抗人类肠道病毒71药物及疫苗研究进展

手足口病作为一个全球性的公共卫生问题,危害巨大,会引起患儿神经系统疾病,具有高传染性、传播方式多样、病原体复杂多样等特点。引起小儿手足口病的病原体主要为柯萨奇病毒A属和人类肠道病毒71(EV71),作为手足口病主要病原体之一的EV71,感染性极强。目前,已经研制出的抗EV71的有效药物,是预防手足口病的关键途径。该文围绕EV71及抗EV71药物的研究进展进行了综述,进而为今后新药物的研发提供有价值的参考。     

新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制和评价标准的研究

目的 研究建立新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制标准和评价体系,为EV71疫苗研发提供基础.方法 根据创新型疫苗研发的要求,充分发挥技术优势,开展EV71疫苗质控标准、标准品和评价方法研究.结果与结论 建立EV71灭活疫苗的中和抗体和抗原定量测定标准品,统一不同企业疫苗的质控标准,规范疫苗的评价体系,为EV71疫苗的研发提供保障.     

福州地区肠道病毒EV71基因型特征的研究

目的 研究福州地区肠道病毒71型(EV71)基因型特征,观察其年度变化及地区分布特点,以了解病毒变迁及传播方式.方法 对住院患者肛拭子EV71阳性的样本,RT-PCT扩增VP1基因的部分片段,再进行核酸测序,以获得的基因片段构建系统发生树,观察不同地区及不同年度之间病毒基因同源性,了解病毒变迁情况.结果 总共获得EV71病毒VP1基因片段64例,其中2013年10例,2014年14例,2015年40例,构建系统发生树,与网上发布的shzh98、shzh03和zhejiang08病毒株相比,均属于C4亚型.福州地区的病毒株,不同年度之间病毒变异不大;同一地区的病毒同源性很高,提示病毒在小范围内保存并持续传播.结论 2013-2015年福州地区手足口病主要病原EV71病毒属于C4亚型;系统发生树显示EV71同源性有较明显的地区分布特点,3年内病毒未出现明显变异.     

肠道病毒71型感染致手足口病的抗病毒药物及疫苗研究进展

手足口病（ hand,foot and mouth disease,HFMD）是一种由多种肠道病毒引起的急性传染病,多发生于儿童,尤其是＜3岁的婴幼儿［1］,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要症状。少数患儿可并发无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脑脊髓炎等严重神经系统疾病,预后差,病死率高［2］。此类患儿多数由肠道病毒71型（EV71）感染引起［3］。目前,针对EV71临床上尚无有效的抗病毒药物或已被批准的疫苗应用。因此,研制有效的抗EV71的药物及疫苗是未来医学研究的重点。现将近年来国内外有关EV71抗病毒药物、疫苗的研究进展综述如下。     

2010年中国人免疫球蛋白中EV71中和抗体效价的比较研究

目的:了解2010年我国生产的静注人免疫球蛋白(IVIG)中抗-EV71中和抗体效价的情况,为治疗EV71引起的手足口病(HFMD)提供特异性治疗药物。方法:采用经典微量细胞病变法,应用近2年分离自中国大陆的2株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对我国不同血液制品厂家生产的97批IVIG进行抗-EV71中和效价检测,比较不同批次IVIG的EV71中和效价。结果:19家生产企业生产的97批IVIG的EV71中和效价几何平均滴度(GMTs)为1∶180(1∶170～1∶191)。其中有7家生产企业生产的12批制品的中和效价大于1∶256,以S公司生产的20100406批制品效价最高为1∶543,以A公司生产的含有1∶256以上效价的IVIG批数最多(5批),使该公司生产的IVIG的平均EV71中和抗体效价显著高于其他10家企业(P<0.05)。进一步分析显示,该2个公司分别是通过对献血员的EV71中和效价进行筛选,挑选出高效价血浆和选择人群抗体水平较高地区作为血浆来源地进行投料,而制备出了含有高效价EV71中和抗体的IVIG。结论:本研究显示,生产企业只要对原料血浆进行合理控制,制备出含有高效价EV71中和抗体的...     

肠道病毒71型结构蛋白和结构蛋白和非结构蛋白的分子生物学特性

  肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）和柯萨奇病毒A组16型感染导致的手足口病已在世界范围内引起数次大规模暴发和流行,成为婴幼儿健康的重大威胁。对EV71结构的分子生物学特征的研究有助于为EV71疫苗的研发提供重要依据,此文就EV71的几种重要结构蛋白和非结构蛋白在病毒感染过程中作用的研究现状做一综述。     

抗肠道病毒71型天然药物化学成分研究进展

目的： 人类肠道病毒71（EV71）是引起手足口病（hand-foot and mouth disease，HFMD）的主要病原体之一，多发生于婴幼儿。本文总结了近年来抗EV71天然药物中的单体有效成分及其作用机制方面的研究，以期为抗EV71的新药发现和药物设计提供参考。方法： 在PubMed、Medline、The Cochrane、Library、Embase、Elsevier、John Wiley等外文数据库及中国知网（CNKI）、万方等中文数据库进行文献检索。结果： 综述的33个化合物通过各种作用机制发生抗EV71作用。结论： 天然药物中存在抗EV71有效单体成分，部分化合物结构、作用机制明确，可为新药发现和药物设计提供参考。     

EV71感染型手足口病患儿特征及高危因素分析

目的:研究分析EV71感染型手足口病患儿特征及高危因素。方法:选取2010年1月～2017年12月某院儿科收治的80例EV71感染型手足口病患儿作为研究对象,并采取同期确诊的75例普通手足口病患儿进行对照,比较EV71感染型手足口病患儿与普通手足口病患儿的临床特征以及高危因素。结果:比较患儿的年龄、患儿首次确诊、患儿嗜睡萎靡、患儿肢体震颤以及各实验室检查结果共17项指标,差异具有统计学意义(P0.05)。根据Logistic回归分析EV71感染型手足口病患儿特征或高危因素有:非典型皮疹、嗜睡萎靡、肢体震颤、影像学表现以及血压升高。结论:3岁及其以下EV71感染型患儿出现非典型皮疹、胸片、血压以及血糖异常提示患儿病情出现恶化。     

荧光PCR法在手足口病肠道病毒EV71型临床诊断中的意义

目的利用实时荧光PCR检测EV71型肠道病毒,了解焦作地区手足口病流行趋势,并提供防治依据。方法采集2014年4月9日至12月16日焦作地区手足口病患儿肛门拭子407例标本,用实时荧光PCR方法对肠道病毒进行核酸检测。结果检出肠道病毒EV71型341例,Co XA16型26例型,肠道病毒通用型40例。结论 2014年4月至12月焦作地区手足口病以肠道病毒EV71型为主。实时荧光PCR技术可以对手足口病的治疗及疫情的有效控制提供有力的病原学支持。     

杨梅素体外抗EV71病毒作用的研究

目的初步探究杨梅素抗肠道病毒71型(EV71)的活性及其机制。方法采用EV71感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)模型,采用致细胞病变(CPE)法和空斑实验观察杨梅素的抗病毒效果。以不同浓度的杨梅素处理细胞,结合结晶紫染色的方法检测杨梅素的细胞毒性。以免疫印迹法检测杨梅素对VP1蛋白表达的影响。应用RT-PCR的方法评价杨梅素对VP1基因表达的影响。结果杨梅素在2.5~20μmol·L^-1的浓度下预处理病毒能够显著抑制EV71感染诱导的细胞死亡,且这种抑制作用具有剂量依赖性,IC50为5.6μmol·L^-1。与病毒组相比,杨梅素在2.5~20μmol·L^-1的浓度下还能够显著降低病毒滴度。免疫印迹和RT-PCR的结果显示,杨梅素还能够明显降低病毒衣壳蛋白VP1的基因和蛋白表达。结论杨梅素具有显著的体外抗EV71病毒活性。     

肠道病毒71型手足口病117例临床分析

目的:分析肠道病毒71型感染所致手足口病的临床及实验室特点。方法:回顾性分析2012年7月—2012年12月收治的117例肠道病毒71感染所致手足口病住院患儿的病例资料。比较普通病例组和重症病例组的临床表现及辅助检查资料。结果:肠道病毒71型手足口病多见于1～3岁婴幼儿(64.96%),主要症状为皮疹(98.29%)、发热(98.29%)。重症病例发生率较高(占82.05%),多有肢体抖动及易惊(77.78%)。常见并发症有支气管炎、支气管肺炎。经对症及抗病毒治疗,重症者早期使用免疫球蛋白、糖皮质激素、甘露醇等治疗,治愈113例(96.58%),好转1例(0.85%),死亡3例(2.56%)。结论:肠道病毒71型手足口病多见于婴幼儿,主要症状为发热、皮疹。重症病例发生率高,多有肢体抖动及易惊。重症手足口病患儿的救治关键在于早期干预,控制进展,减少难治性并发症的发生。     

氯喹和羟氯喹抗病毒药理及临床研究进展

病毒感染性疾病致病率高、传染性强、危害性大,对人类健康乃至社会发展造成很大威胁,因此寻找预防及治疗药物一直是关注的重点。氯喹、羟基氯喹是美国食品药品管理局批准的治疗疟疾、风湿免疫病的常用药,药品的成本低、安全性高。回顾了多项氯喹、羟氯喹抗病毒的药理研究及临床试验,归纳了二者对于人冠状病毒（HCoVs）、人免疫缺陷病毒（HIV）、寨卡病毒、肠道病毒71型（EV-A71）、朊病毒等多类病毒的作用,其具有广谱抗病毒作用,在临床上有较好的应用前景。     

抗病毒药物的应用及其研究进展

综述了抗病毒药物的药理作用。临床应用及最近的研究进展。指出了目前的存在问题及今后的研究方向。     

Acrylamide fragment inhibitors that induce unprecedented conformational distortions in enterovirus 71 3C and SARS-CoV-2 main protease

RNA viruses are critically dependent upon virally encoded proteases to cleave the viral polyproteins into functional proteins. Many of these proteases exhibit a similar fold and contain an essential catalytic cysteine, offering the opportunity to inhibit these enzymes with electrophilic small molecules. Here we describe the successful application of quantitative irreversible tethering (qIT) to identify acrylamide fragments that target the active site cysteine of the 3C protease (3C^pro) of Enterovirus 71, the causative agent of hand, foot and mouth disease in humans, altering the substrate binding region. Further, we re-purpose these hits towards the main protease (M^pro) of SARS-CoV-2 which shares the 3C-like fold and a similar active site. The hit fragments covalently link to the catalytic cysteine of M^pro to inhibit its activity. We demonstrate that targeting the active site cysteine of M^pro can have profound allosteric effects, distorting secondary structures to disrupt the active dimeric unit.     

Spiramycin and azithromycin,safe for administration to children,exert antiviral activity against enterovirus A71 in vitro and in vivo

Hand-foot-mouth disease (HFMD) is a common viral disease in young children, mainly caused by enterovirus A71 (EV-A71) and coxsackievirus A16 (CV-A16). Specific antiviral agents are not commercially available yet. Here we report that the macrolide antibiotics spiramycin (SPM) and azithromycin (AZM) possess antiviral activities against EV-A71 and CV-A16. SPM significantly reduced EV-A71 RNA and protein levels, most likely through interfering with viral RNA replication. The SPM-resistant EV-A71 variants showed similar resistance to AZM, indicating a similar anti-EV-A71 mechanism by which these two drugs exert their functions. The mutations of these variants were reproducibly mapped to VP1 and 2A, which were confirmed to confer resistance to SPM. Animal experiments showed that AZM possesses stronger anti-infection efficacy than SPM, greatly alleviated the disease symptoms and increased the survival rate in a mouse model severely infected with EV-A71. In all, our work suggests that AZM is a potential treatment option for EV-A71-induced HFMD, whose proved safety for infants and children makes it even more promising.     

金银花多糖的提取纯化及抗病毒活性研究

目的：提取纯化金银花多糖,并研究金银花多糖的体外抗病毒活性。方法：采用醇沉法提取多糖并用酶法纯化多糖,运用细胞培养技术,对纯化后的多糖进行体外抗病毒实验,以MTT染色法检测细胞活性,结合CPE法研究金银花多糖对单纯疱疹病毒（HSV-1）、柯萨奇病毒B5（COX-B5）、柯萨奇病毒B3（COX-B3）和肠道病毒71型（EV71）的抑制作用。结果：多糖纯化后含量为54.04%,金银花多糖对COX-B5、EV71、COX-B3、HSV-1的治疗指数分别为4.84,63.85,4.77,51.25。结论：金银花多糖具有体外抗HSV-1、EV71、COX-B5、COX-B3的活性,为临床治疗提供理论依据。     

3D‐quantitative structure‐activity relationship study for the design of novel enterovirus A71 3C protease inhibitors

A three‐dimensional quantitative structure‐activity relationships model of enterovirus A71 3C protease inhibitors was constructed in this study. The protein‐ligand interaction fingerprint was analyzed to generate a pharmacophore model. A predictive and reliable three‐dimensional quantitative structure‐activity relationships model was built based on the Flexible Alignment of AutoGPA. Moreover, three novel compounds ( I – III) were designed and evaluated for their biochemical activity against 3C protease and anti‐enterovirus A71 activity in vitro. III exhibited excellent inhibitory activity (IC₅₀ = 0.031 ± 0.005 μM, EC₅₀ = 0.036 ± 0.007 μM). Thus, this study provides a useful quantitative structure‐activity relationships model to develop potent inhibitors for enterovirus A71 3C protease.