蝇蛆壳聚糖对H2O2致内皮细胞损伤保护作用

目的 研究蝇蛆壳聚糖(HMC)对过氧化氧(H2O2)诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用.方法利用H2 O2诱导的内皮细胞损伤模型,采用不同剂量HMC预培养,通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,生化法和放免法检测细胞培养液超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和内皮素(ET)水平.结果中、高剂量HMC组细胞存活率A值分别为(0.714 0±0.059 5)、(0.811 9±0.059 7),均高于H2O2损伤组(0.5972±0.042 2) (P ＜0.01);低、中、高剂量HMC组细胞SOD活性分别为(14.76±1.59)、(16.99±1.69)、( 19.22±2.31) NU/mL,明显高于H2O2损伤组(P＜0.05,P＜0.01);低、中、高剂量HMC组细胞MDA含量分别为(10.11 +1.91)、(8.23±1.64)、(6.74±1.26) nmol/L,明显低于H2 O2损伤组(P＜0.01);各剂量HMC组细胞NO水平明显高于H2 O2损伤组,而ET含量则明显低于H2 O2损伤组(P＜0.01).结论HMC具有保护血管内皮细胞的作用,机制可能与减少细胞NO释放、增加ET水平、维护内皮细胞结构和功能完整及增强其抗氧化能力有关.     

原花青素对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨原花青素对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：体外培养内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、氧化损伤加入VitC对照组（VC＋H2O2组）、氧化损伤加入原花青素5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度组（procyanidin-L＋H2O2组、procyanidin-M＋H2O2组、procyanidin-H＋H2O2组）。将750μmol/LH2O2作用于加入VitC及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,以细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）作为检测指标。结果：原花青素呈剂量依赖性降低H2O2对内皮细胞的生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO2-/NO3-含量,各指标比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：原花青素可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、促进NO释放有关。     

H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。     

H_2O_2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型

目的以H2O2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型。方法取新生大鼠海马神经细胞,培养至第5天,加入终浓度为50、100、150、200和250μmol/L的H2O2,培养12、24和48 h后,观察细胞形态,通过MTT法测定细胞存活率,CCK-8法测定细胞损伤率,LDH酶标法测定上清液LDH活性,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,确定出细胞损伤的最佳浓度时间。结果 H2O2可诱导神经细胞损伤且呈时间浓度依赖性。150μmol/L H2O2作用24 h时,MTT法测得细胞存活率为(70.18±4.66)%;CCK-8法测得细胞损伤率为(28.30±6.72)%;LDH酶标法测得LDH活性为(208.81±12.24)U/L;流式细胞术测得细胞早期凋亡率为(11.53±2.53)%,晚期凋亡率及坏死率为(13.75±2.22)%。结论 150μmol/L的H2O2作用24 h,可成功构建海马神经细胞氧化损伤模型。     

雌马酚对血管内皮细胞凋亡和增殖影响

目的探讨大豆异黄酮(SI)代谢物雌马酚对血管内皮细胞凋亡和增殖的影响。方法体外培养血管内皮细胞(ECV-304),采用不同浓度雌马酚(0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00μmol/L)处理24 h,收集细胞,采用流式细胞术分析细胞内活性氧(ROS)、细胞凋亡和细胞周期;采用免疫组织化学技术分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3表达;采用噻唑蓝(MTT)法分析雌马酚对ECV-304细胞增殖影响。结果与对照组比较,6.25μmol/L雌马酚组ECV-304细胞内ROS含量下降,100.00μmol/L雌马酚组ECV-304细胞内ROS含量升高;与对照组比较,25.00、50.00、100.00μmol/L雌马酚组ECV-304细胞早、晚期凋亡率明显升高,并可导致细胞G1期阻滞(P<0.05);MTT实验结果显示,0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmol/L雌马酚组ECV-304细胞增殖抑制率分别为-(8.23±2.21)%、-(3.29±1.07)%、(6.75±1.73)%、(25.46±4.82)%和(36.93±4.66)%,低剂量雌马酚对细胞生长具有促进作用,高剂量雌马酚对细胞生长具有抑制作用;与对照组比较,25.00μmol/L雌马酚组作用24 h后,细胞内Bax和caspase-3表达增加,而Bcl-2表达减少。结论低浓度雌马酚可降低细胞内ROS含量,促进ECV-304细胞增殖;高浓度雌马酚可导致细胞凋亡、细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。     

玉米低聚糖阿魏酸酯体外抗氧化作用及机制研究

目的观察从玉米麸皮中提取的低聚糖阿魏酸酯(corn feruloyl oligosaccharides,CFOs)体外对H2O2诱导损伤的PC12细胞的保护作用,探讨其抗氧化作用及机制。方法采用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用MTT法检测各组PC12细胞的增殖率;倒置显微镜下观察细胞形态的变化;流式细胞术测定细胞凋亡率;试剂盒检测PC12细胞内及培养液中LDH、SOD、MDA活力及含量。结果除25μmol/L CFOs组外,其余CFOs各组的细胞活力(A值)与H2O2组相比,差别均有统计学意义(P<0.05),且随着CFOs浓度的加大,细胞活力有逐渐增强的趋势。在800μmol/L时,细胞存活率达到最高值。CFOs的抗氧化作用强度与其浓度存在量效及时效双重依赖性关系。与H2O2组相比,CFOs低、中、高浓度组细胞形态均有所好转,随浓度升高,贴壁细胞数量明显增加,细胞突触逐渐增长并趋于正常。细胞凋亡率均低于H2O2组,且具有浓度依赖性,细胞内外MDA含量明显减少;细胞液中LDH活力明显减弱;细胞内SOD活力显著增强(P<0.01)。结论 CFOs对经H2O2诱导的PC12细胞具有保护作用,该作用的机制与提高PC12细胞的抗氧化能力相关。     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

大蒜多糖及其硒化产物抗氧化活性的比较研究

目的比较大蒜多糖与硒化大蒜多糖对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的大鼠嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用。方法用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测PC12细胞的活力;化学比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内和细胞培养液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果硒化大蒜多糖、大蒜多糖500μg/ml及以上剂量组和亚硒酸钠12.50μg/ml及以上剂量组均能有效抑制由H2O2引起的细胞存活率的下降(P<0.01)。硒化大蒜多糖、大蒜多糖2000μg/ml可显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,以及提高SOD活性(P<0.01),表现出良好的抗氧化活性,而硒化大蒜多糖的抗氧化作用更为明显(P<0.05)。结论硒化大蒜多糖对经H2O2诱导损伤的PC12细胞具有保护作用,这种保护作用明显优于大蒜多糖或单纯硒,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

硒对培养大鼠心肌细胞抗氧化损伤作用的研究

目的　探讨硒对培养心肌细胞的抗氧化损伤作用。方法　应用不同浓度的过氧化氢 (H2 O2 ) ,分别作用不同时间 ,动态观察其对心肌细胞的损伤作用。同时观察硒对培养心肌细胞的保护作用。结果　H2 O2 作用于培养心肌细胞可造成乳酸脱氢酶 (LDH)从心肌细胞泄漏、细胞周期发生改变、心肌细胞和培养液中脂质过氧化物 (丙二醛 ,MDA)含量增加 ,同时发生 HE-染色可见的形态学改变。培养液中加入一定浓度的硒后 ,培养细胞和介质中 LDH和 MDA水平显著下降 (P<0 .0 1 ) ,噻唑蓝 (MTT)测定培养心肌细胞的存活率显著升高 ,细胞周期和形态学表现与正常细胞基本相同。结论　 H2 O2 作为一种自由基 ,依其浓度和作用时间可造成不同程度的心肌细胞的损伤。硒作为具有抗氧化作用的微量元素 ,能明显抑制自由基对心肌细胞的损伤作用。     

姜黄素对过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法以100μmol/L H2O2作用2 h为致伤因素,51,0,15μmol/L姜黄素为保护因素,比色法检测培养基中一氧化氮(NO)的浓度及彗星电泳法检测DNA断裂。结果 100μmol/L H2O2引起内皮细胞NO分泌减少,彗星尾距显著增加。姜黄素干预使NO分泌增加,而彗星尾距显著减小(p<0.05)。结论姜黄素可保护氧化应激引起的内皮损伤及功能障碍,从而可能从病因上预防妊高征。     

α-硫辛酸对氧化损伤大鼠肝细胞及代谢酶影响

目的 探讨α-硫辛酸(α-liplic acid,α-LA)对过氧化氢(H_2O_2)氧化损伤的大鼠肝细胞及糖代谢酶的影响.方法 分别将50,100,200 μmol/Lα-LA作用于大鼠肝细胞24 h后,用H_2O_20.2 moVL损伤1 h,分别检测细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)、细胞中葡萄糖激酶(GK)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的含量.结果 α-LA各剂量组GsH-Px活力与SOD活性分别为141.552～208.171和10.852～13.151U/(mg·prot),均高于H_2O_2损伤组(P<0.05).α-LA各剂量组MDA含量为12.064～14.142 nmol/(mg·prot),明显低于H_2O_2损伤组(P<0.05).α-LA各剂量组葡萄糖激酶(GK)含量为0.928～1.020 mg/L,明显高于H_2O_2损伤组(P<0.05),不同剂量α-LA组GSK-3含量与H_2O_2损伤组比较差异无统计学意义(P<0.05).结论 α-LA对H_2O_2所致大鼠肝细胞氧化损伤具有一定的保护作用,且提高葡萄糖激酶含量.     

硝酸甘油对大鼠重症急性胰腺炎ET／NO、TXA2／PGI2的影响

目的探讨硝酸甘油对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）ET／NO、TXA2／PGI2和胰腺病理形态学的影响。方法SD大鼠60只分为5组：A正常胰腺组,B、C、D和E组为实验组,胰胆管逆行注射5％牛磺胆酸钠制作SAP模型。C、D和E组分别静脉注射硝酸甘油0．5、1．0、2．0μg/（kg·min）,A、B纽注射生理盐水。6h及12h后分别检测各组ET、NO、TXB2及6-keto—PGFIa值并进行胰腺病理标本评分。结果6h及12h时的标本数据分别显示,与B组比较,C、D和E组的胰腺病理评分、ET、ET／NO、TXB2、TXB2／6-keto—PGFIa比值都降低（P〈0．05）。结论硝酸甘油具有降低大鼠血液ET、ET／NO、TXA2、TXA2／PGI2值的作用,改善胰腺血液微循环,延缓大鼠重症急性胰腺炎的炎性病理变化的作用。     

持续性硬膜外阻滞对妊娠高血压综合征患者血管活性因子的影响

目的探讨持续性硬膜外阻滞前后妊娠高血压综合征(简称“妊高征”)患者外周血血管活性因子一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、前列环素(PGI2)、血栓素(TXA2) 水平的变化。方法选择剖宫产的妊高征孕妇(PIH组)和正常晚期妊娠孕妇(NLP组) 各30例,分别于硬膜外阻滞前及阻滞完善后测血压并抽取静脉血,测定外周血中NO、ET、 PGI2及TXA2的浓度变化。结果阻滞前PIH组NO和PGI2浓度显著低于NLP组 (P<0．01);而ET和TXA2浓度明显高于NLP组(P<0．01);阻滞后PIH组和NLP组NO、 PGI2浓度显著高于阻滞前(P<0．01);而ET和TXB2浓度麻醉前、后比较,差异无显著性 (P<0．05)。结论血浆中NO、PGI2浓度降低,ET、TXA2浓度升高是妊高征发病的重要原因之一;持续性硬膜外阻滞可使孕妇体内血管舒张因子(NO、PGI2)水平上升,而对血管收缩因子(ET,TXA2)影响不明显,可安全应用于妊高征孕妇剖宫产手术麻醉中。     

H_2O_2对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z生长和增殖的影响

目的观察H2O2对人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE-2Z细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能机制。方法应用H2O2体外诱导培养CNE-2Z细胞,用生长曲线、MTT及平板克隆形成观察H2O2对肿瘤细胞生长、增殖的影响,以流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,以W estern B lot分析诱导培养后细胞中EGR-1、P53、P16、Cyc lin D1的表达。结果生长曲线、MTT及平板克隆形成实验表明不同浓度H2O2对CNE-2Z细胞生长、增殖具有明显抑制作用;流式细胞仪检测发现H2O2诱导培养后细胞周期进程减慢(G1期阻滞)、凋亡增加;W estern B lot检测发现CNE-2Z细胞缺失EGR-1、P16表达,H2O2诱导培养后可见EGR-1短暂高表达,但无P16表达,且EGR-1表达与P53表达水平呈正相关(P<0.05);Cyc lin D1表达与EGR-1表达无明显相关性(P>0.05)。结论人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE-2Z中EGR-1表达缺失,H2O2体外诱导培养后可见其一过性高表达,且其表达水平与P53表达相一致,两者可能在H2O2所致的细胞生长抑制及凋亡中起作用。一定浓度的H2O2在体外实验中显示出对CNE-2Z细胞具有生长抑制作用,并能诱导细胞凋亡。     

葡多酚对血管内皮细胞自由基损伤的影响

目的:探讨葡多酚(grape procyanidin,GPC)对血管内皮细胞氧自由基损伤的保护作用。方法:取静脉内皮细胞株ECV304在含有不同浓度GPC的培养液中培养,用Fenton试剂引发细胞氧自由基损伤,分别于培养12,24,36和48h采用MTT法测定细胞的增殖水平、用流式细胞法测定细胞凋亡和MDA含量等指标。结果:培养12h阳性对照组及低、高剂量GPC组细胞增殖活性分别为0.475±0.122、0.524±0.068和0.949±0.111,差别均有显著性意义(P<0.05),24h细胞凋亡率分别为12.63%,10.17%和5.45%。结论:GPC可有效抑制氧自由基引发的细胞增殖活性损伤与细胞凋亡,对防止内皮细胞氧化损伤有很好的作用。     

小檗碱对金黄色葡萄球菌诱导的ECV-304细胞凋亡相关基因的影响

目的：研究小檗碱对金黄色葡萄球菌（S.aureus）诱导ECV-304细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的调节作用。方法：小檗碱（Berberine,BBR）预处理ECV-304细胞2h后,用S.aureus感染细胞,采用半定量RT-PCR及Western-blot法检测金黄色葡萄球菌感染后ECV-304细胞内Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果：小檗碱预处理ECV-304后再感染S.aureus可显著性增加凋亡相关细胞因子Bcl-2mRNA水平及蛋白表达量,而Bax和Caspase-3表达下调。结论：小檗碱可以调节S.aureus诱导的ECV-304细胞内凋亡相关基因的表达,抑制ECV-304细胞凋亡。     

给水处理工艺对水中有机提取物致细胞氧化应激的影响

目的研究常规给水处理工艺水中有机提取物致细胞氧化应激的影响。方法以人胚肝细胞(L-02细胞)为靶细胞,水样有机提取物设1.2、6、30、150ml/ml培养液四个剂量,二甲基亚砜(DMSO,10ml/L)为溶剂对照,H2O(2100μmol/L)为阳性对照,染毒L-02细胞24h后,检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。结果与溶剂对照相比,给水处理各工艺环节的水样有机提取物在较高浓度(30、150ml/ml培养液)时均使L-02细胞MDA含量增加(P0.05,P0.01),GSH含量下降(P0.05,P0.01);各工艺环节中MDA含量的变化趋势是:预氯-混凝沉淀工艺使其增加,沉淀工艺使其降低,加氯消毒工艺使MDA含量再次增加;GSH含量在上述相应工艺环节则表现为先下降,再上升,后又下降的趋势。与溶剂对照相比,各工艺环节水样有机提取物浓度为30ml/ml培养液时,L-02细胞中8-OHdG水平升高(P0.05,P0.01),且与MDA的变化趋势一致。结论两次加氯工艺增强了有机提取物对L-02细胞的氧化应激作用,使脂质过氧化反应增强、抗氧化作用降低、DNA氧化损伤增加。沉淀、过滤工艺可以减弱上述有害效应。     

余甘子中水溶性鞣质的抗动脉粥样硬化作用机制研究

目的在细胞水平证实中药余甘子(Phyllanthus Emblica L.)的两个可溶性鞣质成分Phy-13(beta-1-O-galloyl-3,6-(R)-hexahydroxydiphenoyl-d-glucose)和Phy-16(1,6-di-O-galloyl-beta-d-glucose)是否具有抗动脉粥样硬化作用。方法人脐动脉内皮细胞ECV-304经ox-LDL(50 mg/l)诱导,MDA试剂盒检测Phy-13和Phy-16作用后内皮细胞培养上清液中丙二醛(MDA)的水平,MTT法检测动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖,细胞计数仪计数单核细胞和内皮细胞的黏附。结果Phy-13和Phy-16能减少内皮细胞MDA的生成,减少ox-LDL诱发的单核细胞和内皮细胞黏附,并能对抗ox-LDL诱导的动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖。结论Phy-13和Phy-16能够对抗ox-LDL诱导的动脉粥样硬化,这可能是余甘子治疗动脉粥样硬化相关疾病的重要机制之一。     

芳香化酶抑制剂对异位子宫内膜间质细胞NO/ET表达的影响和意义

目的:探讨NO/ET与异位子宫内膜间质细胞凋亡的关系以及芳香化酶抑制剂依西美坦的作用。方法:体外培养原位和异位子宫内膜间质细胞,应用发光免疫法检测雌二醇的水平,应用ELISA检测内皮素表达,用硝酸还原酶法检测一氧化氮,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:与正常内膜间质细胞相比,异位内膜间质细胞可以合成雌激素,其NO和ET合成相应增加,但NO/ET比值下降,细胞凋亡率也相应降低(P<0.05)。依西美坦作用72 h后,异位内膜间质细胞雌激素合成减少,NO/ET比值增加,凋亡率相应升高(P<0.05)。结论:NO/ET比值可以预测异位子宫内膜间质细胞的凋亡情况,依西美坦可升调NO/ET比值并增加异位内膜间质细胞的凋亡。     

VE、BR对糖尿病大鼠胰组织抗氧化影响

目的　探讨维生素E(VitaminE ,VE)和胆红素 (bilirubin ,BR)对糖尿病大鼠胰组织抗氧化的影响。方法　对用链佐霉素 (streptozotocin,STZ)诱发的糖尿病大鼠持续 4周给予BR、VE或BR VE后 ,测定胰组织中的丙二醛(MDA)、一氧化氮 (NO)、超氧化物歧化酶 (SOD)和一氧化氮合酶 (NOS)的水平。结果　与正常对照组比较 ,糖尿病组大鼠的MDA含量显著增加 (P <0 0 1) ,SOD活性显著降低 (P <0 0 1)。糖尿病组、给药组 (BR组、VE组和BR VE组 )大鼠的NO含量、NOS活性均显著升高 (P <0 0 1)。与糖尿病组比较 ,给药组除SOD活性显著升高 (P <0 0 1)外 ,其它 3项指标都显著降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论　BR和VE通过保护胰组织的SOD活性 ,降低胰组织中的MDA、NO和NOS水平 ,从而减轻自由基对糖尿病大鼠的氧化损伤。