显和胶原合成增加可能和硝苯地平药物性牙龈增生机制有关。     

烟草烟雾提取物对人牙龈成纤维细胞在3Y-TZP表面生长状态的影响

目的：观察比较不同浓度烟草烟雾提取物（Cigarette Smoke Extract,CSE）对人牙龈成纤维细胞（HumanGingival Fibroblasts,HGFs）在3mol%氧化钇作为稳定剂的四方氧化锆多晶体陶瓷（3Y-TZP）种植材料表面粘附、增殖、形态伸展及细胞状态的影响。方法：原代培养HGFs并进行细胞来源鉴定;SRB法检测不同浓度CSE作用下HGFs在材料表面粘附、增殖情况;免疫荧光染色,病理图像分析系统计数评价HGFs细胞铺展面积及形状系数改变;激光共聚焦显微镜下观察拍照,观察凋亡形态;扫描电镜观察细胞粘附的形态结构改变。结果：细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性;随CSE浓度升高,HGFs在材料表面粘附、增殖、铺展面积、形状系数及形态伸展均呈下降趋势,各实验组与对照组间均存在显著差异（P〈0.05）,抑制作用随浓度升高更加明显,呈浓度依赖性。结论：CSE对HGFs在3Y-TZP种植材料表面的生长可产生明显抑制作用。提示吸烟对陶瓷种植体植入后的软组织界面产生不良影响,其损害程度可能与烟草有害物质的接触量有相关性。     

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响

目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL 时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG,破坏 RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。     

慢性牙周炎患者和健康人牙龈成纤维细胞细胞活性和凋亡的比较研究

目的:探索慢性牙周炎患者和健康人牙龈成纤维细胞(HGFs)细胞活性和凋亡之间的差异性,为阐明牙周炎的易感性提供实验依据。方法:收集慢性牙周炎患者和健康人的健康牙龈,进行体外培养获得HGFs,采用MTT法比较两组细胞的细胞活性,实时荧光定量PCR检测抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax在两种细胞中的表达水平及其比值。结果:与健康组相比,慢性牙周炎组HGFs细胞活性在培养4 d后明显下降(P＜0.05),而且在体外培养2 d、4 d细胞中Bcl-2/Bax的比值下降(P＜0.05),具有时间依赖性。结论:慢性牙周炎患者HGFs细胞活性下降,细胞凋亡增强,从细胞水平说明其存在牙周炎易感性。     

钙拮抗剂对牙龈成纤维细胞作用的体外实验研究

目的：探讨钙拮抗剂硝苯地平对牙龈成纤维细胞的作用。方法：体外培养牙龈成纤维细胞,细胞在不同浓度硝苯地平作用下计数观察。结果：细胞计数在实验第6、7天出现组间非常显著性差异。主要表现为硝苯地平1200μg/L和360μg/L组,细胞计数明显高于低剂量组。结论：高剂量硝苯地平有刺激牙龈成纤维细胞增殖的作用。     

硝苯地平对牙龈成纤维细胞增殖和DNA合成的影响

目的：研究钙离子通道拮抗剂硝苯地平对人牙龈成纤维细胞的影响,方法：以硝苯地平1200．0、360．0、108．0和32．4μg/L作体外培养牙龈成纤维细胞细胞计数观察,并以^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TDR)细胞内掺入法评价DNA合成量。结果：细胞计数在实验的第6、7d组间差异有极显著性。主要表现为硝苯地平1200．0μg/Lt 360.0μg/L组,细胞计数明显高于低浓度组,各组间DNA合成量差异有极显著性。进一步分析差异存在于高浓组织与其他各之间。结论：高浓度硝苯地平有刺激牙龈成纤维细胞增殖的作用。     

槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激的人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响研究

目的研究槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g LPS)刺激的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学行为的影响。方法采用DNA片段凝胶电泳、CCK-8法、细胞划痕法观察不同浓度槲皮素(10、20、50、100μmol/L)对体外培养HGFs的毒性作用,以及对HGFs增殖与迁移的影响。采用P.g LPS刺激HGFs来建立体外炎症刺激模型,通过流式细胞术、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测、酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进一步观察槲皮素对HGFs凋亡、ROS的产生及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)表达的影响。结果槲皮素对HGFs无毒性作用,且对HGFs的增殖无影响(P>0.05)。各组细胞迁移率总的比较,差异有统计学意义(F=9.973,P<0.05),在处理48 h后,20μmol/L槲皮素处理组细胞迁移率大于10、50μmol/L槲皮素处理组以及对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。槲皮素对P.g LPS刺激的HGFs凋亡具有抑制作用,且其能够抑制并预防P.g LPS刺激的HGFs中ROS相对产生量增加现象(均P<0.05)。槲皮素处理显著抑制了P.g LPS诱导的TNF-α表达增加现象(P<0.05),而槲皮素处理组PGE2的表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论浓度为20μmol/L的槲皮素能够促进体外培养HGFs的迁移,且具有抗氧化、抗炎保护作用。     

LPS刺激对体外培养人牙龈成纤维细胞环氧合酶表达的影响

目的检测脂多糖（LPS）刺激后体外培养人牙龈成纤维细胞环氧合酶-1和环氧合酶-2（COX-1,COX-2）表达的改变,探讨牙龈成纤维细胞与牙周炎症发生发展的关系。方法组织块法原代培养正常人牙龈成纤维细胞并进行来源鉴定,MTT法检测不同浓度LPS刺激后活细胞数量的改变;以10ug/ml刺激第4代细胞,24h后用免疫细胞化学方法检测COX-1和COX-2在细胞中的表达,多功能彩色细胞分析管理系统进行图像分析和统计学分析。结果 LPS刺激可使牙龈成纤维细胞的增殖速度降低,生长曲线大致呈＂S＂形;10ug/ml LPS刺激24h后细胞数量未见明显变化。免疫细胞化学染色结果显示COX-1在LPS刺激前后均有表达但无显著差异（P〉0.05）,COX-2在LPS刺激前无表达,LPS刺激后则表达增强并有显著差异（P〈0.01）。结论 LPS对牙龈成纤维细胞生长增殖有抑制作用,不影响COX-1的表达强度,但可使COX-2表达显著增强,说明牙龈成纤维细胞对LPS刺激的反应可能影响牙周炎症进展。     

ADAM28反义核酸对人牙龈成纤维细胞生物学功能的影响

目的 研究金属蛋白酶解离素28（a disintegrin and metalloproteinase 28, ADAM28）反义核酸（antisense oligodeoxynucleotide, AS-ODN）对人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts, HGFs）增殖、分化、凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法 采用细胞培养、基因转染、四甲基唑蓝（MTT）比色法、酶动力学法和流式细胞术（FCM）检测ADAM28反义核酸转染HGFs后对细胞生物学特性的影响。采用SPSS16.0软件包中的SNK检验对数据进行统计学分析。结果 ADAM28 AS-ODN组HGFs的增殖活性显著降低。AS-ODN组HGFs处于S期的细胞百分比显著低于S-ODN组和未转染组,G₂+M期的细胞百分比显著低于未转染组,AS-ODN组的细胞增殖指数（PI=S+G₂M）显著低于其他2组,差异显著。AS-ODN组碱性磷酸酶（ALP）分泌活性、凋亡细胞百分比显著升高。结论 ADAM28 反义核酸可显著抑制HGFs的增殖,并影响细胞周期的变化,促进其分化,显著诱导HGFs的凋亡。     

纤维连接蛋白修饰的微沟槽钛片对人牙龈成纤维细胞活性影响的研究

目的:研究微沟槽钛片表面经三氟代乙烷磺酰氯激活并修饰纤维粘结蛋白(fibronectin,FN)后对人牙龈成纤维细胞(HGF)活性的影响。方法:将FN修饰于经过激活的微沟槽钛表面,XPS分析材料表面元素组成;使用cck8法检测HGF接种材料表面6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d后的细胞增值率;荧光染色观察接种3 d时的细胞数量及形态。I型胶原纤维ELISA实验及Real-time PCR检测接种5 d时材料表面对HGF分泌功能的差异。结果:在实验观察的6个时间段实验组材料细胞增值率高于对照组(P<0.05)。3 d时HGF在实验组材料表面的伸展率高于空白组(P<0.05)。5 d时FN修饰的两组材料上的细胞外I性胶原纤维的数量及mRNA的表达水平较空白组高(P<0.05)。结论:经三氟代乙烷磺酰氯处理修饰FN的微沟槽钛片可促进HGF的增殖、伸展及分泌功能。     

放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响

目的：观察放线共生放线杆菌对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响。方法：１００ｍｇ／Ｌ细菌表面相关物质和人牙龈成纤维细胞在ＣＯ２孵箱内培养７２ｈ后,采用透射电镜观察细菌表面相关物质对成纤维细胞超微结构的影响。结果：主要使细胞粗面内质网扩张,线粒体水肿,溶酶体增多,但未见膜性结构有明显破坏现象。结论：此物质可影响细胞的超微结构,但不致细胞死亡