鼠疫菌102kb基因座一端IS100的缺失与pgm+稳定性的研究

目的 了解鼠疫菌102kb pgm基因座一端IS100的缺失与pgm~1稳定性的关系。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)扩增国内各型鼠疫菌102kb pgm基因座色素沉着这一端IS100的片段,并选择克隆测序分析。结果 通过PCR扩增,其中只能扩增出约2560bp左右条带的生态型,也就是其102kb pgm基因座色素沉着这一端IS100的片段缺失,除锡林郭勒高原布氏田鼠型,还有北天山东段型、北天山西段A、B型,其pgm~ 表型非常稳定;而有一部分菌株的扩增结果为阴性另一部分菌株扩增出4492bp条带的生态型,扩增出4492bp条带的菌株102kb pgm基因座色素沉着这一端有IS100,结果为阴性的菌株其整个102kb pgm基因座可能已经丢失,此种情况包括祁连山型,青藏高原型,冈底斯山型,滇西纵谷型等,其pgm~ 表型表现出不稳定。结论 鼠疫菌102kb pgm基因座一侧缺失IS100的菌株,可具有较稳定的pgm~ 表型,而鼠疫菌102kb pgm基因座两侧有IS100的菌株,pgm~ 表型不稳定。     

四川省石渠县青海田鼠鼠疫耶尔森菌营养需求

鼠疫菌是典型的异养菌 ,不同自然疫源地的鼠疫菌表现有不同的营养需求 ,为了查明四川省石渠县鼠疫自然疫源地青海田鼠鼠疫菌的营养特性 ,我们对从青海田鼠体内分离的鼠疫菌做了营养鉴定 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　菌株　实验菌株来源于四川省石渠县俄多玛乡青海田鼠鼠疫菌 19株 ,内蒙古阿巴嘎旗布氏田鼠、长爪沙鼠鼠疫菌各 1株 ,青海省共和县、称多县、都兰县喜玛拉雅旱獭 ,腹窦纤蚤鼠疫菌 3株、鼠疫菌141、ＥＶ和假结核菌 0 5各 1株 (表 1)。1 2　最小培养基　选用Ｌａｗｔｏｎ配方[3 ] ,氨基酸浓度 (ｍｇ/ｌ)为ＤＬ -苏氨酸 6…     

四川石渠县鼠疫耶尔森菌的分子生物学特征

目的：对四川省石渠县鼠疫耶尔森菌的遗传特性进行分析。并与其他类型的鼠疫苗株相比较。方法：特征性基因的PCR扩增，随机扩增多态性DNA，脉冲场电泳、rRNA基因指纹图分析等。结果：石渠县的菌株为典型的鼠疫菌株，具有鼠疫强毒菌的典型特征，从该县青海田鼠中分离的鼠疫菌株，其分子生物学特征与我国其他疫源地中的鼠疫菌株明显不同。结论：该地可能存在一种新类型的鼠疫自然疫源地，其鼠疫菌属于一单独型别；1999年该县发生的人间鼠疫。感染来自该疫源地之外；对该疫源地仍须密切监视，以确定其对人类的威胁。     

广西鼠疫耶尔森氏菌质粒及Pgm特征的研究

目的掌握广西鼠疫菌的质粒图谱及Pgm特征。方法质粒运用Kado改良法进行提取;Pgm利用刚果红培养基置28℃培养7天观察。结果广西鼠疫菌菌落大多为Pgm+及Pgm-混合型,占85.7%(12/14),Pgm+、Pgm±、Pgm-株分别为42.9%(6/14)、35.7%(5/14)、21.4%(3/14);广西鼠疫菌株共含5种质粒,其分子量分别为4MD、6MD、45MD、65MD、111MD,由质粒构成显示广西鼠疫菌质粒图谱可划分为3型,I型含4MD、6MD、45MD、65MD质粒,Ⅱ型含4MD、6MD、45MD质粒,Ⅲ型则含有4MD、6MD、45MD、111MD质粒。结论Pgm可作分型指标之一;质粒图谱可为分子流行病学提供科学依据。     

高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌的感受性

目的　探讨高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌感受性水平。方法　采用动物实验的方法 ,观察不同剂量组高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌的反应。结果　高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌具有高抵抗性和低敏感性 ,属低感受性类型。结论　高原鼠兔对青海田鼠型鼠疫菌仅为偶然性或一时性宿主。     

青藏高原鼠疫耶尔森菌基因型分布

目的研究青藏高原鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）基因组型分布特征.方法对分离到的青藏高原鼠疫菌297株,根据已经证实的22个差异区段设计引物,每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用PCR技术进行验证.结果在喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地中,鼠疫菌基因组型有9种,分别为1、5、6、7、8、10、11、新基因组型和Ype-ancestor型,其中以5、8和10型为主,3种基因组型合计所占比例为80.6%（204/253）,而且不同地区鼠疫菌基因组型的分布也不一致.青藏高原青海田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因组型全部为14型.结论青藏高原鼠疫菌基因组型分布具有明显的地理特征.根据基因组型的分布状况推测出了鼠疫菌在青藏高原的传播路径.     

新型鼠疫疫源地鼠疫菌毒力试验

鼠疫菌的毒力是决定动物鼠疫流行强度及预测流行阶段的重要标志之一.我们用布氏田鼠和喜马拉雅旱獭菌株做对照,对青海田鼠型3株鼠疫菌进行了毒力测定.     

中国鼠疫菌核糖体型地理分布

目的 了解鼠疫菌核糖体型在中国的地理分布情况。方法 用限制性内切酶对鼠疫菌染色体进行消化，电泳后，用16s-23s-5s rRNA基因探针进行Southern杂交。结果 把分离自中国不同地区的鼠疫菌共分成了三个核糖体型，每种类型的杂交图谱大概一致，区别仅在于1～2个酶切片段的有无。核糖体A型及B型较常见，分布于中国较大范围的地理区域内，C型最少，只见于某一特殊地区；核糖体型与中国鼠疫自然疫源地之间有一定的对应关系，一种疫源地对应一种核糖体型常见。结论 核糖体型在中国鼠疫自然疫源地内比较稳定，不同核糖体型在中国的分布具有明显的地域性；A、B、C三种核糖体型具有不同的来源，而A型与C型的亲缘关系更近。     

青海省三江源地区鼠疫病原学分析

目的 研究青海省三江源地区鼠疫菌株生物学特性并确定疫源地空间结构及性质.方法 对1954-2007年青海省三江源地区分离的鼠疫菌株进行生物学表型鉴定及分子生物学研究.结果 411株代表性菌株中,12株脱氮(-)阿胶糖(-)甘油(+)属田鼠型,399株为脱氮(+)阿胶糖(+)甘油(+)属古典型.411株均能产生F1和Pst I;vw+菌株占95.13%(391/411),VW-菌株占4.87%(20/411);Pgm+菌株占80.78%(332/411)、Pgm+菌株占9%(37/411)、Pgm-菌株占10.22%(42/411).220株代表株中96.82%(213/220)的菌株对小白鼠表现为强毒株,3.18%(7,220)为中等毒力,说明绝大多数具高致病性,其毒力很强.90.02%(307/341)菌株携带6×106 45×106 x65×106质粒.80株代表株包括8个基因组型,其中6个基因型与原分型相同,另有2个新的基因组型.结论 三江源地区鼠疫菌株具备青藏高原鼠疫病原体特性,人类一旦感染可导致发病急、病情重、传染性强、病死率高等特点.     

河北省鼠疫自然疫源地鼠疫菌生物学特征的研究概述

为进一步研究河北省鼠疫疫源地的结构和性质,通过查阅大量资料,对该疫源地分离的鼠疫菌株的生物学特征做了总结,分别从生化特征、营养需求、质粒特征、毒力因子、毒力和毒素几方面进行介绍,发现河北省分离的鼠疫菌属于B群鄂尔多斯高原型,营养需求表现为对甘氨酸的半依赖和对色氨酸的营养依赖,含有4种质粒,其中13×106质粒是内蒙古长爪沙鼠疫源地所特有,有的菌株缺失45×106质粒,全部菌株表现为F1抗原和鼠疫菌素（PstⅠ）阳性,而鼠疫菌色素沉着（Pgm）和VW抗原阳性仅占一定比例,表现为遗传的不稳定性,中等毒力。     

中国鼠疫耶尔森菌的分子生物学特征与遗传学意义

目的 根据中国鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的分子生物学特征分析其遗传背景。方法利用实验研究中rRNA基因指纹图(ribotyping)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、随机扩增DNA多态性(RAPD)及插入序列(IS)等方面工作的原始数据,通过聚类分析等统计学手段,探究中国鼠疫菌株间的遗传学距离,分析各种方法作为鼠疫菌分子识别特征的意义。结果 rRNA基因指纹图型与脉冲场电泳型之间是相对应的,但同属于7拷贝rRNA基因的田鼠菌株与西藏仲巴菌株,其间的遗传学距离,却较6拷贝rRNA基因的菌株还远。而随机扩增型与rRNA基因型之间对应关系较不明确,有较多的例外情况。用相似值可以表示这些菌株之间的遗传距离。结论 中国的鼠疫菌具有多种独特的分子生物学特征,其中新疆灰旱獭疫源地和西藏南部冈底斯山地理环境复杂,有较多的自然屏障,使鼠疫菌在流行过程中,限于局部地区,各自独立进化,产生了相互混合存在的多种基因类型。     

青藏铁路沿线鼠疫菌表型性状及对抗生素敏感性的研究

目的检测青藏铁路沿线鼠疫菌表型性状、质粒组成、外膜蛋白种类及对抗生素的敏感性。方法采用常规糖醇发酵管法检测生化等表型性状;采用反向血凝试验、用假结核菌为复盖种子层法、用草酸镁培养基和刚果红色素培养基检测FraI、Pstl、Vwa和Pgm4种毒力因子;用Lawton最小培养基测定营养型;采用常规的动物接种试验测定毒力;采用碱裂解、酚一氯仿抽提法提取鼠疫菌质粒;鼠疫菌经破碎后采取超高速离心法提取外膜蛋白;采用纸片法进行抗生素敏感性试验。结果实验用的青藏铁路沿线鼠疫菌株生化性状表现为甘油＋、鼠李糖一、阿胶糖＋、密二糖一、麦芽糖＋、脱氮＋的特征;具有鼠疫菌荚膜抗原（FraI＋）、毒力抗原（Vwa＋）、鼠疫菌素I（PstI＋）、色素沉着因子（Pgm＋）4种毒力因子;营养型表现为对Trp、Thr、Leu、Arg不依赖,而对Phe、Met、Cys依赖,对Ile和Glu表现出低营养;对小白鼠的LD100在10^2～10^3个菌,LDs。为7．94-31．62个菌,对豚鼠的LD100在10^5～10^7个菌,LD50为68．14-685．49个菌;携带Mr为6×10^6、45×10^6、52×10^6、65×10^6、92×10^6]质粒;在10％的SDS-PAGE上37℃条件下的培养物可表达26条外膜蛋白带,28℃培养物可表达36条外膜蛋白;部分头孢类和喹诺酮类药物对实验菌株的敏感性效果较好,20种抗生素均较链霉素为佳。结论青藏铁路沿线的鼠疫菌属于典型的青藏高原型菌株,都是强毒力鼠疫菌,临床治疗除常规的链霉素外可选用头孢类和喹诺酮类药物,该项研究可为青藏铁路沿线的鼠疫防治提供科学的依据。     

四川省青海田鼠疫源地媒介蚤的研究

目的 分析2000-2008年四川省青海田鼠疫源地媒介蚤各指标的变化.方法 统计分析四川省2000-2008年鼠疫监测工作资料.结果 青海田鼠疫源地存在蚤类4科10属19种,以细钩盖蚤为主(62.79%),直缘双蚤指名亚种次之(30.90%);青海田鼠寄生蚤染蚤率和蚤指数有明显的季节变化,10月染蚤率及蚤指数较高,12月和3月则较低;可自然感染鼠疫的蚤类有3种(细钩盖蚤、直缘双蚤指名亚种和五侧纤蚤邻近亚种).结论 青海田鼠疫源地染疫动物和蚤类持续存在,应加强鼠疫监测.

Abstract：

Objective To analyzed the variant information on the indices regarding fleas from natural foci of Microtus plague in Sichuan epidemic area during 2000 to 2008.Methods Statistical and analytical methods were used on the surveillance data regarding Microtus fuscus plague.Results There were 19 flea species identified and the share of Callopsylla sparsilis was 62.79 percent while the share of Amphipsylla tuta tuta was 30.90 percent on Microtus fuscus plague.The infection rate of fleas and the flea index were the highest in October and the lowest in December and March.Species as Callopsylla sparsilis,Amphipsylla tuta tuta and Rhadinopsylla dahurica vicina could naturally infect the Yersinia pestis.Conclusion Microtus fuscus plague could become epidemic when animals and flea species were infected.We should emphasis on plague monitoring program so as to prevent the occurrence of the disease.     

布氏田鼠鼠疫菌102 kb pgm基因座结构研究

目的　研究布氏田鼠鼠疫菌株 1 0 2kbpgm基因座结构与其他类型鼠疫菌是否有区别 ,及其与布氏田鼠鼠疫菌株的独特特征的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)的方法 ,共设计 2 5对嵌套的引物 ,以喜玛拉雅旱獭鼠疫菌株和布氏田鼠鼠疫菌株的染色体DNA为模板 ,分段扩增该区域内的DNA ,选择差异较大的扩增片段进行克隆和测序 ,与已发表的序列比较。结果　布氏田鼠鼠疫菌株的 1 0 2kbpgm基因座一端缺失了1 952个碱基 ,即插入序列IS1 0 0。另外 ,在测序的这段基因中 ,一类似于可变数量串联重复序列 (VNTR)的区域 ,布氏田鼠鼠疫菌比已发表的序列多出几个拷贝。结论　布氏田鼠鼠疫菌株的 1 0 2kbpgm基因座序列改变了 ,一端缺失了插入序列IS1 0 0 ,这就使得它的毒力岛不容易丢失 ,保持了 pgm+表现型的稳定 ;与其毒力的关系 ,有待于进一步研究     

Determination of the virulence of the pigmentation-deficient and pigmentation-/plasminogen activator-deficient strains of Yersinia pestis in non-human primate and mouse models of pneumonic plague

The current human plague vaccine, a killed Yersinia pestis whole-cell preparation, does not protect against aerosol challenge and is reactogenic and antigenically undefined. Live attenuated Y. pestis, such as pigmentation-deficient (Pgm-) strains, have been used frequently as vaccines and are efficacious. They are used widely in plague research and assumed to be safe. However, they can cause serious adverse reactions, and their aerosol infectivity is not known. We tested the virulence of a defined Pgm- variant of the C092 strain of Y. pestis in mouse and non-human primate models of pneumonic plague. The ten-fold lower median lethal dose by the aerosol compared to the subcutaneous (s.c.) routes of the Pgm- strain in mice suggested that the Pgm- strain might be less attenuated by the former than by the latter route. After exposure of 16 African green monkeys to inhaled doses ranging from 1.1 x 10(4) to 8.1 x 10(7)cfu, eight died and eight survived. The terminal cultures collected from five of the non-survivors were all positive for Y. pestis. Two of the remaining three non-survivors were culture-negative but had pathologic and immunologic evidence of infection with Y. pestis, specimens could not be obtained nor the cause of death determined for the third one. The deaths were not dose-related, and there were some differences in the pathology associated with infection by the Pgm- strain compared to the wild-type (wt) strain. However, the Pgm- derivative was clearly virulent for monkeys by the aerosol route. A mutant of the Pgm- strain, which has a deletion in the plasminogen activator (Pla) virulence locus (pla), appeared to be more attenuated than was either the Pgm- single mutant (in NHPs and mice) or the Pla- single mutant strain (in mice) and has potential as a live vaccine.     

中国鼠疫菌某些生化特征及流行病学意义

目的 探讨中国鼠疫菌株生化表征的遗传变异与分型地位。方法 采用平皿单菌落法，实验观察我国17个生态型共336株鼠疫菌酵解麦芽糖、鼠李糖、阿胶糖、甘油及脱氮反应的变化。结果 发现松辽平原、滇闽居民区和滇西纵谷区3个生态型部分菌株对甘油、阿胶糖、麦芽糖酵解有变异，可同时出现酵解和不酵解的单菌落，而且特性较稳定；其余14个生态型鼠疫菌单菌落酵解能力与过去资料报道一致无明显变化；根据实验结果可将中国鼠疫菌分为12个生化型。结论 我国鼠疫菌对糖酵解特性稳定，具有一定的分型意义，滇闽居民区与滇西纵谷区生态型鼠疫菌株可能源于一个祖先。     

不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长影响观察

摘要:目的　观察不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长的影响,从中筛选鼠疫菌生长的最适pH值。方法　同一批号的赫氏干燥培养基分别加入到pH值为6.2、6.6、7.0、7.4、7.8、8.2的蒸馏水溶液中,121℃30 min高压灭菌后倾注平皿。通过进行鼠疫菌强毒141标准株和鼠疫菌弱毒EV 76巴黎株菌落计数实验,观察不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长的差异。结果　不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌的生长均有影响且其差异有统计学意义（EV76χ2＝190.804,P＜0.05;141χ2＝151.742,P＜0.05）。EV76株鼠疫菌和141株鼠疫菌在pH值7.0的赫氏干燥培养基中活菌数值最大。结论　赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长的最适pH值为7.0。