纤维粘连蛋白和凝集素受体在高温致神经管畸形中作用的研究

采用免疫组织化学方法探讨了高温致神经管畸形的分子机理。雌性金黄地鼠交配后将人予高温处理，并与对照组一起在相应时间取材，做石蜡切片。各组部分切片用ＡＢＣ法显示纤维粘连蛋白；其余切片用刀豆凝集素，花生凝集素，麦胚凝集素和荆豆凝集素作为分子探针，用亲合细胞沉浸色，对神经上皮及基膜，脊索和周围间充质的基质粘着分子和相应糖基即集素受体进行定性，定位观察。     

神经生长因子及其受体与高温致神经管畸形关系的研究

目的：探讨高温致神经管畸形（ＮＴＤ）的机制。方法；利用高温致神经管畸形动物模型，在神经管发育的不同阶段，用免疫组织化学法检测神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）和ＮＧＦ受体（ｔｒｋＡ）在神经上皮、基义 索和神经管周围间充质中的分布状况，并观察高温对ＮＧＦ及其受体的影响。结果：ＮＧＦ及其受体广泛分布于神经管及其周围组织，并随胎龄增加而呈规律性变化。高温处理后的胚胎９神经上皮     

热休克蛋白70在高温致神经管畸形发生中的表达

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）与高温致神经管畸形发生的关系。方法：用免疫组织化学和图像分析技术对HSP70在各期高温致畸组和相应正常对照组鼠胚神经管中的表达进行定性、定位和定量研究。结果：HSP70在各期对照组鼠胚神经上皮细胞中稳定表达，各组间无明显差异，高温处理后0.5h，高温组和对照组鼠胚神经上皮细胞的平均光密度（OD）值差异无统计学意义。高温处理后1h和2h，HSP70表达较对照组明显增强，OD值差异十分显著，2h后逐渐降低，24h降至对照组水平。结论：HSP70在高温致神经管畸形中有明显的应激性表达，这种应激性表达可以保护胚胎存活而不能避免畸形的发生。     

层粘连蛋白及生长抑素在高温致神经管畸形发生中的作用

目的：探讨高温致畸中细胞凋亡的发生与层粘连蛋白（LN）及生长抑素（SS）的相关性，研究高温致畸的机理。方法：在高温致神经管畸形的动物模型上,用原位末端标记方法对畸形发生过程中细胞凋亡的时空分布进行定量分析,并用免疫组织化学方法，对各期鼠胚神经上皮和周围间充质的LN和SS表达进行定性、定位和相对定量分析。结果：LN主要位于神经上皮的基底膜,与神经管形成过程中的细胞凋亡呈负相关关系；SS位于神经上皮和周围间充质细胞的胞质内，其含量与神经管形成过程中的细胞凋亡呈明显正相关关系。高温后8～24 h胚胎神经上皮基膜LN含量明显低于对照组。高温后各期胚胎神经上皮和周围间充质细胞SS的含量均不同程度地高于对照组。结论：高温可促进胚胎SS的表达、短暂抑制LN的合成,从而诱导神经上皮和周围间充质细胞凋亡的发生，引起神经管畸形。     

磷酸化JNK在高温致神经管畸形中的表达及其意义研究

目的研究磷酸化JNK（P—JNK）在高温致神经管畸形中的表达及其意义。方法在高温致神经管畸形的动物模型上,用Western blot方法检测P-JNK在实验组和对照组神经上皮中的表达。结果实验组P-JNK蛋白表达增高。9d与10d实验组P-JNK蛋白表达升高,与9d和10d对照组相比有显著差异（P〈0．01）,11dP～JNK蛋白表达较9d与10d实验组P-JNK蛋白表达有所下降,但仍高于11d对照组,两者相比有显著差异（P〈0．05）。结论提示P—JNK可能在促进高温致神经管畸形中发挥作用。     

高温致神经管畸形中bcl-2和bax变化的动物实验研究

目的 探讨高温致神经管畸形的分子机制。方法 在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上，利用免疫组织化学法(SABC法)染色，观察神经管畸形发生过程中凋亡相关基因bcl—2和bax在神经上皮细胞中的表达变化。结果 高温后8h开始，实验组鼠胚神经上皮细胞bcl—2的表达均不同程度低于对照组，尤以高温后16h差异最为显著，24h后实验组与对照组相比bcl—2的表达差异无显著性。高温后8h，16h，实验组鼠胚神经上皮细胞bax的表达均明显高于对照组，24h后实验组与对照组相比bax的表达差异无显著性。结论 高温抑制bcl—2的表达，促进bax的表达，诱发神经上皮细胞的凋亡，是导致神经管畸形发生的机制之一。     

神经生长因子及其受体与高温致神经管畸形关系的研究

目的探讨高温致神经管畸形(NTD)的机制。方法利用高温致神经管畸形动物模型,在神经管发育的不同阶段,用免疫组织化学法检测神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和NGF受体(trkA)在神经上皮、基底膜、脊索和神经管周围间充质中的分布状况,并观察高温对NGF及其受体的影响。结果NGF及其受体广泛分布于神经管及其周围组织,并随胎龄增加而呈规律性变化。高温处理后的胚胎神经上皮及其周围间充质中NGF及其受体的免疫组化着色强度明显减弱,着色细胞数明显减少。结论NGF及其受体的减少,可能是高温致NTD机制中的重要环节。     

在高温致神经管畸形大鼠中MAPKS信号传导通路的作用研究

目的研究高温致神经管畸形的大鼠模型神经管组织比裂酶原注化蛋白激酶（MAPKS）信号传导通路的作用。方法对高温处理后的孕鼠的不同发育阶段的胚胎进行MAPKS信号传导通路中的蛋白免疫组织化学染色,观察其在各期胚胎的神经上皮、其周围间充质、内界膜和脊索中的分布和变化。结果在高温处理后各期胚胎的上述结构中,MAPKS信号传导通路中的ERK、JNK、P38免疫组织化学染色均有不同程度的减弱,不同发育阶段及不同的结构的着色强度不同。结论提示,MAPKS信号传导通路在高温致神经管畸形中起重要作用。     

高温致神经管畸形相关基因片段N32的克隆和测序

目的：对高温致神经管畸形相关基因片段N32进行克隆和测序分析。方法：利用T－A克隆方法，将高温致神经管畸形相关基因片段N32克隆入pMD 18-T载体，转化感受态大肠杆菌DH5α，少量抽提质粒，酶切鉴定并测序，测序结果与GenBank中已知序列进行同源性比较并进行功能分析。结果：N32片段的序列与家鼠剪接因子3bl(Sf3bl)基因的3‘端序列同源性为93％。结论：N32片段所在基因的低表达在高温致神经管畸形中可能发挥重要作用。     

凝集素受体在神经管缺陷发生中作用的研究

雌性金黄地鼠交配后第８天灌服维生素Ａ酸８０ｍｇ／ｋｇ，于给药后不同时间剖腹取胎，石蜡包埋、切片，用刀豆凝集素、麦胚凝集素、花生凝集素和荆豆凝集素为分子探针作亲合细胞化学染色，对神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质的相应糖基即凝集素受体进行定性、定位和半定量观察。结果显示，实验组各组胚胎的凝集素染色与正常对照组相比，刀豆凝集素和花生凝集素染色显著增强，而麦胚凝集素和荆豆凝集素染色差异无显著性。说明在神经管形成过程中，过量维生素Ａ酸可使神经上皮细胞表面的刀豆凝集素和花生凝集素的受体糖蛋白异常增多，破坏了细胞粘着和基质粘着之间的协调关系，干扰了神经上皮的增殖和迁移过程，导致了神经管缺陷的发生。     

维生素A致神经管畸形机理的实验形态学研究

于金黄地鼠交配后第8d灌服维生素A酸80mg/kg,在给药后不同时间剖腹取胎,解剖镜下计数体节并观察神经褶的闭合情况。然后制成光镜、电镜标本并进行观察。同时测定神经上皮细胞的DNA含量。结果显示,与对照组相比,给药动物胚胎的体节数明显减少,神经褶闭合时间延迟或闭合不全,神经上皮及其周围的间充质排布紊乱,细胞的形态和结构异常。     

缝隙连接蛋白43的表达与神经管畸形的关系研究

目的观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在神经管周围间充质细胞的表达,以探讨Cx43与神经管畸形(NTDs)发生的关系。方法用维甲酸(RA)建立昆明小鼠神经管畸形模型,用免疫组化方法分析比较实验组和对照组神经管发育情况以及Cx43蛋白表达的位置和强度。结果对照组神经管发育良好,实验组神经管不能按时闭合;Cx43蛋白表达于神经管周围间充质细胞的胞膜和胞质内,而且实验组明显高于对照组(P<0.05)。结论 Cx43蛋白的过高表达可能与RA致NTDs密切相关。     

孕产妇血清叶酸分布特点及胎儿神经管缺损与母亲血清叶酸关系的研究

1985～1987年在北京地区进行了孕产妇血清叶酸分布特点及与胎儿神经管缺损关系的研究,结果显示:正常孕妇血清叶酸水平随孕周增加逐渐下降,且冬季最低,秋季最高,农村低浓度叶酸所占比重远高于城市。44例神经管缺损儿母亲的血清叶酸略低于88例正常儿对照母亲。病例对照研究结果表明,母亲血清叶酸水平低下,极少食水果、膳食质量差和女性胎儿可能是胎儿发生神经管缺损的危险因子。     

母血清锌、铜、钙水平 与神经管缺损

1987年1月至1988年12月,在北京(城、乡)测定了37例神经管缺损胎儿母血清锌、铜、钙水平,与68例正常孕产妇、25例其他畸形儿母血清各元素比较,未见显著差异,未看出神经管缺损与母血清锌缺乏有关,未看出钙对锌吸收的相互作用的影响。两组畸形儿母于孕早期接触各种化学毒物的例数显著多于正常对照组,统计学有高度显著性差异,但未见接触化学毒物对各元素含量的影响。     

牛磺酸对神经管畸形小鼠Caspase-3、Caspase-8表达的影响

目的探讨维甲酸（RA）致神经管畸形（NTDs）中牛磺酸对神经细胞凋亡的影响。方法建立NTDs模型并给予牛磺酸拮抗,观察神经细胞中Caspase-3、Caspase-8表达的变化。结果各组Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达在E11d达高峰,以后逐渐下降。RA组神经上皮细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白在E9d～E13d的表达均高于对照组及牛磺酸组,差异有统计学意义（P〈0．05）。各组Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA在E10d达到高峰,以后逐渐下降。RA组Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA在E9d～E13d的表达均高于对照组及牛磺酸组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论牛磺酸可以拮抗RA引起的神经上皮细胞过度凋亡,其机理可能是通过下调Caspase-3、Caspase-8的表达实现的。     

胎儿神经管缺损与母体血清铜锌镉水平相关性研究

用Varian SpectrAA-40p原子吸收分光光度计火焰原子化和电热石墨管原子化法测定150例怀有神经管缺损(neural tube defects,NTD)胎儿的孕妇,怀正常胎儿孕妇和健康未孕妇女血清中铜、锌、镉含量。统计处理结果表明,1.NTD组血清铜、锌含量显著低于正常孕妇组(P<0.01),血清镉显著高于正常孕妇组(P<0.01)。2.正常孕妇血清锌显著低于健康未孕妇女,铜显著高于健康未孕妇女(P<0.01),而血清镉两组间差异无显著意义(P>0.05)。3.NTD组血清铜-锌呈正相关(r=0.238,P<0.05),正常孕妇组铜-锌呈高度负相关(r=-0.424,P<0.01),NTD组和正常孕妇组铜与镉,锌与镉无线性关系。提示NTD组母体血清铜和锌同步下降;胎儿神经管缺损与母体铜、锌缺乏、镉过高有关。注意孕早期母体铜、锌营养的补充对满足胎儿正常发育需要、抑制镉毒性、减少畸胎发生率是十分重要的。     

神经生长因子及其受体在过量维生素A酸所致神经管畸形发生中的作用

用免疫组织化学方法研究了神经生长因子（ＮＧＦ）及其受体（ｔｒｋＡ）在正常金黄地鼠和过量维生素Ａ 酸致畸金黄地鼠胚胎神经管及其周围间充质的分布状况。结果显示：ＮＧＦ广泛分布于正常神经上皮及其内、外界膜和周围间充质中;实验组在服药后４６ｈ,上述各部位ＮＧＦ和ｔｒｋＡ 含量均明显减少。表明ＮＧＦ和ｔｒｋＡ 与神经管正常发生密切相关,其含量减少可能是过量维生素Ａ酸致神经管畸形的机制之一     

胚泡着床前后小鼠子宫内膜中LN和FN的表达

选用未经产雌性昆明种小鼠,取未孕及孕４～８ｄ 的子宫作切片,用免疫组化染色及图像分析法观察着床前后子宫内膜中层粘连蛋白（ＬＮ）和纤连蛋白（ＦＮ）的分布状况及含量变化,探讨它们与着床过程的相关关系。结果显示,在未孕子宫,ＬＮ 主要分布于各类上皮基膜中,ＦＮ 存在于基膜和基质细胞之间;着床前后,各类上皮基膜中ＬＮ、ＦＮ 含量明显增多,与未孕小鼠差异有显著性。随着蜕膜发育,蜕膜细胞周围出现ＬＮ 和ＦＮ,呈不甚连续的线样膜环绕蜕膜细胞。ＬＮ 及ＦＮ 在着床前后子宫内膜中表达增多,提示这两种物质与着床过程及蜕膜细胞的功能有关