鞘氨醇激酶2(SphK2)基因敲除小鼠繁殖及基因型鉴定

目的 繁殖和快速鉴定鞘氨醇激酶2(SphK2)基因敲除小鼠.方法 将SphK2敲除杂合子小鼠进行配种繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型.结果 SphK2杂合子小鼠的饲养及繁殖均获得成功,获得子代小鼠,基因型分别为杂合子(SphK2+/-)、纯合子(SphK2-/-)和野生型(SphK2+/+).结论 SphK2基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究SphK2生物学功能提供了理想的动物模型.     

ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).     

ANP基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

目的繁殖和鉴定心房钠尿肽(ANP)基因敲除小鼠。方法将引进的ANP敲除杂合子小鼠进行饲养并繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型。结果获得子代小鼠,基因型分别为杂合子(ANP+/-)、纯合子(ANP-/-)和野生型(ANP+/+),子代小鼠纯合率为9.09%。结论 ANP基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究ANP缺失对肿瘤发生发展的影响提供了理想的动物模型。     

Nrf2基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

目的 繁殖和鉴定Nrf2基因敲除小鼠.方法 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功的子代有3种基因型小鼠,即野生型、杂合子以及纯合子小鼠,从繁殖成功的小鼠尾巴中提取基因组DNA,用PCR法鉴定小鼠的基因型.结果 Nrf2杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得Nrf2基因敲除纯合子小鼠的有效途径.     

LSS基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定

探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因敲除鼠的繁育和基因型分析.将引进杂合子小鼠进行饲养并繁育,提取其基因组DNA,利用PCR反应扩增目的 基因片段,鉴定出小鼠的基因型;Westem blot分析并比较LSS基因敲除杂合子小鼠和野生型小鼠的肝脏、皮肤组织中LSS蛋白的表达情况.成功的繁育出LSS基因敲除小鼠,使用PCR鉴定其子代小鼠包括野生型(LSS+/+,Wt)、杂合子(LSS+/-),未出现纯合敲除小鼠;Western blot结果表明:相较于野生型小鼠,LSS基因敲除杂合子小鼠在肝组织和皮肤组织中表达LSS蛋白量少;杂合子敲除鼠的生存能力比野生型小鼠弱.获得LSS基因敲除小鼠,PCR鉴定小鼠基因型具有简单、稳定的优点.     

腺苷A2a受体基因敲除小鼠不同繁育方法比较

目的繁殖和鉴定以C57BL/6为背景的腺苷A2a受体基因敲除小鼠。方法将引进的腺苷A2a受体基因敲除杂合子小鼠进行饲养繁殖，从子鼠的个体组织（尾部）中提取基因组DNA进行PCR分析，对其基因型进行鉴定，以确定纯合子A2a受体基因敲除小鼠。结果腺苷A2a受体基因敲除杂合子小鼠的饲养和鉴定均获得成功，并获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法，可以获得不同基因型的腺苷A2a受体基因敲除小鼠。     

水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

α7nAChR基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

目的:繁殖和鉴定烟碱型乙酰胆碱受体α7基因敲除小鼠。方法:将引进的α7n AChR基因敲除杂合子小鼠进行饲养并繁殖,提取子代小鼠尾部DNA,用PCR方法检测子代小鼠基因型;采用Western blot检测α7n AChR蛋白质的表达,进一步证实PCR鉴定方法的可靠性。结果:获得子代(α7n AChR+/+),子代小鼠纯合率为30%。结论:α7n AChR基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,为进一步研究α7n AChR缺失对非酒精性脂肪性肝炎的影响提供了理想的动物模型。     

利钠肽受体-A基因敲除小鼠的繁育与鉴定

目的:繁殖和鉴定NPR-A基因敲除小鼠.方法:将所引进的雄性野生型和雌性NPR-A基因敲除杂合子小鼠进行交配繁殖,可以得到野生子、杂合子及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定.结果:NPR-A基因敲除小鼠的饲养和繁殖均获得成功,成功获得了较多的NPR-A基因敲除纯合子小鼠.结论:雌、雄性NPR-A基因敲除杂合子小鼠交配是繁育NPR-A基因敲除纯合子子鼠的较好方法;用PCR方法能够精确鉴定NPR-A基因敲除纯合子子鼠.     

乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响

目的：研究乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响。方法：实验组小鼠每天灌胃5%的乌贼墨0.5ml,连续7d。对照组小鼠给予等量生理盐水。流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋T细胞百分比、CD4^＋/CD8^＋比值及IL-2αR（CD25）表达。结果：实验组小鼠外周血CD4^＋T细胞百分比、CD4^＋/CD8^＋比值及IL-2αR（CD25）表达较对照组小鼠均有明显升高,而CD8^＋T细胞却无显著性变化。结论：乌贼墨通过增高CD4^＋T细胞百分比、CD4^＋/CD8^＋比值及IL-2αR（CD25）表达对小鼠免疫功能进行调节。     

黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4IFN-γIL-10的影响

目的探讨黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4、IFN-γI、L-10的影响。方法将BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组和黄芪组。以卵蛋白（OVA）致敏激发法制备小鼠哮喘模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ、IL-10及血清中IL-10的含量;流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量及FoxP3 mRNA表达情况。结果哮喘组小鼠BALF中IL-4含量明显高于对照组（P〈0.01）而低于黄芪组（P〈0.01）。与对照组相比,哮喘组小鼠BALF中IFN-γI、L-10、血清中IL-10含量及脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量、FoxP3 mRNA表达水平明显降低（P〈0.01）;而黄芪组的上述改变较哮喘组显著增加（P〈0.05）。结论 CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪可通过上调CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、FoxP3 mRNA的表达及增加IL-10含量减轻哮喘炎症。     

蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠免疫损伤的影响

目的:通过模拟岭南湿热复合因素造模实现流感病毒性肺炎湿热证模型的构建,并观察蒿芩清胆汤对模型小鼠T淋巴细胞亚群及Th1/Th2细胞因子水平的影响。方法:将4周龄BALB/c小鼠按体质量随机分为正常对照组(A)、单纯病毒感染组(B)、湿热证模型组(C)、蒿芩清胆汤组(D)和阳性药物组(E)。A、B两组均给予普通饲料喂养14 d,B组于第11天滴鼻感染病毒1次。C、D、E组均给予高脂饲料喂养14d,同时连续10 d气候箱暴露,6 h/d,第11天滴鼻感染病毒1次,感染病毒后不再置入气候箱。D、E组分别于病毒感染后2 h开始灌胃给药,每日1次,连续4 d。D组每日灌胃蒿芩清胆汤水煎浓缩液0.4 ml;E组按70 mg.kg-1.d-1剂量灌胃给予利巴韦林溶液0.4 ml;其余各组均同时以灌胃等量生理盐水。连续干预14 d后,处死小鼠眼球取血,检测各组小鼠T淋巴细胞亚群及Th1/Th2细胞因子的水平。结果:①与A组相比,B、C组CD3+CD4+T淋巴细胞水平明显降低(P<0.05),CD3+CD8+T淋巴细胞水平明显升高(P<0.05),CD3+CD4+/CD3+CD8+值显著降低(P<0.05);与C组相比,E组CD3+CD8+T淋巴细胞水平明显降低(P<0.01),D、E组CD3+CD4+/CD3+CD8+值明显升高(P<0.05或P<0.01)。②与A组相比,B、C组血清IFN-γ水平明显升高(P<0.01),IFN-γ/IL-4值亦明显升高(P<0.05);与C组相比,E组IFN-γ/IL-4值明显降低(P<0.05)。结论:蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠具有多靶点的免疫炎症调节作用。     

吸毒人群中HIV、TB感染者免疫细胞和细胞因子监测

目的测定吸毒人群外周血中T细胞亚群、Th1—Th2细胞因子,评价HIV、TB感染后免疫学指标的变化。方法对吸毒人群中9例HIV阳性者、5例患活动性结核病者、40例吸毒人群中健康者及40例正常人群,应用流式细胞技术（FCM）分别检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋．CD3^＋CD8^＋细胞百分率,计算CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋即Th细胞与Ts细胞的比值,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测Th1（IL-2、IFN-γ）/Th2（IL-4、IL-6）细胞因子浓度。结果HIV感染组、TB感染组及吸毒者健康组、正常人组各项指标间差异有统计学意义,CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋即Th细胞与Ts细胞的比值及Th1（IL-2、IFN-1）浓度均明显低于对照组,HIV〈TB〈吸毒人员健康者〈正常人群（P〈0．05）。而Th2（IL-4、IL-6）细胞因子浓度则明显高于正常人群。结论CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋即Th细胞与Ts细胞的比值及Th1（IL-2、IFN-γ）/Th2（IL-4、IL-6）细胞因子浓度的检测在评价HIV、TB感染者的免疫状况、进展和预后判断等方面具有重要作用。     

季节变化对健康人免疫功能的影响

目的：动态观察季节变化对健康人免疫功能的影响.方法：对20例大学生志愿者分别在春分（VE）、夏至（SS）、秋分（AE）、冬至（WS）4个实验日分为VE组、SS组、AE组、WS组,应用流式细胞术对外周血CD3^＋,CD4^＋,CD8^＋,CD56^＋进行分析;应用放射免疫法检测血清中IL-1β,IL-2,IL-6及唾液中sIgA,IgG水平;应用酶联免疫吸附法检测血清中IFN-γ水平.结果：CD4＋VE组高于WS组（P〈0.05）;IL-2,IL-6高于AE组[（5.39±1.17）vs（4.02±0.89）,（106.79±62.98）vs（95.87±39.43）,P〈0.05];IFN-γ（3.82±0.18）高于WS组（2.72±0.92）;CD3^＋和CD4^＋/CD8^＋比值SS组高于VE组、AE组、WS组（P〈0.05或P〈0.01）;CD8^＋而则低于后者,CD4^＋高于WS组（P〈0.01）;IL-1β,IL-2及IFN-γ高于AE组[（0.21±0.15）vs（0.14±0.23）,（6.47±1.82）vs（4.02±0.89）,（4.58±0.21）vs（2.72±0.92）,P均〈0.05];IL-2,IFN-γ高于WS组[（6.47±1.82）vs（3.55±1.02）,（4.58±0.21）vs（2.58±3.79）,P〈0.05或P〈0.01];sIgA,IgG高于WS组[（95.98±56.35）vs（84.99±39.82）,（21.05±10.11）vs（18.03±9.27）,均P〈0.05].结论：机体免疫功能存在春夏高,秋冬低的季节节律,季节对免疫功能的调节可能是通过T淋巴细胞及其免疫网络进行的.     

多巴胺D1样受体在介导调节CD4^＋T淋巴细胞功能中的作用

目的：从分子水平揭示CD4^＋ T淋巴细胞表达D1受体和D5受体mRNA的现象,探讨这些受体在调节CD4^＋ T淋巴细胞功能中的作用.方法：采用免疫磁珠分离和纯化小鼠淋巴结CD4^＋ T淋巴细胞.用抗CD3/CD28抗体刺激活化CD4^＋ T淋巴细胞,并用D1样受体激动剂SKF38393、拮抗剂SCH23390分别作用于CD4^＋ T淋巴细胞,然后采用real-time PCR法检测CD4^＋ T淋巴细胞上D1受体和D5受体mRNA的表达,Th1细胞特异性转录因子（T-box expressed in T cells,T-bet）和细胞因子干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达,Th2细胞特异性转录因子GATA binding protein 3（GATA 3）和细胞因子白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的表达,Th17细胞特异性转录因子（retinoid acid-related orphan receptor gammat,RoR γt）和细胞因子IL-17、IL-22的表达.结果：D1样受体激动剂SKF38393（10^-8和10^-7 mol/L）作用于CD4^＋ T淋巴细胞后,CD4^＋ T淋巴细胞表达D1样受体mRNA增高,IFN-γ的表达降低,GATA 3、IL-4的表达增高,但T-bet、RoR γt、IL-17和IL-22的表达没有变化,SCH23390（10^-7 mol/L）能阻断SKF38393的这些作用.结论：CD4^＋ T淋巴细胞能表达多巴胺D1样受体,CD4^＋ T淋巴细胞上D1样受体的激活可促进CD4^＋ T淋巴细胞向Th2细胞分化、抑制Th1细胞功能及增强Th2细胞功能.     

IL-15对体外培养的DC致敏的T淋巴细胞的作用研究

目的 通过与IL-2进行比较,观察IL-15激活T细胞反应,增强DC细胞疫苗抗肿瘤的免疫反应.方法 将骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）皮下注射小鼠作为初次免疫,14d后取小鼠脾脏,制备淋巴细胞,与细胞因子（IL-2、IL-15）和BMDCs共同培养作为再次免疫,产生细胞毒T淋巴细胞（CTL）.流式细胞术检测细胞因子（IL-2或IL-15）联合BMDCs刺激小鼠淋巴细胞CD62L、CD69、CD44的表达情况;采用Cr51释放实验检测CTL对Levis肺癌细胞的杀伤作用;采用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）检测分泌干扰素γ（IFN-γ）细胞亚群比例.结果 IL-15联合BMDCs疫苗上调CD8＋T细胞表达CD69＋、CD44＋,增强对肿瘤细胞的杀伤活性,并能产生更多的IFN-γ分泌细胞.结论 IL-15可能较IL-2更能增强DC疫苗抗肿瘤的免疫反应,为IL-15和DC疫苗的联合免疫治疗提供重要的试验依据和临床前研究的理论基础.     

磁流体热疗联合 IL-2对小鼠Lewis肺癌治疗作用的实验研究

目的通过观察磁流体热疗（MFH）联合IL-2对小鼠Lewis肺癌的生长、凋亡及小鼠免疫系统的影响,探讨MFH联合免疫治疗肺癌的可行性。方法建立小鼠浅表Lewis肺癌皮下移植瘤模型,瘤体直径增至0.8cm左右时,将其分为IL-2组、MFH组、MFH＋IL-2组及对照组。MFH组瘤体内部注射0.2ml水平约75mg/ml的磁流体,24h后在交变磁场下加温1次,通过控制磁场的强度,加温温度稳定在43.0℃左右30min。IL-2组瘤体内部注射0.2ml（5×10^4U）的IL-2。MFH＋IL-2组热疗后24h,按上述方法向肿瘤内部注射0.2ml（5×10^4U）的IL-2。对照组瘤体内部注射0.2ml的0.9%氯化钠溶液。采用流式细胞术检测MFH法、MFH＋IL-2后小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化。采用免疫组化法检测治疗后肿瘤组织HSP70、CD4^＋、CD8^＋等免疫因子的表达,比较MFH组、MFH＋IL-2组对肿瘤的治疗效果。结果 MFH组和MFH＋IL-2组注射磁流体后肿瘤内部温度迅速升高至43℃,肿瘤细胞呈凋亡和坏死样改变,小鼠外周血T淋巴细胞水平明显升高（P＜0.05）,HSP70、CD4^＋、CD8^＋水平也均明显升高,小鼠瘤体生长均受到抑制,MFH＋IL-2组小鼠瘤体生长抑制更明显。结论43℃、30min条件下的MFH能抑制Lewis肺癌的生长,诱导荷瘤小鼠机体产生抗肿瘤免疫。IL-2单独对荷瘤小鼠肿瘤生长无明显抑制作用,但可以提高外周血CD4^＋、CD8^＋水平,从而增强MFH对Lewis肺癌抑瘤效果。     

T细胞亚群、NK细胞活性及Th1/Th2细胞因子漂移在FOLFOX化疗前后的动态变化

目的研究FOLFOX化疗对肠癌根治性术后患者免疫功能的影响。方法83例肠癌患者根治性术后6周取外周静脉血,采用抗体标记流式细胞仪检测T细胞亚群细胞,MTT法测NK细胞活性,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中Th1/Th2细胞因子。1个月为1个疗程,共化疗6个疗程。分别于化疗开始前、化疗结束时和化疗结束后6个月监测外周血CD3^＋T、CD4^＋T和CD8^＋T数量比例,NK细胞活性,以及血清中白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）的动态水平变化。结果CD8^＋T、CD4^＋T/CD8^＋T化疗后明显下降（均〈0.05）,化疗结束后6个月恢复至化疗前水平。化疗组的NK细胞活性在化疗结束时较对照组和自身化疗前低（均〈0.01）;化疗结束后6个月NK细胞活性略低于自身化疗前及对照组同期水平,但差异无显著意义（P〉0.05）。化疗结束时IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平较对照组或自身化疗前低,化疗结束后6个月恢复正常（均P〈0.05）。结论FOLFOX化疗可能降低肠癌根治性术后患者的CD8＋T的数量比例及NK细胞活性,引起Th1、Th2细胞因子血清水平下降,抑制抗肿瘤免疫功能。     

细胞因子对HIV/AIDS患者的免疫调节作用

目的 探讨多种细胞因子对高效抗反转录病毒治疗（HAART）的HIV/AIDS患者的免疫调节作用.方法 确诊HIV感染者或AIDS患者40例,CD4＋T细胞数均＜350/μl,接受HAART治疗,并分别于HAART治疗的0、12及24个月随访备血,健康对照组30例.ELISA检测血清和上清液细胞因子（IL-12、IL-21、IP-10和IFN-γ）,流式细胞术检测CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、CD4＋CD25＋FOXP3 Treg细胞.结果 未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者外周血中IL-12、IL-21和IFN-γ水平显著低于正常人,CD4＋T细胞明显降低,HAART治疗后均不同程度升高;而IP-10、CD8＋T细胞、CD4＋CD25＋FOXP3 Treg细胞显著高于正常人,HAART治疗后水平下降.CD4＋T、CD8＋T、CD4＋CD25＋FOXP3 Treg与各细胞因子水平有一定的相关性.结论 细胞因子可能和HIV/AIDS感染的致病机制相关,并可能参与了抗HIV病毒免疫重建和病毒控制过程.